乙肝病毒X蛋白诱导HeLa细胞和转基因小鼠肝细胞凋亡的研究

背景与目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白在细胞凋亡中的作用.材料与方法:采用基因重组技术构建乙型肝炎病毒x基因的真核表达载体pcDNA3-HBx.脂质体FuGENE6转染HeLa细胞,并用蛋白印迹检测pcDNA3-HBx在HeLa细胞中的表达.流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:成功构建了可在真核细胞中稳定表达X蛋白的HBx基因真核表达载体pcDNA3-HBx.稳定转染pcDNA3-HBxDNA的HeLa-Xs细胞的凋亡率为9.8%,较空白HeLa细胞的凋亡率(0.4%)以及对照细胞HeLa-Vs细胞的凋亡率(1.3%)高;两只转基因小鼠肝细胞的细胞凋亡率分别为54.4%和40.4%,较正常小鼠肝细胞的细胞凋亡率(6.8%)明显增高.结论:X蛋白可在体外和体内诱导细胞凋亡.     

NF-κB的活性对TRAIL诱导肿瘤凋亡的影响研究进展

0 引言`` 1986年,Sen等~([1])首先从B淋巴细胞核中检测到一种蛋白因子,它能与免疫球蛋白κ轻链基因增强子_κB序列(5'-CGATITCC-3)特异结合,并促进κ链基因表达,将之命名为核转录因子κB(nuclearfactor-kappa B,NF-κB).此后研究表明,NF-κB是一种普遍存在的转录因子,能与调控免疫应答、炎性反应、细胞生长分化凋亡等所需的许多细胞因子、黏附分子等基因的启动子或增强子的κB位点特异性结合,启动和调节这些基因的转录,在机体的免疫应答、炎性反应、细胞生长分化和凋亡等方面起重要作用.     

乙型肝炎病毒X蛋白在肝细胞癌微环境中的作用及其机制

乙型肝炎病毒（HBV）慢性感染是诱发肝细胞癌（HCC）的重要危险因素，而炎症的持续存在可形成一种适宜肿瘤存活 的微环境（TME），其X基因编码并表达的乙型肝炎病毒X蛋白（HbX）作为一个多功能调节蛋白，它通过与TME中的肿瘤细胞及 周围基质成分相互作用，促进HCC的发生和发展。本文通过对近期文献进行回顾总结，着重分析了HbX在HCC-TME中引发 HCC侵袭和转移的作用机制，包括参与癌细胞增殖与凋亡、抑制机体免疫、促进肝细胞自噬、诱导细胞外基质重塑以及调控干细 胞特性等方面，以期为临床HBV相关HCC提供新的治疗思路。     

抑制NF-κB通路增强蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡

目的:观察蟾蜍灵对HL-60细胞活力和凋亡的影响,对NF-κB通路的作用,探讨NF-κB通路在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用.方法:锥虫蓝染色检测细胞活力;流式细胞仪技术检测细胞凋亡和周期分布;采用Western Blot技术检测IKK的磷酸化.结果:蟾蜍灵以时间和剂量依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡.24,48和72h抑制细胞活力的IC50浓度分别为26.3,7.8和2.0nmol/L.对照组HL-60细胞有pIKK表达,蟾蜍灵可诱导IKK的快速活化.NF-κB通路的特异性抑制剂Bay 11-7082增强蟾蜍灵的凋亡诱导作用.结论:蟾蜍灵可诱导HL-60细胞凋亡,促进IKK活化与NF-κB通路调节相关,而且与NF-κB通路抑制剂有协同作用.     

乙肝病毒X蛋白增加HepG2细胞ras表达

目的:研究转染乙肝病毒X基因后HepG2肝癌细胞H-ras表达的变化,以及拉米夫定是否能抑制其表达。方法:采用细胞免疫化学法、Westernblot技术检测乙肝病毒X蛋白对HepG2细胞以及核苷类似物拉米夫定对转染有乙肝病毒X基因的HepG2x细胞H-ras表达的影响。结果:X蛋白能增加HepG2细胞胞浆内H-ras表达,其面积光密度值较转染前明显增加(P<0.01),4.36×10^-4mol/L拉米夫定能降低HepG2x细胞H-ras蛋白表达,其蛋白条带面积灰密度值明显低于对照(P<0.01),但拉米夫定不影响HepG2细胞H-ras表达(P>0.01)。结论:X蛋白上调肝癌细胞H-ras表达,提示可能促进HepG2细胞恶性转化。拉米夫定能抑制H-ras表达,提示拉米夫定可能遏制X蛋白的致癌作用。     

抑制NF-κB的表达对射线诱导HeLa细胞株凋亡的影响

背景与目的：TNF、某些化疗药物以及电离辐射可以活化NF-κB,从而抑制细胞凋亡。NF-κB的活化可以通过特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸脂（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）得到抑制。本实验的目的在于探讨抑制NF-κB的表达在宫颈癌HeLa细胞对射线诱导的细胞凋亡中的影响。方法：将HeLa细胞分为实验组加入PDTC（100μmol/L）及对照组不加PDTC。两组均给予直线加速器照射,剂量分别为0、2、4、6Gy,均作用2 h。用Western blot法来观察细胞核内NF-κB含量的变化,用TUNEL法来检测细胞的凋亡,用MTT法测细胞增殖。结果：辐射可以使HeLa细胞内NF-κB的表达增多,PDTC可以抑制由射线介导的NF-κB的增加。抑制了由射线介导的NF-κB的增加,不仅使得HeLa细胞的增殖受到明显的抑制（P〈0.05）也使凋亡指数大大增加（P〈0.001）。结论：在宫颈癌HeLa细胞中抑制NF-κB的表达可以增加由射线介导的细胞凋亡,增加了细胞对射线的反应。     

P75NTR 基因在舌鳞状细胞癌细胞凋亡中的作用及其机制

目的：探求p75神经营养因子受体（P75 NTR）基因在舌鳞状细胞癌细胞凋亡中的作用及其可能的分子作用机制。方法p75NTR 特异性小干扰 RNA（siRNA）转染 p75NTR 阳性舌鳞状细胞癌细胞;P75NTR 阳性舌鳞状细胞癌株 Tca8113细胞分为空白对照组、阴性对照组、实验组-776（转染siRNA-P75NTR-776）、实验组-1234（转染 siRNA-P75NTR-1234）。流式细胞仪双染色标记法检测转染率及细胞凋亡;荧光定量 PCR 检测 P75NTR 基因;Western blotting 检测各组 P75NTR 蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝法检测 siRNA 对细胞增殖的影响;细胞免疫荧光标记法观察核转录因子-κB（NF-κB）在细胞质及细胞核中的分布变化。结果测得转染效率为30％;实验组-776、实验组-1234与阴性对照组的凋亡率分别为（20．35±0．18）％、（12．32±1．51）％、（2．63±0．10）％,前两者与阴性对照组相比,差异有统计学意义（t ＝177．20,P ＜0．005;t ＝37．12,P ＜0．005）。P75NTR 基因干扰成功,实验组-776组的 P75NTR蛋白抑制率达31％。P75NTR-siRNA 干扰后实验组-776、实验组-1234与阴性对照组 Tca8113细胞存活率分别为70．02％、78．01％和95．81％,前两者与阴性对照组相比,差异有统计学意义（χ2＝235．3,P ＜0．001;χ2＝117．5,P ＜0．005）。实验组内 NF-κB 在细胞质内分布明显增多。结论P75NTR 能促进舌鳞状细胞癌细胞增殖或抑制其凋亡,其分子机制可能与阻碍 NF-κB 核内转运密切相关。     

蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡机制的初步研究

目的:探讨蛋白酶体抑制剂在诱导甲状腺未分化癌细胞系的凋亡作用中与核转录因子(NFκ-B)活性的关系。方法:利用蛋白酶体抑制剂PSI、EPOX和MG132作用7种甲状腺未分化癌细胞系,MTT法检测细胞生存率、乳酸脱氢酶(LDH)释放检测各组细胞LDH活性,利用酶联免疫吸附(ELISA)法定量分析NF-κBDNA结合活性,Caspases-3酶分析测定活性。结果:ARO和8305C细胞系对蛋白酶体抑制剂完全不敏感,FRO和KTC2细胞系IC50分别为PSI 4~6 nmol/L、EPOX 1~5 nmol/L和MG132 0.5~1μmol/L;KTC1和KTC3细胞系IC50分别为PSI 10~15 nmol/L、EPOX 10~20 nmol/L和MG132 1~2μmol/L;与对照组相比,所有细胞系应用PSI后,NFκ-B DNA结合活性减少,P<0.05;应用EPOX时,NFκ-BDNA结合活性在FRO、KTC2、KTC3和8505细胞系中减少(P<0.05),但在ARO、KTC1和8305C细胞中保持不变(P>0.05)。应用MG132处理后,NFκ-B DNA结合活性在所有细胞系中均无明显变化,P>...     

乙肝病毒X蛋白促进肝细胞癌侵袭转移相关分子的作用机制

乙肝病毒X蛋白(HBx)是乙型肝炎病毒编码的病毒蛋白,在介导肝细胞癌(HCC)转移中起重要作用.新近研究发现,HBx可通过介导肿瘤转移相关分子,如基质金属蛋白酶(MMP)、血管内皮生长因子(VEGF)及尿激酶纤溶酶原激活因子(uPA)等表达,进而活化转移相关信号传导通路,促进HCC转移.     

X连锁的凋亡抑制蛋白研究进展

IAP(inhibitor of apoptosis)是内源性凋亡抑制蛋白家族,其中效力最强的是X连锁凋亡抑制蛋白(X chromosome linked inhilbitor of apoptosis protein,XIAP).它主要通过BIR结构域和RING锌指结构域抑制caspase活性、调节核因子NF2κB并参与信号的转导过程.XIAP受到不均一核糖核酸蛋白C1和C2等的正向调节和XAF1和Smac/DIABLO等的负向调节.近年来XIAP在临床方面的研究也取得了很大进展.     

乙型肝炎病毒X蛋白与肝癌研究进展

X蛋白(HBx)被认为是乙型肝炎病毒(HBV)致原发性肝癌(HCC)的重要物质,具体机制不明,己成为研究的热点之一。近年来对HBx致肝癌机制的研究显示,HBx是一种多功能的病毒蛋白,有转录调控作用,对肝细胞内许多癌基因和/或抑癌基因的表达有直接或间接影响,可影响细胞的生存、增殖和凋亡,调节转录因子活性,促进细胞的侵袭和转移等,在肝癌形成中起重要作用。     

乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)在肝癌中的表达及定位

目的:研究乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)在人肝癌细胞中的表达和定位.方法:蛋白印迹法检测HBXIP在人肝癌细胞系中蛋白和基因的表达,激光共聚焦扫描显微镜检测内源HBXIP在BEL7402、HepG2肝癌细胞中的定位.结果:HBXIP在人肝肿瘤细胞系中蛋白和基因表达水平增高,激光共聚焦扫描显微镜观察发现HBXIP主要定位于BEL7402、HepG2细胞核中.结论:HBXIP在人肝癌细胞系中高表达,主要定位于肝癌细胞核内,可能是人肝癌重要的调节因子.     

Potent cell growth inhibitory effects in hepatitis B virus X protein positive hepatocellular carcinoma cells by the selective cyclooxygenase-2 inhibitor celecoxib

Hepatitis B virus (HBV) X protein (HBx) and cyclooxygenase-2 (COX-2) are all playing roles in hepatocellular carcinoma (HCC), but the reversing effects of COX-2 inhibitors on the neoplastic features caused by HBx protein is still unclear. To further evaluate the therapeutic potential of celecoxib on HBx mediated transformation, HCC cells transfected with HBx gene were treated with COX-2 selective inhibitor, celecoxib. The amount the main metabolite of COX-2, prostaglandin E2 (PGE2), was determined by using high sensitivity ELISA. Electron microscope and flow cytometry was used to analyze cell apoptosis and cell cycle distribution. RT-PCR and Western blot were used to identify the molecules involved in celecoxib induced cell apoptosis. The results showed that celecoxib inhibited cell growth more significantly and also induced more cell apoptosis in HBx over-expression cells than in control cells. Celecoxib could selectively inhibited COX-2 expression and PGE2 production. Celecoxib also inhibited p(473Ser)Akt, raf and p53 expression, and induced apoptosis by release of cytochrome c and activation of caspase 9, 3, and 6, which were more remarkably in HBx positive cells than in control cells. These results suggest that celecoxib had potent cell growth inhibitory effects on HBx positive HCC cells mainly through inducing more cell apoptosis, and these findings provide a new insight into the anticancer effects of celecoxib against HBx related HCC.     

乙肝病毒X蛋白在肝癌转移中的作用

乙肝病毒X蛋白(HBx)是乙肝病毒感染相关性肝癌的重要致病因子,与原发性肝细胞癌(HCC)的发生与发展密切相关.研究表明,HBx也参与血管生成、HGW/c-met信号通路、基质金属蛋白酶(MMP)等相关因素而促进肝癌转移.加强HBx参与肝癌侵袭转移分子机制的研究,有助于完善HCC侵袭转移机制,以进一步提高肝癌的疗效.     

乙肝病毒X蛋白在肝癌转移中的作用

乙肝病毒X蛋白(HBx)是乙肝病毒感染相关性肝癌的重要致病因子,与原发性肝细胞癌(HCC)的发生与发展密切相关.研究表明,HBx也参与血管生成、HGW/c-met信号通路、基质金属蛋白酶(MMP)等相关因素而促进肝癌转移.加强HBx参与肝癌侵袭转移分子机制的研究,有助于完善HCC侵袭转移机制,以进一步提高肝癌的疗效.     

乙肝病毒X蛋白在肝癌转移中的作用

乙肝病毒X蛋白(HBx)是乙肝病毒感染相关性肝癌的重要致病因子,与原发性肝细胞癌(HCC)的发生与发展密切相关.研究表明,HBx也参与血管生成、HGW/c-met信号通路、基质金属蛋白酶(MMP)等相关因素而促进肝癌转移.加强HBx参与肝癌侵袭转移分子机制的研究,有助于完善HCC侵袭转移机制,以进一步提高肝癌的疗效.     

乙肝病毒X蛋白在肝癌转移中的作用

乙肝病毒X蛋白(HBx)是乙肝病毒感染相关性肝癌的重要致病因子,与原发性肝细胞癌(HCC)的发生与发展密切相关.研究表明,HBx也参与血管生成、HGW/c-met信号通路、基质金属蛋白酶(MMP)等相关因素而促进肝癌转移.加强HBx参与肝癌侵袭转移分子机制的研究,有助于完善HCC侵袭转移机制,以进一步提高肝癌的疗效.     

乙肝病毒X蛋白在肝癌转移中的作用

乙肝病毒X蛋白(HBx)是乙肝病毒感染相关性肝癌的重要致病因子,与原发性肝细胞癌(HCC)的发生与发展密切相关.研究表明,HBx也参与血管生成、HGW/c-met信号通路、基质金属蛋白酶(MMP)等相关因素而促进肝癌转移.加强HBx参与肝癌侵袭转移分子机制的研究,有助于完善HCC侵袭转移机制,以进一步提高肝癌的疗效.