3种氟喹诺酮类药物对鲍曼不动杆菌的防耐药突变浓度研究

目的研究3种氟喹诺酮类药物对临床分离的鲍曼不动杆菌敏感株及其环丙沙星诱导突变株的防耐药突变浓度（MPC）,比较其防耐药突变能力。方法用环丙沙星琼脂平板筛选鲍曼不动杆菌临床分离株的突变株,用琼脂平板稀释法测定各实验菌株的最低抑菌浓度（MIC）和MPC。结果加替沙星和左氧氟沙星对临床分离株及其突变株的MPC低于环丙沙星。对临床分离株的MPC,加替沙星和左氧氟沙星均为0．25μg／mL,环丙沙星为2μg／mL;对突变株的MPC,加替沙星和左氧氟沙星为1～8μg／mL,环丙沙星为4～32μg/mL。结论对临床分离的鲍曼不动杆菌敏感株及其环丙沙星诱导的突变株,加替沙星和左氧氟沙星限制其耐药突变株的选择能力强于环丙沙星;对环丙沙星敏感的鲍曼不动杆菌的临床治疗,建议要避免这3种氟喹诺酮类的单药治疗。     

头孢哌酮钠/舒巴坦钠对铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度和防突变浓度研究

目的:研究头孢哌酮钠/舒巴坦钠对铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)和防突变浓度(MPC),为控制细菌耐药提供参考。方法:采用肉汤法富集铜绿假单胞菌标准菌株及14株临床分离菌株,采用琼脂平板稀释法考察头孢哌酮钠/舒巴坦钠对铜绿假单胞菌的MIC、MPC值,计算MIC90、MPC90、选择指数(SI)。结果:头孢哌酮钠/舒巴坦钠对15株铜绿假单胞菌的MIC、MPC均为4³2μg/ml,MIC90、MPC90均为32μg/ml,SI为1。结论:头孢哌酮钠/舒巴坦钠在临床治疗浓度下不容易引起铜绿假单胞菌耐药突变菌株的富集。     

氟喹诺酮类药物对鲍曼不动杆菌及其环丙沙星诱导突变株的防耐药突变浓度

目的研究环丙沙星、左氧氟沙星及加替沙星(均为氟喹诺酮类抗生素)对临床分离的鲍曼不动杆菌敏感株及其环丙沙星诱导的突变株的防耐药突变浓度(MPC),比较防耐药突变能力。方法用环丙沙星琼脂平板,筛选鲍曼不动杆菌临床分离株的突变株;用琼脂平板稀释法,测定各实验菌株的最低抑菌浓度(MIC)和MPC。结果加替沙星和左氧氟沙星对临床分离株及其突变株的MPC低于环丙沙星;对临床分离株的MPC,加替沙星和左氧氟沙星均为0.25μg·mL-1,环丙沙星为2μg·mL-1;对突变株,前者为1~8μg·mL-1,后者为4~32μg·mL-1。结论对临床分离的鲍曼不动杆菌敏感株及其环丙沙星诱导的突变株,加替沙星和左氧氟沙星限制其耐药突变株选择的能力强于环丙沙星;建议临床对环丙沙星敏感的鲍曼不动杆菌,要避免这3种氟喹诺酮的单药治疗。     

氟喹诺酮药物对金黄色葡萄球菌同源耐药突变株的耐药突变选择窗研究

目的通过测定不同氟喹诺酮（FQ）药物对同源金黄色葡萄球菌耐药突变株的MIC和防耐药突变浓度（mutant prevention concentration。MPC），分析不同药物的抗菌活性及限制耐药突变株选择的能力。方法分别采用环丙沙星和加替沙星琼脂平板筛选金黄色葡萄球菌ATCC25923同源的第一步和第二步耐药突变株。采用琼脂平板稀释法测定各耐药突变株的MIC和MPC。计算选择指数（MPC／MIC）。结果加替沙星和莫西沙星对金黄色葡萄球菌ATCC25923第一步耐药突变的MPC值（1—2μg／ml）明显低于环丙沙星、左氧氟沙星和帕珠沙星（4—16μg／m1），以上5种FQ药物对第一步耐药突变的MPC值和选择指数分别为ATCC25923的2—8倍和1-4倍。加替沙星和莫西沙星对第二步耐药突变的MPC值为8—16μg／ml。结论对于金黄色葡萄球菌ATCC25923同源的第一步耐药突变株。加替沙星和莫西沙星限制下一步耐药突变株选择的能力强于环丙沙星、左氧氟沙星和帕珠沙星，结合药动学参数，环丙沙星、左氧氟沙星和帕珠沙星很容易选择出下一步耐药突变株；而加替沙星和莫西沙星则能够限制下一步耐药突变株的选择。对于第二步耐药突变株，加替沙星和莫西沙星则很容易筛选出对这两种药物也耐药的菌株。临床上为延长加替沙星和莫西沙星的应用时间，对于已对左氧氟沙星耐药的菌株应避免应用加替沙星和莫西沙星单药治疗。     

氟喹诺酮类药物对粪肠球菌的防耐药突变浓度研究

目的通过测定4种氟喹诺酮类药物(FQ)对粪肠球菌ATCC29212及其同源耐药突变体、粪肠球菌临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)、防耐药突变浓度(MPC)和突变选择窗(MSW),比较其抗菌活性及防耐药突变的能力。方法采用4种FQs(环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星和加替沙星)筛选粪肠球菌ATCC29212同源的第一步耐药突变体,用加替沙星筛选第二步耐药突变体;采用琼脂二倍稀释法测定粪肠球菌ATCC29212及其同源耐药突变体、粪肠球菌临床分离株的MIC、暂定MPC(MPCpr)和MPC,并计算MIC90、MPCpr90、选择指数SI(MPCpr90/MIC90及MPC/MIC)。结果加替沙星、莫西沙星、左氧氟沙星和环丙沙星对粪肠球菌ATCC29212的MPC分别为1.2、1.2、5.6和6.4μg/m L,选择指数分别为3.4、6、8和8;对30株环丙沙星敏感的粪肠球菌临床分离株的MPCpr90分别为2、1、4和4μg/m L,选择指数分别为4、4、8和8;而加替沙星和莫西沙星对15株环丙沙星中介耐药株的MPCpr90分别为32和16μg/m L,选择指数均达到了32。4种FQs药物对ATCC29212第一步耐药突变体的MIC及MPC值均较其源菌株升高;加替沙星和莫西沙星对第二步耐药突变体的MPC已高达32μg/m L;加替沙星、莫西沙星和左氧氟沙星对第一步耐药突变体的MSW较源菌株增宽。结论对于粪肠球菌临床分离株、ATCC29212及其同源的耐药突变体,加替沙星和莫西沙星的抗菌活性均高于左氧氟沙星和环丙沙星,且加替沙星和莫西沙星限制粪肠球菌耐药突变体被选择出来的能力强于左氧氟沙星和环丙沙星,结合药动学参数,加替沙星和莫西沙星能限制下一步耐药突变株的产生,而环丙沙星和左氧氟沙星则很容易筛选出下一步耐药突变株。但对于第二步耐药突变株,加替沙星和莫西沙星则很容易筛选出对这两种药物也耐药的菌株。因此,临床上为延长加替沙星和莫西沙星的使用寿命,对于环丙沙星非敏感的菌株应避免应用加替沙星和莫西沙星单药治疗。     

头孢吡肟对铜绿假单胞菌防突变浓度的研究

目的研究头孢吡肟对铜绿假单胞茵的防突变浓度（MPC）,考察头孢吡肟对耐药突变株的选择能力,为临床优化抗菌药物的给药方案。方法采用肉汤法富集铜绿假单胞茵ATCC27853和10株临床分离茵,采用琼脂平板二倍稀释法测定头孢吡肟对铜绿假单胞茵的MIC、MPC值,计算MIC90、MPC90、选择指数SI。结果头孢吡肟对铜绿假单胞茵临床分离菌株的MIC90为32μg·mL^-1,MPC90〉2048μg·mL^-1,SI〉64。结论头孢吡肟在临床的应用容易筛选出铜绿假单胞茵耐药突变株。     

羟基氰氯苯腙对铜绿假单胞菌喹诺酮类药物耐药的抑制作用

目的：探讨铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物（ FQS）的耐药机制,对临床合理应用抗生素提供参考依据。方法应用琼脂稀释法检测铜绿假单胞菌耐药株和敏感株在加入主动外排泵抑制剂羟基氰氯苯腙（CCCP）后对环丙沙星的最低抑菌浓度（MIC）变化情况。结果 CCCP浓度为5 mg/L时能明显增强环丙沙星对铜绿假单胞菌的敏感性,环丙沙星的敏感率由62．36％→78．82％,CCCP 在体外能增强FQS抗菌活性,27株耐环丙沙星铜绿假单胞菌11株敏感性增加,53株对环丙沙星敏感性菌株有3株MIC值下降,CCCP能使部分耐药细菌的MIC逆转。结论外排泵机制可能是造成铜绿假单胞菌对环丙沙星耐药的主要原因之一,泵抑制剂可部分逆转这种耐药性。     

氟喹诺酮类药物体外诱导大肠埃希菌交叉耐药性研究

目的探讨大肠埃希菌在体外对氟喹诺酮类药物的交叉耐药性。方法：采用多步诱导法,对大肠埃希菌临床分离株分别进行环丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星的诱导耐药试验;用琼脂稀释法测定药物敏感性。结果：大肠埃希菌经环丙沙星诱导后其MIC90由0．0548μg／ml升到252．5108μg／ml：对左氧氟沙星和加替沙星产生交叉耐药,MIC90由3．3873μg／ml和3．2494μg／ml升到50．2169μg／ml和25．1102μg／ml。经左氧氟沙星诱导后其MIC90由3．3873μg／ml升到390．7599μg／ml;对环丙沙星和加替沙星产生交叉耐药,MIC90分别由0．0548μg／ml和3．2494μg／ml升到390．7599μg／ml和59．7173μg／ml。经加替沙星诱导后其MIC90由3．2494μg／ml升到362．0762μg／ml;对环丙沙星和左氧氟沙星产生交叉耐药,MIC90分别由0．0548μg／ml和3．3873μg／ml升到415．8149μg／ml和362．0762μg／ml。3种氟喹诺酮类药物诱导前后大肠埃希菌ESBLs阳性率无变化。临床分离大肠埃希菌ESBLs阳性菌株对3种氟喹诺酮类药物的耐药率分别为82．8％、72．4％、51．7％均大于ESBLs阴性菌株的60．7％、28．6％、17．9％。     

临床分离铜绿假单胞菌喹诺酮耐药株gyrA基因突变及其对β-内酰胺类药物敏感性研究

利用PCR、限制性片段多态性分析（RFLP）、DNA单链构像多态性分析（SSCP）和DNA测序等方法，对10株成都地区临床分离耐喹诺酮类药物铜绿假单孢菌gyrA基因进行研究。结果表明，成都地区耐喹诺酮类药物铜绿假单胞菌gyrA的喹诺酮耐药决定区编码等83位氨基酸密码子表现出高频单点突变（10株中有8株），其突变方式为ACC→ATC。gyrA的PCR扩增产物SacII酶切片段与测序结果一致。SSCP的带谱与测序结果比较，除1株（PSA2）的SSCP带谱与标准株相同，但测序结果有点突变外，其余菌株与测序结果一致。因此，利用PCR－SSCP－RFLP系统，可快速、准确的检测耐喹诺酮类药物的铜绿假单胞菌gyrA中至少一个碱基的差异。用二倍稀释法测定喹诺酮和β－内酰胺类药物对耐药突变株体外抗菌活性，结果表明，铜绿假单胞菌gyrA基因突变株对诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢他啶、亚胺培南和哌拉西林表现出不同的敏感性。试验所用8株突变株对诺氟沙星和环丙沙星表现出高水平抗性；3株对左氧氟沙星敏感；3株对头孢他啶和哌拉西林表现出耐药，2株对亚胺培南耐药。     

铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药作用的研究

目的研究铜绿假单胞茵对喹诺酮类药物的耐药性及其机制。方法收集、分离及鉴定从四川大学华西医院分离的27株铜绿假单胞茵,测定5种喹诺酮类药物的最低抑茵浓度（MIC）及碳酰氰基-对-氯苯腙（CCCP）对喹诺酮类药物的体外抗茵活性。采用RT—PCR方法扩增铜绿假单胞茵外膜蛋白基因oprM,PCR方法扩增外排蛋白阻遏基因mexR、质粒qnr基因。结果5种喹诺酮类药物中没有一种对27株铜绿假单胞菌完全敏感,均出现了比较高的耐药水平,且具有交叉耐药性。CCCP能使部分耐药 细菌的MIC逆转。耐药菌株oprM基因在RNA水平上表达增加,mexR经DNA测序表明临床分离铜绿假单胞菌主动外排耐药株基因在编码66住氨基酸处发生了碱基突变oqnr基因经PCR扩增后电泳无条带显示,表明没有质粒介导的耐药产生。结论成都地区铜绿假单胞菌临床分离株对5种喹诺酮类药物呈现交叉耐药。主动外排是导致铜绿假单胞菌耐药性的重要因素。