女性HPV感染与宫颈鳞状上皮内病变

目的 研究女性HPV感染与其宫颈鳞状上皮内病变关系,为临床预防宫颈癌发生发展提供基础数据.方法 537例HPV感染阳性患者样本来源于解放军第210医院妇科门诊,分析患者感染HPV基因亚型与数量及患者年龄数据,研究其与患者宫颈鳞状上皮内病变统计学关系.结果 单一高危亚型HPV感染患者宫颈鳞状上皮内病变发病率高于单一低危亚型HPV感染患者,差别有统计学意义(P＜0.05).单一高危亚型HPV感染患者4种具体宫颈鳞状上皮内病变发病率均高于低危亚型HPV感染患者,其中ASC-H及LSIL发病率差别有统计学意义(P＜0.05).不同类型多重HPV感染患者宫颈鳞状上皮内病变发病率差别未见统计学意义(P＞0.05).多重HPV感染患者宫颈鳞状上皮内病变发病率高于单一HPV感染患者,差别有统计学意义(P＜0.05).多重HPV感染患者ASC-US发病率高于单一HPV感染患者,差别有统计学意义(P＜0.05).HPV感染患者宫颈鳞状上皮内病变发病率在41 ～ 50年龄组最高,65.04％(80/123),与其它各年龄组比较差别均有统计学意义(P＜0.05).结论 HPV感染基因亚型种类、数量及感染者年龄均与宫颈鳞状上皮内病变发生有一定关联,其中高危亚型HPV感染、多重HPV感染与中年妇女三种因素,与宫颈鳞状上皮内病变发生发展关系密切.     

散发性胆囊癌nm23-H1基因遗传不稳定性与错配修复基因hMLH1和hMSH2蛋白表达的研究

目的:研究人类17号染色体D17S396位点微卫星不稳定性和杂合性缺失,对nm23-H1蛋白表达的影响,同时检测错配修复基因hMLH1和hMSH2蛋白的表达,为揭示nm23-H1基因、hMLH1和hMSH2基因与肿瘤发生和转移机制提供实验依据.方法:采用石蜡包埋组织抽提DNA、PCR-SSCP、常规银染、Envision免疫组织化学等方法,对50例胆囊癌及其相应的正常组织,进行D17S396位点MSI、LOH的检测和nm23-H1、hMLH1和hMSH2蛋白表达研究.结果:①原发性胆囊癌D17S396位点遗传不稳定发生率为42.55%,LOH的发生率与肿瘤组织分化程度差异显著(P＜0.05);在肝脏侵润和淋巴转移组高于无肝脏侵润和无淋巴转移组(P＜0.01),在NevinⅣ+Ⅴ期高于Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ期(P＜0.01);而MSI发生率则相反;②nm23-H1蛋白阳性率为46.81%,在淋巴转移组低于无淋巴转移组(P＜0.01);NevinⅣ+Ⅴ期低于Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ期(P＜0.05);③hMLH1和hMSH2蛋白阳性率分别为51.06%和42.55%,hMLH1蛋白表达在有无淋巴转移组和Nevin分期有显著差异(P＜0.01),肝脏侵润组低于无肝脏侵润组(P＜0.05);④MSI阳性组中hMLH1蛋白阳性率显著高于MSI阴性组(P＜0.05).LOH阳性组中nm23-H1和hMSH2蛋白阳性率显著低于LOH阴性组(P＜0.05);⑤hMSH2蛋白阳性组中nm23-H1蛋白表达明显高于hMSH2蛋白阴性组(P＜0.05).结论:nm23-H1基因的遗传不稳定性可能是胆囊癌发生、发展的一个重要分子机制.nm23-H1基因的MSI和LOH,通过相互独立的途径调控胆囊癌的发生和转移.hMLH1/hMSH2表达异常可能是胆囊癌的早期分子事件.提高胆囊癌局部nm23-H1、hMLH1和hMSH2蛋白的表达,可减缓肿瘤的侵润转移并提高预后率.     

维吾尔族妇女宫颈病变组织中HPV感染与低相对分子质量蛋白酶体2和7基因启动子甲基化的关系

目的 探讨维吾尔族妇女宫颈病变及其人乳头状瘤病毒( human papillomavirus,HPV)感染与低相对分子质量蛋白酶体(low molecular-weight protein,LMP)基因启动子区甲基化水平的关系和意义.方法 利用专业软件设计LMP2和LMP7基因启动子区含CpG岛特异性PCR引物,对SiHa宫颈癌细胞DNA进行亚硫酸氢盐修饰、目的片段扩增、质粒载体克隆和测序,确定该区域所含CpG序列甲基化情况;收集维吾尔族妇女正常宫颈上皮、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)患者新鲜组织和石蜡组织标本78例,并提取DNA,采用Sequenom MassARRAY DNA技术平台(质谱分析),定量分析LMP2和LMP7基因启动子甲基化水平,同时以HPV分型芯片鉴定HPV亚型,分析基因甲基化与HPV感染的关系;应用RT-PCR和免疫组织化学方法检测LMP2、LMP7mRNA和蛋白的表达,并分析蛋白表达与基因甲基化的关系.结果 LMP2和LMP7基因相应目的片段各含有22个CpG位点,在SiHa宫颈癌细胞基因组DNA中,只有LMP7有2个位点发生甲基化.宫颈病变病理过程伴随着LMP7基因CpG片段甲基化水平改变,其在CSCC和CIN组织的甲基化率(0.1864±0.0893和0.0728±0.0548)高于正常宫颈上皮组织(0.0652±0.0488),差异有统计学意义(P＜0.05).随着宫颈病变的加重LMP7 mRNA和蛋白表达逐渐下调,各组间表达差异具有统计学意义(P＜0.05),LMP7蛋白表达随着该基因甲基化率增高而降低(F=8.69,P=0.035).而LMP2蛋白表达在3组间差异无统计学意义(P＞0.05).HPV分型芯片检出12种HPV基因型,其中HPV16感染率构成比为52/78(66.7％),HPV16亚型阳性与宫颈病变进程及LMP7基因甲基化率升高趋势正相关(t=1.996,P=0.049).结论 LMP7基因启动子区CpG岛甲基化是一种宫颈癌病变特异性改变,与HPV16感染可能存在密切关系.     

中国人肺鳞癌nm23H1基因遗传不稳定性的研究

目的 研究nm23H1基因5'端非转录区微卫星位点的微卫星不稳定(MSI)和杂合性缺失(LOH)对肺鳞癌(SLC)nm23H1蛋白表达的影响,以探讨nm23H1基因遗传不稳定性与肺鳞癌进展的关系,为肺鳞癌临床治疗和预后提供实验依据.方法 采用新鲜组织标本抽提DNA,应用荧光PCR-单链构象多态性(FPCR-SSCP)方法、免疫组织化学染色法,Leica-Qwin计算机图像分析等方法,进行nm23H1基因遗传不稳定性的研究.结果 在能提供信息(杂合子)的44例肺鳞癌患者中,MSI、LOH检出率和nm23H1蛋白阳性表达率分别为11.36%、25.00%和50.00%.在TNM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中,MSI的检出率分别为8.70%、10.00%和18.18%,而LOH分别为30.43%、20.00%和18.18%;MSI和LOH在淋巴结转移组的检出率为10.00%和20.00%,而无淋巴结转移组则为12.50%和29.17%.然而,以上各组在统计学上均无显著差异(P＞0.05).本研究中所有MSI(共5例)全部发生在分化良好(G1为2例和G2为3例)的存活患者(1年生存率)中,但MSI的检出率与肺鳞癌分化程度及患者生存状态并无统计学上的相关性(P＞0.05).nm23H1蛋白阳性表达率在TNM Ⅰ期(65.22%)、无淋巴结转移组(66.67%)显著高于TNM Ⅲ期(18.18%)、淋巴结转移组(30.00%)(P＜0.05).另外,统计学分析表明,MSI和LOH的检出率与nm23H1蛋白表达无关(P＞0.05).计算机图像定量分析显示,在各临床病理参数影响下,各组nm23H1蛋白的表达强度也没有差异(P＞0.05).结论 nm23H1蛋白可能对抑制肺鳞癌淋巴结转移有重要作用.nm23H1基因5'端非转录区微卫星的MSI和LOH对nm23H1蛋白的表达无影响,也未发现其与肺鳞癌发生、发展具有相关性.     

宫颈癌相关基因表达与HPV感染的相关性研究

目的 探讨宫颈癌凋亡相关Bcl-2、TRAIL及Caspasc-3在宫颈组织中的表达及与人乳头瘤病毒感染(HPV)的相关性.方法 采用免疫组织化学方法对宫颈正常组织(NE)26例,宫颈鳞状细胞癌组织(SCC) 30例进行Bcl-2、TRAIL及Caspasc-3蛋白表达的测定,同时采用PCR技术测定各组患者HP16/18感染情况.结果 ①TRALL在SCC组宫颈活检组织中阳性表达率显著低于NE组(P＜0.05),SCC组中Caspage-3阳性表达率均显著低于NE组(P＜0.05),Bcl-2、HPV16/18在SCC组宫颈活检组织中阳性表达率显著高于NE组,(P＜0.05).②在宫颈组织中,TRALL阳性表达率与组织分化程度具有相关性(P＜0.05),Caspage-3阳性表达率与组织分化程度及临床分期具有相关性(P ＜0.05);Bcl-2阳性表达率与组织分化程度及临床分期具有相关性(P＜ 0.05);HPV16/18阳性表达率和SCC病理特征均无关.③HPV16/18感染及Bcl-2表达与TRALL、Caspage-3表达呈负相关(P＜ 0.05);TRALL与Caspage-3表达呈正相关(P＜0.05),HPV16/18感染与Bcl-2表达呈正相关(P＜0.05).结论 Bcl-2的过度表达,TRAIL及Caspasc-3低表达和HPV16/18感染在宫颈癌发病过程中发挥协同作用.     

cyclin E、pl6ink4、ki67在宫颈脱落细胞中的表达及其与HPV16／18感染的相关性

目的研究cyclin E、p16ink4、ki67在宫颈脱落细胞中的表达水平及其与HPV16/18感染的相关性,探讨其对宫颈癌高危人群筛查的意义.方法采用免疫组织化学方法对78例官颈脱落细胞标本进行cyclin E、p16ink4、ki67检测,同时应用多重引物PCR技术检测HPV16/18.结果cyclin E、p16ink4、ki67在宫颈癌细胞中的表达水平均较鳞状上皮非典型增生(ASCUS)差异有统计学意义(P＜0.005);各级宫颈癌细胞中HPV16的阳性率均较ASCUS差异有统计学意义(x2=25.27,P＜0.005),且随着宫颈上皮细胞损伤程度加重阳性率升高,差异也有统计学意义(P＜0.01).p16ink4和ki67在宫颈癌细胞中的表达水平与HPV16高度相关(rs=1.0,P＜0.05);而cyclin E的表达与HPV16相关性较小(rs=0.4,P＜0.05).HPV18阳性例数较少,在各项分析中差异均无统计学意义(x2=3.68,P＞0.05).结论官颈癌细胞中cyclin E、p16ink4及ki67的高度表达与HPV16感染有关;它们均可能作为有价值的诊断指标应用于宫颈癌高危人群筛查,且cyclin E对宫颈癌的早期诊断意义更大.     

中国人肝癌分泌型卷曲相关蛋白1基因遗传的不稳定性

目的 研究8号染色体上D8S532位点的杂合性缺失(LOH)和微卫星不稳定性(MSI)对分泌型卷曲相关蛋白1基因(sFRP1)蛋白表达的影响,阐明 sFRP1 基因遗传不稳定性与肝癌进展的关系,为揭示sFRP1 基因作用机制和肿瘤发生发展机制提供实验依据. 方法 采用石蜡包埋组织抽提DNA,聚合酶链-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析,常规银染检测D8S532位点的LOH和MSI,采用Envision免疫组织化学染色,Leica-Qwin计算机图像分析系统采图和Image-Pro P1uS(IPP)Version5.0专业图像分析软件分析蛋白表达. 结果 在36例肝癌中,D8S532位点LOH和MSI检出率分别为11.11%(4/36)和8.33%(3/36),D8S532位点MSI发生率在60岁以上年龄组(≥60) 26.67%(4/15),高于60岁以下年龄组(<60)0.00%(0/21, P <0.05).相比较于正常组织,86.11%(31/36)的sFRP1蛋白有不同程度表达下降,在肝癌组织中,sFRP1表达阳性率为52.78%(19/36),蛋白表达阴性组LOH阳性率为23.53%(4/17),明显高于蛋白阳性组的0.00%(0/19)( P <0.05). 结论 在中国人肝癌发生进展中,sFRP1蛋白表达下降甚至缺失是普遍现象, sFRP1 基因的遗传不稳定性可能是导致该抑癌基因突变、肿瘤发生的一个机制,LOH在sFRP1表达缺失的过程中起了重要作用.     

高危型HPV阳性患者宫颈支原体和衣原体感染与宫颈组织学改变的关系

目的 探讨高危型HPV阳性不孕患者宫颈支原体和衣原体感染与宫颈组织病变的关系.方法 以HPV阴性不孕患者为对照,回顾分析不同高危型别HPV阳性不孕患者宫颈支原体和衣原体感染与宫颈组织病理分级、炎症分级之间的关系.结果 支原体阳性者HPV感染的发生率与支原体阴性者差异有统计学意义（P＜0.01）,衣原体阳性者HPV感染的发生率与衣原体阴性者差异无统计学意义（P＞0.05）.与HPV阴性组比较,HPV阳性者CIN和宫颈糜烂发生率以及CIN分级均较高（P＜0.01）,HPV阳性者宫颈糜烂程度无差异（P＞0.05）.与单纯HPV阳性组比较,HPV和支原体混合感染者CIN发生率及重度宫颈糜烂无差异（P＞0.05）.结论 支原体感染增加了高危型HPV的感染概率,高危型HPV感染增加了宫颈组织的病理损害程度,支原体感染可能是高危型HPV持续性感染的因素,宫颈组织病理程度是宫颈性不孕不可忽视的因素.     

内源性端粒酶抑制基因遗传不稳定性与胃癌进展的关系

目的 研究8号染色体上D8S277位点的杂合性缺失(LOH)和微卫星不稳定性(MSI)对内源性端粒酶抑制基因(PINX1)蛋白表达的影响,阐明PINX1基因遗传不稳定性与胃癌进展的关系. 方法采用石蜡包埋组织抽提DNA,聚合酶链-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析,常规银染检测D8S277位点的LOH和MSI,采用Envision免疫组织化学染色和Leica-Qwin计算机图像分析等方法. 结果 D8S277位点的LOH发生率在淋巴结转移组(21.15%)明显高于无淋巴结转移组(0,P<0.05);在胃癌TNM Ⅲ Ⅳ期(24.39%)显著高于Ⅰ Ⅱ期(3.33%,P<0.05).PINX1蛋白阳性率在无淋巴结转移组(78.95%)明显高于有淋巴结转移组(48.08%,P<0.05);TNM分期Ⅰ Ⅱ期(73.33%)明显高于Ⅲ Ⅳ期(43.90%,P<0.05);蛋白表达阴性组LOH阳性率为32.28%,明显高于蛋白阳性组的2.50%(P<0.01). 结论 PINX1基因的遗传不稳定性可能导致该抑癌基因突变,是肿瘤发生发展的一个因素,LOH和MSI通过不同的途径调控胃癌的发生和发展.     

人乳头瘤病毒16型E6和E7基因特征分析

目的 对北京15例宫颈癌病变组织中的人乳头瘤病毒(HPV)16型E6和E7基因进行扩增及序列测定,分析E6和E7基因突变特征,并探讨宫颈癌病变中HPV16的感染情况.方法 自行设计HPVl6型E6和E7基因扩增引物,采用PCR法扩增15例宫颈癌组织中HPV16 E6和E7片段,将PCR产物克隆到TA载体,进行序列测定.通过Sequencer、Bioedit、Mega等生物学软件对E6和E7基因进行核苷酸和氨基酸序列分析.结果 15例宫颈癌中8例鳞癌检出E6和E7基因,检出率为8/15.2例腺癌、1例腺鳞癌和其他4例鳞癌中均未检出HPV16 E6E7 DNA.8例鳞癌中的4例检出的HPVl6为亚洲类似株,在E6基因178位(T→G,D25E)和E7基因647位(A→G,N29S)发生突变;另外4例为欧洲类似株,其中1例(BJ16)的HPV16在E6基因335位点发生突变(C→T,H78Y).结论 HPV16是致宫颈癌的重要因素;宫颈鳞状细胞癌HPV16感染的发生频率较腺癌和腺鳞癌高;E6基因178位点可能是区分亚洲株和欧洲株的重要位点;E6基因178位点和E7基因647位点是突变频率较高的位点,可能导致HPV16致癌能力发生改变.     

Telomerase activation and human papillomavirus infection in invasive uterine cervical carcinoma in a set of Malaysian patients

AIM: Telomerase activity was studied in invasive uterine cervical carcinoma to assess whether it was activated during cervical malignant transformation and to look for a possible association with human papillomavirus (HPV) infection in a set of Malaysian patients. METHODS: Histologically confirmed invasive cervical carcinoma and benign cervices were assayed for telomerase activity using a commercial telomerase polymerase chain reaction (PCR) enzyme linked immunosorbent assay kit. The same cases were subjected to PCR detection of HPV using type specific (HPV types 6b, 11, 16, and 18) followed by L1 open reading frame (ORF) consensus primers. RESULTS: HPV was detected in 18 (13 HPV-16, one HPV-6b, four only L1 ORF) of 20 invasive cervical carcinoma and one (only L1 ORF) of 19 benign cervices. Raised telomerase activity (A(450 nm) > 0.215) was detected in 11 cervical carcinomas, with A(450 nm) ranging between 0.238 and 21.790 (mean, 3.952) in positive squamous carcinomas, whereas A(450 nm) was only 0.222 in the one positive adenosquamous carcinoma. Five of 11 cervical carcinomas in stage I, three of six in stage II, both in stage III, and the only case in stage IV showed telomerase activation. Increased telomerase activity was noted in five of the 12 lymph node negative, five of the seven lymph node status unknown cases, and the one case with presumed lymph node metastasis. Ten of 18 HPV positive and one of two HPV negative cervical carcinomas showed telomerase upregulation. CONCLUSIONS: Telomerase is activated in invasive cervical carcinoma. Although larger studies are needed, there seems to be no clear association between telomerase upregulation and HPV status, although there is a suggestion of increased telomerase activity in squamous carcinomas and late stage disease.     

宫颈癌组织中MCM4、TFF2的表达及其与HPV_(16/18)感染的相关性研究

研究MCM4、TFF2在宫颈癌组织中的表达及其与HPV16/18感染的相关性,以探讨宫颈癌的发生机制,进一步寻找有利于宫颈癌诊断的新的分子标志物,以指导其诊断与预后。采用免疫组织化学方法对50例宫颈癌石蜡标本、宫颈上皮内瘤变CINⅠ20例、CINⅡ-Ⅲ20例、正常宫颈组织20例进行MCM4、TFF2的检测,同时采用PCR技术检测HPV16/18感染情况。结果:(1)在宫颈癌组织中MCM4的阳性率高于CIN和正常宫颈组织,差异有统计学意义(P<0.05),且MCM4阳性表达率与病理分级、淋巴结转移有关,差异有统计学意义(均P<0.05)。在宫颈癌组织中MCM4的阳性表达率与年龄分组、临床分期无关(均P>0.05)。在宫颈癌组织中TFF2的阳性率低于CIN和正常宫颈组织,差异有统计学意义(P<0.05),且TFF2阳性表达率与年龄分组有关,差异有统计学意义(P<0.05),其阳性表达率均与临床分期、病理分级、淋巴转移无关(均P>0.05);(2)HPV16/18在正常宫颈组织、CIN和宫颈癌中的阳性率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05),但与年龄、临床分期、病理分级、淋巴转移无关(均P>0.05);(3)在宫颈癌组织中,MCM4与HPV16/18感染呈正相关(rs=0.634,P<0.01),TFF2与MCM4、HPV16/18感染呈负相关(rs=-0.375,P<0.01;rs=-0.500,P<0.01)。宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中MCM4、TFF2表达的改变可能与HPV16/18感染有关,且互相作用,共同影响CIN的发展及宫颈癌的发生。这些指标综合分析可能为阐明HPV16/18的恶性转化机制以及为提高宫颈癌及其癌前病变诊断率提供参考依据。MCM4的异常表达与宫颈癌的恶变程度有关,可作为宫颈癌筛查、预后判断的有利指标。     

胃肠癌nm23H1基因遗传不稳定性及其与临床病理特性的关系

目的： 研究中国人17号染色体D17S396位点微卫星不稳定性（MSI）和杂合性缺失（LOH），对胃肠癌nm23H1蛋白表达的影响，阐明nm23H1基因遗传不稳定性与胃癌、结肠癌进展的关系，为临床治疗提供实验依据。方法: 采用石蜡包埋组织抽提DNA、PCR-单链构象多态性（SSCP）、常规银染、Envision免疫组织化学和Leica-Qwin计算机图像分析等方法，对40例石蜡包埋胃癌标本和30例石蜡包埋结肠癌标本及其相应的正常组织，进行D17S396位点MSI、LOH的检测和nm23H1蛋白表达研究。 结果: D17S396位点MSI检出率在胃癌、结肠癌的TNM Ⅰ+Ⅱ期高于Ⅲ+Ⅳ期，并且胃癌MSI发生率随着淋巴结转移的发生而降低。LOH检出率在胃癌、结肠癌的TNM Ⅲ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期，并随淋巴转移的发生而增高。nm23H1蛋白阳性率在胃癌、结肠癌的TNMⅠ+Ⅱ期显著高于Ⅲ+Ⅳ期，无淋巴结转移组显著高于淋巴结转移组。 结论: MSI和LOH通过相互独立的途径调控胃癌、结肠癌的进展。MSI是胃癌、结肠癌的早期分子标志,LOH多发生于胃癌、结肠癌的晚期阶段并赋予癌细胞高侵袭、预后差的表型。     

血清SCCA水平及盆腔淋巴结HPV 16/18感染状况与宫颈鳞癌患者预后的关系

 摘要：目的 探讨术前血清SCCA水平、盆腔淋巴结HPV16/18感染状况与宫颈鳞癌患者预后的关系。方法 ELISA法检测血清SCCA水平,实时荧光定量PCR法检测盆腔淋巴结HPV16 /18感染,分析二者与宫颈鳞癌患者三年生存率的关系。结果 血清SCCA水平与盆腔淋巴结HPV16/18感染相关 (P<0.05)。35例宫颈鳞癌患者中位随访36个月（12～41月）,死亡4例,3年总体生存率为85.0%。血清SCCA阴性者和阳性者的3年生存率分别为100%和69.2%;盆腔淋巴结HPV16/18阴性者和阳性者的3年生存率分别为96.4%和57.1%;血清SCCA及盆腔淋巴结HPV16/18阴性患者的3年生存率明显优于阳性者（P<0.05）。淋巴结转移、血清SCCA和淋巴结HPV16/18与宫颈鳞癌患者的预后相关。结论 血清SCCA水平及盆腔淋巴结HPV 16/18感染状况与宫颈鳞癌患者预后相关,可作为宫颈鳞癌预后判断指标。     

Human papillomavirus detection in paraffin-embedded cervical carcinomas and metastases of the carcinomas by the polymerase chain reaction.

The polymerase chain reaction (PCR) is used for human papillomavirus (HPV) detection in paraffin-embedded tissue. The specificity of the reaction is unaffected by the method of fixation used before embedding into paraffin. Five HPV 16, 18, 31, and 33 DNA in situ hybridization (DISH)-negative cervical carcinomas were subjected to the PCR. In two patients, HPV 16 DNA could be detected in the cervical squamous cell carcinomas and also in their lymph node metastases. One patient with an adeno-carcinoma of the cervix was found positive for HPV-18. A lymph node of this patient was HPV 18 positive as well. In the tumors of the remaining two patients, no HPV 16, 18, or 33 DNA was detected by the PCR. Both negative patients had cervical squamous cell carcinomas. One had a bladder metastasis, whereas the other had a lymph node metastasis and an additional distant metastasis in the lung. HPV DNA positivity in cervical carcinomas correlated with HPV prevalence in the metastases. This relationship can be of use for diagnostic purposes in the pathologic analysis of metastases.     

宫颈癌组织中survivin和CD44v6的表达及其与HPV16/18感染的相关性

目的研究survivin、CD44v6在宫颈癌组织中的表达及其与HPV16/18感染的相关性,以探讨宫颈癌的发生机制。方法用免疫组化方法进行survivin和CD44v6的检测,用PCR检测HPV16/18感染情况。结果survivin和CD44v6的阳性率在宫颈癌组织中远高于CIN和正常宫颈组织,差异显著(均P<0.01),其表达率与淋巴结转移有关(均P<0.05)。CD44v6随着临床分期、病例分级的升高阳性率升高(P<0.05),survivin的阳性率则随着病例分级的升高而增加(P<0.05)。HPV16/18在正常宫颈组织、CIN和宫颈癌中的阳性率逐渐升高(P<0.01),但与临床分期、病理分级、淋巴转移无关。survivin与HPV16/18感染有相关性(P<0.05)。结论宫颈癌组织中survivin的异常表达与HPV16/18感染有关。survivin和CD44v6与宫颈癌的恶变程度有关,可作为宫颈癌筛查预后判断的有利指标。     

散发性胆囊癌nm23-H1基因遗传不稳定性与错配修复基因hMLH1和hMSH2蛋白表达的研究

目的： 研究人类17号染色体D17S396位点微卫星不稳定性和杂合性缺失，对nm23-H1蛋白表达的影响，同时检测错配修复基因hMLH1和hMSH2蛋白的表达，为揭示nm23-H1基因、hMLH1和hMSH2基因与肿瘤发生和转移机制提供实验依据。方法: 采用石蜡包埋组织抽提DNA、PCR-SSCP、常规银染、Envision免疫组织化学等方法，对50例胆囊癌及其相应的正常组织，进行D17S396位点MSI、LOH的检测和nm23-H1、hMLH1和hMSH2蛋白表达研究。结果: ①原发性胆囊癌D17S396位点遗传不稳定发生率为42.55%，LOH的发生率与肿瘤组织分化程度差异显著（P <0.05）；在肝脏侵润和淋巴转移组高于无肝脏侵润和无淋巴转移组(P <0.01)，在NevinⅣ+Ⅴ期高于Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ期(P <0.01)；而MSI发生率则相反；②nm23-H1蛋白阳性率为46.81%，在淋巴转移组低于无淋巴转移组(P <0.01)；NevinⅣ+Ⅴ期低于Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ期(P <0.05)；③hMLH1和hMSH2蛋白阳性率分别为51.06%和42.55%，hMLH1蛋白表达在有无淋巴转移组和Nevin分期有显著差异(P <0.01)，肝脏侵润组低于无肝脏侵润组(P <0.05)；④MSI阳性组中hMLH1蛋白阳性率显著高于MSI阴性组(P <0.05)。LOH阳性组中nm23-H1和hMSH2蛋白阳性率显著低于LOH阴性组（P <0.05）；⑤hMSH2蛋白阳性组中nm23-H1蛋白表达明显高于hMSH2蛋白阴性组（P<0.05）。结论:nm23-H1基因的遗传不稳定性可能是胆囊癌发生、发展的一个重要分子机制。nm23-H1基因的MSI和LOH，通过相互独立的途径调控胆囊癌的发生和转移。hMLH1/hMSH2表达异常可能是胆囊癌的早期分子事件。提高胆囊癌局部nm23-H1、hMLH1和hMSH2蛋白的表达，可减缓肿瘤的侵润转移并提高预后率。     

Genetic alterations during the progression of squamous cell carcinomas of the uterine cervix.

Most cervical carcinomas appear to arise from cervical intraepithelial neoplasia (CIN) lesions. In addition to infection with high-risk human papilloma viruses, which is indicative of an increased risk of progression, alterations of oncogenes and tumor suppressor genes play a role. Genetic studies of CIN lesions, primary cervical carcinoma, and metastases may shed light on the relative importance of various genetic alterations involved in the progression of CIN to invasive carcinoma. We examined tumor material from 10 patients with squamous cell carcinoma of the uterine cervix and synchronous CIN lesions and lymph node metastases. The CIN component, invasive carcinoma, and lymph node metastases were analyzed separately for loss of heterozygosity (LOH) on the following loci: VHL (3p21), HLA region (6p22-23), PGL (11q 22-24), E6 associated protein (15q11-13), TP53 (17p13), DCC (18q21.1), and chromosomes 1, 2, 4, 9, 20, and X. Using immunohistochemistry, the expression of the EGF receptor, ERBB2, and TP53 was determined. In CIN lesions, frequent LOH was found at chromosome arms 3p, 6p, and 11q. Primary invasive carcinoma showed additional LOH at chromosome arms 6q, 17p, and 18q. In lymph node metastases, an additional locus on the X chromosome displayed LOH. All carcinomas and synchronous lesions but one showed high expression levels of the EGF receptor. TP53 staining, when present, was found in all synchronous lesions. Focal staining of ERBB2 was found in one CIN lesion, two invasive carcinomas, and four metastases. The molecular alterations accumulated in a fashion that paralleled the progression of the tumors. These results indicate that cervical tumorigenesis occurs in a stepwise fashion, including infection and integration of oncogenic HPV and several specific genetic alterations. Genes Chromosomes Cancer 26:346-354, 1999.     

子宫颈病变组织中低分子量蛋白酶体表达与HPV16感染的关系

目的观察低分子量蛋白酶体(low molecular-weight protein,LMP)在子宫颈病变组织中的mRNA和蛋白表达,探讨其与HPV16感染的关系。方法以152例新疆维吾尔族妇女正常子宫颈上皮、子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和子宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)患者为研究对象,采用RT-PCR和免疫组化法鉴定LMP2和LMP7mRNA及蛋白表达水平;采用PCR技术检测相应标本HPV16感染情况。结果 (1)LMP2、LMP7随着子宫颈病变的加重其蛋白表达逐渐降低,且mRNA表达水平与蛋白表达趋势相一致。在CIN中LMP2、LMP7蛋白表达下调和缺失率分别为25.0%/15.6%、29.7%/23.4%;在子宫颈癌中LMP2、LMP7蛋白的表达下调和缺失率分别为17.5%/34.9%、23.8%/41.3%。临床病理参数进行分析发现LMP2、LMP7与子宫颈癌分化程度及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。(2)PCR结果显示,HPV16的检出率随着子宫颈病变的进展而增加,在慢性子宫颈炎、CIN和子宫颈癌组织中阳性率分别为8%(2/25)、67.2%(43/64)和77.8%(49/63),且随着肿瘤恶性程度的增加其阳性表达率增加,各组间阳性表达差异有统计学意义(P<0.05)。在CIN中LMP7表达下调与HPV16感染有关(P<0.05),子宫颈癌中LMP2和LMP7表达下调与HPV16感染有关(P<0.05)。结论 LMP基因的转录表达下调或蛋白质表达缺失与维吾尔族妇女子宫颈癌病变进程密切相关,其中HPV16感染可能是重要原因之一。