胃癌中EZH2的表达及临床评估

目的：探讨EZH2在胃癌中的表达及其临床意义。方法：采用逆转录荧光PCR方法检测胃癌组织和配对的正常组织中EZH2的表达,分析EZH2与临床病理参数之间的关系。结果：53例标本中34例（64.15%,34/53）癌组织中EZH2表达增高,EZH2在胃癌组织中的表达明显高于配对正常组织（P〈0.05）。EZH2表达在低分化胃癌中表达明显高于高-中分化胃癌（P〈0.01）;EZH2表达在T3-T4期表达增高,明显高于T1-T2期（P〈0.05）;而EZH2的表达与性别、年龄等因素无关。结论：EZH2在胃癌组织表达增高,与分化程度及TNM分期有关,提供胃癌的进展和肿瘤形成;并预测胃癌治疗的预后方面,可能是一种新的生物标志物。     

胃腺癌中EZH2、Akt蛋白的表达及意义

研究果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)及Akt蛋白在胃腺癌中的表达及与其临床意义。方法应用S-P免疫组化技术检测73例胃腺癌及其相应的癌旁正常组织中EZH2和Akt蛋白的表达。73例胃腺癌组织中EZH2、Akt蛋白的阳性表达率67.1%(49/73)、61.6%(45/73)均高于癌旁正常组织5.5%(4/73)、10.4%(7/73),差异具统计学意义(P<0.05);EZH2的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期相关,有统计学意义(P<0.05);Akt蛋白的表达与淋巴结转移相关有统计学意义(P<0.05)。EZH2与Akt蛋白在胃腺癌组织中的表达呈负相关关系(rs=-0.252,P<0.05)。EZH2与Akt在胃腺癌的发生发展中发挥重要作用,且EZH2的调控可能与Akt的活化有关。     

EZH2基因RNAi慢病毒载体的包装及鉴定

目的 外周T细胞淋巴瘤（PTCL）源于成熟的胸腺后淋巴细胞,是一类少见的生物学行为及临床表现均高度异质性的疾病,且预后差.包装zeste基因增强子同源物2（EZH2）RNA干扰（RNAi）慢病毒载体,可为今后相关实验研究奠定基础.方法 靶向EZH2基因的短发夹RNA（EZH2-shRNA）质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆,经测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒三质粒系统共转染293T细胞,进行慢病毒包装.病毒载体感染Hut78细胞后,观察感染效率,并用反转录定量PCR（RT-qPCR）和Western Blot检测EZH2mRNA和蛋白表达水平.结果 成功包装了慢病毒表达载体,对Hut78细胞的感染效率在95％以上.RT-qPCR和Western Blot检测结果显示,EZH2基因在靶细胞中的表达水平降低.结论 成功包装并鉴定了EZH2基因RNAi慢病毒表达载体.     

反义N-ras1基因抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞增殖和肥大

目的 探讨逆转录病毒介导的Ｎ－ｒａｓ１基因对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞增殖和肥大的抑制作用。及其应用于心肌肥厚基因治疗的可能性。方法 将重组逆转录病毒反义Ｎ－ｒａｓ１基因体外转染乳鼠心肌细胞,应用ＲＴ－ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测基因表达情况,应用细胞计数（＾３Ｈ）－ＴｄＲ掺入及细胞体积检测手段,观察Ｎ－ｒａｓ１基因对心肌细胞增殖及肥大的抑制作用。结果 逆转一贯功体能将外源性基因导入心肌细胞并     

血管紧张素Ⅱ刺激肥大心肌细胞和心肌成纤维细胞核酸蛋白质及胶原合成

本实验用压力（ＰＯ）和容量超负荷（ＶＯ）性分离的肥大心肌细胞（ＭＣ）及培养的心肌成纤维细胞（Ｆｂｓ），就血管紧张素（Ａｎｇ）Ⅱ对其￣３Ｈ－Ｌｅｕ，￣１４Ｃ－ＵＲ，￣３Ｈ－ＴｄＲ和￣３Ｈ－ｐｔｏ掺入率的影响进行了对比研究。发现尽管ＡｎｇⅡ可提高正常和两种肥大ＭＣ的￣３Ｈ－Ｌｅｕ和￣１４Ｃ－ＵＲ掺入率，但肥大ＭＣ增加幅度显著高于假手术对照（ＳＯ）组，尤其以ＶＯ组最为明显（Ｐ＜０．０５ｖｓＰＯ）。相反，ＰＯ组ＦｂＳ的￣３Ｈ－ＴｄＲ，￣１４Ｃ－ＵＲ和￣３Ｈ－Ｐｒｏ掺入率增加幅度又显著高于ＳＯ和ＶＯ组。除￣３Ｈ－Ｐｔｏ外，ＶＯ组的￣３Ｈ－ＴｄＲ及￣１４Ｃ－ＵＲ掺入率与ＳＯ组相比差异无显著性。表明ＡｎｇⅡ对两种肥大心肌的ＭＣ和Ｆｂｓ的核酸、蛋白质及胶原合成的促进作用存在明显差异。提示：ＡｎｇⅡ的这种作用可能是导致压力和容量超负荷性心肌肥大时，心肌实质细胞与胶原增生出现不同步发展的主要和直接原因之一。     

Pyk2促进血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的探讨富含脯氨酸蛋白酪氨酸激酶(Pyk2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠心肌细胞肥大的作用及其机制。方法提取大鼠乳鼠原代心肌细胞,随机分为对照组、AngⅡ诱导组(AngⅡ剂量为100 nmol/L,将其加入心肌细胞培养皿中刺激24 h)、Pyk2抑制剂PF-431396组(PF-431396剂量为10μmol/L,在AngⅡ刺激前30 min加入心肌细胞培养皿中)以及PF-431396干预AngⅡ诱导组(AngⅡ剂量为100 nmol/L,PF-431396剂量为10μmol/L)。用细胞骨架蛋白(α-actinin)免疫荧光染色检测心肌细胞表面积大小;real-time PCR检测心肌细胞中肥大指标(ANP和β-MHC) mRNA表达;Western blot检测心肌细胞p-Pyk2、Pyk2以及p53的蛋白表达。结果在AngⅡ刺激下,心肌细胞表面积增大(P<0. 05)、肥大指标的mRNA水平升高(P<0. 05)、p-Pyk2和p53的蛋白水平增加(P<0. 05);而加入Pyk2抑制剂PF-431396后,心肌肥大指标明显改善,p-Pyk2和p53的蛋白表达降低(P<0. 05)。结论 Pyk2通过p53信号通路促进AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大。     

参麦注射液对AngⅡ诱导培养心肌细胞凋亡的影响

目的:观察参麦注射液对血管紧张素-Ⅱ(AngⅡ)诱导培养心肌细胞凋亡的影响。方法: 乳鼠心肌细胞原代培养,MTT法观察参麦注射液对培养心肌细胞活力的影响;荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡,Fluo-3荧光探针标记测定钙离子荧光强度。结果: AngⅡ(10^-7mol/L)孵育48 h后心肌细胞凋亡明显多于对照组(P＜0.05);参麦注射液(0.5 g/L、1.0 g/L)组心肌细胞活力显著高于AngⅡ组(P＜0.05);参麦注射液(1.0 g/L)组AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡率明显低于AngⅡ组(P＜0.05),AngⅡ所导致的心肌细胞内钙超载明显轻于AngⅡ组(P＜0.01)。结论: 参麦注射液对AngⅡ诱导的细胞凋亡具有明显的抑制作用,其机制可能与其抑制心肌细胞内钙超载有关。     

血管紧张素Ⅱ对动力性肺动脉高压左室心肌细胞凋亡及纤维化的影响

目的观察先天性心脏病（congenital heart disease，CHD）合并肺动脉高压（PAH）患儿心肌细胞凋亡、心肌纤维化及与血浆血管紧张素Ⅱ含量的关系。方法根据有无合并肺动脉高压将20例CHD患儿分为2组，CHD组（n=8）和CHD合并PAH组（n=12），对照组（n=5）为单纯缺血缺氧性脑病患儿。采用TUNEL标记法检测心肌组织中的凋亡细胞，用免疫组化法检测左室心肌细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达，采用放射免疫法测定血浆血管紧张素Ⅱ浓度。结果CHD组和CHD合并PAH组心肌细胞凋亡指数明显高于对照组，两组左室心肌组织Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白呈强阳性表达，与对照组相比差异有统计学意义；CHD及CHD合并PAH组血浆AngⅡ水平均显著高于对照组，CHD合并PAH组高于CHD组，且两组相比较有统计学意义。血浆AngⅡ与心肌细胞凋亡指数和Ⅲ型胶原蛋白表达量呈正相关关系，而肺动脉压与心肌细胞凋亡指数和Ⅲ型胶原蛋白表达量及Ⅰ型胶原蛋白表达量无相关关系。结论在CHD患儿左室心肌细胞凋亡和纤维化的过程中，AngⅡ可能比肺动脉压力发挥着更重要的作用，所以应用ACEⅠ阻断肾素-血管紧张素加以降低肺动脉压对提高降低病死率有重要意义。     

过表达miR-217调控EZH2促进骨质疏松模型小鼠BM-MSCs成骨分化

目的 探究微小RNA-217(miR-217)对骨质疏松症(OP)模型小鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)成骨分化的影响及其可能调控机制。方法 将小鼠分为OP组、假手术(sham)组,各12只,均进行了双侧卵巢切除术。将OP小鼠BM-MSCs分为对照组、miR-NC组、miR-217 mimics组、miR-217 mimics+pcDNA 3.1组、miR-217 mimics+pcDNA 3.1-EZH2(果蝇zeste基因增强子同源物2)组,分别不做转染、转染miR-NC、转染miR-217 mimics、转染miR-217 mimics及pcDNA 3.1、转染miR-217 mimics及pcDNA 3.1-EZH2,之后进行成骨诱导分化。RT-qPCR/Western blot检测miR-217及EZH2、OCN、Runx2、collagenⅠmRNA和蛋白表达情况;酶标仪检测各组BM-MSCs碱性磷酸酶(ALP)活性;利用茜素红S(ARS)染色测定法对各组BM-MSCs进行染色,观察染色情况;双荧光素酶报告基因验证miR-217与EZH2的靶向关系。结果 OP组小鼠骨组...     

卡托普利对实验性腹主动脉狭窄大鼠左心室肥厚的影响

目的进一步证实实验性腹主动脉狭窄大鼠左心室肥厚及卡托普利的作用。方法采用实验性腹主动脉银夹狭窄大鼠模型,观察左心室重量指数（ＬＶＭＩ）,放免测定血浆血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅢ）及左心室心肌局部 Ａｎｇ Ⅱ。结果模型组ＬＶＭＩ、血浆ＡｎｇⅡ、左心室心肌Ａｎｇ　Ⅱ水平明显高于假手术组;卡托普利组ＬＶＭＩ、血浆Ａｎｇ Ⅱ、左心室心肌Ａｎｇ　Ⅱ明显下降。结论使用腹主动脉银夹狭窄方法建立心脏后负荷增加的心肌肥厚动物模型是可靠的,卡托普利确有抗心肌肥厚的作用。     

伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ所致心肌细胞蛋白质合成和肌球蛋白重链表达的影响

目的 观察伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）所致心肌细胞中蛋白质合成速率及肌球蛋白重链（MHC）基因表达改变的影响.方法 以AngⅡ及伊贝沙坦分别或同时作用于培养的细胞.采用放射性同位素[^3H]-leu掺入法检测培养心肌细胞蛋白质合成速率.应用荧光定量PCR方法检测心肌细胞心房利钠肽因子（ANF）以及α-MHC、β-MHC的表达.结果 AngⅡ处理使心肌细胞中[^3H]-Leu掺人增加（P＜0.05）,同时ANF mRNA的表达明显高于正常（P＜0.05）;α-MHC mRNA的表达显著低于正常（P＜0.05）,而β-MHC mRNA的表达显著高于正常（P＜0.05）,α-MHC/β-MHC的比值下降（P＜0.05）.当伊贝沙坦与AngⅡ共同作用于培养的心肌细胞时,与AngⅡ组比较,[^3H]-Leu的掺入明显下降（P＜0.05）,与正常组比无统计学意义（P＞0.05）;同时ANF的表达下降,与正常组比无统计学意义（P＞0.05）;心肌细胞中α-MHC的表达明显增高（P＜0.05）,而β-MHCmRNA的表达显著降低（P＜0.05）,α-MHC/β-MHC的比值上升（P＜0.05）.结论 伊贝沙坦能抑制AngⅡ所致的心肌细胞肥大和细胞中α-MHC向β-MHC表达的转换.     

肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ对心肌细胞的细胞间粘附分子-1表达的影响

目的 :研究肿瘤坏死因子α(TNFα)和血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对心肌细胞的细胞间粘附分子 - 1(ICAM - 1)表达的不同影响。方法 :运用免疫组化技术和流式细胞仪观察TNFα和AngⅡ对培养的乳鼠心肌细胞ICAM - 1表达量的影响。结果 :TNFα明显增加心肌细胞ICAM - 1表达量 ,以刺激 6h最明显 ,随时间作用延长表达量减少。AngⅡ对培养的心肌细胞ICAM - 1表达量无显著作用。结论 :TNFα是调节心肌细胞ICAM - 1表达的重要细胞因子。AngⅡ并没有调节心肌细胞ICAM - 1表达的作用     

血管紧张素Ⅱ对培养新生大鼠心肌细胞MHC基因表达的影响

目的：本研究新生大鼠原代培养心肌细胞上，观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对心肌细胞ＭＨＣ基因表达的影响。方法和结果：（１）在培养新生大鼠心肌细胞中，用１０－７ｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ处理后，６ｈ就引起α－ＭＨＣｍＲＮＡ水平的迅速增加，１２ｈ达峰值，为对照组的１７５倍（Ｐ＜００５）。β－ＭＨＣｍＲＮＡ水平也有所增加，为对照组的１２５倍（Ｐ＜００１），两者均呈量效关系。（２）ＡｎｇⅡ受体阻断剂ｓａｒａｌａｓｉｎ可阻断ＡｎｇⅡ诱导的α－ＭＨＣ和β－ＭＨＣ基因的表达。结论：ＡｎｇⅡ可能通过ＡｎｇⅡ受体的介导作用，诱导心室肌细胞α－ＭＨＣ和β－ＭＨＣ基因表达增加     

血管紧张素Ⅱ和心房及对小鼠细胞免疫功能的影响

机体在应激状态下血浆血管紧张素Ⅱ和心房肽浓度均显著升高，且时免疫功能亦有明显发迹本文采用免疫学方法检测了应激激素ＡⅡ和ＡＮＰ对小鼠细胞免疫功能的影响。     

SHR心脏肥厚对心肌胶原及血管紧张素Ⅱ含量的变化

采用病理学及放射免疫方法检测 16、2 4和 32周龄自发性高血压大鼠 (SHR)心肌胶原容积分数 (CVF)和心肌血管周围胶原面积 (PVCA)、心脏肥厚指标及血浆和组织血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )浓度 ,并以同龄Wister大鼠作对照 ,以探讨SHR心脏肥厚进展阶段心肌纤维化、心脏重构、血浆和组织血管紧张素Ⅱ浓度及其相互关系。结果显示各组SHR收缩压明显增高、心脏肥厚指标心脏重量 (HW )、左室重量 (LVW)、左室重量指数 (LVW BW)显著增加 ,血浆、心肌组织AngⅡ浓度明显增高 ;2 4、32周龄SHR的CVF和PVCA显著增加 ;SHR心肌组织AngⅡ浓度与CVF呈显著正相关。结果表明心肌纤维化可能参与SHR代偿性心脏肥厚阶段心脏重构病理过程 ,组织AngⅡ可能是导致SHR代偿性心脏肥厚阶段心肌纤维化的重要机制之一     

MicroRNA-98通过下调EZH2表达抑制结直肠癌细胞的活力与侵袭能力

目的:探讨微小RNA-98(mi R-98)与Zeste基因增强子同源物2(EZH2)之间的靶向关系,及其对结直肠癌细胞活力和侵袭能力的影响。方法:Target Scan软件预测EZH2和mi R-98之间的靶向结合,双萤光素酶报告基因实验验证mi R-98与EZH2之间的靶向关系。用mi R-98 mimic和mi R-98 inhibitor分别转染人结直肠癌SW480细胞和SW620细胞,Western blot检测EZH2的蛋白表达; MMT法检测细胞活力; Transwell法检测细胞的侵袭能力。转染EZH2过表达质粒检测其对细胞活力和侵袭的影响。结果:mi R-98能够靶向调节EZH2并负向调节SW480细胞和SW620细胞中EZH2的蛋白表达。在SW480细胞和SW620细胞中,过表达mi R-98显著下调细胞活力和侵袭能力,而抑制mi R-98表达显著促进细胞生长和侵袭。过表达EZH2也可促进SW480细胞和SW620细胞的生长和侵袭。结论:mi R-98通过下调EZH2表达抑制SW480细胞和SW620细胞的活力和侵袭。本研究为结直肠癌的治疗提供了新的靶点和方向。     

ACEI/ARB对AF患者血浆BNP水平的影响及临床意义

目的探讨血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）/血管紧张素受体拮抗剂（ARB）对心房颤动（AF）患者血浆脑钠肽（BNP）水平的影响及其临床意义。方法选取心功能l～4级AF患者126例,采用干性免疫法测定患者AF发作时血浆BNP浓度,将患者分为使用ACEI/ARB组（62例）和未使用ACEI/ARB组（64例）,比较分析两组血浆BNP浓度的差异。结果使用ACEI/ARB组患者AF发作时血浆BNP水平为（242.31±182.15）pg/ml,明显低于未使用ACEI/ARB组的（453.84±365.57）pg/ml,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 ACEI/ARB对AF患者血浆BNP水平有一定的影响,提示ACEI/ARB可能干扰临床医生根据BNP水平变化对AF、心衰等情况作出评估。     

雌激素对内皮素诱导心肌细胞肥大反应的影响及其机制

目的： 探讨雌激素（E₂）对内皮素-1（ET-1）诱导心肌细胞肥大反应的影响及其机制。方法： 以ET-1刺激体外培养的新生大鼠心肌细胞，建立心肌肥大细胞模型；观察E₂对ET-1诱导心肌细胞肥大反应的影响，并检测心肌细胞中ERK1/2活性的变化。结果： ET-1可使心肌细胞蛋白质含量、表面积和［³H］^-亮氨酸掺入显著增加，这些作用可被E₂明显抑制。E₂预处理抑制ET-1诱导的心肌细胞ERK1/2活性的增加。雌激素受体拮抗剂他莫昔芬（Ta）可抑制E₂对ET-1诱导的心肌细胞［³H］^-亮氨酸（［³H］^-Leu）掺入和ERK1/2活性的作用。MEK1/2抑制剂PD98059预处理使ET-1诱导的心肌细胞［³H］^-Leu掺入减少，使E2对ET-1诱导的心肌细胞肥大反应的抑制作用加强。结论： E₂通过雌激素受体抑制ET-1诱导的心肌细胞肥大反应，这一过程与ERK1/2信号转导途径有关。