化浊抗纤保肝汤调控PI3K/AKT/mTOR途径抑制肝纤维化的机制研究

[目的] 探究化浊抗纤保肝汤（HZKXD）调控磷脂肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）途径抑制肝纤维化的机制。[方法] 80只大鼠随机分为4组：对照组、模型组、低剂量HZKXD组和高剂量HZKXD组（每组20只）。四氯化碳（10%）腹腔注射构建纤维化模型,低剂量HZKXD组和高剂量HZKXD组灌胃剂量分别为5 mL/kg和10 mL/kg。比较各组大鼠外周血中肝功能指标、肝组织损伤、肝纤维化情况、成纤维细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）水平,以及PI3K、AKT、mTOR mRNA和蛋白表达量。[结果] 4组大鼠上述指标比较差异有统计学意义（P<0.05）。模型组的谷丙转氨酶（ALT）（127.26±14.03） U/L、谷草转氨酶（AST）（260.15±27.57） U/L、肝组织损伤情况、胶原蛋白的体积分数（24.27±1.96）%、α-SMA蛋白、PI3K、AKT和mTOR mRNA和蛋白表达量高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。低剂量HZKXD组的ALT（92.85±9.84） U/L、AST（198.67±21.91） U/L、肝组织损伤情况、胶原蛋白的体积分数（14.81±1.04）%、α-SMA蛋白、PI3K、AKT和mTOR mRNA和蛋白表达量显著低于模型组（P<0.05）。高剂量HZKXD组的ALT（56.44±6.35） U/L、AST（137.23±14.06） U/L、肝组织损伤情况、胶原蛋白的体积分数（7.05±0.85）%、α-SMA蛋白、PI3K、AKT和mTOR mRNA和蛋白低于模型组和低剂量HZKXD组,差异有统计学意义（P<0.05）。[结论] HZKXD可缓解肝纤维化模型大鼠肝组织中胶原蛋白累积,还可以抑制PI3K/AKT/mTOR通路减少成纤维细胞。     

健脾消癌方通过PI3K/Akt信号通路抑制结肠癌血管生成的研究＊

目的 观察结肠癌HCT116细胞健脾消癌方的条件培养液对HUVEC细胞管腔形成的影响，从PI3K/Akt生物轴调控角度探讨其作用机制。方法 培养HCT116细胞，细胞设3组：对照组，健脾消癌方组（加入15%健脾消癌方含药血清）及人参皂苷Rg3组；制备HCT116细胞健脾消癌方条件培养液（分组及制备方法见实验方法），用条件培养液干预HUVEC（脐静脉内皮细胞，Human Umbilical Vein Endothelial Cells），Matrigel基质胶法检测HCT116细胞健脾消癌方条件培养液对HUVEC小管形成的影响。随后采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组HCT116细胞磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、p-Akt、VEGF（血管内皮生长因子，Vascular endothelial growth factor）蛋白表达。最后在结肠癌HCT116荷瘤小鼠中验证健脾消癌方对肿瘤生长速度的影响，并经瘤组织VEGF蛋白表达、CD31免疫组化染色检测肿瘤内血管生成情况。结果 模型组HUVEC细胞管腔形成较空白血清组显著增加（P<0.05）；健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组较模型组HUVEC细胞管腔形成显著减少（P<0.01）。p-Akt和VEGF蛋白表达水平模型组高于空白血清组（P<0.05），健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组显著低于模型组（P<0.01）；PI3K、Akt蛋白表达量组间差异无统计学意义。与对照组比较，模型组荷瘤小鼠肿瘤体积显著性增大，瘤组织内VEGF表达、CD31阳性面积显著性增加，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组荷瘤小鼠肿瘤体积显著减小，瘤组织内VEGF表达、CD31阳性面积降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 健脾消癌方可抑制肿瘤的血管生成和生长，其作用机制可能与PI3K/Akt生物轴调控VEGF表达有关。     

加味小陷胸汤水提物通过Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路抑制TGF-β1介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化及侵袭迁移

目的 观察加味小陷胸汤水提物对转化生长因子-β₁（transforming growth factor-β₁,TGF-β₁）介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）及侵袭迁移能力的影响,探讨其调控Wnt5a/Ca²⁺/活化T细胞核因子（nuclear factor of activated T-cells,NFAT）信号通路抑制MGC-803细胞EMT和侵袭转移的作用机制。方法 用TGF-β₁（10 μg·L^-1）诱导人胃癌MGC-803细胞EMT及侵袭转移模型,分别采用Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹和免疫荧光法检测细胞侵袭迁移能力,EMT标志蛋白表达和Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路关键蛋白表达以及细胞内Ca²⁺浓度。结果 TGF-β₁能够显著增强MGC-803细胞侵袭迁移能力（P<0.01）,下调上皮细胞黏附分子（E-cadherin）水平（P<0.01）,上调间质细胞标志蛋白（N-cadherin）,转录因子（Snail）和细胞骨架蛋白（Vimentin）表达（P<0.01）,并诱导细胞Wnt5a,钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）,活化T细胞核因子1（nuclear factor of activated T-cells1,NFAT1）总蛋白,磷酸化蛋白p-NFAT1和NFAT1核蛋白表达上调及Ca²⁺胞内蓄积（P<0.01）;而加味小陷胸汤（10,20,40 mg·L^-1）均可明显抑制这一现象,且40 mg·L^-1效果最佳（P<0.05,P<0.01）;Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路特异性抑制剂（R）-（+）-Bay-K-8644与加味小陷胸汤40 mg·L^-1均可明显抑制MGC-803细胞经TGF-β₁介导后的侵袭迁移,上调E-cadherin水平,下调N-cadherin,Snail,Vimentin,Wnt5a,CaN,NFAT1蛋白表达及减少Ca²⁺在胞内蓄积（P<0.05,P<0.01）,且（R）-（+）-Bay-K-8644协同加味小陷胸汤40 mg·L^-1抑制作用效果更强（P<0.05,P<0.01）。结论 以上结果提示加味小陷胸汤能通过Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路抑制TGF-β₁介导的EMT,进而降低MGC-803细胞侵袭迁移能力。     

基于IRS-1/PI3K/AKT通路探讨枳葛口服液对酒精性肝病大鼠胰岛素抵抗的影响＊

目的 探讨枳葛口服液对酒精性肝病大鼠胰岛素抵抗的影响及可能机制。方法 SD雄性大鼠100只随机分为5组，正常组（蒸馏水）、模型组（52%老白干）、枳葛口服液高、中、低剂量组（52%老白干 + 不同剂量枳葛口服液）灌胃。各组大鼠每四周取尾静脉血测定FBG、FINS，持续16周后处死大鼠，取肝组织行HE染色、免疫组化，取肝脏总蛋白Western blotting检测IRS-1、PI3K、AKT、GLUT-2等IRS-1/PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组FBG、FINS明显升高（P < 0.05），IRS-1/PI3K/AKT通路相关蛋白水平均显著降低（P < 0.01），HE染色及免疫组化可见细胞内较多的脂肪空泡；与模型组比较，枳葛口服液高、中剂量组以上指标均有所改善（P < 0.05），低剂量组以上指标无明显改善（P > 0.05）。结论 乙醇诱导的酒精性肝损伤大鼠存在着胰岛素抵抗及IRS-1/PI3K/AKT通路的改变，一定剂量的枳葛口服液可能通过IRS-1/PI3K/AKT信号通路改善胰岛素抵抗状态。     

基于Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路研究小陷胸汤调控Ca2+载量抑制MGC-803细胞侵袭迁移和上皮间质转化作用

目的 探讨小陷胸汤对转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响，并探讨其可能的机制。方法 通过CB-DOCK在线平台（http： //clab. labshare. cn /cb-dock /）预测小陷胸汤与活化T细胞核转录因子（NFAT）分子对接。使用质量浓度为10 μg·L^-1的TGF-β₁建立人胃癌MGC-803细胞侵袭转移模型，将MGC-803细胞分为空白组、模型组、小陷胸汤组（0.1、0.2、0.4 g·L^-1），为进一步探讨Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路在小陷胸汤抑制胃癌中的关键参与作用，将Wnt5a过表达质粒转染MGC-803细胞，分为空白质粒组、Wnt5a-OE组、空白质粒+小陷胸汤（0.4 g·L^-1）组和Wnt5a-OE+小陷胸汤（0.4 g·L^-1）组。分别使用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法、Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹法（Western blot）、免疫荧光法检测MGC-803细胞活力、侵袭能力、迁移能力、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指蛋白（Snail）、Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路关键蛋白Wnt5a、钙调神经磷酸酶（CaN）、NFAT1、磷酸化（p）-NFAT1和NFAT1核蛋白表达以及细胞Ca²⁺浓度变化。结果 分子对接提示小陷胸汤作用于Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路。与模型组比较，小陷胸汤（0.1、0.2、0.4 g·L^-1）能明显促进MGC-803细胞活力的丧失，可通过基质凝胶侵入Transwell下室抑制细胞，并以剂量依赖性的方式减缓细胞划痕愈合，并促进E-cadherin的表达，抑制N-cadherin、Vimentin和Snail的表达（P<0.05，P<0.01）。进一步实验表明，与模型组比较，小陷胸汤可以抑制Wnt5a、CaN、NFAT1和p-NFAT1的表达，降低NFAT1核表达和NFAT1介导的转录活性，从而降低细胞Ca²⁺浓度，且可逆转Wnt5a的作用（P<0.05，P<0.01）。结论 小陷胸汤可通过Wnt5a/Ca²⁺/NFAT通路减弱人胃癌MGC-803细胞的侵袭转移和上皮间质转化（EMT），从而减弱TGF-β₁诱导的促瘤作用。这提示小陷胸汤可能通过调节胃癌的侵袭、转移和EMT来预防和治疗胃癌。     

白藜芦醇通过PI3K/Akt信号通路协同5-氟尿嘧啶对结肠癌细胞的抑制作用

[目的] 观察白藜芦醇（RES）对5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗结肠癌敏感性及磷脂酰肌醇激酶（PI3K）/蛋白激酶（Akt）信号通路的影响。[方法] 体外培养SW620细胞,CCK8法检测细胞活力,倒置显微镜分析细胞克隆数,流式细胞术分析细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡蛋白Cle-caspase 9、Cle-caspase 7和Cle-PARP及PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达水平。[结果] 与对照组比较,RES组、5-FU组和RES+5-FU组SW620细胞活力、克隆数及p-p85、p-110β、p-PDK1和p-Akt表达水平明显降低,而细胞凋亡率及Cle-caspase 9、Cle-caspase 7和Cle-PARP表达水平明显增高（P<0.05）;与RES组和5-FU组比较,RES+5-FU组SW620细胞活力、克隆数及p-p85、p-110β和p-PDK1和p-Akt表达水平明显降低,而细胞凋亡率及Cle-caspase 9、Cle-caspase 7和Cle-PARP表达水平明显增高（P<0.05）。PI3K抑制剂LY294002增强RES和5-FU联合处理对SW620细胞生长的抑制作用,而PI3K基因过表达则降低RES和5-FU联合处理对SW620细胞生长的抑制作用。[结论] RES与5-FU协同抑制PI3K/Akt信号通路诱导结肠癌的化疗效果。     

芎归不忘散对脑缺血大鼠学习记忆障碍及其线粒体、PI3K/Akt信号通路作用机制研究＊

目的 探讨芎归不忘散对血管性痴呆（vascular dementia，VD）模型大鼠线粒体保护及对PI3K/AKT信号通路的影响，揭示其抗血管性痴呆的作用机制。方法 采用微血栓栓塞法制备VD大鼠模型；采用Morris水迷宫评价其学习记忆能力；HE染色法观察海马CA1区病理学形态学；流式细胞术检测大鼠海马线粒体肿胀及膜电位；HPLC测定脑组织ATP、ADP以及AMP的含量；Western Blot测定脑组织PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果 与模型组比较，芎归不忘散显著缩短模型大鼠逃避潜伏期（P < 0.05），明显增加穿越平台次数（P < 0.05），海马CA1区病理损害明显减轻；芎归不忘散高剂量组海马线粒体肿胀度明显减轻（P < 0.05）；高、低剂量组海马线粒膜电位显著增高（P < 0.05），海马能荷值显著增高（P < 0.05），p-PI3K、p-AKT表达显著增强。结论 芎归不忘散能改善血管性痴呆学习记忆功能，激活PI3K/AKT信号通路保护线粒体功能是其主要作用机制之一。     

没食子酸通过P13K/AKT 信号通路影响胃癌MGC-803细胞侵袭性

目的 探讨没食子酸(gallic acid,GA)对胃癌MGC-803细胞侵袭能力的影响及机制。方法 体外培养胃癌MGC-803细胞,噻唑蓝（MTT）法观察细胞的生存率;transwell 小室法检测GA 对MGC-803细胞侵袭能力的影响;Western-blotting 技术检测没食子酸对P13K/AKT 通路相关因子( PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT) ,细胞基质金属蛋白酶( MMP2、MMP9) 蛋白表达的改变。结果 MTT检测6.25～50μmol·L-1 GA可抑制MGC-803的生长,并呈剂量依赖性（P＜0.05）;transwell 小室法显示,与对照组比较,经GA处理后MGC-803细胞侵袭能力明显降低（P＜0.05）;Western-blotting结果显示,没食子酸处理后的MGC-803细胞PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、MMP2、MMP9蛋白表达下降,同时加入P13K 抑制剂后,显示可抑制P13K/AKT 通路活化,抑制MMP2 和MMP9 的表达;结论 没食子酸可有效抑制胃癌MGC-803细胞侵袭能力,其机制可能是通过调控P13K/AKT 信号通路,抑制MMP2 和MMP9 的表达有关。     

膜肾1号方对大鼠肾脏病理及PI3K/Akt/mTOR信号通路表达的影响

[目的] 观察膜肾1号方对膜性肾病大鼠肾脏病理的改善作用及其对自噬通路磷脂肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）相关蛋白表达的影响。[方法] 将大鼠随机分为对照组、模型组、膜肾1号方高剂量组、中剂量组、低剂量组,盐酸贝那普利组。采用大鼠尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）的方法建立MN大鼠模型,灌胃、取材。苏木精-伊红（HE ）染色法观察大鼠肾脏组织病理改变;免疫球蛋白G（IgG）免疫荧光染色观察大鼠IgG沉积;蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测PI3K/Akt/mTOR 信号通路相关蛋白及自噬相关蛋白轻链3（LC3）表达。[结果] 药物干预后,膜肾1号方组大鼠24 h尿蛋白、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白下降且低于模型组,并具有统计学差异（P＜0.05）。光镜下观察,HE染色示正常组肾组织整体结构基本正常,膜性肾病（MN）模型组肾小球毛细血管丛充血,系膜增生,基底膜出现增厚,部分肾小管细胞空泡变、组织内可见炎症细胞浸润,可见嗜复红蛋白及IgG沉积。经膜肾1号方和盐酸贝那普利干预后,大鼠肾脏病理学改变均有所减轻。各组大鼠IgG沉积显示,与对照组比较模型组IgG沉积明显,IgG荧光表达升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）,盐酸贝那普利组和膜肾1号方组IgG荧光表达下降且低于模型组,具有统计学差异（P＜0.05）。Western Blot检测显示,药物干预后,盐酸贝那普利组和膜肾1号方组大鼠PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达下降,LC3 表达增加,并具有统计学差异（P＜0.05）。[结论] 膜肾1号方可改善大鼠肾脏病理损伤,膜肾1号方干预后PI3K-Akt信号通路相关蛋白磷酸化磷酸肌醇3激酶（p-PI3K）,磷酸化Akt蛋白（p-Akt）,磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）表达明显降低,自噬相关蛋白LC3表达升高,其分子机制与自噬信号通路的调控有关。     

青蒿琥酯通过PI3K/GSK-3β通路对1型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的改善作用研究

[目的] 观察青蒿琥酯对1型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的影响,以及探究其作用机制。[方法] 取Balb/c小鼠腹腔注射200 mg/kg STZ建立1型糖尿病小鼠模型,随机分为模型组、青蒿琥酯组和胰岛素组。另随机选10只Balb/c小鼠为健康对照组,腹腔注射等量的生理盐水。建模成功后,青蒿琥酯组灌胃100 mg/kg青蒿琥酯,健康对照组和模型组灌胃等量的生理盐水,每日1次,共4周,胰岛素组皮下注射4 U/kg甘精胰岛素注射液,每日1次,连续5 d。检测各组小鼠空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、肝脏三酰甘油（TG）、丙二醛（MDA）、血清游离脂肪酸（FFA）;苏木精-伊红（HE）染色观察小鼠胰岛病理学;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组兔抗鼠磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、糖原合成酶激酶-3（GSK3β）、磷酸化糖原合成酶激酶-3（p-GSK3β）和谷氨酰胺合成酶（GS）蛋白表达水平。[结果] 与健康对照组比较,模型组的FBG、FINS、HOMA-IR、TG、MDA和FFA含量显著增加（P＜0.05）,p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的蛋白比值以及GS蛋白表达量显著降低（P＜0.05）,p-GSK3β/GSK3β蛋白表达量比值显著增加（P＜0.05）。与模型组比较,青蒿琥酯组、胰岛素组的FBG、FINS、HOMA-IR、TG、MDA和FFA含量显著降低（P＜0.05）,p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的蛋白比值以及GS蛋白表达量显著增加（P＜0.05）,p-GSK3β/GSK3β蛋白表达量比值显著降低（P＜0.05）。[结论] 青蒿琥酯可显著降低1型糖尿病小鼠胰岛素抵抗,降低葡萄糖含量,其作用机制可能抑制PI3K/GSK3β信号通路传导有关。     

消岩汤对A549/DDP细胞自噬及耐药蛋白的影响研究

[目的]通过消岩汤对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP多药耐药及自噬蛋白的影响,探究消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP的耐药逆转作用及探讨相关分子通路。[方法]建立稳定细胞耐药模型,连续灌胃不同浓度消岩汤10 d后,通过血清药理学的实验方法,提取药物血清,用含药血清作用于肺腺癌细胞耐药细胞A549/DDP,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QPT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Werstern Blot)检测A549/DDP耐药、自噬相关基因的表达及相关通路蛋白的变化。[结果]高剂量消岩汤,低剂量消岩汤和生理盐水作用于肺腺癌耐药细胞A549/DDP,检测A549/DDP细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、肺抗药性相关蛋白(LRP)及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1m RNA和蛋白表达变化,发现高剂量组消岩汤处理细胞株后P-gp、LRP及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1 m RNA和蛋白均发生降低(P0.05),进一步发现消岩汤可影响AKT1-m TOR相关基因,消岩汤明显降低AKT1,m TOR蛋白的表达。[结论]消岩汤通过影响AKT1-m TOR分子通路进而影响耐药相关蛋白P-gp、LRP及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1基因的变化。     

金龙胶囊对胃癌细胞MGC-803和BGC-823侵袭转移能力的影响

目的:探讨金龙胶囊对人胃癌MGC-803,BGC-823细胞侵袭和迁移能力的影响并对其具体机制进行探讨。方法:体外培养胃癌MGC-803,BGC-823细胞,分为金龙胶囊组(0.1,0.2,0.4,0.8 g·L~(-1)),空白组和5-氟尿嘧啶(5-FU)组,采用噻唑蓝(MTT)比色法分别检测金龙胶囊对MGC-803,BGC-823细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制率(IC50);采用细胞侵袭(transwell)小室法和划痕实验检测金龙胶囊处理MGC-803和BGC-823细胞24 h后,细胞侵袭和迁移能力发生改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测金龙胶囊处理MGC-803,BGC-823细胞24 h后E-钙黏素(E-cadherin),基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况。结果:金龙胶囊能明显抑制MGC-803,BGC-823细胞的增殖,呈一定的浓度及时间依赖性;与空白组比较,金龙胶囊能明细减少MGC-803,BGC-823细胞的穿膜细胞数目,可明显影响2种胃癌细胞的侵袭与迁移能力,并呈明显浓度依赖性(P0.05);金龙胶囊组的划痕距离较空白组明显降低,影响MGC-803,BGC-823细胞迁移,并呈浓度依赖性(P0.05);与空白组比较,金龙胶囊组能够提高MGC-803和BGC-823细胞中E-cadherin蛋白表达,降低MMP-2,MMP-9蛋白表达水平,且呈一定的量效关系(P0.05)。结论:金龙胶囊能够抑制人胃癌MGC-803,BGC-823细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能与上调E-cadherin表达,抑制MMP-2,MMP-9表达水平有关。本研究证实了金龙胶囊对胃癌MGC-803,BGC-823细胞抗侵袭转移的部分机制。     

消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

[目的]分析消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,探究其抑瘤机制。[方法]在Invitrogen公司的网上设计系统中设计靶向Survivin基因的siRNA序列,并将其转染A549细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测消岩汤以及转染组对A549细胞生长抑制的情况,免疫组化法观察A549细胞Survivin蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。[结果]MTT法显示消岩汤具有抑制A549细胞生长的作用,其作用具有一定的时间依赖性,转染中药组的抑制率显著高于转染对照组及非转染中药组。经免疫组化法检测,转染对照组对Survivin蛋白表达的抑制率明显高于非转染中药组,但显著低于转染中药组。流式细胞术检测结果显示消岩汤及重组质粒以诱导细胞晚期凋亡为主,转染中药组A549细胞凋亡率显著高于其他各组。[结论]消岩汤可诱导A549细胞的凋亡,联合应用转染靶向Survivin基因的重组质粒可增强其体外诱导A549细胞凋亡的作用。     

清肺消炎丸对肺心病患者免疫功能影响的临床研究

[目的]观察清肺消炎丸对肺心病患者(痰热壅肺证)急性感染后免疫功能的影响。[方法]将120例满足纳入标准的肺心病患者,随机分为两组,对照组采用常规内科治疗,试验组在常规治疗基础上加用清肺消炎丸,14 d后分别检测两组患者的免疫功能。[结果]两组患者治疗前免疫球蛋白定量、补体含量、T淋巴细胞亚群比较均无统计学意义(P0.05),治疗后试验组较对照组免疫球蛋白定量及补体含量差异无统计学意义(P0.05),CD_4~+细胞比值、CD_4~+/CD8+比值、总T细胞百分比均明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]清肺消炎丸能提高肺心病患者急性感染后CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+比值,具有一定免疫调节作用。     

自拟固胎煎对复发性流产小鼠脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响

[目的]观察自拟固胎煎对自然流产模型小鼠脾脏Th17/Treg细胞及对妊娠结局的影响。[方法]采用CBA/J雌鼠×BALB/c雄鼠建立正常妊娠模型,以CBA/J雌鼠×DBA/2雄鼠建立自然流产模型,自然流产孕鼠分为自然流产组、地屈孕酮组、中药低、中、高剂量组,正常妊娠组和自然流产组给予生理盐水,中药低、中、高剂量组分别给予7.125、14.25、28.5 g/kg自拟固胎煎汤剂,地屈孕酮组给予3.0 mg/kg地屈孕酮溶液,连续2周灌胃,每日1次。给药结束后处死并解剖小鼠,观察子宫胚胎数量并计算胚胎丢失率,流式细胞法检测脾脏中Th17细胞、Treg细胞含量及Th17/Treg细胞比例。[结果] 1)与自然流产组相比,中药低剂量组胚胎丢失率差异无统计学意义(P0.05);中药中剂量组、高剂量组和地屈孕酮组胚胎丢失率均显著降低(P0.05),且中药中剂量组、中药高剂量组、地屈孕酮组3组间比较,胚胎丢失率差异均无统计学意义(P0.05)。2)与自然流产组相比,中药低剂量组Th17细胞数、Treg细胞数及Th17/Treg细胞百分率比值均无统计学差异(P0.05);中药中剂量组、高剂量组和地屈孕酮组,Th17细胞数及Th17/Treg细胞百分率比值均显著降低(P0.05),Treg细胞数均显著升高(P0.05);且中药中剂量组、中药高剂量组、地屈孕酮组3组间比较,Th17细胞数、Treg细胞数及Th17/Treg细胞百分率比值差异均无统计学意义(P0.05)。[结论]自拟固胎煎可降低Th17/Treg比例,诱导免疫耐受,减少胚胎丢失率,改善妊娠结局。     

消岩汤治疗甲状腺癌术后患者维持治疗期的临床观察研究

[目的] 观察消岩汤对甲状腺癌术后患者维持治疗期的临床疗效。[方法] 62例甲状腺癌术后患者随机分为治疗组与对照组。治疗组32例,予消岩汤联合左甲状腺素钠片治疗,对照组30例,单纯服用左甲状腺素钠片。观察两组治疗前后生活质量评分、血清促甲状腺激素（TSH）、血清甲状腺球蛋白（TG）、血清游离三碘甲腺原氨酸（FT3）及血清游离甲状腺素（FT4）、免疫功能指标（T淋巴细胞亚群水平）的变化。[结果] 与对照组比较,治疗组临床症状改善率明显提高（P<0.01）。与本组治疗前比较,治疗组患者血TSH和TG值下降显著（P<0.01）,总T细胞（CD3⁺）、T辅助/诱导淋巴细胞（CD3⁺/CD4⁺）、T抑制/毒性淋巴细胞（CD3⁺/CD8⁺）、B淋巴细胞（CD3-/CD19⁺）、NK淋巴细胞（CD3^-/CD16⁺56⁺）明显高于对照组（P<0.01）。[结论] 在甲状腺癌患者维持治疗期,消岩汤能够减轻甲状腺癌术后内分泌治疗不良反应,具有提高甲状腺癌术后患者的机体免疫功能趋势,一定程度预防甲状腺癌复发风险,改善患者的生活质量。     

基于“通肾络、益脾肾”治法研究足细胞凋亡及自噬

[目的]基于中医"通肾络、益脾肾"治法,探讨通络益肾方对体外高糖培养的小鼠肾小球足细胞自噬和凋亡蛋白SIRT1、BNIP3、P62、Bax表达的调控影响。[方法]成熟无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠40只,随机分为正常组、中药高、中、低剂量组各10只。按照人与大鼠体表面积折算方法计算出大鼠所需中药灌胃浓度:高剂量浓度4.76 g/mL、中剂量浓度2.38 g/mL、低剂量浓度1.19 g/m L,灌胃10 d取含药血清备用。足细胞分6组,正常组5.6 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、高糖组30mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、通络益肾方含药血清高、中、低干预组30 mmol/L葡萄糖+10%高、中、低剂量大鼠血清、高渗组甘露醇24.5 mmol/L+10%正常大鼠血清。细胞培养48 h后收集,Hoechst33342荧光染色,观察各组足细胞凋亡状况及形态变化;流式细胞仪检测足细胞凋亡率;Western Blot检测细胞内自噬标志蛋白SIRT1、P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax表达水平。[结果]流式细胞仪检测结果显示通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率(P0.01或P0.05),高剂量组不能改善凋亡情况(P0.05);Hoechst33342荧光染色观察结果也证实通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率;蛋白印迹结果显示,与高糖组相比,通络益肾方中、低剂量组自噬标志蛋白SIRT1表达升高,自噬标志蛋白P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax蛋白表达下降(P0.05或P0.01),高剂量组SIRT1、BNIP3、P62、Bax蛋白表达未见明显改变(P0.05)。[结论]中剂量、低剂量通络益肾方能够启动细胞自噬减少高糖刺激下体外培养足细胞凋亡,降低细胞凋亡率及凋亡蛋白的表达。     

南蛇藤提取物对高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响

目的:利用高表达抑癌基因maspin的人胃癌MGC-803细胞探讨南蛇藤提取物对其凋亡的影响。方法:以人胃癌MGC-803细胞为研究对象,不同质量浓度20,40,80,160,320 mg·L-1南蛇藤提取物作用于MGC-803细胞24,48 h后,MTT法检测南蛇藤提取物对高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞增殖的影响;以不同质量浓度COE组(0,20,40,80 mg·L-1)及32 mg·L-1的5-FU阳性对照处理24 h后,TUNEL法检测南蛇藤提取物对细胞凋亡的影响,Western blot检测对maspin,Bcl-2,Bcl-2L12及Bax蛋白表达的影响。结果:南蛇藤提取物(20,40,80,160,320 mg·L-1)能明显抑制高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞的增殖,呈现时间及浓度依赖性;与空白组比较,不同质量浓度的南蛇藤提取物(20,40,80 mg·L-1)作用24 h后,镜下显示,随着药物浓度升高,细胞数目减少,形态变圆,胞浆浓缩,出现凋亡小体,TUNEL结果表明南蛇藤提取物(20,40,80 mg·L-1)能促进细胞凋亡,Western blot结果显示南蛇藤提取物(20,40,80,160 mg·L-1)可呈浓度依赖性地增加抑癌基因maspin蛋白的表达,降低Bcl-2,Bcl-2L12的表达,均具有明显的统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:南蛇藤提取物能够抑制高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与南蛇藤提取物促进抑癌基因maspin的表达以及抑制Bcl-2,Bcl-2L12的表达有关。     

消岩汤对肺癌A549细胞及肺癌干细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨消岩汤对非小细胞肺癌转移的作用机制。方法通过划痕实验,观察消岩汤对肺腺癌A549细胞的迁移能力的影响;通过侵袭实验,观察消岩汤对肺癌干细胞(SP细胞)侵袭能力的影响。结果划痕实验中消岩汤组肺腺癌A549细胞在24、48、72 h的迁移距离明显短于各时刻对照组细胞(P0.05);侵袭实验中消岩汤干预下的SP细胞穿出Transwell小室的细胞数明显少于对照组(P0.05)。结论消岩汤可有效抑制肺腺癌A549细胞的迁移及SP细胞的侵袭。     

麦门冬汤对大鼠骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化的影响

[目的]观察麦门冬汤含药血清对促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向肺泡上皮细胞分化的影响。[方法]分别予麦门冬汤大鼠血清、肺纤维化模型大鼠血清、肺纤维化模型大鼠+麦门冬汤血清对绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞(GFP-BMSC)进行干预14 d,通过免疫组化、实时荧光定量聚核酶链反应(qPCR)方法,检测各组GFPBMSC细胞肺表面活性蛋白(SP-C)、水通道蛋白-5(AQP-5)蛋白及mRNA的表达。[结果]模型组、模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5蛋白表达明显高于DMEM对照组、麦门冬汤组(P0.01),其中模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5表达明显高于模型组(P0.01)。[结论]麦门冬汤在肺纤维化环境中可促进GFP-BMSC向肺泡上皮细胞分化,该作用可能是其改善肺纤维化的重要机制。