PCR法检测16S rRNA基因在败血症诊断中的价值

目的评价外周血细菌16S rRNA基因检测诊断败血症的敏感性及特异性。方法利用通用引物对6种常见细菌16S rRNA基因进行扩增，通过阳性菌株及阴性对照检测引物的特异性；观察不同退火温度及不同细菌浓度下PCR检测效果；检测败血症患者及正常人血液标本中的16S rRNA基因表达，并与血培养结果进行比较，评价其诊断意义。结果6种阳性菌株均出现特异阳性条带，阴性质控未出现阳性条带；不同退火温度对PCR结果无明显影响，以55、58℃最佳；PCR方法的最低细菌检测浓度为1．5×10^3cfu／ml；观察组血培养阳性率为38．3％（23／60），血液16S rRNA基因阳性表达率为86．6％（52／60），P〈0．01。结论PCR法检测16S rRNA基因用于败血症诊断特异性及敏感性强，但应注意规范操作、避免污染。     

16SrRNA基因检测在老年糖尿病烧伤脓毒血症诊治中的价值

目的探讨16S核糖体RNA(16SrRNA)基因检测对于老年糖尿病患者烧伤脓毒血症耐药性检测的临床价值。方法收集老年糖尿病烧伤患者可疑脓毒血症患者41例外周静脉血标本共45份,将每份标本分别进行血常规、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-6、-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、血液培养以及16SrRNA基因检测,比较两种检测方法对细菌病原体检测的阳性率,以PCR及血培养阴性、阳性患者血常规、TNF-α、IL-6、CRP、FPG、餐后2 h血糖(2 h PG)、Hb A1c的相关性。结果采用PCR和血培养检测阳性率和操作时间,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。16SrRNA基因检测及血培养方法阳性及阴性标本患者白细胞计数(WBC)、CRP、IL-6、TNF-α水平比较差异有统计学意义(P<0.05),且阳性患者明显高于阴性患者,16SrRNA基因检测及血培养方法阳性及阴性标本患者FPG、2 h PG比较差异有统计学意义(P<0.05),但Hb A1c组间比较无统计学意义(P>0.05)。两种检测方法分离病原菌以革兰阴性菌为主,革兰阳性菌低于革兰阴性菌,但是行血培养阴性患者中有部分患者PCR检测阳性。结论老年糖尿病烧伤患者应早期行血常规、TNF-α、IL-6、CRP检测、监测FPG、2 h PG变化,一旦有潜在脓毒症风险,行16SrRNA基因PCR检测,判断细菌特征,早期给予抗感染对症治疗。16SrRNA基因PCR检测应用于老年糖尿病烧伤脓毒症患者细菌感染特异性、快速性、敏感性均较高,操作时间短,不受临床应用抗生素的影响。     

16S rRNA基因芯片诊断新生儿败血症

目的建立16SrRNA基因加基因芯片检测新生儿败血症的诊断技术，以提高临床检测细菌的速度及准确性。方法对125例拟诊为败血症的新生儿血标本及部分脑脊液标本进行细菌16SrRNA基因及基因芯片检测．包括DNA提取、设计引物和探针、聚合酶链反应（PCR）扩增、基因芯片的制备、杂交、激光扫描与读片。结果125例中PCR检测血标本阳性64例，占51．2％；血培养阳性32例，占25．6％；非特异性指标41例，占32．8％，差异有统计学意义（P〈0．01）。若以血培养阳性和／或非特异指标至少两项阳性为诊断标准，PCR灵敏度为90．3％（56／62），特异度为87．3％（55／63），正确诊断指数为0．776。3例脑脊液标本中PCR阳性2例，培养阳性仅1例。对64例PCR阳性血标本进一步作基因芯片检测，结果通用探针均阳性。其中G^＋探针阳性60份。G探针阳性4份。30份PCR和血培养均阳性的标本中其探针菌株与血培养细菌阳性结果相符。2例脑脊液标本PCR阳性，基因芯片检测结果与培养结果相符。结论168 rRNA基因PCR加基因芯片杂交可为新生儿败血症提供早期、敏感的病原学诊断依据。     

双重聚合酶链反应法早期诊断军团菌肺炎的初步研究

目的探讨双重聚合酶链反应（DPCR）法检测痰及支气管肺泡灌洗液（BALF）中军团菌DNA在早期诊断军团菌肺炎的意义。方法用DPCR对军团菌肺炎组（15例）和普通肺炎组（31例）患者病程早期留取的痰及BALF进行军团菌DNA检测。用军团菌16SrRNA基因和mip基因序列引物,可扩增386bp16SrRNA基因片段和206bpmip基因片段。通过模拟标本来检测DPCR方法用于临床标本时的灵敏度。结果军团菌肺炎组患者痰、BALF的DPCR结果均为阳性,其中13例患者留取的23份痰、7份BALF标本386bp16SrRNA基因片段和206bpmip基因片段的扩增结果均阳性,余2例患者留取的2份痰和1份BALF标本单一386bp基因片段扩增阳性。DPCR结果与血清军团菌抗体结果相符。普通肺炎组患者痰和BALF的DPCR结果均为阴性。同一患者留取的多份标本呈现相同的DPCR结果。模拟痰和BALF的DPCR最低检出限均为1×103cfu/ml。结论采用DPCR法检测痰和BALF中的军团菌DNA,具有较好的敏感性、特异性和稳定性,在临床早期诊断军团菌肺炎方面具有一定的价值。     

用PCR方法检测难辨梭状芽胞杆菌

目的建立PCR方法检测难辨梭状芽胞杆菌．方法采用PCR方法对难辨梭装芽胞杆菌（以下简称c，d）的毒素B基因和毒素A基因进行扩增，同时和细菌厌氧培养法进行对比．结果36例标本中采用PCR方法有16例扩增出毒素B基因（占46．7％），13例扩增出毒素A基因（占36．1％），用细菌厌氧培养法有7例培养出c，d（占19．2％），而且厌氧培养阳性者，用PCR方法也都扩增出毒素B基因和毒素A基因．结论用PCR方法检测c，d比厌氧培养法检出率明显增高（P＜0．05）而且特异性较好．     

荧光探针杂交技术检测临床标本内结核人支杆菌的价值

目的：评价聚合酶链反应（PCR）荧光探针杂交技术（TaqMan技术）检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法：应用细菌学方法（涂片镜检和培养）及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本，53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果：细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36．1％，TaqMan法阳性率为61．7％，高于细菌学检测法，经统计学处理，两者有显著性差异（P＜0．05），用TaqMan法检测临床标本特异性为96．2％，结论：TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化，在单一管内完成，具有简便，快速、防污染，敏感性及特异性较高等优点，是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

建立16S rRNA基因聚合酶链反应方法快速检测脑膜炎奈瑟菌

目的建立以16S rRNA基因为靶基因的聚合酶链反应(PCR)方法,用于快速检测脑膜炎奈瑟菌。方法根据GenBank公布的奈瑟菌属16S rRNA基因序列,使用DNAstar软件设计引物,应用PCR方法特异检测脑膜炎奈瑟菌,对部分菌株结合16S rRNA基因测序和APIRNH生化鉴定系统以验证该方法的准确性,同时与文献报道的检测脑膜炎奈瑟菌crgA-PCR方法进行比较。结果 16S rRNA-PCR与crgA-PCR方法检测脑膜炎奈瑟菌阳性预测值皆为100%,阴性预测值分别为100%和46.94%,假阳性率分别为0%和36.73%,假阴性率皆为0%。约登指数分别为1和0.47。对188名健康儿童咽拭子杂菌DNA应用16S rRNA-PCR和crgA-PCR方法检测脑膜炎奈瑟菌,检测阳性率分别为18.62%(35/188)和15.96%(30/188)。两者同时检测到脑膜炎奈瑟菌的标本为7.98%(15/188)。结论 16SrRNA-PCR方法特异、敏感、快速,可用于脑膜炎奈瑟菌的快速检测与鉴定。     

16SrRNA基因序列分析用于诊断病原性细菌感染初步研究

目的建立一种可适用于多种病原菌检测的方法,以提高病原学诊断率,有利于传染病的病原学监测。方法细菌16SrRNA基因通用引物对直接从血液、尿液、脑脊液标本中提取的细菌DNA进行PCR扩增,并对16SrRNA基因扩增产物进行克隆和序列分析。结果检测了28份临床标本,16SrRNA基因序列分析与尿液细菌培养结果不完全吻合;血液和脑脊液的16SrRNA的检出率均高于细菌培养。结论16SrRNA基因检测分析和细菌培养均具有良好的诊断效果,而针对16SrRNA基因的PCR直接扩增核酸并进行序列分析可对分离培养阴性的标本进行有效的补充诊断,可检测到多种病原菌如肠球菌,大肠杆菌,表皮葡萄球菌,牛链球菌,猪链球菌,布鲁氏菌,表皮葡萄球菌和脑膜炎球菌等,为疾病的诊断提供良好的线索。     

用PCR方法检测粪便难辨梭状芽胞杆菌

目的：采用PCR方法检测粪便难辨梭状芽胞杆菌。方法：北京协和医院的36例应用抗生素后腹泻的病人粪便标本,采用PCR方法对难辨梭状芽胞杆菌（以下简称C．D）的毒素B基因和毒素A基因进行扩增,同时进行厌氧细菌培养。结果：PCR法毒素B基因的阳性率为46．7％（16／36）,毒素A基因为36．1％（13／36）;用厌氧菌培养的阳性率为19．2％（7／36）。PCR检测C．D毒素基因方法与厌氧培养法的一致性为100％。结论：用PCR方法检测C．D比厌氧培养法检出率明显增高（P＜0．05）,与厌氧菌培养法的一致性高。     

荧光探针杂交技术检测临床标本内结核分支杆菌的价值

目的　评价聚合酶链反应(PCR)荧光探针杂交技术(TaqMan技术)检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法 应用细菌学方法(涂片镜检和培养)及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本,53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36.1%,TaqMan法阳性率为61.7%,高于细菌学检测法,经统计学处理,两者有显著性差异(P<0.05),用TaqMan法检测临床标本特异性为96.2%。结论 TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性较高等优点,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

Research and Evaluation of the Influence of the Construction of the Gate and the Influence of the Piston Velocity on the Distribution of Gases into the Volume of the Casting

Distribution of gasses to the cast volume and volume of pores can be maintained within the acceptable limits by means of correct setting of technological parameters of casting and by selection of suitable structure and gating system arrangement. The main idea of this paper solves the issue of suitability of die casting adjustment—i.e., change of technological parameters or change of structural solution of the gating system—with regards to inner soundness of casts produced in die casting process. Parameters which were compared included height of a gate and velocity of a piston. The melt velocity in the gate was used as a correlating factor between the gate height and piston velocity. The evaluated parameter was gas entrapment in the cast at the end of the filling phase of die casting cycle and at the same time percentage of porosity in the samples taken from the main runner. On the basis of the performed experiments it was proved that the change of technological parameters, particularly of pressing velocity of the piston, directly influences distribution of gasses to the cast volume.