microRNA-3147在宫颈癌中的表达及意义

目的分析microRNA-3147在宫颈癌患者以及正常人血液中的表达情况及其与宫颈癌患者临床病理参数之间的相关性。方法选择宫颈癌患者以及健康查体者各100例分别作为患者组和正常组,采用实时荧光定量PCR法检测2组受检者血液中microRNA-3147表达量,分析其与宫颈癌临床病理参数之间的相关性,绘制ROC曲线探讨其在宫颈癌诊断中的价值。结果患者组血液中microRNA-3147表达量明显高于正常组(P0.05),ROC曲线下面积为0.932;血液中microRNA-3147表达量与患者年龄、肿瘤类型不相关(P均0.05),但与肿瘤大小、分化程度、转移状态相关(P均0.05)。结论血清中microRNA-3147的表达量对宫颈癌的早期诊断、预后和治疗有一定的指导意义。     

宫颈癌中 p16、p53 和 Ki67 的表达及其临床意义

〔摘 要〕 目的：研究在宫颈癌中 p16、p53、Ki67 的表达与临床意义。方法：选取 2018 年 10 月至 2020 年 9 月间南华 大学附属第二医院收治的 50 例宫颈癌患者，纳入患者均接收免疫组织化学染色法检测 p16、p53、Ki67 表达情况，并分析 其临床意义。结果：50 例宫颈癌患者中，Ki67 阳性表达率占比 72.00 %，p53 阳性表达率占比 42.00 %，p16 阳性表达率占 比 52.00 %，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）；宫颈癌中 p16、p53 和 Ki67 的表达与患者病理分级、临床分期具有显著相 关性（P ＜ 0.05）。结论：在宫颈癌中 p16、p53、Ki67 的表达与病情进展有关，其阳性表达水平与病理分级、临床分期具 有显著相关性。     

p53、p16和C-myc基因表达在宫颈癌早期诊断中的价值

目的探讨p53、p16和C-myc基因表达在宫颈癌早期诊断中的价值。方法收集本院宫颈活检组织65例,免疫组化染色SP法显色观察结果。结果 p53在正常宫颈组织、CIN(LSIL、HSIL)和宫颈鳞癌中阳性率分别为7%,57%和80%,有显著性差异P<0.05;p16在正常宫颈组织、CIN(LSIL、HSIL)和宫颈鳞癌中阳性率分别为7%,90%和100%,有显著性差异(P<0.05);C-myc在正常宫颈组织、CIN(LSIL、HSIL)和宫颈鳞癌中阳性率分别为7%,73%和100%,有显著性差异(P<0.05)。结论 p53、p16和C-myc与宫颈癌前病变发生及进展相关,其检测可作为宫颈CIN分级与宫颈癌早期诊断的重要辅助指标。     

p14ARF基因在肺癌中的表达及意义

目的:探讨p14ARF基因在肺癌中的表达及意义.方法:采用免疫组化S-P法,检测60例肺癌及20例正常肺组织中p14ARF蛋白的表达情况.结果:p14ARF在肺癌组织中的阳性率为43.3%,显著低于正常肺组织的95%,两组间差异有显著性(P<0.05);p14ARF与肺癌患者的性别、年龄、组织学类型、分化程度及淋巴结转移等无相关性(P>0.05).结论:p14ARF的表达缺失在肺癌的发生发展中起重要作用,可作为肺癌基因诊断和治疗的靶点.     

血清miR-21和miR-10b在早期宫颈癌患者中的表达及临床意义

目的观察血清miR-21和miR-10b在早期宫颈癌患者中的表达及临床意义。方法选择手术治疗的宫颈上皮内瘤样变(CIN)患者45例作为CIN组,早期宫颈浸润癌(ICC)患者85例作为ICC组,子宫肌瘤全切子宫后正常宫颈上皮(NCE)患者20例作为NCE组。用Real time PCR法检测各组血清miR-21和miR-10b表达情况及ICC组手术后miR-21和miR-10b表达情况,分析miR-21和miR-10b相对表达量与CIN分级、ICC临床指标的关系及ICC患者血清miR-21和miR-10b表达的相关性。结果 ICC组的miR-21相对表达量明显高于CIN组和NCE组(P均<0.05),并随着CIN分级的升高相对表达量增加(P<0.05),手术后血清miR-21相对表达量明显降低(P<0.05);ICC组的miR-10b相对表达量明显低于CIN组和NCE组(P均<0.05),并随着CIN分级的升高相对表达量降低(P<0.05),手术后血清miR-10b表达量明显增加(P<0.05)。血清miR-21和miR-10b表达量与年龄、组织类型、肿瘤直径、肌层浸润深度、脉管浸润和神经浸润无明显相关性(P均>0.05),而与临床分期、组织分化程度、高位HPV和淋巴转移具有明显的相关性(P均<0.05)。ICC患者的血清miR-21相对表达量与血清miR-10b相对表达量呈负相关(r=-0.618,P<0.05)。结论 miR-21可能为促癌基因,miR-10b为抑癌基因,miR-21和miR-10b参与了宫颈癌的发生发展,联合检测血清miR-21和miR-10b表达量对于早期诊断宫颈癌和监测预后具有重要意义。     

Lgr5在宫颈癌中的表达及意义

目的:探究Lgr5在宫颈癌发生发展中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学方法检测30例正常宫颈组织、20例宫颈上皮内瘤变(CIN)及30例宫颈癌组织中Lgr5的表达。结果:Lgr5在正常宫颈组织、CIN组织及宫颈癌组织中的表达阳性率及免疫组化评分均逐渐升高。结论:Lgr5在CIN及宫颈癌的表达升高,可能对宫颈癌的发生发展起促进作用。     

抑癌基因p16及Rb在肺癌细胞中表达的实验研究

目的研究中药组方对小鼠肺癌细胞的抑制作用及其分子机制。方法将小鼠Lewis肺癌细胞复苏后,于小鼠右腋窝皮下传代后构建小鼠Lewis肺癌模型30只,随机分为3组,各10只,雌雄各半。接种后第2d开始灌胃,中药治疗组予中药稀释液（相当于生药量60g/kg）,替加氟组予替加氟稀释液（相当于替加氟药量78mg/kg）,0.9%氯化钠注射液组予0.9%氯化钠注射液,各组均为0.4mL,每日1次灌注。观察中药组方、替加氟和0.9%氯化钠注射液对各组瘤体大小的影响,并用免疫组化方法检测不同组别间抑癌基因p16和Rb蛋白的表达情况,比较各实验组的变化。结果治疗3周后,中药治疗组和替加氟组小鼠皮下肿瘤平均质量均比0.9%氯化钠注射液组小（P〈0.01）;中药治疗组、替加氟组抑瘤率均〉40%,2组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,说明中药组方具有一定的抑制肿瘤生长的作用。0.9%氯化钠注射液组p16的标记指数（LI）、Rb-LI显著低于中药治疗组和替加氟组（P〈0.01,P〈0.01）。镜下可见,p16、Rb蛋白阳性细胞在各组中表达不一,0.9%氯化钠注射液组阳性细胞呈棕黄色,细胞形态较完整,数量较少,呈散在分布;中药治疗组和替加氟组阳性细胞呈棕黄色,深浅不一,细胞形态相对不完整。结论中药组方对小鼠Lewis肺癌的细胞生长具有抑制作用,其机制可能与中药激活抑癌基因,影响细胞周期的发生和阻断细胞脱氧核糖核酸（DNA）合成有关。     

端粒酶活性联合p16启动子超甲基化在胆囊癌中的表达意义

目的探讨胆囊癌组织和癌旁组织中端粒酶活性和p16基因启动子超甲基化的意义。方法采用TRAP-ELISA和MSP检测胆囊癌及癌旁组织各46例中端粒酶活性和p16基因启动子区超甲基化。结果46例胆囊癌中33例(72%)p16超甲基化阳性,癌旁组织有14例(30%)p16超甲基化,两者有明显差异(P<0.05)。46例胆囊癌中31例(67%)端粒酶阳性,而癌旁组织端粒酶阳性仅有4例(9%),两者有显著性差异(P<0.05)。p16超甲基化和端粒酶阳性率这两项指标在胆囊癌的不同分化程度中无明显差异(P>0.05);中、低分化胆囊癌与高分化胆囊癌端粒酶积分光度比较有显著性差异(P<0.05)。胆囊癌p16甲基化和端粒酶检测一致性较好(P<0.01)。结论联合检测端粒酶活性与p16启动子异常甲基化对胆囊癌的诊断有一定价值。     

狭叶柴胡内参基因筛选及皂苷合成关键酶基因组织表达分析

目的筛选适宜狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium组织表达分析的内参基因,分析柴胡皂苷合成关键酶基因的组织表达模式。方法选取Actin、α-tubulin、β-tubulin、Cyclophilin、EF-1α5个常用的内参基因作为候选,分别使用Delta CT、Best Keeper、Norm Finder、ge Norm软件对各候选内参基因的稳定性进行评价,并对候选内参基因的稳定性进行验证,利用实时荧光定量PCR技术,以筛选得到的内参基因分析狭叶柴胡根、茎、叶、果中柴胡皂苷合成关键酶基因HMGR、IPPI、FPS、SS、β-AS基因的组织表达模式。结果候选内参基因平均表达稳定性由高到低排序为β-tubulinCyclophilinActinEF-1αα-tubulin,β-tubulin是狭叶柴胡基因组织表达分析的适宜内参基因。HMGR基因表达量由高到低为根茎/果叶,IPPI基因表达量由高到低为根茎果叶,FPS基因表达量由高到低为叶根茎果,SS基因表达量由高到低为叶果根茎,β-AS基因表达量高低为叶根果茎,其中HMGR与IPPI及FPS与β-AS基因的表达显著呈正相关(P0.05)。结论筛选得到了狭叶柴胡不同组织基因表达分析的最适内参基因为β-tubulin,为狭叶柴胡基因组织表达分析奠定方法学基础。柴胡皂苷合成关键酶基因有不同的组织表达模式,可能参与调控狭叶柴胡不同组织中柴胡皂苷合成与积累的流向。     

抑癌基因PTEN在宫颈癌中的表达及意义

目的探讨一种新的抑癌基因PTEN在人宫颈癌中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法,检测48例宫颈癌及癌旁正常组织石蜡切片中PTEN蛋白表达情况。经计算机图像分析,计算阳性细胞数,比较PTEN蛋白表达与临床病理特征的关系。结果PTEN蛋白表达于细胞浆。48例宫颈癌中PTEN蛋白阳性表达率40%(19/48),而癌旁正常组织阳性表达率96%(46/48),两者有显著性差异(P<0.05)。在淋巴结转移组织中PTEN蛋白阳性表达率(24%)明显低于未转移组织(52%,P<0.01),另外,PTEN蛋白表达与临床分期呈负相关趋势,而与病理分级、浆膜浸润无相关性(P均>0.05)。结论PTEN异常表达可能与部分宫颈癌发生、发展及预后有关。     

p16基因的研究进展

ｐ１６基因是新近发现的一种肿瘤抑制基因，由于其在多种肿瘤中的高频率突变，已吸引了许多科学家在肿瘤分子遗传学、病因学、诊断和治疗学等众多领域进行了极其广泛的研究。笔者将近年来国内外有关ｐ１６基因的研究进展作一简单综述。１ｐ１６基因的发现与结构 １９９３年Ｓｅｒｒａｎｏ［１］等在ＳＶ４０Ｔ抗原转化细胞中发现并分离了特异性的周期蛋白依赖性激酶４（ｃｙｃｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　 ｋｉｎａｓｅ　４，ＣＤＫ４）的抑制蛋白－ｐ１６蛋白，并克隆了ｐ１６的ｃＤＮＡ，证明ｐ１６与ＣＤＫ４的亲和力明显高于其它 ＣＤＫ…     

miR-495-3p、miR-181d-5p在宫颈癌患者中的表达及临床意义

目的 探讨miR-495-3p、miR-181d-5p在宫颈癌及宫颈癌前病变组织中的表达差异及对宫颈癌诊断的价值。方法 收集2020年6月—2022年12月河北中石油中心医院收治的30例宫颈低级别鳞状上皮内病变(CINⅠ级组)、30例宫颈高级别鳞状上皮内瘤变(CINⅡ～Ⅲ级组)、50例宫颈癌(宫颈癌组)患者的临床资料及宫颈组织标本。采用免疫组化法检测各组宫颈组织中miR-495-3p、miR-181d-5p阳性表达情况,比较各组miR-495-3p、miR-181d-5p阳性表达率;采用RT-qPCR法检测宫颈癌组患者癌组织中miR-495-3p、miR-181d-5p表达量,分析miR-495-3p和miR-181d-5p表达量与宫颈癌患者临床病理特征的关系、miR-495-3p和miR-181d-5p对宫颈癌的诊断价值及二者在宫颈癌组织中表达的相关性。结果 宫颈癌组miR-495-3p、miR-181d-5p阳性表达率均明显低于CINⅠ级组及CINⅡ～Ⅲ级组(P均<0.05)。宫颈癌组织中miR-495-3p、miR-181d-5p表达量与FIGO分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转...     

参黄冲剂对衰老患者P16基因mRNA表达及临床疗效的影响

目的：评价参黄冲剂在延缓衰老方面的作用和临床疗效。方法：将60例符合条件的衰老患者随机分为参黄冲剂治疗组和对照治疗组,每组30例。参黄冲剂组进行常规治疗基础上加用参黄冲剂治疗,每次10 g,每日3次。对照组进行常规系统治疗,并给予甲磺酸双氢麦角毒碱片,每次1 mg,每日3次。各组均连续服药8周为1疗程,观察时间为1疗程。结果：衰老患者肾阴虚、肾阳虚2种证型P16基因的序列特征未见突变改变。参黄冲剂组与对照组在治疗前的衰老患者P16基因mRNA定量表达比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,二者之间具有可比性;在治疗后两组比较,差异具有统计学意义（P〈0.05）。两组治疗后衰老患者临床疗效比较,参黄冲剂组30例,显效3例,有效21例,无效6例,有效率80.0%;对照组30例,显效1例,有效12例,无效17例,有效率43.3%;经统计学处理,两组间有效率比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：参黄冲剂治疗老年肾虚患者,可有效改善临床衰老的临床症状,提高日常生活能力;而且参黄冲剂可减少P16基因mRNA的表达,其机制可能是通过抑制衰老细胞的增殖而达到延缓衰老的作用,从而起到抗衰老的作用,但衰老主要证型肾阴虚、肾阳虚P16基因的序列特征未见突变改变,为进一步诠释中医辨证施治衰老的机制提供了分子生物学的依据。     

p16基因上游序列与急性白血病细胞核基质蛋白结合的临床

目的 采用DNA-蛋白质杂交（Southwestern blot）技术研究p16基因上游序列-869bp中是否含有核基质结合元素,并分析p16基因上游序列在急性白血病细胞组与对照组内与核基质蛋白结合的情况.方法 p16基因上游序列与急性白血病细胞核基质蛋白结合的实验研究.结果 p16基因上游序列与核基质蛋白的结合在急性白血病组与对照组间存在差异.结论 p16基因外显子1α上游-869bp片段可以与核基质蛋白结合,表明该片段存在MAR序列,对p16基因表达调控具有重要意义.     

疏肝益肾方对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠肝、肾p16基因表达的影响

目的:研究疏肝益肾方对衰老小鼠肾脏、肝脏p16基因表达的影响,探讨疏肝益肾方抗衰老机制。方法:用D-半乳糖建立衰老小鼠模型,以疏肝益肾方治疗,实时荧光定量PCR法观察小鼠肝脏、肾脏p16基因的mRNA表达。结果:疏肝益肾方组p16基因mRNA表达降低。结论:疏肝益肾方能降低p16基因的表达,从而起到抗衰老作用。     

RhoA在食管癌中的表达及其机制研究

目的:研究RhoA基因在人食管癌中的mRNA表达及其与肿瘤发生的关系。方法:采用SYBR Green实时定量PCR技术检测30例食管癌组织及癌旁组织中的RhoA基因的mRNA水平。同时,采用免疫组化技术检测上述30例组织中RhoA的蛋白水平及分布。结果:与癌旁组织相比,RhoA基因在食管癌组织中mRNA水平较癌旁组织显著上调,癌旁组织中RhoA的表达为0.39±0.09,食管癌组织中RhoA的表达为0.94±0.25,与癌旁组织相比小上调2.4倍。免疫组化的结果也表明,RhoA基因在食管癌组织中表达要高于癌旁组织,并且主要分布于细胞浆。结论:RhoA基因在人食管癌中较癌旁组织表达显著上调,RhoA基因的表达与食管癌的发生密切相关。     

复方苦参胶囊治疗宫颈癌荷瘤裸鼠及对免疫系统和p53 mRNA表达的影响

目的观察复方苦参胶囊治疗宫颈癌荷瘤裸鼠及对免疫系统和p53 mRNA表达的影响。方法建立宫颈癌荷瘤裸鼠模型,观察复方苦参胶囊对荷瘤小鼠的抑瘤率及对T淋巴细胞增殖能力、血清白介素2(IL-2)、瘤体组织p53基因mRNA表达等指标的影响。结果复方苦参胶囊高(0.80g/kg)、中(0.20g/kg)剂量可明显抑制荷瘤裸鼠瘤体的生长(P<0.05或P<0.01),提高T淋巴细胞增殖能力和IL-2的产生(P<0.05或P<0.01),但对p53基因mRNA表达无显著影响(P>0.05)。结论复方苦参胶囊可显著抑制宫颈癌荷瘤裸鼠瘤体的生长,并能增强荷瘤裸鼠的免疫功能。     

远志bZIP基因家族的鉴定及表达分析

目的 鉴定远志Polygala tenuifolia bZIP基因,为远志抗逆性改良及次生代谢调控研究提供参考。方法 基于远志三代全长转录组数据库,采用生物信息学方法对远志bZIP基因家族成员进行鉴定和分析,并利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术分析其在不同组织及处理中的表达特性。结果 共鉴定得到27个含有特征性保守结构域的PtbZIP基因,编码蛋白质的氨基酸数量为143 aa（PtbZIP24）～846 aa（PtbZIP9）,相对分子质量范围为16201.52～92932.30,等电点（pI）介于4.59～9.69,其中25个家族成员为不稳定蛋白,所有家族成员均为亲水性蛋白。蛋白二级结构主要由α螺旋和无规卷曲构成,均无信号肽,存在多种互作现象。进化树分析将27个PtbZIP蛋白分为A、B、C、D、F、G、I、S 8个亚组,其中G亚组含有PtbZIP家族成员数量最多（共有8个）,占总数的29.63%,没有PtbZIP基因被归类到E和K组。PtbZIP家族基因的密码子偏好性较弱,适应性较弱。表达模式分析显示,PtbZIP4/15在叶中的表达量最高,茎和根次之;PtbZIP8/24在茎中的表达量最高,叶和根次之;PtbZIP1/17的表达量为根＞叶＞茎;其余21个的表达模式均为根＞茎＞叶。qPCR结果表明,PtbZIP26基因受脱落酸、壳聚糖的诱导,且能显著应答干旱和盐胁迫。结论 鉴定了远志bZIP家族基因及其分子特征,为进一步研究PtbZIP基因在调控远志发育及次生代谢物合成方面的生物学功能奠定基础。     

参黄冲剂对衰老患者抗氧化作用及P16基因mRNA表达的影响

目的观察参黄冲剂对衰老患者P16基因mRNA定量表达、血清一氧化氮（NO）和超氧化物歧化酶（SOD）含量的影响,探讨其延缓衰老作用机制。方法将60例衰老患者随机分为参黄冲剂组和对照组,每组30例。在常规疾病治疗基础上,参黄冲剂组加用参黄冲剂,对照组加用甲磺酸双氢麦角毒碱片,均连续服用8周。观察治疗前后患者临床症状及P16基因mRNA定量表达、血清NO和SOD含量变化。结果治疗后参黄冲剂组P16基因mRNA扩增曲线起始循环数明显变大（P〈0.05）,P16基因mRNA定量表达与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。参黄冲剂组治疗后血清NO含量和SOD水平明显升高（P〈0.05）,且明显高于对照组（P〈0.05）。参黄冲剂组总有效率为80.0%（24/30）,对照组为43.3%（13/30）,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论参黄冲剂可有效改善衰老患者的临床症状,提高日常生活能力,提高血清NO含量和SOD活性,减少P16基因mRNA的表达,其机制可能是通过抑制衰老细胞的增殖而起到延缓衰老的作用。     

杭菊DFR基因克隆及其在花中表达特征分析

目的克隆杭菊Chrysanthemum morifolium二氢黄酮醇还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)基因,并研究其在花芽分化期及开花期不同时期的表达特征。方法根据已报道的菊花Chrysanthemum morifolium DFR基因序列设计引物,通过荧光定量PCR(RT-PCR)技术从杭菊头状花序中扩增出目的基因片段,连接、转化、挑取阳性克隆测序并拼接;采用基于内参基因的相对定量PCR方法,分析该基因表达量特征。结果得到全长1 152 bp的杭菊DFR基因,最大开放阅读框1 029 bp,共编码342个氨基酸。NCBI上进行Blast比对,该基因与其他植物的DFR基因有很高的同源性。RT-PCR表明该基因在花芽分化时期不同阶段以及开花期不同时期花不同部位中表达量均有差异。花芽分化时期杭菊DFR基因在50 d表达量最高;开花期该基因在时期I的管状花中表达量最高,在时期II的花序托中表达量最低。结论克隆得到杭菊DFR基因c DNA序列,该基因表达存在时间和空间上的差异,表达量在花蕾膨大成熟到舌状花开放30%的时间段内最高。该结果为进一步进行该基因在杭菊中的表达与催化产物的关系和调控机制研究奠定了基础。