损伤脑组织匀浆诱导骨髓间质干细胞向神经细胞分化的研究

目的探讨损伤脑组织匀浆液对骨髓间质干细胞的诱导分化作用。方法体外分离、培养骨髓间质干细胞,经体外增殖,用损伤脑组织匀浆液诱导其分化,应用免疫细胞化学方法对分化的细胞进行鉴定。结果大鼠骨髓间质干细胞可在体外增殖,经损伤脑组织匀浆液诱导,骨髓间质干细胞形态学改变明显,部分细胞突起可见锥样改变,在细胞密集处可突起交织成网。免疫细胞化学法染色显示分化细胞呈NSE阳性表达占23.2%±6.09%,GFAP阳性表达占14.3%±3.27%。结论损伤脑组织匀浆液可诱导大鼠骨髓间质干细胞向神经细胞分化,部分为神经元,部分为神经胶质细胞。     

人脑组织匀浆液诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经细胞

目的 研究人脑组织匀浆液诱导大鼠骨髓间质干细胞向神经元细胞分化能力。方法从大鼠骨髓分离培养骨髓间质干细胞．经体外增殖，用人脑组织匀浆液诱导骨髓间质干细胞向神经元样细胞分化，应用免疫细胞化学方法对分化的细胞进行鉴定。结果大鼠骨髓间质干细胞可在体外增殖，经人脑组织匀浆液诱导，骨髓间质干细胞可向神经元样细胞分化，且分化率较高，24小时为45％，48小时为78．2％，72小时为88．3％。分化后的细胞表达神经元标志物-神经微丝(NF)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)。结论人脑组织匀浆液可诱导大鼠骨髓间质干细胞向神经元细胞分化，从而为骨髓间质干细胞脑内移植与及其分化，以及神经功能的修复提供了基础。     

大鼠骨髓间质干细胞用中药绞股蓝诱导为神经细胞的研究

目的　体外诱导大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC)分化为神经细胞。方法　用SD大鼠股骨骨髓细胞体外培养。用绞股蓝总甙加入无血清L DMEM诱导MSC分化为神经细胞。免疫细胞化学鉴定有神经元烯醇化酶 (NSE)、神经干细胞标志物巢蛋白 (nestin)和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果　大鼠骨髓间质干细胞在体外扩增 5～ 2 2代 ,对照组不加任何诱导剂 ,MSC可分化为神经样细胞 (5 3 1%± 4 3% )。加入绞股蓝诱导剂诱导 1～ 5h ,MSC形态转变为典型的神经样细胞(90 0 %± 4 6 % )。免疫细胞化学染色显示诱导出的神经样细胞 ,NSE、nestin、GFAP表达阳性。继续培养 12～ 19d ,5d后对照组所有细胞逐渐死亡。绞股蓝组持续诱导 12～ 19d后神经样细胞形态完好 ,大部分细胞变为圆形并聚集成团 ,NSE、nestin、GFAP表达阳性。如果换回正常培养液 ,神经样细胞可逆转回MSC并传代。结论　骨髓本身可能存在神经干细胞。大鼠骨髓间质干细胞用中成药绞股蓝诱导可分化为多种形态的神经样细胞。     

碱性成纤维生长因子等诱导间质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的　体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞。方法　采用Ficoll Paque液 (10 77g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,分别采用含碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和叔丁对甲氧酚 (BHA)或硫代甘油等试剂的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、巢蛋白 (nestin)的表达。结果　成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得 5× 10 5,10代可获得 2× 10 10 个细胞。加入bFGF和BHA等诱导剂或硫代甘油诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF、nestin表达阳性 ,GFAP阴性。结论　成人骨髓间质干细胞在体外可以分化为神经元样细胞。     

VEGF/PDGF受体通路参与骨髓间充质干细胞诱导分化及向脑胶质瘤的定向迁移

背景：最近的研究显示VEGF能够诱导骨髓间质干细胞分化为血管内皮细胞样细胞,促进骨髓间质干细胞向脑胶质瘤选择性迁移,但骨髓间质干细胞并无VEGF受体的表达,目前关于VEGF对骨髓间质干细胞的诱导分化和促迁移作用机制还不清楚。 目的：探讨PDGF受体在VEGF诱导骨髓间质干细胞分化和促迁移过程中的作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-06/2009-03在安徽医科大学附属省立医院神经再生与修复实验室完成。 材料：骨髓取自骨科病人;U87胶质瘤细胞购自上海生命科学院;Transwell小室购自美国Coring公司;DMEM培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司;生长因子购自美国Peprotech公司。 方法：利用50ng/ml VEGF对骨髓间质干细胞进行诱导分化培养,实验组骨髓间质干细胞在接受诱导分化培养前用受体中和抗体封闭相关受体的生物学活性,以不进行预处理作为对照组,以研究相关受体信号通路在骨髓间质干细胞分化过程中的作用;细胞迁移实验采用Transwell迁移模型进行,骨髓间质干细胞加在Transwell小室的上室,生长因子或胶质瘤细胞培养上清加在下室,实验组利用受体抗体进行预处理骨髓间质干细胞,对照组不予预处理,以研究相关受体信号通路在骨髓间质干细胞定向迁移过程中的作用;VEGF预培养骨髓间质干细胞,比较预培养组和对照组向胶质瘤细胞培养上清的迁移能力。 主要结果：封闭骨髓间质干细胞表面PDGF受体的生物学作用后,VEGF不能诱导骨髓间质干细胞表达细胞表面标志物的CD-31、vWF;用VEGF受体封闭剂进行封闭时,VEGF任能诱导骨髓间质干细胞表达CD-31、vWF;封闭PDGF受体后,VEGF吸引骨髓间质干细胞穿过Transwell小室聚碳酸脂膜发生迁移的细胞数减少,骨髓间质干细胞向脑胶质瘤迁移的细胞数也减少,用VEGF受体封闭剂进行封闭时,穿过的细胞数没有改变;用VEGF预培养骨髓间质干细胞,能够增加向胶质瘤迁移的细胞数。 结论：VEGF通过与骨髓间质干细胞表面PDGF受体结合,吸引骨髓间质干细胞定向迁移,诱导其分化;VEGF/PDGF受体通路参与骨髓间质干细胞向脑胶质瘤的定向迁移;用生长因子VEGF预处理骨髓间质干细胞可以增加骨髓间质干细胞向胶质瘤的迁移效率。 国内外研究现状：国内外研究一致认为骨髓间质干细胞无血管内皮细胞生长因子（VEGF）受体的表达,对VEGF诱导骨髓间质干细胞分化和促迁移作用机制的研究还很少,通过Pubmed搜索仅一篇发表于2007年的文献的研究相对深入,认为VEGF的促迁移作用可能与PDGF受体有关,本研究对此做了更深入的研究,结果见前文。     

参芪液对成人骨髓间质干细胞的诱导分化作用

目的　探讨参芪液体外对成人骨髓间质干细胞 (MSC)定向诱导分化为神经元的作用。方法　从成人肋骨分离MSC ,体外培养扩增 ,并传代至第 5代。含 10mg/mL碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的培养液预诱导 2 4h ,再用含不同浓度参芪液的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果　成人骨髓间质干细胞在体外扩增 5代后 ,加入参芪液诱导 ,可见MSC胞体收缩 ,突起伸出。免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF阳性 ,GFAP阴性。神经分化的定量分析显示NSE、NF阳性细胞分别为 (79 5± 2 5 ) %和 (76 5± 2 3 ) %。结论　参芪液在体外可以诱导成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞     

bFGF和N2体外联合定向诱导骨髓间质干细胞向神经元样细胞分化

目的:将成年大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)体外定向诱导分化为神经元样细胞。方法:成年大鼠骨髓间质干细胞，进行体外扩增、纯化培养，对纯化后的MSCs，使用碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)和神经培养添加剂N2进行诱导，使MSCs分化为神经元样细胞，并进行免疫细胞化学方法鉴定。结果：95．6％的MSCs出现形态改变，呈神经元样。免疫细胞化学法鉴定，显示神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)和神经干细胞标志物巢蛋白(nestin)阳性表达。结论体外MSCs可以分化为神经元样细胞。     

骨髓间质干细胞的分离培养及向神经细胞分化的研究

目的 研究骨髓间质干细胞的分离培养方法及其向神经元细胞分化的条件及可行性。方法 取大鼠骨髓，采用贴壁培养筛选法，分离培养骨髓问质干细胞，经β-巯基乙醇诱导，骨髓问质干细胞可向神经元样细胞分化，免疫细胞化学方法对分化细胞进行鉴定。结果 分离的骨髓间质干细胞可体外增殖，经β-巯基乙醇诱导，骨髓间质干细胞可向神经元细胞分化，细胞突起增多，具有神经元的形态学特征；分化后的细胞表达神经元标志物-神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经微丝(NF)。结论 骨髓组织中存在着骨髓间质干细胞，易分离和培养，体外可增殖，可横向分化为神经元，从而为中枢神经系统疾病的移植治疗提供了细胞来源。     

参芪液对成人骨髓问质干细胞的诱导分化作用

目的探讨参芪液体外对成人骨髓间质干细胞(MSC)定向诱导分化为神经元的作用.方法从成人肋骨分离MSC,体外培养扩增,并传代至第5代.含10 mg/mL碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养液预诱导24h,再用含不同浓度参芪液的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元.免疫组化鉴定神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果成人骨髓间质干细胞在体外扩增5代后,加入参芪液诱导,可见MJSC胞体收缩,突起伸出.免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF阳性,GFAP阴性.神经分化的定量分析显示NSE、NF阳性细胞分别为(79.5±2.5)%和(76.5±2.3)%.结论参芪液在体外可以诱导成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞.     

成鼠骨髓基质细胞向神经干细胞诱导分化的实验研究

目的研究成鼠骨髓基质细胞体外培养的生长行为和分化情况。方法利用EGF、FGF-b等增殖及分化诱导因子和神经干细胞培养液进行培养,分化诱导,用细胞免疫组化染色进行细胞鉴定。结果成鼠骨髓基质细胞在体外培养中能形成细胞克隆团,具有增殖能力,并可分化出胶质细胞样细胞和神经元样细胞。结论骨髓基质细胞具有较强的自我更新及多向分化能力,在适宜的诱导分化条件下,可诱导为神经干细胞,分化出神经元和胶质细胞。     

猫骨髓源性神经干细胞诱导分化的实验研究

目的探讨猫骨髓分离培养、诱导分化神经干细胞的可行性。方法无菌条件下行骨穿,梯度密度离心获取猫骨髓基质细胞,以“神经干细胞培养基”培养,用分化诱导因子进行体外培养和诱导分化。结果猫骨髓基质细胞在相应培养条件下能在体外培养中增殖、分化,克隆形成细胞球(或称“神经球”),这些细胞球能表达神经干细胞特异性抗原nestin,而且能进一步诱导分化出胶质样细胞和神经元样细胞,免疫细胞化学检测可见有胶质源性纤维酸性蛋白抗体(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗原表达。结论猫骨髓基质细胞在一定条件诱导下可分化成神经胶质样和神经元样细胞。     

人参皂苷Rg1诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的作用

目的研究人参皂苷Rg1在体外能否诱导Wistar大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。方法通过贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养扩增,人参皂苷Rg1诱导分化,光镜下观察细胞形态,免疫细胞化学检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）和神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达,RT-PCR检测细胞NGF mRNA的表达。结果大鼠骨髓间充质干细胞可通过贴壁法成功分离并可以在体外大量扩增。人参皂苷Rg1诱导72h后,部分骨髓间充质干细胞（35．57％±3．59％）转变为神经元样细胞,免疫细胞化学染色NSE呈阳性,分化的神经元样细胞可能表达NGF mRNA。结论人参皂苷Rg1可以在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞,并且可能表达NGF mRNA。     

体外培养骨髓间充质干细胞诱导分化为神经样细胞的研究

目的探讨DMSO+BHA体外培养骨髓间充质干细胞诱导分化为神经样细胞的可行性。方法 DMSO+BHA诱导BMSCs向神经样细胞分化,免疫组织细胞化学染色法检测相关蛋白表达。结果神经方向诱导后细胞形态学发生变化,且NSE、Nestin及GFAP染色均为阳性。结论 DMSO+BHA可成功诱导BMSCs向神经样细胞方向分化。     

MSCs向神经细胞横向分化的研究与质疑

骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)可横向分化为神经细胞，这种跨系分化在体外可单独诱导分化为神经元，而在体内可能与神经干细胞(neural stem cells，NSCs)或胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESCs)产生融合，由融合细胞分化为神经细胞，这一过程被误解为横向分化，故而横向分化仍需深入研究。     

人脐带基质干细胞体外向雌性生殖细胞分化的潜能

背景:骨髓间充质干细胞具有向卵母细胞分化的潜能,但是其免疫排斥和来源的有限性限制了其应用。研究表明,脐带间质干细胞也具有分化为卵母样细胞的潜能。 目的：建立分离培养人脐带间质干细胞的方法,观察其在体外向生殖细胞分化的潜能。 方法：无菌条件下取正常足月分娩新生儿的脐带,用Ⅰ型胶原酶消化,分离单个核细胞,DMEM培养,获得贴壁细胞,流式细胞仪检测其免疫表型。采用不同条件培养基诱导细胞向成脂、成骨、成软骨方向分化。通过RT-PCR检测脐带间质干细胞中生殖系特异性标记物的表达,采用卵泡液作为条件培养基,体外诱导脐带间质干细胞向生殖细胞分化。 结果与结论：①分离的脐带单核细胞培养后呈纺锤体样,体外增殖达10代以上,其分子免疫表型为：CD29、CD44、CD73(SH3)、CD90、CD105 (SH2)阳性;SSEA-4弱阳性;CD31、CD34、CD45、HLA-DR阴性,与骨髓间充质干细胞的免疫表型相似。在不同的诱导条件下,脐带间质干细胞可形成脂滴、骨结节、软骨结节等结构,并表达脂肪、骨及软骨细胞相关的特异性基因。②脐带间质干细胞表达OCT4、Stella、Ifitm3等生殖系标记物,在含5%,10%,20%等不同浓度卵泡液的诱导条件下细胞可聚集分化形成卵母细胞样结构。     

BMSC向神经干细胞诱导分化研究进展

骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSC）是指存在于骨髓间质中具有自我复制能力，不仅可分化为造血细胞，在特定条件下还可分化为非造血组织细胞。BMSC具有多向分化潜能和强大的增殖能力，遗传背景稳定，体内植入反应弱，易于分离扩增纯化，是一种较理想的组织工程种子细胞。近年来，国内外学者广泛开展了BMSC向神经干细胞诱导分化的研究，本文就BMSC向神经干细胞及神经细胞诱导分化的研究进展分述如下。     

骨髓间质干细胞体外诱导分化神经样细胞功能的研究进展

骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可经药物、细胞营养因子、细胞共培养等多种方法诱导分化为神经样细胞,移植后可显著改善和促进损伤部位的结构和功能修复并代替坏死的神经元发挥正常的生理作用。研究发现此神经样细胞可能具备突触联系、神经递质、神经电生理等正常神经细胞的功能。     

骨髓间充质干细胞向多巴胺能神经元的诱导分化

背景：近年来研究发现,神经营养因子在骨髓间充质干细胞的分化中发挥重要作用。目前脑组织中具有再生能力的神经干细胞在体外是否具有直接诱导骨髓间充质干细胞分化为多巴胺能神经元的作用还未见报道。 目的：观察大鼠间充质干细胞在胶质细胞源性神经营养因子与神经干细胞共培养两种诱导条件下体外分化成多巴胺能神经元的能力。 方法：分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代细胞分2组培养,一组细胞应用胶质细胞源性神经营养因子单独诱导,另一组细胞与已培养成球的神经干细胞共培养进行诱导,共培养之前行Brdu标记。诱导3 d后以免疫组织化学法检测各组贴壁细胞神经元特异性标志物神经原纤维和多巴胺能神经元特异性标志物酪氨酸羟化酶的表达,观察间充质干细胞的分化情况。 结果与结论：胶质细胞源性神经营养因子单独诱导组间充质干细胞在诱导24 h后胞体回缩呈锥形,突起延长且数量增多,有神经元样形态,且细胞间相互连接成网络状,3 d后部分细胞表达神经原纤维,其中少部分同时表达酪氨酸羟化酶。与神经干细胞共培养组神经干细胞球很快解离,迅速贴壁,共培养的贴壁细胞大量增殖且多呈神经元样,胞体细长多突起,相互间连接成网,多数贴壁细胞分别单独表达神经原纤维和酪氨酸羟化酶,少数细胞可见Brdu/神经原纤维,Brdu/胶质纤维酸性蛋白,Brdu/酪氨酸羟化酶双标阳性。提示间充质干细胞在胶质细胞源性神经营养因子、神经干细胞存在的情况下可定向转化为神经元,并有向多巴胺能神经元分化的可能。在该实验条件下胶质细胞源性神经营养因子效果好于神经干细胞。     

音猬因子诱导恒河猴间充质干细胞向神经样细胞的分化**☆◆

背景：骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞，是神经系统疾病细胞治疗的有效手段，但目前的时效尚不完善。 目的：应用神经发育音猬因子诱导恒河猴骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化。 方法：应用经典的维甲酸方案与音猬因子方案两种方法诱导恒河猴骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞，采用密度梯度离心法分离培养恒河猴骨髓间充质干细胞，倒置相差显微镜观察生长情况，MTT法测定细胞生长曲线，流式细胞仪鉴定细胞表型，免疫组织化学鉴定分化细胞标志，透射电镜和扫描电镜观察分化细胞超微结构。 结果与结论：体外分离培养的恒河猴骨髓间充质干细胞，经流式细胞仪表型鉴定，具有较高均一性。通过音猬因子诱导方案诱导处理7 d后，分化细胞多数表现为NSE、NF-M、Tau和Nestin染色阳性，经图像统计分析发现经音猬因子诱导方案神经干细胞标志物Nestin阳性率显著高于维甲酸诱导方案(P < 0.01)，另一方面经维甲酸诱导方案诱导的细胞表现GFAP阳性率高于音猬因子诱导方案，差异具有显著性意义(P < 0.05)。提示音猬因子诱导方案是一种诱导恒河猴骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的有效途径。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导为肝细胞样细胞***

背景：目前体外诱导骨髓间充质干细胞分化为肝细胞样细胞的研究主要集中在不同诱导因子的诱导作用,而微环境的诱导作用研究较少。 目的：观察肝细胞生长因子、胎肝细胞对骨髓间充质干细胞体外诱导分化为肝细胞样细胞的影响。 方法：采用密度梯度离心法分离大鼠骨髓间充质干细胞,反复贴壁法纯化扩增骨髓间充质干细胞;采用Ⅰ型胶原酶消化法分离孕3周大鼠胚胎肝脏细胞,差速贴壁法纯化肝脏细胞;阴性对照组骨髓间充质干细胞只加入含体积分数为10%胎牛血清的L-DMEM培养基。诱导组在阴性对照组基础上加入一定浓度肝细胞生长因子或者与胎肝细胞共培养进行诱导分化。 结果与结论：诱导组白蛋白、甲胎蛋白水平均高于非诱导组(P < 0.01),诱导组糖原染色阳性,免疫细胞化学染色CK-18阳性,而非诱导组糖原染色、CK-18均阴性。结果显示肝细胞生长因子和胎肝细胞均可在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为具有肝细胞样细胞表型和功能的类肝细胞。