不同效力糖皮质激素对HaCaT细胞糖皮质激素受体调节的比较

临床上皮肤科医生常根据患者不同的皮损状况选用不同效力的糖皮质激素(glucocorticoid,GC)外用制剂,以达到理想的治疗效果.本课题组前期研究已发现,GC具有下调角质形成细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)α的表达和上调GRβ表达的作用,从而导致外用GC制剂皮肤耐受,疗效降低[1-2].对GC效力等级的判定主要依据其收缩血管作用的强弱而定,那么不同效力的GC外用制剂对角质形成细胞GR表达的调节作用有何差异呢?针对这一问题,本研究以人角质形成细胞为研究对象.观察并比较经不同效力GC作用后人角质形成细胞HaCaT GRα和GRβ的表达情况,希望为临床合理地使用不同效力GC外用制剂提供理论和实验依据.     

不同效力糖皮质激素对HaCaT细胞糖皮质激素受体调节的比较

临床上皮肤科医生常根据患者不同的皮损状况选用不同效力的糖皮质激素(glucocorticoid,GC)外用制剂,以达到理想的治疗效果.本课题组前期研究已发现,GC具有下调角质形成细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)α的表达和上调GRβ表达的作用,从而导致外用GC制剂皮肤耐受,疗效降低[1-2].对GC效力等级的判定主要依据其收缩血管作用的强弱而定,那么不同效力的GC外用制剂对角质形成细胞GR表达的调节作用有何差异呢?针对这一问题,本研究以人角质形成细胞为研究对象.观察并比较经不同效力GC作用后人角质形成细胞HaCaT GRα和GRβ的表达情况,希望为临床合理地使用不同效力GC外用制剂提供理论和实验依据.     

肿瘤坏死因子-α对角质形成细胞株HaCaT细胞糖皮质激素受体表达的影响

目的:研究肿瘤坏死因子(TNr)-α对角质形成细胞糖皮质激素受体(GR)表达的影响.方法:采用反转录实时定量PCR和Western blotting观察经TNF-α作用后,培养的人角质形成细胞株HaCaT细胞的GRα、Cnβ mRNA和蛋白质的表达情况.结果:TNF-α对HacaT细胞GRα的表达无明显影响,但可上调HacaT细胞GRB的表达,并且呈剂量和时间依赖.结论:TNF-α可增加GRβ的表达,可能是炎性细胞因子参与诱发糖皮质激素皮肤耐受现象的内在机制之一.     

地塞米松对HaCaT细胞核因子-κB/IκB表达的影响

目的:探讨地塞米松对角质形成细胞核因子(NF)-κB活性及其抑制蛋白(IKB)α表达的调节作用.方法:采用反转录-荧光实时定量PCR和蛋白印迹试验.观察经不同浓度及不同时间的地塞米松作用下.培养的人角质形成细胞HaCaT细胞的IκBα mRNA和蛋白质的表达;用蛋白印迹试验检测NF-κB核蛋白的表达情况.结果:地塞米松可诱导HaCaT细胞IKBα的表达而抑制NF-κB核转位,此作用呈浓度依赖性效应,在36 h时作用最明显.结论:糖皮质激素通过调控人角质形成细胞NF-κB/IκB信号通路.可抑制皮损局部的炎症反应.     

3种糖皮质激素对HaCaT细胞核因子-κB/抑制蛋白IκBα调节的比较

目的:比较3种不同糖皮质激素对角质形成细胞的核因子(NF)-kB/IkBα调节效应的差异.方法:将培养的人角质形成细胞HaCaT细胞分为空白对照组、氢化可的松组、地塞米松组、倍他米松组,采用反转录(RT)-PCR和蛋白印迹试验检测各组HaCaT细胞的IkBα mRNA和蛋白质表达,用蛋白印迹试验检测NF-kB核蛋白的表达情况.结果:3种糖皮质激素均具有诱导HaCaT细胞IkBα的表达而抑制NF-kB核转位的作用,其中氢化可的松作用最弱,地塞米松与倍他米松无明显差异.结论:不同效力的糖皮质激素对角质形成细胞NF-kB/IkBα的调节效力不同.提示临床上正确选用不同效力糖皮质激素外用制剂的必要性.     

地塞米松及甲氨蝶呤上调HaCaT细胞结合珠蛋白的表达

目的:探讨地塞米松及甲氨蝶呤对人角质形成细胞系HaCaT细胞合成结合珠蛋白(Hp)的影响。方法:采用RT-PCR方法检测Hp mRNA表达水平,ELISA方法检测Hp浓度。结果:地塞米松或甲氨蝶呤刺激HaCaT24h后,HaCaT细胞表达Hp增加;但较短刺激时间或较低刺激浓度时,HaCaT细胞表达Hp水平无明显变化。结论:地塞米松及甲氨蝶呤能够上调HaCaT细胞Hp的合成,这种作用具有时间依赖性及剂量依赖性的趋势。     

不同效力糖皮质激素对HaCaT细胞糖皮质激素受体调节的比较

【摘要】目的 比较三种不同的糖皮质激素对角质形成细胞的糖皮质激素受体调节效应的差异。 方法 将培养的人角质形成细胞HaCaT细胞分为空白对照组、氢化可的松作用组、地塞米松作用组、倍他米松作用组,采用反转录Real-Time PCR和Western blotting法检测各组HaCaT细胞的GRα、GRβ mRNA和蛋白质表达。 结果 三种激素均具有下调HaCaT细胞GRα表达的作用,其中氢化可的松作用最弱,而地塞米松与倍他米松作用之间无明显差异;三种激素均具有上调HaCaT细胞GRβ表达的作用,但此作用之间无明显差异。 结论 不同效力的糖皮质激素对角质形成细胞GRα和GRβ的调节效力不同,可指导临床上正确应用不同效力糖皮质激素外用制剂。     

他克莫司对HaCaT细胞核因子-κB和糖皮质激素受体表达的影响

目的 探讨他克莫司对TNF-α刺激的HacaT细胞核因子-κB(NF-κB)表达的影响,以及对HaCaT细胞糖皮质激素受体(GR)α和β表达的影响.方法 采用Western印迹和免疫荧光-激光共聚焦显微镜技术观察:①以TNF-α(10μg/L)单独或TNF-α(10μg/L)与他克莫司(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)同时作用HaCaT细胞,在24h和48h分别观察胞核NF-κB的表达;②以他克莫司(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)作用HaCaT细胞,在12h、24h和36h分别观察GRα和GRβ的表达.结果 未处理组HaCaT细胞的胞核有NF-κB(p65)蛋白的表达,灰度值比值为0.4988±0.03506;TNF-α作用24h和48h后,HaCaT细胞胞核NF-κB(p65)表达随时间延长而增强,灰度值比值分别为0.73±0.0316和0.8925±0.0171,与未处理组相比较.差异均有统计学意义(P<0.05).TNF-α与10-8 mol/L、10-7 mol/L、10-6mol/L他克莫司同时作用组HaCaT细胞胞核NF-κB表达灰度值比值分别为0.6825±0.0263、0.6200±0.0163和0.5575±0.0299,NF-κB表达随他克莫司浓度增加而减弱,后两组与TNF-α单独作用组相比,差异均有统计学意义(P<0.05).各浓度他克莫司作用24h和48h的NF-κB表达差异均无统计学意义(P>0.05).与未处理组相比,不同浓度他克莫司作用HaCaT细胞后,各时相点GRα和GRβ的表达差异均无统计学意义(P>0.05).结论 他克莫司能以浓度依赖方式抑制TNF-α刺激的角质形成细胞胞核NF-κB的表达,不影响角质形成细胞GRα和GRβ的表达.     

皮肤科学基础

20110353地塞米松对HaCaT细胞核因子-κB/IκB表达的影响/郁博(三军大新桥医院皮肤科),何威,张斌…∥临床皮肤科杂志.-2010,39(7).-399~402采用反转录-荧光实时定量PCR和蛋白印迹试验,观察不同浓度及不同时间的地塞米松作用下,培养的人角质形成细胞HaCaT细胞的IκBαmRNA和蛋白质的表达;用蛋白印迹试验检测NF-κB核蛋白的表达情况。结果显示,地塞米松     

慢性湿疹皮损中糖皮质激素受体-α表达下调

目的 探讨糖皮质激素受体-α(glucocorticoid receptor α, GRα)在慢性湿疹皮损中的表达.方法 采用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)和SP免疫组化染色技术检测慢性湿疹皮损中GRα的表达情况.结果 与正常对照皮肤相比,慢性湿疹皮损中GRα的mRNA和蛋白表达均显著下调.结论 慢性湿疹中GRα表达下调可能会干扰皮损局部糖皮质激素的抗炎机制,降低外用糖皮质激素的疗效.     

卤米松对角质形成细胞维生素D受体表达的影响

目的观察卤米松对角质形成细胞维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)表达的影响,以探讨糖皮质激素对维生素D3衍生物治疗银屑病效应的潜在影响。方法采用CCK8法观察不同浓度卤米松、卡泊三醇在不同时相点下对HaCaT角质形成细胞增殖的影响;采用反转录-实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、蛋白印迹法,观察不同浓度卤米松在不同时相点作用下HaCaT细胞VDR的表达情况。结果卤米松可增强卡泊三醇对HaCaT细胞增殖的抑制作用;卤米松作用24 h、48 h后,HaCaT细胞中VDR m RNA及蛋白水平均明显升高,并呈剂量依赖性效应。结论卤米松上调VDR的表达可能有助于提高角质形成细胞对维生素D3衍生物作用的反应性,从而有可能提高维生素D3衍生物对角质形成细胞的治疗效应。     

全反式维甲酸对IL-22诱导HaCaT细胞中Cx43和GJIC功能影响研究

目的:探究全反式维甲酸(ATRA)对IL-22处理后HaCaT细胞Cx43蛋白表达水平和细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响,以及该过程是否与JNK通路有关,进一步阐明ATRA对GJIC功能影响的分子作用机制。方法:筛选ATRA影响IL-22处理HaCaT细胞最适处理时间;划痕标记染料示踪试验观察GJIC功能影响;免疫荧光检测ATRA和/或IL-22处理组Cx43、p-JNK、JNK表达水平的变化。结果:ATRA使HaCaT细胞的GJIC功能呈处理时间依赖性上升。ATRA作用于IL-22诱导HaCaT细胞后, Cx43蛋白表达水平增加, GJIC功能上调,p-JNK表达无明显变化。结论:ATRA可抑制IL-22介导的Cx43表达减少和GJIC下调作用,这一过程与JNK通路无关。     

高表达αB-晶状体蛋白对HaCaT细胞存活和凋亡的影响

目的:探讨αB-晶状体蛋白(αB-crystallin)高表达对人皮肤角质形成细胞(HaCaT)存活和凋亡的影响。方法:构建αB-crystallin的真核表达载体,转染至HaCaT细胞中并筛选出稳定高表达αB-crystallin的HaCaT细胞株,MTT法和流式细胞术分别检测高表达αB-crystallin对HaCaT细胞的细胞存活率和细胞凋亡率的影响。结果:成功筛选出高表达αB-crystallin的HaCaT/CRYAB-1、HaCaT/CRYAB-2,该两者的αB-crystallin表达水平均较亲代HaCaT明显升高。αB-crystallin高表达的HaCaT细胞在H_2O_2处理后细胞存活率明显升高(t=5.23,P0.05),细胞凋亡率明显下降(t=15.09,P0.05)。结论:αB-crystallin具有促人角质形成细胞存活和抗细胞凋亡的作用。     

角质形成细胞生长因子对HaCaT细胞增殖的影响

目的:研究角质形成细胞生长因子(KGF)对HaCaT细胞增殖的影响,探讨KGF与银屑病表皮过度增殖的关系。方法:利用HaCaT细胞体外培养,采用KGF为增殖诱导剂,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测不同浓度的KGF对HaCaT细胞增殖率的影响;检测KGF对细胞生长曲线及细胞集落形成的影响。结果:MTT实验表明,KGF可刺激HaCaT细胞增殖,刺激作用呈浓度依赖性(r=0.981,P<0.05);10 ng/mL KGF作用下HaCaT细胞的生长速度较对照组明显加快(P<0.05),集落形成率较对照组增加(P<0.05),且细胞呈明显的增殖形态,形成的集落较大,集落内细胞多呈星状,胞内染色质丰富。结论:KGF具有显著的促HaCaT细胞增殖作用,银屑病皮损区域KGF表达增加可能是引起表皮过度增殖的重要致病因子。     

表皮生长因子对HaCaT细胞miR-21/PCD4的表达研究

目的 探讨表皮生长因子(EGF)对角质形成细胞(HaCaT细胞)miR-21/PDCD4表达的调控作用.方法 聚合酶链反应(PCR)法检测不同浓度EGF(0、5、15、25 ng/mL)对HaCaT细胞miR-21表达的影响;蛋白免疫印迹法检测不同浓度EGF(0、5、15、25 ng/mL)对HaCaT细胞PDCD4蛋白表达的影响.结果 EGF浓度依赖性促进HaCaT细胞miR-21的表达,与对照组比较,5 ng/mL EGF组、15 ng/mL EGF组、25 ng/mL EGF组HaCaT细胞miR-21表达分别为1.46±0.11、2.44±0.05、3.19±0.08(P＜0.05);EGF浓度依赖性抑制HaCaT细胞HaCaT细胞PDCD4表达,跟对照组比较,25 ng/mL EGF组能显著抑制HaCaT细胞PDCD4表达.结论 EGF促进HaCaT细胞miR-21的表达,抑制HaCaT细胞PDCD4的表达水平.     

地塞米松和他克莫司对HaCaT细胞热休克蛋白90表达影响的研究

目的:比较地塞米松和他克莫司对HaCaT 细胞热休克蛋白90(HSP90)表达的影响,并探讨其潜在的临床意义.方法:以含10-6 mol/L 地塞米松或10-6 mol/L 他克莫司的DMEM(高糖)培养基培养细胞,在24 h 和48 h 的不同时相点,采用Real timePCR和Western blotting 检测HSP90 的表达.结果:地塞米松作用24 h 后,HSP90 mRNA和蛋白表达水平均升高,48 h 后进一步升高(P ＜ 0.05);而他克莫司作用于HaCaT 细胞后的不同时相点,HSP90 mRNA 和蛋白水平与未处理组相比差异均无统计学意义(P ＞ 0.05).结论:地塞米松可上调角质形成细胞中HSP90 的表达,他克莫司不影响角质形成细胞HSP90 的表达.     

2型单纯疱疹病毒对HaCaT细胞分泌I型干扰素的影响

目的: 评价2型单纯疱疹病毒(HSV-2)对人永生化角质形成细胞(HaCaT)分泌I型干扰素(IFN-α、IFN-β)的影响,探讨角质形成细胞(KC)对HSV-2 感染的免疫防御机制.方法: 以HSV-2感染HaCaT细胞,采用荧光实时定量PCR检测感染后24 h、48 h、72 h IFN-α1、α2、β1 mRNA的表达.结果: HaCaT细胞静息状态存在IFN-α1、α2、β1三种细胞因子的mRNA表达,但HSV-2感染HaCaT细胞后IFN-α1、α2、β1 mRNA的表达较对照组明显升高(P<0.05),且在72 h内随时间的递增而逐渐升高.结论: 在HSV-2感染KC的初期,KC分泌的I型干扰素参与HSV-2感染的免疫防御反应,对清除HSV-2及防止其扩散有积极作用.     

罗格列酮对HaCaT细胞增殖及β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 探讨罗格列酮对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖的影响.方法 用不同浓度的罗格列酮处理HaCaT细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HaCaT细胞增殖活性;蛋白免疫印迹法测定HaCaT细胞β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达水平.结果 不同浓度的罗格列酮对HaCaT细胞体外增殖均具有抑制作用,药物作用48 h后对HaCaT细胞体外增殖的抑制率分别为18.9％、23.7％、35.1％、44.6％,与溶媒组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).罗格列酮处理HaCaT细胞后,β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达明显下调.结论 罗格列酮抑制HaCaT细胞的体外增殖的机制可能与β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1的表达下调有关.