成纤维细胞生长因子-7在除草醚诱导的先天性膈疝大鼠模型胎肺中的表达

目的研究成纤维细胞生长因子-7（FGF-7）在先天性膈疝（CDH）胎肺中的表达及探讨其在CDH肺发育不良中的作用。方法采用免疫组织化学和图像分析方法半定量地检测FGF-7在胎肺中的表达部位及表达相对含量。结果CDH肺发育不良，处于假腺体期。FGF-7在对照组显示强表达于支气管和细支气管上皮细胞，在除草醚（nitrofen）组中表达微弱，其表达的相对含量显著低于对照组，Nitrofen组中CDH组和noCDH组间差异没有显著性意义。FGF-7的表达与肺泡面积呈显著正相关性，与肺泡间隔呈显著负相关性。结论FGF-7在CDH胎肺中表达降低，且降低具有组织特异性；FGF-7可作为提示CDH胎肺成熟度的重要指标；FGF-7表达降低可能是CDH肺发育不良形成机制之一。     

Wnt7b在Nitrofen诱导的先天性膈疝大鼠模型胎肺中的表达

目的 研究Wnt7b在Nitrofen诱导的先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia,CDH)胎肺中的表达特点,探讨其在CDH肺发育不良发生机制中的可能作用.方法 采用实时荧光定量PCR方法检测Wnt7b基因在妊娠E17.5、E19.5、E21.5的Nitrofen诱导CDH大鼠模型胎肺及正常对照大鼠胎肺中的相对表达量,并用免疫组化方法检测Wnt7b蛋白在胎肺中的表达.结果 正常对照组和CDH组胎肺中Wnt7b mRNA的表达水平均随着胎龄的增加呈下降趋势,其中E17.5胎龄CDH组胎肺中Wnt7b mRNA的表达水平与对照组相比,差异无统计学意义;而E19.5、E21.5胎龄CDH组胎肺中Wnt7b mRNA的表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).对E21.5胎龄对照组和CDH组的标本进行免疫组化检测,结果显示Wnt7b免疫阳性细胞主要分布在支气管和细支气管上皮,且CDH组Wnt7b免疫阳性程度(以平均光密度值表示)较正常对照组升高,有统计学差异.结论 Wnt7b mRNA表达量随大鼠胎肺逐渐发育成熟而下降,提示其在胎肺中的表达量与胎肺发育的成熟度有关.CDH组中E19.5、E21.5胎龄时Wnt7b mRNA的表达水平明显高于对照组,是CDH孕晚期胎肺发育滞后的分子基础之一,提示Wnt7b在CDH孕晚期胎肺中表达增高可能参与了肺发育不良.Wnt7b蛋白在肺发育中特异性定位于气道上皮,提示信号町能在肺上皮与间质细胞之间有重要联系,协同促进上皮和间质的发育.     

Hoxa5基因在先天性膈疝大鼠模型胎肺中的表达

目的 研究Hoxa5基因在先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia,CDH)胎肺中的表达特点以及探讨其在CDH肺发育不良发生机制中的可能作用.方法 采用实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,QPCR)方法检测Hoxa5基因在妊娠第17.5天、19.5天、21.5天的nitrofen诱导CDH大鼠模型胎肺及正常对照大鼠胎肺巾的相对表达量.结果 正常对照组胎肺中Hoxa5 mRNA的表达水平随着胎龄的增加旱下降趋势,其中第21.5天胎肺中Hoxa5 mRNA的表达水平显著下降,与其他二胎龄点相比差异有统计学意义(P＜0.05);CDH组中Hoxa5 mRNA的表达趋势与正常胎肺相似,即随胎龄的增加其表达量下降,其当中第21.5天胎肺中Hoxa5 mRNA的表达水平明显降低,与其他二胎龄点相比差异有统计学意义(P＜0.05).第17.5天与19.5天胎龄CDH组胎肺中Hoxa5 mRNA的表达水平分别与相应对照组相比,差异无统计学意义;而妊娠晚期(第21.5天胎龄)CDH组胎肺中Hoxa5 mRNA的表达水平高于对照组.差异具有统计学意义.结论 正常对照组中第21.5天胎龄时Hoxa5 mRNA的表达水平显著降低,提示Hoxa5 mRNA在孕晚期的低表达是正常肺发育的分子基础之一;而CDH组中第21.5天胎龄时Hoxa5 mRNA的表达水平明显高于对照组,提示Hoxa5在孕晚期CDH胎肺中Hoxa5的高表达可能是CDH肺发育不良形成机制之一.     

大鼠胎肺内表皮生长因子及其受体变化与先天性膈疝肺发育不良的关系

目的观察表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR)在Nitrofen诱导的CDH模型胎肺中表达的情况,探讨CDH时肺发育不良的原因。方法实验组20只SD怀孕大鼠于孕9.5d时经胃管给予Nitrofen,正常对照组给食用油,孕21.5d时对所有孕鼠行剖宫产,取出胎鼠两侧肺组织进行EGF和EGFR免疫组化染色和图像分析。结果实验组死亡1只,致畸率46.7%;CDH肺发育不良,处于假腺体期和原始肺小管期,EGF表达上调而EGFR表达下调(P<0.05),膈疝侧与非膈疝侧肺组织EGF及EGFR表达差异没有统计学意义(P>0.05);实验组内产生CDH者胎肺内EGF和EGFR表达与无CDH者相差不大(P>0.05)。结论大鼠CDH模型中,腹腔内器官进入胸腔对肺组织的压迫可能并不是肺发育不良的主要原因,肺发育不良于膈疝形成前就已发生。CDH肺发育不良与EGF EGFR系统的变化密切相关。     

缺氧诱导丝裂原因子在先天性膈疝胎鼠肺中的表达

目的研究缺氧诱导丝裂原因子（hypoxia—inducedmitogenicfactor，HIMF）在先天性膈疝（congenitaldiaphragmatichernia，CDH）胎鼠肺组织中的表达，探讨其在CDH肺发育不良中的作用。方法实验组10只BABL／C小鼠妊娠8d时经胃管注入25mg除草醚，正常对照组给予食用油，妊娠21d行剖腹产，解剖胎鼠两侧肺组织，采用免疫组化、Westernblot方法检测HIMF表达。结果实验组CDH致畸率56．5％，肺发育不良，处于假腺体期和原始肺小管期，HIMF蛋白显著表达下调（P〈0．05）；实验组内产生CDH者胎肺内HIMF表达水平与无CDH者比较差异无显著性意义（P〉0．05）；CDH膈疝侧与非膈疝侧肺组织HIMF表达差异无显著性意义（P〉0．05）。结论在CDH肺发育不良组织中HIMF蛋白表达显著下调，且早于膈疝形成，可能参与CDH肺发育不良的发病机制。     

汉防己甲素对先天性膈疝大鼠模型胎仔肺发育不良的影响及意义

目的 探讨产前应用汉防己甲素(TET)对先天性膈疝(CDH)大鼠模型胎仔肺内表面活性蛋白B(SP-B)和增殖细胞核抗原(PCNA)的影响及意义.方法 10只成年雌性SD大鼠配种后,于孕9.5 d随机分为3组:对照组(2只)、膈疝组(4只)和治疗组(4只),膈疝组和治疗组一次性灌胃给予除草醚125 mg/只(溶于2.5ml橄榄油中),对照组灌胃给予等量橄榄油.配种后18.5 d时,治疗组给予30 mg/kg汉防己甲素灌胃(1次/d,连续3 d),膈疝组和对照组给予等量生理盐水.孕21 d对孕鼠行剖宫产,观察胎鼠膈疝形成情况,取出肺组织行HE染色并行图像分析,采用免疫组化染色法检测胎肺内SP-B和PCNA的表达情况.结果膈疝组和治疗组共有48只胎鼠形成膈疝,其致畸率为64.9%,二组之间致畸率差别无统计学意义(P>0.05).膈疝组胎鼠存在肺发育不良,产前给予TET干预,肺组织在形态上有明显改善,外形接近于对照组.正常肺组织中,SP-B在肺泡上皮细胞及远端支气管上皮细胞的胞浆内表达,在膈疝组中未见SP-B表达.治疗组中可见SP-B表达,但低于对照组(P<0.01).PCNA阳性细胞率在对照组与膈疝组的差异无统计学意义(P>0.05),但在治疗组中其表达显著较前二组为低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 产前应用TET可诱导CDH胎鼠肺的成熟,促进肺内SP-B表达升高;同时,产前给予TET干预的CDH胎鼠,其肺内PCNA阳性细胞率明显降低,提示TET诱导CDH胎肺的成熟并不是依靠促进细胞增殖来完成的.     

上皮生长因子对大鼠先天性膈疝模型肺发育的影响

目的　探讨上皮生长因子 (EGF)对先天性膈疝 (CDH)模型肺发育不良的影响 ,尤其是对Ⅱ型细胞的影响。方法　 2 0只雌鼠配种后第 8.5d给予除草醚 (Nitrofen) 1 0 0mg ;第 1 8.5d将孕鼠随机分为三组 :CDH ,地塞米松 (Dex)和EGF组。第 2 1d剖宫取出胎鼠及其肺组织 ,进行组织学观察和图像分析。结果　实验组致畸率达 61 .7%。EGF组与Dex组肺重量与体重之比 (Lw/Bw)均较CDH组高(P <0 .0 1 )。EGF组肺组织形态明显改善 ,并且随EGF剂量增加 ,改善作用明显加强。透射电镜观察结果 :EGF组Ⅱ型细胞分化较成熟 ,板层小体和细胞器多见 ;CDH组分化不成熟 ,胞浆内存在大量糖原颗粒。计数结果 :EGF ,Dex和CDH组平均分别为 65± 4 .5 ,31± 3 .1和 8± 1 .5(P <0 .0 5)。结论　EGF对CDH大鼠肺发育不良具有明显的改善作用 ,尤其对Ⅱ型细胞有明显的促分化作用。EGF产前应用有助于纠正大鼠CDH表面活性物质缺陷 ,从而为CDH的治疗提供一种新的可能手段     

先天性膈疝肺发育不良的研究进展

先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia,CDH)是由于单侧或双侧膈肌发育缺损,导致腹腔内脏器官疝入胸腔的一种先天性疾病.其发病率约为1/2.500(如包含死产在内,约为1/2 000)~([1]).CDH的病因及分子生物学机制尚未明了,目前仍无有效的治疗手段从根本上改变其合并的肺发育不良;临床上,尽管对CDH患儿进行了积极的对症支持及相应的外科手术治疗,重症病例的死亡率仍达50%～60%,而双侧CDH患儿的死亡率更是高达100%~([2-3]).目前,对CDH的研究已成为一个热点,其临床治疗的效果常常是衡量新生儿科综合治疗水平的一个重要的指标.本文就目前CDH肺发育不良的病因及诊疗进展作如下慨述.     

大鼠胎仔先天性膈疝模型胎肺血管重构的超微结构观察

目的 观察先天性膈疝(CDH)动物模型胎肺血管的超微结构变化,并结合大体组织及显微形态学检查探讨其在CDH发病机制中的作用.方法 将SD大鼠4只配种后随机分成对照组和模型组.妊娠第9.5天以Nitrofen诱导建立大鼠CDH动物模型,第21天剖宫取出胎鼠及其肺进行HE、弹力纤维染色,观察分析图像,并用电镜观察腺泡内动脉(IAPA)超微结构.结果 模型组胎肺小动脉结构发生明显的重构,肌型动脉(MA)管壁中膜增厚(P<0.ol),IAPA水平MA及部分肌型动脉(PMA)的比例升高(P<0.01),非肌型动脉(NMA)的比例降低(P<0.01).电镜观察发现肺泡水平NMA肌化,IAPA内皮细胞增生变性,血管壁平滑肌细胞呈增殖型表现,小动脉管壁弹力膜厚薄不均匀,连续性差,管壁结构破坏.结论 IAPA平滑肌细胞增殖、动脉肌化及管壁破坏是CDH肺血管重构的主要超微结构变化,是CDH肺动脉高压形成的病理基础之一.     

Nitrofen对膜受体STRA6在先天性膈疝大鼠模型中表达的影响

目的 研究STRA6基因在先天性膈疝胎肺中的表达特点并探讨其在CDH肺发育不良发生机制中的可能作用.方法 采用实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,QPCR)方法检测在妊娠D 15.5、D 17.5、D21.5的Nitrofen诱导CDH大鼠模型胎肺及正常对照组大鼠胎肺中的STRA6基因mRNA相对表达量.结果 control组:STRA6 mRNA相对表达量呈下降趋势,各时期的相对表达量分别为14.800±5.155,4.061±2.765,1.000±0.449,D 15.5与D 17.5和D 21.5相比有统计学意义(P=0.000＜0.01);Nitrofen组:STRA6 mRNA相对表达量波动.各时期的相对表达量分别为1.191±0.351、7.552±3.716、0.951±0.942、D17.5表达升高,D17.5与D15.5和D21.5相比差异有统计学意义(P=0.000＜0.01);在D 15.5,controls组与Nitrofen诱导组相比有统计学意义(P=0.000＜0.01).结论 在实验动物模型胎鼠肺发育早期(D15.5),Nitrofen干扰肺细胞表面RBP受体STRA6的表达.可能引起肺细胞吸收Vit A障碍而导致CDH肺发育不良的发生;在实验动物模型胎鼠肺发育中期(D 17.5),STRA6的表达增高,这可能是维A酸信号途径对肺细胞内的VitA水平低下的一种负反馈反应.     

表皮生长因子对先天性膈疝大鼠模型胎肺活性物质的影响

目的探讨表皮生长因子（EGF）对大鼠先天性膈疝（CDH）模型肺发育活性物质的影响，了解EGF的可能作用机制。方法建立大鼠CDH模型。随机分为正常、CDH、CDH加EGF组，采用免疫组织化学方法检测各组胎肺组织甲状腺转录因子-1（TTF-1）、转化生长因子（TGFβ1）表达情况。结果 TTF-1和TGFβ1在各实验组中均有表达，且二者在正常、CDH和CDH加EGF组的两两比较均有显著性差异（只〈0．05）。随EGF剂量增加，TTF-1表达增强，而TGFβ1表达减弱，各组间均有显著性差异（Pa〈0．05）。结论EGF对CDH大鼠胎肺组织TTF-1和TGFβ1表达部位和强度均有影响，可能是其影响CDH肺发育机制之一。     

Hippo通路相关分子在先天性膈疝肺发育不良大鼠模型中的表达及意义

目的了解Hippo信号通路主要组成分子在先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia,CDH)模型大鼠胎肺组织中的表达情况,初步探讨该通路与CDH肺发育不良的关系。方法应用除草醚建立CDH大鼠模型,选取模型组中单纯左侧膈疝的胎鼠左肺作为研究对象,通过免疫印迹法和RT-PCR分别检测肺组织中Lats1、Taz和Yap(pYap)表达情况并与对照组胎鼠的左肺组织进行比较。结果 Lats1、Taz和Yap在模型胎鼠和正常胎鼠的支气管、肺上皮细胞及肺动脉壁中都有表达。模型组的Yap蛋白及其mRNA的表达量分别为2.333 3±0.367 5和1.243 3±0.103 3明显高于对照组的1.250 9±0.388 6和0.983 3±0.065 0,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);而Lats1蛋白及其mRNA和Yap蛋白磷酸化水平(pYap)的表达量在两组间的差异均无统计学意义(P>0.05)。Taz的mRNA表达量在模型组和对照组分别为1.216 7±0.033 9和1.013 3±0.183 4,组间比较,差异有统计学意义(P<0...     

胰岛素样生长因子结合蛋白6在维甲酸诱导的大鼠马蹄内翻足畸形中的表达研究

目的 探讨大鼠先天性马蹄内翻足(CCF)软骨组织内胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)的表达规律.方法 应用生物学活性物质全反式维甲酸(ATRA)构建大鼠CCF动物模型;光镜和透射电镜观测大鼠的足部软骨组织病理学改变;RT-PCR及Western印迹杂交检测胎鼠足部软骨组织中IGFBP-6 mRNA及蛋白质的表达水平.结果 120 mg/kg的ATRA诱导实验组35%的胎鼠出现CCF畸形,其他畸形包括:内翻足、小脑畸形、腭裂、无尾畸形等;在骨骼畸形胎鼠的足部距骨内软骨发生中心带缩小,软骨细胞数量减少,软骨细胞核内粗面内质网扩张,线粒体嵴紊乱;正常胎鼠软骨组织内IGFBP-6基因呈低水平表达状态,而骨骼畸形胎鼠IGFBP-6的mRNA和蛋白质表达则明显升高300%和197%(P＜0.05).结论 正常大鼠软骨组织内IGFBP-6基因有低表达.CCF大鼠软骨组织内IGFBP-6的高表达可能与骨骼发育畸形的发生密切相关.