大分子物质对中药注射剂的安全性影响

目的去除中药注射剂中大分子物质,观察其主要功效是否改变,安全性是否提高,试图为提高中药注射剂的安全性提供技术策略。方法用不同截留分子量的分子筛去除两种上市中药注射剂(清开灵注射液和双黄连注射液)大分子,获得去除大分子的中药注射液和富含大分子的中药注射液,用HPLC检测去大分子中药注射剂的指纹图谱变化;用脂多糖家兔发热模型检测两种去大分子注射液的退热作用;参照药典方法检测富含大分子中药注射剂的一般毒性或过敏毒性。结果经截留分子量10k的分子筛处理后,两种去大分子中药注射液的指纹图谱变化小于5%,退热作用基本不变;而两种富含大分子注射剂具有明显的一般毒性或过敏毒性。结论采用适当截留分子量的分子筛去除中药注射剂大分子物质能在确保疗效无明显变化的前提下提高中药注射剂的安全性。     

参芪扶正注射液大分子物质研究

目的:建立参芪扶正注射液大分子物质的检测方法,为评价其安全性提供依据。方法:采用超滤离心法分离参芪扶正注射液样品,采用MALDI-TOF-MS检测大分子物质,同时进行豚鼠全身主动过敏试验,根据大分子物质检测结果及过敏反应情况,分析两者之间的相关性。结果:参芪扶正注射液中间体存在分子量3800～4000 Da的大分子物质(植物蛋白与多糖),这些大分子物质会引起豚鼠过敏反应。经过生产过程的逐步除杂,大分子物质在参芪扶正注射液成品中已完全去除。结论:本研究建立了对参芪扶正注射液样品中大分子物质进行检测的方法,具有简便、实用等优点。     

生脉注射液含残留蛋白质的检测

目的:检测生脉注射液不同制备工艺中间体残留蛋白质含量.方法:以残留蛋白质为检测目标,采用透析法获取生脉注射液不同制备工艺中间体中大分子杂质,Bradford法测定各大分子杂质中残留蛋白质含量,结合SDS-PAGE电泳分析各残留蛋白质分子量.结果:在0-8 μg线性范围内,牛血清白蛋白标准品回归方程为:Y=0.0474X-0.003(r=0.9974);不同工艺对提取液中残留蛋白的影响较大,红参提取液含残留蛋白浓度较高;麦冬、五味子提取液残留蛋白含量相对较低;经对SDS-PAGE电泳结果分析,各不同工艺提取液中间体含蛋白质分子量主要集中于6-11万.结论:生脉注射液中间体提取工艺工程中可能有蛋白质残留,应加强残留蛋白质检测及生脉注射液的工艺改进;Bradford法结合SDS-PAGE电泳分析生脉注射液中的残留蛋白质,快速、准确、敏感性及检测结果均较好,可为工业生产提供科学数据参考.     

大分子物质对中药注射剂外观颜色的影响

目的:探究大分子物质对中药注射剂外观颜色的影响。方法:取清开灵、双黄连、丹参和灯盏细辛4种中药注射液,用3、10、30 k超滤管截留制备去大分子注射液和富含大分子注射液,用Tecan酶标仪扫描紫外-可见吸收曲线,分析曲线下面积的变化;用HPLC法检测并分析10 k去大分子液的指纹图谱变化,用冷冻干燥法检测固体物含量。然后用10 k分子筛过滤4种注射液,反复洗涤截留液获得大分子物质。最后用焦性没食子酸和鞣酸模拟中药注射剂变色过程。结果:4种注射液用不同超滤管超滤后,去大分子液的颜色明显变浅,吸收曲线下面积变小,且截留分子量越小,去大分子液的吸收曲线下面积也越小;富含大分子部分的颜色则明显变深,曲线下面积增大;10 k去大分子液的指纹图谱与原液相似,指纹图谱总峰面积变化较小,固体物含量波动在5%以内;焦性没食子酸和鞣酸溶液变色后去除大分子物质,颜色也明显变浅。结论:大分子物质是中药注射剂有色物质的重要来源,去除大分子物质可改善中药注射液外观质量。     

4种去大分子中药注射液与原液的主要疗效对比实验研究

目的:通过动物实验观察4种去大分子中药注射液的主要疗效变化。方法:用孔径为10K的纤维滤器去除清开灵注射液、双黄连注射液、丹参注射液和灯盏细辛注射液中的大分子物质。用家兔脂多糖(1μg/kg)发热模型证实高(3.0 m L/kg)、中(1.5 m L/kg)、低(0.75 m L/kg)剂量的清开灵注射液和双黄连注射液的清热疗效变化;用高分子右旋糖酐复制家兔血瘀模型,观察高中低剂量的丹参注射液(1.2 m L/kg、0.6 m L/kg、0.3 m L/kg)和灯盏细辛注射液(6.0 m L/kg、3.0m L/kg、1.5m L/kg)的活血化瘀作用。结果:去大分子清开灵注射液和双黄连注射液与对应的注射剂原液均能不同程度地降低发热家兔的体温,去大分子丹参注射液和灯盏细辛注射液与对应的注射剂原液均能不同程度地改善血瘀证家兔的血液流变学指标;且同等剂量的去大分子注射液与原液无明显差异。结论:清开灵注射液、双黄连注射液、丹参注射液和灯盏细辛注射液去除大分子物质后,其主要疗效无明显改变。     

凝胶法检测2种中药注射液中内毒素含量

目的:通过特异性及非特异性鲎试剂法对鱼腥草注射液及清开灵注射液的内毒素含量的检测,探讨特异性鲎试剂法检测中药注射剂中内毒素的可行性。方法:采用特异性和非特异性的鲎试剂,对不同批次的鱼腥草注射液、清开灵注射液进行检测。结果:特异性及非特异性的鲎试剂均可检测鱼腥草注射液,其无干扰的最小稀释倍数完全一致;用特异性鲎试剂可以检测清开灵注射液,而用非特异性鲎试剂不能检测。结论:在检测清开灵注射液内毒素含量时,用特异性鲎试剂代替非特异性鲎试剂进行检测是一种较为理想的优化方法。     

清开灵注射液对老年痴呆小鼠血液、脑组织Aβ含量及神经递质的影响

目的:观察清开灵注射液对老年痴呆小鼠血液和脑组织中β-淀粉样蛋白(Aβ)含量以及神经递质乙酰胆碱(Ach)、一氧化氮(NO)水平的影响,探讨清开灵防治老年痴呆的部分作用机制。方法:采用转基因快速老化痴呆小鼠Sam P8模型,按随机数字表法分为模型组、清开灵注射液组、阳性药对照组,以正常老化小鼠Sam R_1为正常对照组。实验组小鼠腹腔注射清开灵注射液1个月后比较各组血清及脑组织中Aβ水平,并检测脑组织中Ach、NO含量。结果:清开灵可明显降低痴呆小鼠血液中Aβ含量,增加脑内神经递质Ach、NO水平。结论:清开灵注射液改善老年痴呆的作用可能与清除血液中Aβ、增加神经递质Ach、NO水平有关。     

中药注射剂树脂检查方法的改进

目的改进中药注射剂中树脂的检查方法,提高检查灵敏度。方法将清开灵注射液、双黄连注射液、丹参注射液和灯盏细辛注射液用分子筛(3 000、10 000、30 000 Da)10倍富集大分子物质,参照《中国药典》方法,取大分子富集液5 m L,氯仿萃取挥干,冰醋酸复溶后加入三蒸水混合30 min,3 000 r/min离心10 min,通过观察有无沉淀来判定树脂有无。结果富集大分子后,可检查到清开灵注射液、双黄连注射液、丹参注射液含有树脂,而灯盏细辛注射液不含有树脂。结论该方法的灵敏度高于药典法,可以用于中药注射剂的树脂检查。     

清开灵注射液中钙元素分析

目的:通过对清开灵注射液组方药材、清开灵注射液和大鼠给药清开灵注射液后体内钙元素含量进行分析,明确清开灵注射液中钙元素的含量、主要来源和不同批次间的差异,推测钙元素是否是清开灵注射液的药效物质基础。方法:采用微波消解法对清开灵注射液、相关药材和大鼠给药清开灵注射液后的血浆样品进行处理,用电感耦合等离子体质谱(ICPMS)法检测其中的钙元素,并结合相关信息学研究对结果进行分析。结果:明确了珍珠母和板蓝根是清开灵注射液组方药材钙元素的主要提供者,且进入到清开灵注射液中的钙元素不足组方药材钙元素质量分数的0.1%。不同批次清开灵注射液中钙元素差异相对差异40%。大鼠尾静脉给予清开灵注射液后,血浆中的钙元素未有统计学意义上的变化。结论:清开灵注射液的制备工艺导致钙元素大量损失,且清开灵注射液中的钙元素未能引起大鼠血浆中钙元素浓度增加,因此钙元素是否是清开灵注射液的药效物质基础有待进一步研究。     

HPLC法测定眼氨肽注射液中大分子蛋白

目的建立眼氨肽注射液中大分子蛋白的检测方法,比较不同厂家生产的眼氨肽注射剂中大分子蛋白的质量分数。方法采用高效液相色谱法测定,TSK-GEL2000SWxl分子排阻色谱柱(300 mm×7.8 mm,5μm),以三氟乙酸–乙腈–水(0.1∶10∶90)为流动相,体积流量为0.6 mL/min,检测波长214 nm,进样体积10μL。采用面积归一化法计算大分子蛋白的质量分数。结果不同厂家生产的眼氨肽注射液中的大分子蛋白质量分数普遍较低,在0.020%~0.245%。结论与原方法20%磺基水杨酸法检测蛋白质比较,本方法的准确度更好,能有效地测定眼氨肽注射液中的大分子蛋白。     

清开灵注射液中大分子物质相对分子质量高效凝胶渗透色谱研究

 目的 清开灵注射液中大分子物质的测定研究。方法 采用高效凝胶渗透色谱法,测定了16批清开灵注射液样品。色谱柱为TSK-Gel GPWXL4000（7.8 mm×300 mm）;流动相为10 mmol·L-1醋酸铵溶液;柱温为40 ℃,流速为0.6 mL·min-1,蒸发光散射检测器（氮气流速3.2 L·min-1;漂移管温度115 ℃）。结果 5家公司清开灵注射液M≥10 000平均分子累计峰面积比为0.107%,0.127%,0.727%,0.283%和0.553%。结论 该方法可用于清开灵注射液中大分子物质相对分子质量及其分布的测定;测定结果可为清开灵注射液质量标准提高提供依据。     

清开灵注射液中铅镉含量测定及其来源研究

目的建立石墨炉原子吸收光谱法测定清开灵注射液中铅(Pb)、镉(Cd)含量的方法并探究其来源。方法以微波消解仪处理样品,采用石墨炉原子吸收光谱法测定清开灵注射液原料、制剂中间体和成品中的Pb、Cd含量。结果 Pb、Cd标准曲线的回归方程分别为Y=0.007 3X+0.011 6、Y=0.056 7X+0.060 4,加样平均回收率分别为97.0%、95.6%。通过测定清开灵注射液原料、制剂中间体及成品的Pb、Cd含量,确定成品中的Pb、Cd主要来源于原料。结论本方法快速、灵敏、准确,适用于清开灵注射液中Pb、Cd含量的测定。     

清开灵注射液生物热活性指纹图谱的初步研究

 目的研究清开灵注射液作用于金黄色葡萄球菌的生物热活性指纹图谱,探索清开灵注射液质量的生物活性评价新方法。方法采用微量量热法,在合适测试浓度下,分别测定各清开灵注射液样品生物热活性指纹图谱,并进行定性、定量分析。结果不同厂家及同厂家不同批次清开灵注射液样品的生物热活性指纹图谱相似度及热动力学参数存在不同程度差异,一个过期样品亦可被区分。结论该方法简便可靠,可为清开灵注射液的质量控制提供参考,为从活性角度研究中药注射液的质量一致性和稳定性提供了一种很好的思路。     

全蝎蛋白药效组分的生物鉴定法研究

目的 :研究全蝎蛋白药效组分的提取方法,摸索全蝎蛋白药效组分SDS-PAGE的最佳电泳条件,测定全蝎蛋白药效组分电泳图谱条带的大致分子质量,确定其SDS-PAGE的表达特征,从而建立全蝎蛋白药效组分的电泳鉴别法。 方法 :采用水提与盐析法获得全蝎蛋白药效组分,考马斯亮蓝法测定蛋白药效组分的蛋白质含量,SDS-PAGE法和Alpha Ease FC 4.0.0软件测定全蝎蛋白药效组分的蛋白质相对分子质量。 结果 :全蝎蛋白药效组分的蛋白质质量分数为50.37%;得到较好的全蝎蛋白药效组分的10条电泳谱带,相对分子质量分别为94.162 0,66.400 0,40.357 0,27.541 0,22.518 0,19.520 0,12.766 0,11.190 0,9.665 3,8.534 2 KDa。 结论 :这10条谱带是全蝎蛋白药效组分的特征谱带,可用于全蝎蛋白药效组分的鉴别。     

清开灵注射液对人食管癌 Ec-109细胞的体外抑制作用

目的：探讨中药制剂清开灵注射液对人食管癌Ec-109细胞的体外抑制作用。方法体外培养人食管癌细胞株Ec-109,分别给予不同剂量的清开灵注射液对体外培养的Ec-109细胞进行干预,然后用MTT法测定清开灵注射液对Ec-109细胞增殖抑制作用;用AO/EB染色检测细胞凋亡情况。结果 MTT和染色实验均显示清开灵注射液能明显抑制Ec-109细胞的生长。结论清开灵注射液对人食管癌Ec-109细胞具有明显的增殖抑制和促进凋亡作用。     

清开灵注射液中间体银黄液中黄芩苷含量近红外测定方法的建立和验证

目的:建立清开灵注射液生产过程中间体银黄液中黄芩苷的近红外定量模型,并对其进行方法学验证。方法:采用近红外透射模式,以高效液相色谱分析值为参考值,采用偏最小二乘回归法(PLS)建立黄芩苷含量的近红外定量校正模型。采用相关系数(R)、校正标准差(SEC)、预测标准差(SEP)等参数评价模型,并运用AP方法验证模型。结果:所建模型的Rcal和Rval为0.9978和0.9995,SEC和SEP为723.0μg/mL和513.8μg/mL,模型预测效果良好;在β-期望容差区间为90%,容许极限为15%,风险性为10%的约束下,该模型各项分析指标满足分析要求,最低定量限为8 025μg/mL。结论:当黄芩苷含量大于8 025μg/mL时,所建近红外分析模型稳健可靠,可用于清开灵注射液生产过程中间体银黄液中黄芩苷快速准确定量。     

清开灵注射液对急性脑缺血大鼠不规则趋化因子表达的影响

目的:观察清开灵注射液对大鼠脑梗死缺血性损伤急性期阶段,不规则趋化因子(Fractalkine,FKN)的表达变化,探讨清开灵注射液治疗急性脑缺血的可能机制.方法:线栓法制备大鼠大脑中动脉永久性梗死模型(MCAO),随机分为假手术组、模型组,清开灵注射液观察组,TTC染色观察大鼠治疗前后脑组织梗死体积变化,同时采用蛋白...     

清开灵注射液细菌内毒素检查法研究

目的：建立清开灵注射液的细菌内毒素检查方法。方法：通过预试验和干扰试验确定清开灵注射液的有铲稀释浓度和相应的鲎试剂灵敏度。结果：清开灵注射液经３２倍稀释,可用灵敏度为０.03Eu/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查。结论：细菌内毒素检查法适用于清开灵注射液。     

依达拉奉联合清开灵注射液治疗急性脑出血疗效评价

目的观察依达拉奉联合清开灵对急性脑出血患者预后的影响。方法选择发病48h内的急性脑出血患者90例，随机分为依达拉奉组（30例）、清开灵组（30例）及联合组（依达拉奉联合清开灵30例）；比较治疗前、治疗后第14日、治疗后3个月时的美国国立卫生研究院卒中量表评分（NHISS）及治疗前、3个月时BI指数以及三组间的临床疗效。结果联合组NHISS评分及BI评分幅度变化大于清开灵组及依达拉奉组，而依达拉奉组NHISS评分及BI评分幅度变化大于清开灵组，差异具有统计学意义。结论依达拉奉联合清开灵治疗脑出血能显著提高脑出血患者的预后。     

清开灵注射液配伍注射用头孢西丁钠的稳定性研究

目的研究清开灵注射液与注射用头孢西丁钠配伍的稳定性。方法在模拟临床用药浓度条件下,考察清开灵注射液与注射用头孢西丁钠配伍后4 h内溶液的外观、pH值、不溶性微粒的变化,并采用高效液相色谱法测定配伍液中黄芩苷和头孢西丁。结果 4 h内配伍液的外观、pH值无明显改变。随着时间的延长,配伍液中10μm、10μm以上的不溶性微粒数增多,1 h后超过《中国药典》2010年版标准。黄芩苷和头孢西丁的质量浓度均逐渐降低。结论清开灵注射液与注射用头孢西丁钠配伍后4 h内不稳定,不建议配伍使用。