细胞因子诱导的杀伤细胞对人宫颈癌HeLa-luc细胞荷瘤裸鼠模型的抗肿瘤作用

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)抗肿瘤活性,及其作用机制.方法:人宫颈癌细胞HeLa-luc接种BALB/ C裸鼠建立动物模型.从健康人外周血单个核细胞诱导培养CIK细胞.CIK或PBS经瘤周注射入荷瘤鼠体内.应用活体生物发光成像技术观察肿瘤大小变化.观察肿瘤的体积和重量变化. ELISA法检测荷瘤鼠外周血中IFN-γ水平.HE染色观察肿瘤、肺脏、肝脏及脾脏的病理形态学变化.结果:CIK治疗后实验组(CIK)肿瘤明显比对照组(PBS)体积小,P<0.05.接种HeLa-luc细胞第5、8周的抑瘤率分别为47.18%、64.38%.接种HeLa-luc细胞第8周实验组血清中IFN-γ[(61.92±6.49) ρg/mL]明显高于对照组[(34.30±1.78) ρg/mL],P<0.01.实验组和对照组中,肿瘤组织形态学无明显差别.实验组肺脏、肝脏未见癌结节出现,但均有炎细胞浸润.对照组肺脏出现大量癌结节而肝脏未见癌结节出现.两组脾脏中均可见癌结节.结论:CIK细胞可以明显抑制肿瘤的生长,其机制可能与免疫细胞产生IFN-γ有关.该研究为肿瘤的临床过继免疫治疗提供了理论依据.     

IL-24对CIK细胞体内杀伤肿瘤细胞活性的影响

目的 研究IL-24对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)体内杀伤肿瘤细胞活性的影响。方法 (1)从健康人外周血中提取单个核细胞,第一天加入IFN-γ(1 000 IU/mL),第二天加入IL-1(100 IU/mL)、CD3mAb(50 ng/mL)、IL-2(300 IU/mL)诱导CIK细胞,另一组与IL-1、CD3mAb、IL-2同时加入IL-24(1 000 IU/mL);(2)建立HepG₂肿瘤细胞株荷瘤小鼠皮下移植瘤模型,分为五组,每三天分别测量肿瘤大小。结果 IL-24诱导CIK细胞治疗组荷瘤小鼠实体瘤体积小于其它组(P＜0.05)。结论 在CIK细胞诱导过程中加入IL-24能明显增强其体内的抗肿瘤活性,对临床上把CIK细胞用于生物治疗有一定的指导意义。     

CIK细胞体内外抗宫颈癌HeLa细胞活性的研究

目的：探讨细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞的体内外抗宫颈癌HeLa细胞活性。方法：收集8名健康献血者和8名宫颈癌患者的新鲜外周血,分别通过常规方法分离外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）,应用相应细胞因子体外诱导分化出CIK细胞,动态观察CIK细胞的体外增殖活性、细胞表型和对HeLa细胞的杀伤活性;在BALB/c裸鼠皮下接种效应细胞,观察宫颈癌患者CIK细胞对接种HeLa细胞的荷瘤鼠的抑瘤作用,同时设淋巴因子激活的杀伤细胞（lymphokine activated killer cells,LAK）和PBMC细胞作为对照。结果：源于健康人和宫颈癌患者的CIK细胞间的增殖活性无明显区别（P〉0.05）。表型分析结果表明,两种来源的CIK细胞中CD3~＋CD56~＋双阳性细胞均得到了大量扩增,宫颈癌患者CIK细胞中CD3~＋CD56~＋双阳性细胞在实验开始前约占0.13%,到实验后第28天上升到25.8%。体外实验表明,宫颈癌患者的CIK细胞杀伤宫颈癌HeLa细胞的细胞毒活性明显高于PBMC细胞。裸鼠体内实验表明,宫颈癌患者CIK细胞能够显著抑制肿瘤的生长,其抑瘤率可达80.6%,高于LAK细胞的59.1%和PBMC细胞的38.3%（P〈0.01）。CIK治疗后肿瘤体积明显比空白对照组缩小（P〈0.05）。结论：宫颈癌患者CIK细胞具有较强的体内外抗宫颈癌细胞活性,有可能用于临床上宫颈癌的过继性免疫治疗。     

负载小鼠端粒酶逆转录酶基因的树突状细胞体内诱导抗肝癌免疫应答

目的 探讨小鼠端粒酶逆转录酶(mTERT)基因修饰的树突状细胞(Ad-mTERT-DC)在体内诱导抗肝癌活性的情况.方法 选用Bal B/c小鼠肝癌种植模型,用携带mTERT基因的重组腺病毒载体(Ad-mTERT)转染小鼠体外培养的DC,对同系小鼠进行免疫.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测脾细胞体外抗原再刺激后白介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)水平,酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测分泌IFN-γ细胞的数量,51Cr释放法检测细胞毒T淋巴细胞杀伤活性.接种H22细胞后,观察肿瘤大小及荷瘤小鼠存活情况.并进一步观察,在H22移植瘤存在的情况下,Ad-mTERT-DC是否能够有效抑制肿瘤生长.结果 小鼠脾细胞体外接受抗原再刺激后,Ad-mTERT组IL-2和IFN-γ水平以及IFN-γ分泌细胞的数量分别为871.25 pg/ml、169.15 ng/ml和378/106个脾细胞,显著高于Ad-GFP组(131.6 pg/ml、15.4 ng/ml和36/106个脾细胞,均P<0.05)、DC组(71.3 pg/ml、10.5ng/ml和21/106个脾细胞)和PBS组(65.8 pg/ml、7.4 ng/ml和18/106个脾细胞,均P<0.05).Ad-mTERT-DC能诱导特异性CTL的产生,在效靶比为90:1时,Ad-mTERT组的特异性杀伤率为58.7%,明显高于Ad-GFP组(10.3%)、DC组(2.9%)和PBS组(1.7%).接种后第27天,Ad-mTERT组中成瘤小鼠的肿瘤平均直径明显低于各对照组(P<0.05),小鼠存活时间明显延长(P<0.05).Ad-mTERT组抑瘤率为43.6%,明显高于PBS组、DC组和Ad-GFP组(均P<0.01).结论 Ad-mTERT-DC在小鼠体内可诱导出mTERT抗原特异性的抗肿瘤活性,对肝癌有预防和治疗作用.     

IL-12对CIK细胞体外增殖及体内外杀瘤活性影响的实验研究

目的 动态观察IL-12对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)体外增殖,体内外的细胞毒活性的影响.方法 采用三种不同的细胞因子组合扩增CIK细胞,即IL-2组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1和IL-2;IL-2加IL-12组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1、IL-2和IL-12;IL-12组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1和IL-12.流式细胞术分析细胞表型,细胞计数法测定细胞的增殖.MTT法测定CIK体外细胞毒活性,并通过做扫描和透射电镜,对CIK细胞杀伤的肿瘤细胞进行形态学观察.研究CIK细胞对BGC-823荷瘤裸鼠的体内抗肿瘤作用.结果 三种方法均可使细胞增殖能力显著增加,对CD3+CD56+细胞的诱导作用也无明显差异,IL-12与IL-2联合作用组促增殖能力和细胞毒性作用明显强于其他两组(P＜0.05).被CIK细胞杀伤的肿瘤细胞的死亡形式是坏死和凋亡.动物实验证实CIK有较强的体内抗瘤活性,可延长荷瘤鼠的生存期,联合IL-12与IL-2诱导的CIK细胞疗效较好.结论 IL-12同样可以用于CIK细胞的诱导,而联合IL-12与IL-2诱导的CIK细胞其增殖能力和体内外抗肿瘤活性均增强.     

IL-12诱导肝癌微环境中NK细胞活化发挥抗肿瘤作用

目的:探讨IL-12通过诱导肝癌微环境中NK细胞活化诱导抗肿瘤的效果。方法:NOD/SCID小鼠皮下注射肝癌HepG2细胞,成瘤后腹腔注射人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL),建立HCC-huPBL荷瘤小鼠模型。将荷瘤小鼠随机分为IL-12组和PBS对照组,瘤内注射IL-12后,观测荷瘤小鼠瘤体积、体重、一般状况的变化,IL-12瘤内注射后第30天ELISA法检测荷瘤小鼠肝癌组织微环境中IL-12、INF-γ含量以及小鼠外周血中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amin-otransferase,AST)及谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)的含量,免疫组化法检测IL-12治疗后肝癌微环境中NK细胞活化性受体NKG2D、NKp44、NKp30、NKp46,以及抑制性受体KIR2DL3/CD158b、NKG2A/CD159a的表达。结果:第12、18、24、30天IL-12组荷瘤小鼠瘤体积均小于PBS组[(594.47±205.51)vs(832.10±187.49)mm3,(963.61±427.95)vs(1 350.87±468.23)mm3,(1 285.02±368.56)vs(1 975.49±655.54)mm3,(1 903.64±471.34)vs(2 568.77±784.68)mm3,均P<0.05]。IL-12组小鼠肝癌组织中IL-12与INF-γ的表达水平均明显高于PBS组[(2.96±1.02)vs(1.35±0.75)pg/ml,(12.26±4.11)vs(7.81±3.46)pg/ml,均P<0.05]。IL-12组与PBS组相比,血清ALT水平第7天显著升高[(73.85±10.71)vs(41.73±13.13)U/L;P<0.05],第14天达到高峰。IL-12组治疗后肝癌组织中NK细胞活化性受体NKG2D、NKp44、NKp30的表达较PBS组高(P<0.05),NKp46的表达未见明显升高;而NK细胞抑制性受体CD158b和CD159a表达较PBS组低(P<0.05)。结论:肝癌模型小鼠瘤体内IL-12注射可上调瘤组织内NK细胞活化性受体、IL-12、IFN-γ的表达,下调抑制性受体的表达,从而抑制小鼠模型中肿瘤的生长。     

共培养的树突细胞和CIK细胞对肺癌的体内外抑癌作用

背景与目的:细胞因子诱导的杀伤(cytokine-inducedkiller,CIK)细胞是高效的肿瘤杀伤细胞。树突细胞(dendriticcells,DCs)是体内最强的抗原递呈细胞,并且能够提高效应细胞的抗瘤活性。本实验将DCs和CIK细胞共培养观察DCs对CIK细胞的细胞表型、增殖活性及体内外的抗肺癌作用的影响。方法:从健康人外周血单个核细胞中常规诱导出DCs、CIK细胞后,将DCs和CIK细胞按1∶10比例共培养5天获得DC-CIK细胞。流式细胞仪测DC-CIK细胞表型变化,3H-TdR掺入法测定其体外的细胞毒活性,并用肺腺癌细胞株A549建立裸鼠模型观察DC-CIK体内的抗肿瘤效果。结果:在培养第14天,DC-CIK细胞与单独CIK细胞培养组相比,增殖速率提高[(17.0±1.8)倍vs.(10.9±2.0)倍,P<0.05],CD3 CD56 表达水平明显上调[(36.0±4.2)%vs.(25.7±2.9)%,P<0.05],同时对A549细胞的细胞毒活性明显增强(P<0.05)。裸鼠体内实验表明,接种肺癌细胞51天后DC-CIK组、CIK组的抑瘤率分别为62.9%、41.5%,与对照组相比DC-CIK组及CIK组均抑制裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0.01),且DC-CIK组与CIK组抑瘤效应差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DCs与CIK细胞共培养可使CIK细胞获得更高的增殖活性和更强的抑癌作用。     

Exosomes联合卡介苗的体内抗肿瘤效应

目的: 探讨细胞因子诱导杀伤细胞(cytokineinduced killer cell,CIK)对裸鼠胃癌移植瘤的靶向抑制作用。方法:将人胃癌细胞SGC7901注射到裸鼠腹股沟皮下建立胃癌移植瘤裸鼠模型,荷瘤裸鼠随机分为CIK细胞组与成纤维细胞组,分别注射荧光染料SPDiI标记的CIK细胞与成纤维细胞(HFLI)于裸鼠种植瘤对侧腹股沟皮下, 观察其在荷胃癌裸鼠体内各种组织中的分布情况;同时观察CIK治疗后肿瘤的体积大小并计算抑瘤率,病理观察肿瘤的坏死面积。结果: SPDiI标记的CIK细胞注射后10 d主要浓集在荷瘤裸鼠的肿瘤组织,注射局部、肝脏、脾脏和肺脏组织中无CIK细胞或分布极少（P＜001）;标记的成纤维细胞没有出现在肿瘤组织、肝脏、脾脏和肺脏组织,主要集中于注射局部。CIK细胞治疗后裸鼠的移植瘤体积显著小于对照组（P＜0.05）,其抑瘤率为29.82％;移植瘤组织坏死面积评分显著高于对照组（P＜0.01）。结论: CIK细胞对裸鼠胃癌移植瘤有良好的靶向性和杀伤性。     

两种不同成分培养基制备CIK细胞的生物学特征

目的:采用细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell,CIK cell)培养基(含低浓度IL-2、IFN-γ、IL-12和anti-CD3)和NK培养基(含高浓度IL-2和anti-CD3)体外刺激诱导CIK,分析CIK细胞的扩增、表型和细胞因子分泌情况。方法:健康自愿者来源的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),分别加入CIK培养基和NK培养基进行诱导培养,24 h后,换用含IL-2的1%自体血浆培养基继续诱导培养2周。在培养的第6天和第10天检测培养上清中IFN-γ的分泌情况,在培养的第10天以流式细胞术检测两组培养细胞表面CD3、CD4、CD8、CD16、CD56的表达情况。结果:CIK培养基和NK培养基均可使培养细胞在第7天时开始明显扩增,第10天时可扩增至200倍。其中,CIK培养基获得的细胞扩增倍数明显高于NK培养基,其IFN-γ分泌明显高于NK培养基组[(724.7±434.8)vs(108.9±60.6)pg/ml,P<0.01];而以NK培养基培养的细胞,CD3-CD16+CD56+细胞比例高于CIK培养基[(6.27±3.33)%vs(2.88±1.88)%,P<0.05]。结论:不同成分的CIK培养基和NK培养基均可促进CIK细胞的扩增和成熟,但呈现不同的生物学特征。     

负载人AFP肽段的树突细胞在体内外对小鼠肝癌的抑制作用

背景与目的:甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)是原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)免疫治疗的一个良好的靶分子,如何克服对自身抗原的免疫耐受状态是诱导有效抗肿瘤免疫反应的关键.本研究探讨异种同源蛋白疫苗负载人AFP肽段的树突细胞(human AFP-derived peptide-pulsed dendritic cells,hAFP-DCs)对小鼠肝癌的体外杀伤作用和体内抑瘤效应.方法:传统方法制备骨髓来源的DCs.MTT法检测hAFP-DCs诱导的CTL对小鼠肝癌细胞Hepal-6的体外杀伤活性.建立Hepal-6细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型,分别瘤内注射hAFP-DCs、DCs和PBS(每周两次),观察小鼠肿瘤体积和荷瘤存活时间.结果:成功制备小鼠骨髓来源的DCs.体外杀伤实验显示,hAFP-DCs刺激组和单纯DCs刺激组CTL对Hepal-6细胞的杀伤作用强于PBS组,但组间差异无统计学意义(P>0.05).体内实验表明.每个C57BL/6小鼠接种7×106个Hepal-6细胞31 d后,hAFP-DCs、DCs和PBS组小鼠平均移植瘤体积分别为(195.04±155.22)mm3、(360.65±209.02)mm3和(756.19±503.24)mm3,组间比较差异有显著性(P<0.001).在40 d的观察期内,小鼠的累积存活率分别为100%、90%和50%(P=0.008).结论:负载人AFP抗原肽的DEs疫苗在体外和体内均能有效抑制小鼠肝癌的生长.     

多肽负载DC联合CIK治疗激素难治性前列腺癌的疗效

目的:研究多肽负载树突状细胞(dendritic cell,DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对激素难治性前列腺癌(hormone refractory metastatic prostate cancer,HRPC)患者免疫治疗的效果。方法:选择无锡市第四人民医院中西医结合科收治的HLA-A2+HRPC患者26例,分离外周血单个核细胞,其中贴壁细胞经GM-CSF、IL-4联合诱导培养为成熟DC,负载前列腺癌特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)、前列腺酸性磷酸酶(prostatic acid phosphatase,PAP)、前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)三个多肽,制备成DC疫苗,经患者腹股沟皮内注射;未贴壁细胞经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗、IL-1体外诱导培养成CIK,经静脉回输给患者。在治疗后1周进行迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)检测,在患者治疗前后进行血清中细胞因子和PSA检测,治疗结束后4周进行短期疗效评价。结果:26例HRPC患者对DC联合CIK治疗的耐受良好。治疗后患者血清中IL-2、IL-12、IFN-γ水平较治疗前显著升高(上升幅度分别为65.07%、67.69%和125.38%,P<0.05或P<0.01),TNF-α和IL-10水平变化不大;DTH的阳性率为43.5%(10/23);7例患者的CD8+IFN-γ+T细胞比例较治疗前显著提高[(8.95±2.74)%vs(0.39±0.15)%,P<0.01];8/26例患者的PSA下降,降幅为13%～66%。26例患者短期疗效评价,3例PR、4例PD、19例SD,所有患者治疗中未出现明显不良反应。结论:多肽负载DC联合CIK治疗HRPC能激发患者的免疫应答、诱导Th1型细胞因子的分泌,近期疗效良好,是一种安全的治疗方法。     

健康人和肝癌患者CIK体外增殖能力及对原代肝癌细胞抗肿瘤作用的比较研究

目的探讨源自健康人和肿瘤患者的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)体外增殖能力及对原代肝癌细胞的抗肿瘤作用的差异,进一步了解CIK的抗肿瘤作用.方法分离健康人和肝癌患者外周血单个核细胞经细胞因子激活诱导培养为CIK,流式细胞分析检测CIK免疫表型;用机械研磨法将新鲜肝癌组织标本分离成单细胞悬液;四甲基偶氮唑盐法榆测两种CI...     

In vivo distribution and antitumor effect of infused immune cells in a gastric cancer model

Adoptive cellular transfer has been employed for cancer immunotherapy, including patients with gastric cancer. However, little is known about the distribution of effector cells after their injection via different pathways. In this study, we used human gastric cancer cells (BGC823) tagged with enhanced green fluorescent protein (EGPF) to establish a subcutaneous gastric cancer model in nude mice. Cytokine-induced killer (CIK) cells and cytotoxic T?lymphocytes (CTLs) were generated from human peripheral blood and labeled with red fluorescent PKH26. A portion of CIK?cells was armed with CEA/CD3-bispecific single-chain antibody. When CIK?cells were injected into nude mice with established subcutaneous gastric cancer via peritumoral (p.t.), intravenous (i.v.) and intraperitoneal (i.p.) infusion respectively, the distribution of cells was observed using a live fluorescence imaging system. We found that only a very small number of CIK?cells could travel to the tumor site after i.p. or i.v. infusion, and they inhibited subcutaneous tumor growth in?vivo only immediately following injection. In contrast, p.t. injection resulted in a significantly higher accumulation of CIK?cells at the tumor site for 48 hours and mediated the greatest tumor inhibition compared with the other two injection methods. In addition, we compared the antitumor activity of CIK, CEA/CD3-bscAb-CIK and CTL?cells in?vitro and in?vivo after p.t. injection. Among the three types of immune cells, CTLs demonstrated the strongest antitumor activity both in?vitro and in?vivo. CEA/CD3-bispecific single chain antibody could effectively link T?lymphocytes and tumor cells expressing CEA, and resulted in significantly higher accumulation of CIK?cells at the tumor site compared with the parental CIK?cells. This study indicates that peritumoral injection of immune effector cells by minimally invasive surgical procedures represents an effective delivery method of adoptive cellular immunotherapy. Tumor-specific immune cells, such as CTLs, are a better choice of effector cells than CIKs in cellular immunotherapy. Furthermore, CD3+ immune cells armed with the CEA/CD3-bispecific single chain antibody could more effectively travel to and accumulate at the site of tumors expressing CEA, such as gastric cancer.     

细胞因子诱导激活的杀伤细胞联合化疗治疗晚期结直肠癌的临床观察

 目的 评价细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）联合化疗治疗晚期大肠癌的临床疗效。方法 取外周血50 ml,分离单个核细胞,体外经IL-2、IFN-γ、抗CD3单抗、IL-1刺激培养8天后获得CIK细胞。CIK联合化疗组、行单纯化疗的同期配对晚期大肠癌组患者各50例,比较近期疗效及生存率,流式细胞术检测回输CIK前后患者免疫学指标,并观察其生活质量改善情况及不良反应。结果 CIK细胞治疗前患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+和NK细胞比例分别为54.779±14.228%、30.821±11.554%、16.676±6.256%、18.705±9.347%,治疗后分别为65.236±14.901%、37.292±8.880%、25.229±6.711%、22.950±8.9323%,较治疗前均显著提高(P<0.05);CIK联合化疗组患者生活质量明显改善,不良反应轻微;CIK联合化疗组的疾病控制率(DCR)率为64%（32/50）高于单纯化疗组的40%（20/50）(P<0.05),CIK联合化疗组与单纯化疗组生存率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 CIK联合化疗可增强晚期大肠癌患者免疫功能,提高患者生活质量,有较好的临床疗效。     

负载人结肠癌Lovo细胞总RNA抗原树突状细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞在体外特异性杀伤的影响

目的 探讨人结肠癌Lovo细胞总RNA抗原致敏的树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)在体外特异性杀伤的影响.方法 利用Ficoll密度梯度离心法提取脐血单核细胞,分别诱导CIK和DC细胞,并用流式细胞仪检测其免疫表型.采用Trizol提取结肠癌Lovo细胞总RNA作为肿瘤细胞抗原,转染脐血来源的DC.实验分为3组:转染Lovo DC共培养CIK组、未转染DC共培养CIK组和单纯CIK组.靶细胞为Lovo细胞,在效靶比为50∶1和20∶1的条件下以噻唑蓝法分别检测CIK的体外杀伤活性.结果 在效靶比为20∶1时,负载Lovo RNA抗原的DC能诱导出CIK对Lovo细胞最强的细胞毒杀伤力为(76.49±4.21)%,DC+CIK组次之为(53.84±2.15)%,CIK组细胞毒性最低为(32.20±3.07)%,且两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肿瘤细胞总RNA提取方法简单,易于临床实施,其作为抗原致敏DC能强化CIK的特异性杀伤,将有很好的临床应用前景.     

DC-CIK细胞的制备及其对恶性肿瘤的疗效观察

目的：探索DC-CIK细胞应用于临床的质量控制及对恶性肿瘤的疗效.方法：选取陕西省友谊医院肿瘤生物诊疗科中晚期恶性肿瘤患者33例（恶性黑色素瘤3例,肠癌4例,肺癌5例,胃癌3例,食管癌4例,宫颈癌7例,肾癌7例）.采集患者外周血分离PBMC,诱导DC-CIK细胞,并扩增培养.质控检测细胞数量和活细胞比例、细胞毒活性、感染源、流式细胞术检测免疫表型.将检测合格后的DC-CIK细胞分5次静脉回输入患者体内,每2天回输一次,每疗程5次,共2个疗程,观察治疗效果和不良反应.结果：经诱导后的DC-CIK细胞符合预期免疫活性细胞质控的各项要求.33例患者经治疗后,完全缓解3例,部分缓解17例,稳定9例,进展4例.总有效率60.6％,临床受益率87.8％.治疗后患者外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD3＋CD56＋T细胞比例分别为（60.25±7.75）％、（29.76±3.85）％、（30.25±4.35）％和（18.20±4.30）％,较治疗前均明显增高（P均＜0.05）.生活质量KPS评分较治疗前明显上升（P＜0.01）[（75.3±7.6）分vs（58.5±6.2）分].无严重不良反应和化验指标异常.结论：DC-CIK细胞制剂质量控制指标切实可行,对恶性肿瘤有较好的临床疗效,并能有效增强患者的免疫功能.     

自体肿瘤抗原负载的树突细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞治疗中晚期非小细胞肺癌

 【摘要】　目的　观察自体肿瘤抗原负载的树突细胞（DCTAA）联合配型脐血来源的细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）免疫联合治疗48例中晚期肺癌的临床疗效。方法　采用配型的脐血分离单个核细胞（PBMC）,在体外用多种细胞因子[CD3McAb、白细胞介素（IL）-2、肿瘤坏死因子（IFN）-γ、IL-1α等]共同诱导成CIK和树突细胞（DC）,经过12～15 d诱导扩增后获得CIK细胞,再经严格质控检测合格后,分6次回输患者体内,每疗程回输细胞总数为（5～8）×109个。培养的第5天用自体肿瘤抗原负载DC,第8天收获DCTAA,行淋巴结部位皮下注射,观察患者接受治疗后瘤体的大小、临床症状积分、生活质量及免疫学指标、Karnofsky评分、体质量、不良反应等的变化,同时记录患者的生存期。结果　48例接受脐血DCTAA-CIK治疗的患者中,完全缓解（CR）+部分缓解（PR）为37例,总缓解率 77.1 %。临床症状评分改善率 78.9 %～84.7 %;Karnofsky评分提高率为89.6 %（43／48）。1年生存率80.6 %。不良反应轻微。DCTAA-CIK细胞治疗患者外周血CD3、CD4 T细胞和NK细胞比例均显著提高[（42.21±6.12）%、（24.42±3.01）%、0.99±0.34、（24.98±3.02）%与（71.58±7.64）%、（37.25±2.13）%、1.62±0.45、（35.23±4.11）%]（t值分别为6.34、5.67、0.25、4.43,P值均<0.01）。结论　脐血来源的DCTAA-CIK细胞过继性免疫治疗是治疗中晚期肺癌的一种良好的方法,能显著提高患者免疫功能,改善患者临床症状,提高生存质量,延长生存期。     

CIK分泌的细胞因子对逆转耐顺铂肺腺癌细胞系A549/DDP耐药性的研究

  目的   探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer, CIK) 分泌的细胞因子在逆转耐顺铂(DDP) 人肺腺癌细胞系A549/DDP顺铂耐药性中的可能作用。   方法  采用transwell非接触共培养CIK与A549/DDP细胞, 收集不同时间点的共培养上清, 酶联免疫试剂方法(ELISA) 检测IFN-γ、TNF-α、IL-2的分泌情况, 四氮甲唑兰比色法(MTT法) 检测DDP耐药性的变化, 实时定量PCR检测GST-π基因表达水平的变化。   结果  分析发现A549/DDP细胞的耐药逆转与IFN-γ的分泌水平显著相关, 与TNF-α、IL-2的分泌量无显著相关。给予anti-IFN-γ中和抗体后, 共培养20h A549/DDP的DDP耐药性显著上升(P < 0.05), GST-π基因水平的表达量较未加中和抗体组也显著增加(P < 0.05)。而加入anti-TNF-α、anti-IL-2中和抗体组, A549/DDP细胞的DDP耐药性及GST-π基因水平的表达量较未加入中和抗体组无明显变化(P > 0.05)。   结论  CIK通过分泌IFN-γ下调A549/DDP细胞中GST-γ的表达来实现其逆转DDP耐药的作用。      

CIK细胞联合贝伐单抗对肝癌HepG2细胞的体内外抗瘤活性

目的:探讨细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞联合贝伐单抗(bevacizuma)对肝癌HepG2细胞的体内外抗肿瘤活性及其作用机制.方法:提取健康供血者外周血的单个核细胞(PBMC),加入多种细胞因子促进CIK细胞成熟,在流式细胞仪上进行CIK细胞的免疫表型分析.CIK细胞与贝伐单抗单独或联合作用于HepG2细胞后,利用CCK-8测定其对HepG2细胞体外增殖活性的影响;利用侵袭小室(Transwell)和划痕实验测定其对HepG2细胞侵袭迁移活性的影响;Western blotting检测HepG2细胞Akt和Erk信号通路相关蛋白磷酸化的变化.建立HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤模型,并随机分为生理盐水组、CIK组、贝伐单抗组及CIK细胞联合贝伐单抗组,给药28 d后处死裸鼠,剥取瘤体,免疫组化法检测瘤组织CD31及Ki67蛋白的表达.结果:提取健康人PBMC诱导14 d后,CIK细胞表型分析显示CD3+ CD56+细胞扩增达(36.33±2.58)％.与单独治疗组比较,联合组对HepG2细胞的抗肿瘤增殖活性显著增强(P ＜0.05);CIK细胞和贝伐单抗两药联合比单独给药组对HepG2细胞的侵袭[(75.6 ±9.53) vs (304.8 ±45.73)、(359.8 ±38.10)个,P＜0.01]和迁移[(29.35±8.14)％vs (55.07±6.27)％、(60.50±9.73)％,P＜0.05]能力的抑制更强;CIK细胞和贝伐单抗两药单独及联合都能抑制Akt和Erk的磷酸化;CIK联合贝伐单抗组可显著抑制移植瘤生长以及移植瘤组织平均血管密度和Ki67表达,与单独治疗及对照组细胞比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:CIK联合贝伐单抗在体内外对HepG2细胞增殖、侵袭、迁移均有抑制作用,且优于单独治疗组.