雷公藤甲素对去势小鼠骨质疏松模型破骨细胞分化的影响

目的 探究雷公藤甲素（TP）对去势小鼠骨质疏松模型破骨细胞分化的影响，并探讨其可能的分子机制。方法 建立去势小鼠骨质疏松模型，分为假手术组（Sham组）、卵巢切除去势组（OVX组）、雷公藤甲素组（TP组）、利维爱组（Livial组），造模后第3天给予对应药物处理。治疗6周后，采用TRAP染色检测左侧股骨干骺端的破骨细胞数量。Micro-CT重建三维骨结构图像，检测左侧胫骨干骺端的骨密度（BMD）、骨小梁数目（Tb.N）、骨体积分数（BV/TV）、骨表面积组织体积比（BS/TV）、骨小梁分离度（Tb.Sp），ELISA检测外周血中IL-6、TNF-α、骨形成标志物骨钙素（OC）、骨吸收标志物抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAcp5b）含量。Western Blot检测右侧股骨组织中p65、p-p65、IκBα、p-IκBα蛋白表达水平。结果 骨小梁周围破骨细胞数量比较：OVX组与Sham组相比明显增加；TP组与OVX组相比明显减少；TP组与Livial组比较，差异无统计学意义。骨参数分析：OVX组与Sham组相比，小鼠骨组织的BMD、Tb.N、BV/TV、BS/TV均显著下降，而Tb.Sp显著升高（P＜0.01）；与OVX组相比，TP组和Livial组骨组织的BMD、Tb.N、BV/TV、BS/TV均显著升高，而Tb.Sp显著下降（P＜0.01）；TP组与Livial组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。IL-6、TNF-α、OC、TRAcp5b含量比较：OVX组的IL-6、TNF-α含量显著高于Sham组（P＜0.01）；各组间OC水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；OVX组的TRAcp5b水平显著高于Sham组（P＜0.01）。蛋白表达水平：与Sham组相比，OVX组的p65、IκBα表达水平不变，而p-p65和p-IκBα表达水平显著升高（P＜0.01）；TP处理后，p65、IκBα表达水平不变，而p-p65和p-IκBα表达水平却显著降低（P＜0.01）；TP组与Livial组比较，两者间p65、IκBα、p-p65和p-IκBα表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 TP抑制破骨细胞分化，改善了去势小鼠的骨量丢失，其分子机制可能与抑制炎症因子IL-6、TNF-α的表达及NF-κB信号通路的磷酸化水平有关。     

美满霉素对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用

目的观察美满霉素(MC)对脂多糖(LPS)所致帕金森病(PD)大鼠黑质多巴胺能(DA)神经元损伤的保护作用。方法黑质内注射LPS制作PD大鼠模型。应用MC对实验动物进行处理。采用行为学、酪氨酸羟化酶(TH)、核因子-κB(NF-κB)等免疫组化及免疫印迹技术观察MC的神经保护作用。结果对照组大鼠无行为变化,PD组大鼠平均旋转圈数为196.90±9.52,MC组为120.03±10.50,差异非常显著(p<0.01)。免疫组化表明对照组TH阳性神经元数量较多,PD组神经元数量明显减少或消失(p<0.01),MC组TH阳性神经元数与PD组相比明显增加(p<0.01);对照组黑质仅见少数NF-κB阳性细胞,无明显核转位现象,PD组黑质NF-κB阳性细胞较多,部分细胞有明显核转位现象,与PD组相比,MC组NF-κB阳性细胞数明显减少(p<0.01);对照组黑质OX-42小胶质细胞呈分枝状,胞体较小突触细长,PD组黑质小胶质细胞大部分呈圆形,突起少而短甚至消失,与PD组相比,MC组呈激活状态的小胶质细胞数量明显减少。Western blotting分析结果相同。结论 MC可防护LPS所致黑质DA能神经元损伤,具有神经保护作用。     

核因子-κB对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡及TGF-β1表达的影响

目的: 探讨核因子-κB(NF-κB)对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖、凋亡和转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达的影响。方法: 体外培养ASMCs，以肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)作为工具药,将ASMCs分为对照组、TNF-α组和TNF-α+PDTC组。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β₁ mRNA表达，Western blotting检测NF-κB、TGF-β₁的表达，免疫细胞化学染色法检测PCNA、Bcl-2蛋白表达及定位，四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定ASMCs增殖，Annexin V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡。结果: （1）TNF-α组ASMCs的NF-κB活性显著高于对照组(P<0.01),TNF-α+PDTC组NF-κB活性显著低于TNF-α组 (P<0.01)。（2）TNF-α组ASMCs增殖显著高于对照组(P<0.01),TNF-α＋PDTC组的增殖反应显著低于TNF-α组(P<0.01)；TNF-α+PDTC组细胞凋亡率显著高于TNF-α组及对照组(P<0.01)。（3）TNF-α组ASMCs的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.01)，TNF-α+PDTC组的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著低于TNF-α组(P<0.01)。（4）TNF-α组ASMCs的TGF-β₁的mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组及TNF-α＋PDTC组（P<0.01）。结论: NF-κB活化可能参与调控TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞的增殖、凋亡及TGF-β₁的表达和分泌。     

脑血疏口服液灌胃对帕金森病模型大鼠黑质内神经炎症反应的影响

目的:研究脑血疏口服液对帕金森病(PD)模型大鼠黑质内神经炎症的抑制作用,以及对黑质多巴胺(DA)能神经元的保护作用。方法:应用立体定向注射技术,向大鼠脑右侧纹状体内注射6-羟多巴胺制备PD模型。将PD模型大鼠随机分为PD组、雷沙吉兰组和脑血疏口服液高、中、低剂量干预组,每组10只;另选10只正常大鼠作为对照组。采用免疫组织化学法检测各组大鼠黑质DA能神经元(酪氨酸羟化酶(TH)阳性)、小胶质细胞(CD11b阳性)、星形胶质细胞(GFAP阳性)形态变化。Western Blot法检测中脑黑质环氧化酶-2(COX-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化。结果:大鼠行为学检测和黑质TH免疫组织化学染色显示,中剂量组的干预效果最好。免疫组织化学显示,与对照组相比,PD组的星形胶质细胞、小胶质细胞、TNF-α阳性细胞和COX-2阳性细胞均明显增加,TH阳性细胞数量明显减少,经中剂量的脑血疏口服液干预后,两种胶质细胞、TNF-α和COX-2阳性细胞数量均减少,TH阳性细胞增多。Western Blot显示,与PD组比较,中剂量组和雷沙吉兰组GFAP、CD11b、TNF-α和COX-2蛋白表达量显著减少(P0.05),而中剂量组与雷沙吉兰组比较上述蛋白表达均无显著差异(P0.05)。结论:脑血疏口服液可能通过抑制PD大鼠黑质胶质细胞的异常激活,减少炎性因子分泌而发挥神经保护作用。     

α-突触核蛋白在帕金森病发病机制中的研究进展

帕金森病（PD）是最常见的神经系统退行性疾病,路易小体（LBs）是其最典型的病理改变。LBs的主要成分是α-突触核蛋白（α-syn）,其被认为是PD的致病因子。传递假说认为,病理性α-syn可由受损神经元转运到正常神经元,导致受体神经元中α-syn也产生病理性错误折叠和聚集,导致级联式神经细胞受损。肠脑轴假说认为,病理性α-syn可由肠道产生,经由迷走神经上传至中枢神经系统。本文就α-syn在PD发病机制中的作用进行概述,以期为PD的干预靶点的研究提供参考。     

色钉菇乙酸乙酯提取物对脂多糖损伤的多巴胺能神经元的保护作用

目的 探讨不同剂量的色钉菇乙酸乙酯提取物对帕金森病（PD）模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用。 方法 以昆明小鼠为实验材料,将脂多糖（LPS）定位注射至黑质内复制PD模型。30只小鼠随机分为假手术对照组、LPS 实验对照组、低剂量实验组（LPS+ 100mg/kg）、中剂量实验组（LPS+ 200mg/kg）和高剂量实验组（LPS+ 400mg/kg）,每组6只。用免疫荧光方法显示多巴胺能神经元和星形胶质细胞,荧光显微镜下观察、计数黑质内的阳性细胞数。结果 LPS实验对照组小鼠的黑质内,多巴胺能神经元数量少于假手术组（P<0.05）,且细胞胞体变圆,突起变短;星形胶质细胞胞体增大, 多呈激活形态。低剂量实验组与中剂量实验组小鼠黑质内的多巴胺能神经元数量多于LPS实验对照组（P<0.05）,星形胶质细胞密度降低;高剂量实验组小鼠黑质内的多巴胺能神经元数量与实验组差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 低剂量与中剂量的色钉菇乙酸乙酯提取物能够抑制星形胶质细胞的激活,对LPS导致的多巴胺能神经元损伤有显著保护作用。     

Estimation of myofibrillar responsiveness to Ca2+ in isolated rat ventricular myocytes

 To estimate myofibrillar responsiveness to Ca²⁺, we used the relation between cell length and intracellular [Ca²⁺] ([Ca²⁺]_i) during tetanic contractions of isolated ventricular myocytes. Enzymatically isolated rat ventricular myocytes were loaded with fura-2 AM (4 μM for 10 min) and excited alternately at 340 nm and 380 nm. The ratio (R) of fura-2 fluorescence at these wavelengths [F(340)/F(380), an index of [Ca²⁺]_i] and cell length (L) were measured simultaneously. Following treatment with thapsigargin (0.2 μM), myocytes were stimulated at 10 Hz for 10 s to produce a tetanic contraction every min and an instantaneous plot of R vs L (R-L trajectory) was constructed. The R-L trajectory followed the same path during cell shortening and re-lengthening, suggesting that dynamic equilibrium between R and L was achieved during tetanus. Increasing the extracellular [Ca²⁺] from 1 to 8 mM extended the R-L trajectory without a substantial shift of the relation. The Ca²⁺-sensitizing thiadiazinone derivative, EMD57033 (1 μM), shifted the R-L trajectory to the left (sensitization of the myofibrils to Ca²⁺), whereas the non-selective phosphodiesterase inhibitor, 3-isobutyl-1-methylxantine (200 μM), shifted the R-L trajectory to the right (desensitization of the myofibrils to Ca²⁺), in agreement with previous results obtained using skinned preparations. We conclude that the R-L trajectory is useful for estimating the myofibrillar responsiveness to Ca²⁺ in isolated myocytes and may be beneficial for the evaluation of inotropic agents. Received: 13 March 1998 / Received after revision: 4 May 1998 / Accepted: 2 June 1998     

五味子乙素通过抑制 TLR4/NF-κB 信号通路减轻 PD 小鼠炎症反应及 DA能神经元凋亡

目的：探讨五味子乙素（Sch B）对帕金森病（PD）模型小鼠炎症反应及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法：30只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组和Sch B组,10只/组。腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）建立PD模型,Sch B组小鼠给予Sch B灌胃14 d。步态实验观察各组小鼠行为学表现;免疫荧光染色检测小鼠黑质区酪氨酸羟化酶（TH）荧光强度;ELISA法测定黑质区IL-1β、IL-6和TNF-α水平;Western blot检测黑质区TH、Bcl-2、Bax、TLR4和p-NF-κB p65表达。结果：与正常组相比,模型组小鼠左前爪步幅显著减小,后爪步宽明显增大,中脑黑质中TH荧光强度显著减弱、表达量减少,IL-1β、IL-6和TNF-α水平明显升高,Bcl-2与Bax蛋白表达比值显著减少,TLR4和p-NF-κB p65表达明显增加。与模型组相比,Sch B组小鼠的步幅明显增大、步宽显著减小,中脑黑质TH荧光强度增强、表达量增加,IL-1β、IL-6和TNF-α水平明显降低,同时Bcl-2与Bax蛋白表达比值显著增加,TLR4和...     

NO在外源性高浓度Ca2+损伤心肌线粒体中的作用

目的：探讨一氧化氮在外源性高浓度Ca²⁺损伤心肌线粒体中的作用。方法：正常心肌线粒体分为单纯L-精氨酸（L-Arg）组、Ca²⁺损伤组和左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）保护组,分别于含有20 μmol/L EDTA、100 μmol/L CaCl₂以及1 μmol/L L-NAME+100 μmol/L CaCl₂的反应介质中孵育,然后测定线粒体活力、膜电位以及NO含量。结果：Ca²⁺损伤组线粒体活力、膜电位明显下降,而NO^-₂/NO^-₃含量升高,且线粒体活力、膜电位与NO₂^-/NO₃^-含量呈显著负相关（r=-0.5297,P<0.01;r=-0.6041,P<0.01）;L-NAME保护组线粒体活力与膜电位均明显高于Ca²⁺损伤组,但仍低于L-Arg组,而NO₂^-/NO₃^-含量低于Ca²⁺损伤组,且与L-Arg组无明显差异。结论：外源性Ca²⁺可激活线粒体一氧化氮合酶,使NO生成增多,后者在线粒体活力与膜电位降低中起重要作用。     

L-精氨酸对急性心肌梗死大鼠选择素mRNA表达的影响

目的：探讨左旋精氨酸（L-Arg）对急性心肌梗死（AMI）大鼠L、E-选择素mRNA表达的影响及其对心肌的保护作用机制。方法：SD大鼠40只，采用垂体后叶素（Pit）复制急性心肌梗死。设正常组、Pit组、L-Arg治疗组及一氧化氮合酶抑制剂L-NAME组，使用原位杂交检测白细胞L-选择素及心肌微血管内皮细胞E-选择素mRNA的表达，并测定血清TnT、NO₂^-/NO₃^-、CK的浓度以及心肌组织PMNs浸润数。结果：阳性组和L-NAME组，L、E-选择素mRNA表达明显上调（P<0.01或P<0.05），血清NO₂^-/NO₃^-水平显著降低（P<0.01），心肌PMNs浸润数、血清TnT、CK浓度显著增高（P<0.01或P<0.05）。L-Arg组较阳性组，L、E-选择素mRNA表达下调，血清NO₂^-/NO₃^-水平增高（P<0.05），心肌PMNs浸润数、血清TnT、CK浓度降低。结论：外源性L-Arg对AMI大鼠心肌具有保护作用，其作用机制与增加NO合成、抑制选择素mRNA表达有关。