miR-152靶向下调DNMT1表达对宫颈癌细胞株Siha侵袭转移的影响

目的研究miR-152靶向下调DNA甲基化转移酶1(DNMT1)表达对宫颈癌细胞株Siha侵袭转移的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-152在宫颈癌细胞株Siha及人正常宫颈上皮细胞HUCEC中的表达水平;体外培养Siha细胞,随机分为对照组、miR-152 mimics阴性对照组、miR-152 mimics组,分组转染后采用CCK-8试验检测细胞增殖情况,采用Transwell侵袭试验和细胞划痕试验检测细胞侵袭转移情况,采用qRT-PCR检测miR-152及DNMT1 mRNA水平,采用Western blot检测DNMT1和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果与HUCEC细胞相比,miR-152在Siha细胞中[(0.43±0.08)比(1.02±0.25)]表达水平明显下降(P0.05);与对照组相比,miR-152 mimics组细胞miR-152[(2.61±0.47)比(1.00±0.21)]和E-cadherin表达水平[(0.85±0.16)比(0.42±0.07)]显著升高(均P0.05),相对生存率[(45.53±10.15)%比(100)%]、迁移细胞数[(28.86±4.91)个比(387.75±56.43)个]、侵袭细胞数[(108.54±19.53)个比(273.68±47.36)个]、DNMT1 mRNA[(0.46±0.09)比(1.01±0.23)]及DNMT1[(0.28±0.05)比(1.01±0.22)]和Vimentin蛋白表达[(0.12±0.03)比(0.94±0.15)]水平均显著降低(均P0.05)。miR-152 mimics阴性对照组细胞各指标均无显著变化(均P0.05)。结论 miR-152在宫颈癌细胞株Siha中低表达,上调其表达可下调DNMT1表达,抑制癌细胞的增殖,降低癌细胞的侵袭转移能力。     

miR-646调控BIRC5基因表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭的影响

目的检测微小RNA-646(miR-646)与含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)基因在结直肠癌组织表达情况,探讨miR-646对结直肠癌细胞(HT-29)增殖、迁移及侵袭的影响。方法 2018年4月-2020年12月在本院行手术治疗的结直肠癌患者72例,手术中取结直肠癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-646、BIRC5 mRNA表达水平。体外培养结直肠癌细胞系HT-29细胞并随机分为对照组、miR-646阴性对照(NC)组和miR-646模拟物(mimics)组(设正常结肠上皮细胞CCD841对照),RT-qPCR检测各组HT-29细胞miR-646、BIRC5 mRNA的表达;MTT法检测HT-29细胞存活率变化;Transwell小室法检测HT-29细胞迁移与侵袭情况;Western blot检测HT-29细胞凋亡抑制蛋白Survivin、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达的变化;双荧光素酶报告验验证miR-646与BIRC5基因的靶向关系。结果与癌旁组织和正常结肠上皮细胞CCD841细胞比较,结直肠癌组织与HT-29细胞miR-646相对表达水平显著降低,BIRC5 mRNA相对表达水平显著升高(P0.05)。targetscan数据库预测miR-646与BIRC5基因3’UTR区有结合位点。与BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 NC组(0.81±0.09)比较,BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 mimics组(0.28±0.04)荧光素酶活性降低(P0.05);与对照组[(3.04±0.21)个、(3.41±0.24)个、(98.56±0.64)%]和miR-646 NC组[(2.96±0.25)个、(3.32±0.23)个、(97.94±0.57)%]相比,miR-646 mimics组HT-29细胞miR-646表达水平显著升高(P0.05),细胞存活率[(47.34±1.78)%]、迁移数[(1.35±0.08)个]与侵袭数[(1.48±0.05)个]、BIRC5和Survivin蛋白、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(均P0.05)。结论 miR-646与BIRC5基因存在靶向关系,可能通过靶向抑制BIRC5基因的表达抑制HT-29细胞的增殖、迁移与侵袭。     

miR-646调控BIRC5基因表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭的影响北大核心CSCD

目的检测微小RNA-646(miR-646)与含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)基因在结直肠癌组织表达情况,探讨miR-646对结直肠癌细胞(HT-29)增殖、迁移及侵袭的影响。方法 2018年4月-2020年12月在本院行手术治疗的结直肠癌患者72例,手术中取结直肠癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-646、BIRC5 mRNA表达水平。体外培养结直肠癌细胞系HT-29细胞并随机分为对照组、miR-646阴性对照(NC)组和miR-646模拟物(mimics)组(设正常结肠上皮细胞CCD841对照),RT-qPCR检测各组HT-29细胞miR-646、BIRC5 mRNA的表达;MTT法检测HT-29细胞存活率变化;Transwell小室法检测HT-29细胞迁移与侵袭情况;Western blot检测HT-29细胞凋亡抑制蛋白Survivin、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达的变化;双荧光素酶报告验验证miR-646与BIRC5基因的靶向关系。结果与癌旁组织和正常结肠上皮细胞CCD841细胞比较,结直肠癌组织与HT-29细胞miR-646相对表达水平显著降低,BIRC5 mRNA相对表达水平显著升高(P<0.05)。targetscan数据库预测miR-646与BIRC5基因3’UTR区有结合位点。与BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 NC组(0.81±0.09)比较,BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 mimics组(0.28±0.04)荧光素酶活性降低(P<0.05);与对照组[(3.04±0.21)个、(3.41±0.24)个、(98.56±0.64)%]和miR-646 NC组[(2.96±0.25)个、(3.32±0.23)个、(97.94±0.57)%]相比,miR-646 mimics组HT-29细胞miR-646表达水平显著升高(P<0.05),细胞存活率[(47.34±1.78)%]、迁移数[(1.35±0.08)个]与侵袭数[(1.48±0.05)个]、BIRC5和Survivin蛋白、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05)。结论 miR-646与BIRC5基因存在靶向关系,可能通过靶向抑制BIRC5基因的表达抑制HT-29细胞的增殖、迁移与侵袭。     

miR-1306-5p在AML患者骨髓组织单个核细胞中的表达及对HL60细胞增殖凋亡和迁移侵袭调控作用观察

目的 观察微小RNA-1306-5p(miR-1306-5p)在急性髓系白血病（AML）患者骨髓组织单个核细胞中的表达及对人白血病细胞株HL60增殖凋亡和迁移侵袭调控作用。方法 分别提取初诊AML患者和再生障碍性贫血（AA）患者骨髓组织单个核细胞，采用qRT-PCR法检测单个核细胞miR-1306-5p；(2)取HL60细胞，分别转染过表达和敲低miR-1306-5p质粒（mimics control、miR-1306-5p mimics、inhibitor control、miR-1306-5p inhibitor，计为1、2、3、4组），转染48 h后采用CCK8法检测各组细胞OD值，流式细胞术和Transwell法分别检测各组细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数。结果 AML患者和AA患者miR-1306-5p相对表达量分别为0.27±0.07、1.00±0.08，两者比较，P<0.05。与mimics control组比较，miR-1306-5p mimics组OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数降低，凋亡率升高（P均<0.05）；与inhibitor control组比较...     

沉默miR-135a-5p对宫颈癌细胞增殖、侵袭的影响及作用机制

目的 探究沉默微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响，重点分析miR-135a-5p在宫颈癌HeLa细胞中的作用机制。方法 将宫颈癌HeLa细胞经培育后分为对照组、过表达组、沉默组，对照组不做处理，过表达组转染miR-135a-5p mimics上调载体，沉默组转染miR-135a-5p inhibitor下调载体。使用实时荧光定量法检测每组宫颈癌HeLa细胞中miR-135a-5p表达量；四甲基偶氮唑盐法检测每组宫颈癌HeLa细胞增殖水平；Transwell小室法检测每组宫颈癌HeLa细胞侵袭水平。结果 与对照组比较，过表达组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、miR-135a-5p、宫颈癌HeLa细胞迁移数、侵袭数明显升高，宫颈癌HeLa细胞凋亡能力明显降低(P<0.05);与对照组比较，沉默组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、迁移数、侵袭数、miR-135a-5p明显降低，凋亡能力明显升高(P<0.05);与过表达组比较，沉默组(24 h、48 h、72 ...     

miR-21靶向调控TET1促进结直肠癌HCT15和HT29细胞增殖、侵袭及迁移

目的探究miR-21对结直肠癌细胞生物学行为的影响以及潜在调控机制。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织中miR-21和TET1的表达水平并分析其相关性;利用生物信息学网站预测miR-21潜在靶基因TET1,利用双荧光素酶实验进行验证;利用细胞转染实验对两种结直肠癌细胞株进行miR-21 mimics、miR-21 inhibitor、si-TET1及相关对照的细胞转染,采用CCK-8分析、Transwell实验及细胞划痕实验检测转染后细胞增殖、侵袭及迁移能力的变化;利用Western blotting实验检测转染后细胞中TET1蛋白的表达。结果 qRT-PCR结果显示,结直肠癌组织中miR-21呈高表达水平,TET1 mRNA呈低表达水平,且两者表达水平呈负相关。靶基因预测及验证实验结果显示TET1是miR-21的靶基因,miR-21表达引起结直肠癌细胞中TET1表达下调。细胞转染实验结果显示,miR-21促进细胞增殖、侵袭及迁移。Western blotting实验结果显示,转染miR-21 mimics抑制TET1蛋白表达,转染miR-21 inhibitor促进TET1蛋白表达。结论 miR-21通过靶向调控TET1促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移。     

miR-185通过靶向BRCA1抑制三阴乳腺癌细胞的增殖与侵袭

目的探讨miR-185是否通过靶向人类乳腺癌易感基因(BRCA)1抑制三阴乳腺癌细胞的生长与侵袭及其抗肿瘤机制。方法采用Target Scan软件预测miR-185靶基因、将野生型或突变型E2F6的3'-UTR区域克隆到荧光素酶报告基因的下游(E2F6-wt或E2F6-mut)并分别与miR-185模拟物(miR-185 mimics)及其无关对照寡核苷酸序列(scramble)、抗miR-185寡核苷酸序列(miR-185-LNA)及其无关对照寡核苷酸序列(control)共转染,荧光素酶报告基因实验验证所预测的靶基因E2F6、qRT-PCR检测转染后靶基因的mRNA表达水平、Western印迹检测转染后靶基因的蛋白表达水平。MTS和Transwell验证不同转染后,三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞生长增殖活性和侵袭能力。结果在共转染miR-185mimics和E2F6-wt、scramble和E2F6-wt两组中,miR-185组荧光素酶活性强度降低了约41.3%(P<0.05)。转染miR-185后,E2F6的蛋白和mRNA水平均显著下调,BRCA1的蛋白和mRNA水平均显著上调(P<0.05)。在细胞增殖试验中,转染miR-185后,三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长速度显著低于scramble组(P<0.05);与vector组比,BRCA1组可显著抑制三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长(P<0.05),且miR-185+BRCA1组比BRCA1组对细胞生长的抑制作用更加明显(P<0.05)。Transwell侵袭实验中,转染miR-185和BRCA1组在36 h后穿过基底膜的细胞数分别为(100±6)和(100±9),而对照组即转染scramble和转染vector组穿膜细胞数分别为(210±13)和(180±14),即miR-185和BRCA1能明显抑制三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的穿膜能力,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-185通过靶向调控BRCA1表达而抑制三阴乳腺癌细胞的生长与侵袭。     

miR-138-5p通过调控自噬影响乳腺癌细胞他莫昔芬耐药性的体外研究

目的 探讨miR-138-5p对乳腺癌细胞他莫昔芬(TAM)耐药性的影响及其机制。方法 体外培养乳腺癌细胞MCF-7和TAM耐药细胞株MCF-7/TAM,设置正常对照组(MCF-7细胞)、耐药对照组(MCF-7/TAM细胞)、LV-NC组(MCF-7/TAM细胞+慢病毒空载体)和LV-miR-138-5p mimics组(MCF-7/TAM细胞+miR-138-5p mimics慢病毒)。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞miR-138-5p表达水平;通过MTT法检测各组细胞增殖抑制率;通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率;通过MDC染色法检测各组细胞自噬小体数量;通过Western blot法检测各组细胞LC3Ⅱ、Beclin-1、Bcl-2蛋白表达水平。结果 与正常对照组相比较,耐药对照组、LV-NC组细胞miR-138-5p、增殖抑制率、凋亡率、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),蛋白LC3Ⅱ、Beclin-1表达水平及自噬小体数显著升高(P<0.05)。过表达miR-138-5p后,细胞增殖抑制率、凋亡率、蛋白Bcl-2表达水平显著升高...     

microRNA-99b过表达对宫颈癌细胞增殖、侵袭及化疗敏感性的影响

目的：探讨上调microRNA-99b（miR-99b）表达对宫颈癌细胞增殖、侵袭及化疗敏感性的影响。方法选取24例宫颈癌患者，采用qRT-PCR法分别检测宫颈癌组织、癌旁组织、正常宫颈上皮组织及宫颈癌细胞（ HeLa细胞系、C4-1细胞系、CaSki细胞系、SiHa细胞系）中miR-99b的表达；将miR-99b转染至宫颈癌细胞株，采用CCK-8法、Transwell法分别检测转染后宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力，CCK-8法检测转染后宫颈癌细胞对顺铂、卡铂的半数有效抑制浓度（IC50）。结果宫颈癌HeLa细胞系、C4-1细胞系、CaSki细胞系、SiHa细胞系中miR-99b的表达水平分别为0．64±0．08、0．31±0．06、0．45±0．07、0．23±0．04，均低于正常宫颈上皮组织（1．00±0．00）（P均＜0．05），C4-1细胞系和SiHa细胞系中miR-99b的表达水平较HeLa细胞系和CaSki细胞系更低。转染miR-99b后宫颈癌HeLa细胞系、C4-1细胞系、CaSki细胞系、SiHa细胞系增殖能力降低、侵袭能力被明显抑制，细胞对顺铂、卡铂的敏感性明显增强。结论上调miR-99b表达能够抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭能力，增强肿瘤细胞的化疗敏感性。     

miR-200c对人胃癌细胞增殖能力的影响及其机制探讨

目的 观察miR-200c对人胃癌细胞增殖能力的影响,并探讨其是否通过靶向调控DNA甲基化转移酶(DNMT3B)表达发挥作用.方法 采用MTT法检测miR-200c对人胃癌MGC-803细胞生长增殖能力的影响;构建DNMT3B 3'UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告载体系统观察miR-200c对DNMT3B 3'UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-200cmimics转染胃癌细胞MGC-803,采用Western blot检测DNMT3B表达水平.结果 MTT结果显示,在转染miR-200c mimics 24、48、72 h后,细胞增殖活性OD值分别为0.31±0.01、0.47±0.01、0.53 ±0.02,与对照组的0.44±0.03、0.62±0.01、0.87 ±0.01比较,P均＜0.05;荧光素报告载体系统证实,DNMT3B是miR-200c直接调控的靶基因.Western blot结果显示,miR-200c可抑制DNMT3B蛋白的表达.结论 miR-200c通过靶向调控DNMT3B的表达而抑制胃癌细胞生长增殖能力.     

miR-188-5p靶向Nek6对宫颈癌细胞的影响及机制

目的探究微小RNA-188-5p(miR-188-5p)对宫颈癌细胞增殖、侵袭、凋亡、迁移的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)对33例宫颈癌患者的癌组织及癌旁组织中的miR-188-5p的表达水平进行检测。常规培养宫颈癌HeLa细胞,利用脂质体分别将miR-188-5p模拟物(mimics)及阴性对照转染至HeLa细胞。采用甲基噻唑基四唑(MTT)与平板克隆形成实验检测细胞存活率及克隆数目。流式细胞仪分析细胞凋亡;Transwell小室法分析侵袭与迁移;利用Targetscan及双荧光素酶报告基因实验分析miR-188-5p对NIMA相关激酶(Nek)6的靶向性作用;构建Nek6小干扰RNA(si-Nek6),观察抑制Nek6的表达对细胞生物学行为的影响。结果宫颈癌组织、癌旁组织中miR-188-5p的相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-188-5p mimics或转染si-Nek6可降低细胞增殖、克隆形成能力,减少迁移和侵袭细胞数,并增加细胞凋亡率;miR-188-5p与Nek6基因的3′UTR结合,抑制Nek6的蛋白表达(P<0.05);Nek6过表达可逆转miR-188-5p对HeLa细胞生物学行为的调控作用。结论miR-188-5p可能靶向下调Nek6抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡。     

病毒性心肌炎患者外周血miR-31与Th22细胞水平的相关性分析北大核心CSCD

目的检测病毒性心肌炎(VMC)患者外周血中微小RNA-31(miR-31)、辅助型T 22(Th22)细胞及其白介素-22(IL-22)的变化,探讨miR-31与Th22细胞水平的相关性。方法从2020年1月到2021年6月期间本院收治的VMC患者中选取125例作为VMC组,根据心功能指标(LVEF)划分为轻度组(52例)、中度组(52例)和重度组(21例),对照组为125名健康志愿者;收集外周血样本5 ml并分离单个核细胞,实时荧光定量(qRT-PCR)技术检测外周血中miR-31的表达水平,流式细胞仪检测Th22细胞水平,酶联免疫吸附实验检测IL-22表达水平,分析比较对照组与VMC组及不同病情组之间miR-31、Th22细胞及IL-22的表达水平的差异;分析VMC组外周血miR-31表达水平分别与Th22细胞水平、IL-22水平之间,及Th22细胞水平与IL-22水平之间的相关性。结果与对照组[(1.00±0.00)、(0.78±0.22)%、(21.69±3.50)pg/mL]相比,VMC组外周血中miR-31表达水平(1.45±0.32)、Th22细胞水平[(2.02±0.55)%]及IL-22[(33.34±7.44)pg/mL]水平升高(P<0.05);不同病情组VMC患者间外周血miR-31[(1.35±0.27)、(1.47±0.32)、(1.63±0.36)]、Th22细胞[(1.80±0.42)%、(2.02±0.51)%、(2.55±0.57)%]及IL-22的表达水平[(30.95±6.98)pg/mL、(33.96±7.00)pg/mL、(37.75±7.61)pg/mL]比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),且重度组>中度组>轻度组;VMC组外周血miR-31、Th22细胞水平与IL-22表达水平均呈显著正相关(r=0.599,P<0.05;r=0.635,P<0.05);VMC组外周血miR-31表达水平与Th22细胞水平呈显著正相关(r=0.613,P<0.05)。结论VMC患者外周血的miR-31、Th22细胞及IL-22表达水平均显著升高,miR-31可能通过影响Th22介导的免疫调控在VMC的发生发展中起关键作用。     

miR-183靶向DDR1调控乳腺癌细胞迁移侵袭的分子机制

目的研究miR-183对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹检测乳腺癌细胞MDA-MB-231、正常细胞MCF-10A中miR-183、盘状结构域受体(DDR)1的表达;将miR-183组(转染miR-183 mimics)、miR-con组(转染miR-con)、si-TCF7组(转染si-TCF7)、si-con组(转染si-con),miR-183+pcDNA组(共转染miR-183 mimics和pcDNA)、miR-183+pcDNA-DDR1组(共转染miR-183 mimics和pcDNA-DDR1)均用脂质体法转染至MDA-MB-231细胞;MTT和Transwell法检测各组细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常细胞MCF-10A相比,乳腺癌细胞MDA-MB-231中miR-183表达显著降低,DDR1表达显著升高(P0.05);过表达miR-183、敲减DDR1均可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭;miR-183可靶向负调控DDR1表达;过表达DDR1可逆转miR-183对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-183可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向DDR1有关,可为乳腺癌的治疗提供新靶点。     

miR-125a对肺癌细胞增殖、凋亡及侵袭能力的研究

目的探讨miR-125a在肺癌细胞增殖凋亡侵袭中的作用。方法以肺癌细胞A549、NCL-H661、NCL-H460、SPC-A-1和支气管上皮细胞HBE为研究对象,提取细胞RNA,反转录合成miR-125a的cDNA,RT-PCR检测细胞中miR-125a的表达水平。转染miR-125a inhibitor、inhibitor control、miR-125a mimics、mimics control到细胞A549中,MTT法检测细胞增殖情况,原位末端标记法检测细胞凋亡情况,Transwell小室检测细胞侵袭力。结果 miR-125a表达水平按照由大到小的顺序依次为:HBE、SPC-A-1、NCL-H460、NCL-H661、A549细胞,肺癌细胞中miR-125a表达水平均低于支气管上皮细胞HBE。miR-125a inhibitor组比inhibitor control组抑制率低(P0.01);miR-125a mimics组比mimics control组抑制率高(P0.01)。miR-125a inhibitor组比inhibitor control组凋亡率低(P0.05),miR-125a mimics组比mimics control组凋亡率高(P0.01)。miR-125a inhibitor组侵袭力比inhibitor control侵袭力强(P0.01);miR-125a mimics组侵袭力比mimics control侵袭力低(P0.01)。结论 miR-125a在肺癌细胞A549、NCL-H661、NCL-H460、SPC-A-1中低表达,miR-125a可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,降低细胞侵袭力。     

miR-519d-3p靶向KPNA2对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨微小RNA(miR)-519d-3p对核转运蛋白α-2(KPNA2)的靶向作用及其对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能作用机制。方法体外培养胶质瘤细胞株U251、U87、T98G与正常胶质细胞株SVGp12,采用qRT-PCR与Western印迹法检测细胞中miR-519d-3p与KPNA2的mRNA及蛋白表达。脂质体将miR-519d-3p mimics、si-KPNA2及其各自阴性对照转染入胶质瘤U251细胞;共转染分组:miR-519d-3p+pcDNA组(miR-519d-3p mimics与pcDNA共转染胶质瘤U251细胞),miR-519d-3p+pcDNA-KPNA2组(miR-519d-3p mimics与pcDNA-KPNA2共转染胶质瘤U251细胞)。MTT实验与Transwell小室检测各组胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭。运用生物信息学方法预测miR-519d-3p与KPNA2的靶向配对关系,采用双荧光素酶报告实验验证miR-519d-3p与KPNA2的作用关系。Western印迹检测CyclinD1、p21、p27、MMP-2、MMP-9、MMP-14蛋白表达。结果与正常胶质细胞株SVGp12比较,胶质瘤细胞株U251、U87、T98G中miR-519d-3p的表达水平均显著降低(P0.05),而KPNA2 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P0.05);miR-519d-3p过表达后胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显减弱,促进p21、p27表达,而抑制CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14表达;抑制KPNA2表达后胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显减弱,促进p21表达,而抑制CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达;miR-519d-3p过表达同时上调KPNA2表达后部分逆转miR-519d-3p过表达对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论 miR-519d-3p可通过负向调控KPNA2表达而抑制胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-200a对宫颈癌细胞系HeLa增殖、迁移、侵袭调控作用观察及其靶向mRNA和lncRNA预测分析

目的 观察微小RNA-200a(miR-200a)对宫颈癌细胞系HeLa增殖、迁移和侵袭的调控作用,对miR-200a的靶向mRNA及靶向长链非编码RNA(lncRNA)进行预测分析。方法 取人宫颈癌细胞系HeLa分为1、2、3及4组,分别转染miRNA模拟物miR-200a mimics、miRNA抑制物miR-200a inhibitor、对照物mimics NC及inhibitor NC。培养48 h时采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-200a表达;采用CCK8法检测各组细胞增殖能力,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,采用Transwell迁移实验和细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。使用miRNA数据库在线预测miR-200a靶向mRNA和靶向lncRNA,采用基因本体论功能注释和京都基因和基因组百科全书富集分析法分析宫颈组织中miR-200a的靶向mRNA和靶向lncRNA的生物学功能。结果 与3组比较,1组细胞miR-200a相对表达量高;与4组比较,2组细胞miR-200a相对表达量低（P均<0.05）。与3组比较,培养72、96 h时1组细胞增殖...     

miR-503在结直肠癌组织和细胞中的表达及对细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨microRNA-503(miR-503)在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测54例结直肠癌组织及4种结直肠癌细胞(SW480、Lovo、LS174T和HT-29)中的miR-503水平,分析结直肠癌组织miR-503表达与常见临床病理参数的关系,采用脂质体转染miR-503模拟物(mimics)至miR-503水平最低的细胞,采用MTT法、流式细胞仪及Transwell法检测过表达miR-503对细胞增殖、凋亡、细胞周期和侵袭的影响。结果 54例结直肠癌组织的miR-503相对表达量为(0.257±0.011),低于癌旁组织(P0.05),且miR-503水平与TNM分期、分化情况、肿瘤大小和术前癌胚抗原均有关(P0.05);与人正常结肠细胞系CCD-18Co相比,4种不同恶性程度结直肠癌细胞SW480、Lovo、LS174T和HT-29的miR-503相对表达量依次为(0.342±0.072)、(0.161±0.054)、(0.260±0.041)和(0.415±0.086),差异均有统计学意义(P0.05);与对照组相比,转染miR-503 mimics后的细胞增殖抑制率和凋亡率均升高,G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期细胞比例均降低,穿膜细胞数减少(P0.05)。结论 miR-503在结直肠癌组织和细胞中低表达,且与结直肠癌的临床病理参数有关,上调miR-503水平可抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭并诱导细胞周期阻滞和凋亡。     

miR-1290靶向STK17A对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-1290(miR-1290)靶向调控丝氨酸苏氨酸激酶(STK)17A对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人宫颈癌细胞SiHa、HeLa、CaSki和人正常宫颈上皮细胞H8中miR-1290和STK17A表达情况,选取同时表达miR-1290和STK17A且miR-1290表达量最高的HeLa细胞进行实验;该细胞随机分为Control组(HeLa细胞未转染)、miR-1290 NC组(HeLa细胞转染miR-1290 NC)、miR-1290 inhibitor组(HeLa细胞转染miR-1290 inhibitor)。qRT-PCR检测miR-1290、STK17A mRNA表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞增殖率、Transwell小室法检测各组细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶法检测miR-1290和STK17A的靶向关系。结果 HeLa、SiHa、CaSki细胞miR-1290相对表达量均明显高于H8细胞(P<0.05),其中HeLa细胞miR-1290相对表达量最高,故选择HeL...     

miR-214负向调控结肠癌细胞株LoVo中Sema4D的表达

目的:观察miR-214对人结肠癌细胞株LoVo中轴突导向因子4D(semaphorin 4D,Sema4D)表达水平的影响,探讨miR-214对Sema4D的调控作用.方法:设计并合成miR-214模拟物(miR-214mimics),miR-214抑制剂(miR-214 inhibitor),二者对照序列(mi-control,in-control),分别与以脂质体lipofectamine 2000包裹后转染人结肠癌细胞株LoVo.RT-PCR检测转染24 h后各细胞株内miR-214的表达及Sema4D mRNA的表达变化,并用Western blot检测Sema4D蛋白的表达变化.结果:LoVo细胞株转染miR-214 mimics、mi-control,inhibitor、in-control 24 h后miR-214的相对表达量为8.003±0.651,3.464±0.332,0.740±0.088,2.620±0.166,mimics组miR-214表达较其对照组升高,inhibitor组表达较其对照组降低(P0.05).Sema4D mRNA的相对表达量为:0.420±0.027,0.851±0.062,1.243±0.087,0.660±0.042;Sema4D蛋白/β-actin分别为:0.163±0.037,0.550±0.038,1.137±0.112,0.457±0.046.Sema4D mRNA及蛋白mimics组表达较其对照组降低,inhibitor组较其对照组升高(P0.05).结论:人结肠癌细胞株LoVo中,Sema4D受miR-214的调控,miR-214可负向调控Sema4D mRNA的表达水平进而影响其蛋白的表达,miR-214可能作为结肠癌治疗的新靶点.     

MiR-32对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨miR-32靶向CCNE2调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的增殖、迁移和侵袭的机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测30例NSCLC患者癌组织及其匹配癌旁组织和支气管上皮细胞株16-HBE及NSCLC细胞株A549、H460和H1299中miR-32 mRNA表达水平;选择A549和H1299细胞为研究对象,将细胞随机分8组:NC组(转染miR-NC)、miR-32组(转染miR-32 mimics)、NC inhibitor组(转染miR-32-NC)、miR-32 inhibitor组(转染miR-32 inhibitor)、si-NC组(转染对照干扰RNA)、si-CCNE2组(转染CCNE2干扰RNA)、miR-32+vector(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1)、miR-32+CCNE2组(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1-CCNE2),转染按照Lipofectamine^TM2000试剂进行。qRT-PCR检测转染效果,qRT-PCR和Western印迹分别检测CCNE2 mRNA和蛋白...