SNHG7-miR-653-5p-STAT2反馈通路在神经母细胞瘤进展中的调节作用研究

目的 研究lncRNA SNHG7在神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)进展中的作用,以及SNHG7-miR-653-5p-STAT2反馈通路在神经母细胞瘤进展中的调节作用.方法 从青岛大学附属医院收治的NB患儿体内获得92对NB组织及相邻非肿瘤组织.采用qRT-PCR检测SNHG7在神经母细胞瘤肿瘤组织及...     

miR-34b-3p靶向FDX1抑制小儿神经母细胞瘤细胞生长和凋亡

目的探究miR-34b-3p在神经母细胞瘤(neuroblastoma, NB)细胞增殖和凋亡过程中的调节作用。方法体外培养人正常背根神经节细胞和NB细胞系, 搜集NB组织和邻近的正常组织。qRT-PCR检测NB组织和细胞中miR-34b-3p和FDX1的表达;CCK-8法、克隆形成实验和流式细胞术检测NB细胞的增殖和凋亡;双荧光素酶报告基因分析FDX1 mRNA 3’’非翻译区(3’’-untranslated region, 3’’-UTR)和miR-34b-3p之间的靶点关系;Western blot检测相关蛋白的表达。采用SPSS 23.0和GraphPad Prism 6.01进行Student’’st-test检验。结果与对照组比较, miR-34b-3p在NB肿瘤组织和癌细胞系(SK-N-BE、SK-N-SH、SH-SY5Y和LAN-6)中均下调(P<0.05)。与对照组比较, miR-34b-3p过表达抑制了癌细胞SK-N-BE和SH-SY5Y的生长, 并诱导凋亡增加(P<0.05)。萤光素酶报告基因证实, miR-34b-3p可以与FDX1 3’’-UTR...     

DKK-1在神经母细胞瘤中的表达及其意义

目的 研究Dickkopf-1 (DKK-1)在儿童神经母细胞瘤(NB)中的表达及其意义.方法 运用免疫组织化学方法检测DKK-1在42例NB,19例神经节细胞瘤及15例正常肾上腺组织中的表达水平.运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting检测DKK-1在分化程度依次增高的3株NB细胞株IMR-32、SK-N-SH和SH-SY5Y中的mRNA及蛋白表达水平.结果 免疫组织化学研究发现DKK-1在正常肾上腺组织中呈强阳性表达(免疫组织化学评分为1.912±0.047),在神经节细胞瘤组织中呈弱阳性表达(免疫组织化学评分为1.214±0.095),在NB组织中呈阴性表达(免疫组织化学评分为0.371±0.293).神经节细胞瘤和NB中DKK-1的表达量分别与正常对照组相比较,差异均有统计学意义(all P＜0.001).在3种组织中,不同组间DKK-1表达量的差异有统计学意义(F=211.375,P＜0.001).qRT-PCR研究发现DKK-1在IMR-3、SK-N-SH和SH-SY5Y中平均相对表达量分别为(25.323±8.651)％、(58.852±10.223)％和(75.385±9.381)％,均呈低表达水平,不同组间DKK-1表达差异有统计学意义(F=57.628,P＜0.001).Western blotting研究发现在IMR-32、SK-N-SH和SH-SY5Y中DKK-1蛋白表达相对灰度值依次增高,分别为0.093±0.016、0.397±0.051和0.411±0.062,不同组间蛋白表达差异有统计学意义(F=156.783,P＜0.001).结论 DKK-1在NB组织及细胞株中均呈低表达水平,且DKK-1在NB中的表达可能与该肿瘤的分化密切相关,提示其或许可以作为一个特殊的分子标记物用于NB的早期诊断及预后监测.     

TrkA基因在神经母细胞瘤增殖及形态分化中的作用

目的 观察酪氨酸激酶受体A(TrkA)基因抑制神经母细胞瘤生长、诱导其分化的可行性。方法 利用脂质体转染法将TrkA cDNA重组质粒转染入人神经母细胞瘤(NB)SH-SY5Y细胞系中,应用RT-PCR技术鉴定转染后基因的表达,比较转染前后SH-SY5Y细胞的增殖率及细胞的分化程度。结果 成功转染TrkA基因并在SH-SY5Y细胞中稳定表达,转染后SH-SY5Y细胞的增殖率较亲代细胞明显下降(P<0.01),细胞的分化程度增加(P<0.01)。结论 TrkA基因的高表达能有效抑制神经母细胞瘤的生长,并能促其向良性分化,为神经母细胞瘤的基因治疗提供理论依据。     

miR-92a-3p靶向调控PTEN对神经母细胞瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:探讨微小RNA-92a-3p （micro RNA-92a-3p, miR-92a-3p）靶向调控PTEN对神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用miR-92a-3p mimics及其抑制基因（inhibitor）分别转染至SH-SY5Y细胞,根据实验需要分为miR...     

miR-144通过靶定ITGβ1调控神经母细胞瘤的侵袭转移

目的 本研究旨在探讨miR-144对神经母细胞瘤的侵袭和转移的影响,并探索miR-144是否通过靶定ITGβ1调节神经母细胞瘤的侵袭和转移.方法 利用生物信息学技术预测miR-144的靶基因ITGβ1,应用荧光报告基因检测以及荧光定量PCR、Western Blot实验对靶基因进行验证.在神经母细胞瘤SH-SY5Y和SK-N-BE分别瞬时转染化学合成的成熟双链miR-144和靶基因敲降质粒及对照质粒,建立过表达miR-144细胞模型和靶基因敲降细胞模型.通过 Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞的体外侵袭和转移能力.结果 Transwell实验结果表明,在神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和SK-N-BE中过表达miR-144后,细胞的侵袭数目分别为41±2和55±2,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).抑制ITGβ1基因的表达后,体外划痕实验结果表明,过表达miR-144后,与对照组相比,SH-SY5Y和SK-N-BE细胞的转移能力分别下降了65.45%和75.41%(P<0.01).荧光报告基因检测结果显示过表达miR-144后,含有结合位点的荧光报告质粒的相对荧光量降低了37.11%(P<0.01),而将结合位点进行基因突变后miR-144对靶基因的抑制作用消失.过表达miR-144后,与对照组相比,SH-SY5Y和SK-N-BE细胞内的ITGβ1 mRNA水平分别降低了40%和43%,Western Blot检测结果显示,ITGβ1蛋白水平分别降低了39%和40%.结论 miR-144通过靶定ITGβ1基因抑制神经母细胞瘤的侵袭和转移过程.     

细胞色素C1对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖作用的研究

目的分析细胞色素C1(CYC1)在神经母细胞瘤(NB)增殖中的作用,探讨神经母细胞瘤增殖的分子机制。方法首先采用在SH-SY5Y细胞系中慢病毒介导敲减CYC1基因方法,建立神经母细胞瘤CYC1敲减模型,并利用实时定量RT-PCR方法验证敲减效率;随后利用荧光显微镜观察及细胞分析系统连续检测慢病毒感染SH-SY5Y细胞后连续5 d细胞增殖数。结果慢病毒介导的SH-SY5Y细胞中CYC1基因敲减效率达77.0%±4%,具极显著差异(P<0.01);通过细胞分析系统连续检测SH-SY5Y细胞慢病毒感染敲减CYC1后0~5 d细胞数发现细胞增殖速度明显降低,对照组/敲减CYC1组细胞数1~5 d比值分别为(1.00±0.11)、(1.61±0.16)、(1.58±0.17)、(1.97±0.13)、(1.44±0.13),具极显著差异(P<0.01)。结论 CYC1基因沉默可抑制神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖,CYC1在调节神经母细胞瘤生长增殖方面发挥重要作用。     

HA117调节DPF3表达对神经母细胞瘤分化的影响

目的 探讨HA117及DPF3在儿童神经母细胞瘤(NB)中的表达及意义,及其对NB分化的影响和可能机制.方法 运用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)、免疫组化法检测HA117、DPF3在35例NB、8例节细胞神经母细胞瘤(GNB)和10例神经节细胞瘤(GN)中的表达水平.构建HA117过表达和空载慢病毒,分别转染SH-SY5Y细胞株,构建HA117过表达组和对照组.采用qRT-PCR和Western Blot检测HA117和DPF3的RNA和蛋白质表达水平.采用10 μmol/L维甲酸诱导HA117过表达组和对照组细胞,普通光学显微镜观察细胞形态,免疫荧光法检测神经特异性标志物MAP2蛋白质表达,Western Blot检测HA117过表达组和对照组细胞MAP2、NSE蛋白质的表达情况.结果 HA117的RNA在NB中的相对表达量为30.14±15.96,明显高于GNB/GN的1.03±0.37(P＜0.05),DPF3的mRNA在NB中的表达量为0,81±0.17,明显低于GNB/GN的3.14±1.09(P＜0.05),与HA117的表达趋势相反.免疫组化检测发现DPF3在GNB/GN中呈强阳性表达,在分化中的NB中呈弱阳性表达,在未分化/分化差的NB中呈阴性表达.过表达HA117可在mRNA和蛋白水平明显下调SH-SY5Y中DPF3的表达.经10 μmol/L维甲酸诱导7d后,对照组细胞生长明显减慢,细胞长出突起,发生神经元样分化;HA117过表达组SH-SY5Y的MAP2、NSE的表达水平明显低于对照组(P＜0.05).结论 HA117和DPF3的表达可能与NB的分化相关,HA117可能通过下调DPF3的表达抑制NB的分化.     

RNAi抑制Wnt1信号通路对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖抑制的实验研究

目的 检测人神经母细胞瘤细胞株SH-SYSY中Wnt1的表达情况,并通过抑制Wnt1基因的表达来干预Wnt1信号通路,观察其对神经母细胞瘤增殖的影响,阐明Wnt1信号通路与神经母细胞瘤之间的相关性.方法 检测人神绛母细胞瘤株SH-SY5Y中Wnt1在基因和蛋白水平的表达及细胞内定位情况;将SH-SY5Y细胞分为四组,分别是阴性对照组、空白载体组、非特异性siRNA组和Wnt1-siRNA组.用针对Wnt1的特异性siRNA阻断该细胞中Wnt1信号通路的传递,分别检测上述四组细胞中Wnt信号通路中Wnt1及β-catenin浓度的变化;显微镜下观察细胞形态、数量的改变;用MTT方法检测肿瘤细胞增殖情况.结果 SH-SY5Y中的Wnt1在mRNA转录水平以及蛋白水平均有表达,且位于细胞浆内.采用Wnt1的特异性siRNA技术干预细胞后,Wnt1特异性siR-NA干预组中Wnt1蛋白的表达较阴性对照组、空白载体组及非特异性siRNA组明显下降(P<0.01),其下游通路中的关键蛋白β-catenin的表达同样明显下降(P<0.01);光学显微镜下发现特异性干预组中细胞明显较其他三组少,死亡漂浮的细胞较多,细胞突触减少;MTT结果提示,Wnt1基因表达被抑制后,SH-SY5Y细胞的增殖率明显下降(P<0.01).结论 Wnt1在人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y中呈阳性表达;阻断Wnt1信号通路可以抑制人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的增殖.Wnt1信号通路可能是影响神经母细胞瘤增殖的重要通路.     

神经母细胞瘤细胞在鸡胚尿膜囊模型上生物学性状的研究

目的 探讨神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）鸡胚尿膜囊（chicken chorioallantoic membrane,CAM）血管模型的建立,以及缺氧诱导因子1α（hypoxia inducing factor-1α,HIF-1α）对神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y肿瘤生长和血管生成的影响.方法 含有目的 基因HIF1 α和对照组增强型绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein,EGFP）的非增值性重组5型腺病毒分别转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y,检测目的 基因和目的 蛋白表达.SH-SY5Y细胞株经不同处理后分为两组：A组为空白对照组;SH-SY5Y细胞组;B组为HIF1 α-SH-SY5Y组;EGFP-SH-SY5Y组.不同组别细胞悬液分别种植于CAM,1周后A组提取组织RNA,检测人源性促血管相关基因的表达.B组于1周后测量肿瘤体积,分别测定肿瘤周嗣固定范围内放射状血管所占面积以及血管分支数.结果 RT-PCR和细胞免疫组化检测HIF1α转基因组较对照EGFP组目的 基因和蛋白表达水平显著增高,差异有显著统计学意义（P〈0.05）.A组SH-SY5Y细胞悬液种植于CAM膜后,肿瘤形成、周围放射状血管网络形成、肿瘤组织中检测到人源性促血管生长因子的表达.B组HIF1α转基因组血管计数、血管面积较对照EGFP组显著增多,差异有统计学意义（P〈0.05）,而肿瘤大小无显著统计学差异（P〉0.05）.结论 CAM模型作为NB血管模型有可行性.HIF-1 α与肿瘤血管生成具有显著相关性,可作为神经母细胞瘤患者预后评估的指标.     

先天性神经母细胞瘤发病机制与临床特点的研究进展

神经母细胞瘤是儿童最常见的颅外实体肿瘤,来源于肾上腺髓质或交感神经节.先天性神经母细胞瘤约占神经母细胞瘤患儿总数的5％,大多数患儿于出生后1个月内确诊.与1岁以上神经母细胞瘤患儿相比,新生儿神经母细胞瘤有其独特的病程.本文就先天性神经母细胞瘤的发病机制、临床表现、治疗方法以及预测患儿长期预后的生物学因素进行综述.     

先天性神经母细胞瘤发病机制与临床特点的研究进展CSCD

神经母细胞瘤是儿童最常见的颅外实体肿瘤,来源于肾上腺髓质或交感神经节。先天性神经母细胞瘤约占神经母细胞瘤患儿总数的5%,大多数患儿于出生后1个月内确诊。与1岁以上神经母细胞瘤患儿相比,新生儿神经母细胞瘤有其独特的病程。本文就先天性神经母细胞瘤的发病机制、临床表现、治疗方法以及预测患儿长期预后的生物学因素进行综述。     

手术完全切除肿瘤对晚期神经母细胞瘤患儿生存率的影响

目的分析21例Ⅲ期、Ⅳ期腹膜后神经母细胞瘤患儿经血管骨骼化方法完全切除肿瘤后的临床疗效,探讨手术完全切除肿瘤对晚期神经母细胞瘤患儿生存率的影响。方法2003年至2008年,对本院收治的22例临床诊断为Ⅲ期、Ⅳ期神经母细胞瘤的患儿,经穿刺活检病理诊断明确为神经母细胞瘤后,按照最新国际标准化疗方案行4～6个疗程的化疗,待肿瘤体积缩小后,采用腹膜后大血管骨骼化的方法实施手术,21例完全切除肿瘤,并继续化疗等治疗。通过门诊复查及电话、信件随访的方式了解术后康复情况,包括有无原位复发、有无远隔转移、是否存活以及死亡原因等。结果21例延期一期手术完全切除肿瘤（占95．45％）,无严重的术后并发症及围手术期死亡。失访3例。随访病例中,无瘤存活10例,占55．56％;带瘤存活3例,占16．67％;死亡5例,占27．78％,5年总体生存率为72．22％（13／18）。结论通过腹膜后大血管骨骼化方法完全切除儿童Ⅲ期、Ⅳ期神经母细胞瘤,能显著提高术后生存率。     

神经母细胞瘤综合治疗

目的 探讨神经母细胞瘤的综合治疗方法。方法 分析日本松户市立医院24例神经母细胞瘤的治疗效果。早期神经母细胞瘤，即1岁未满的病例和Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅳs期的病例共13例，10例是由筛查发现。岛田分类10例是预后良好型，2例预后不良型；遗传因子N-myc扩增11例阴性。晚期神经母细胞瘤，即1岁以上的Ⅲ期、Ⅳb期和全年龄的Ⅳa期患者，共11例；岛田分类3例预后不良型；N-myc扩增2例阴性，1例10倍以上扩增；2例进行了末梢造血干细胞移植（PBSCT）。晚期患者诊治按照日本厚生省晚期神经母细胞瘤的综合诊疗方案进行。结果 13例早期神经母细胞瘤患者均Ⅰ期完成肿瘤切除术，经不同的术后化疗，全部临床缓解或治愈，生存率100％。晚神经母细胞瘤11例，10例患者在化疗2-4个疗程后进行了Ⅱ期肿瘤切除，淋巴结清除术，5年生存率为36.2％。结论神经母细胞瘤早期病例可通过手术切除、简单化疗而治愈。晚期病例，通过手术、化疗和放疗，配合造血干细胞移植等，可提高生存率。     

神经母细胞瘤并骨转移患儿临床特征及预后相关因素的单中心分析CSCD

目的分析伴骨转移神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)患儿的临床特征及预后相关因素,总结临床诊疗经验,以提高伴骨转移NB患儿的生存率。方法以2013年12月至2020年12月重庆医科大学附属儿童医院肿瘤外科收治的伴骨转移NB患儿为研究对象,收集并总结患儿临床资料及预后情况。随访时间截至2021年3月31日。结果共收集97例NB患儿,男68例,女29例,男女比例为2.4∶1;中位年龄为49.4个月。首发症状:发热47例(48.5%),骨痛38例(39.2%),腹痛或腹胀29例(29.9%),咳嗽15例(15.5%);伴骨转移的NB患儿存在多类骨转移(62.9%),且合并骨髓转移(73.2%),整体预后差,1年生存率为93.6%,5年生存率仅20.2%。经生存分析发现,女性、伴多类骨转移、肿瘤位于腹部、首诊时LDH测定值大于660 U/L以及术中肿瘤残留是预后不佳的影响因素,其中手术切除范围是独立预后影响因素。结论伴骨转移的NB患儿临床表现多样,其预后受诸多因素影响,肿瘤复发或进展是主要的致死原因。对于此类患儿,建议术中尽可能完全切除肿瘤,以改善预后。     

神经母细胞瘤并骨转移患儿临床特征及预后相关因素的单中心分析

目的 分析伴骨转移神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)患儿的临床特征及预后相关因素,总结临床诊疗经验,以提高伴骨转移NB患儿的生存率.方法 以2013年12月至2020年12月重庆医科大学附属儿童医院肿瘤外科收治的伴骨转移NB患儿为研究对象,收集并总结患儿临床资料及预后情况.随访时间截至2021年3月31日...     

儿童腹部神经母细胞瘤手术技术探讨

儿童神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是一种发生于交感神经系统的异质性实体肿瘤,最常见于腹膜后。手术在NB多学科治疗中起着重要的作用,其主要目的是切除肿瘤病灶和尽可能保持周围组织结构的完整。关于NB的最佳手术方案目前尚未达成共识。手术入路很大程度上取决于肿块的解剖位置及对周围组织的侵犯程度。本文结合文献及作者多年临床实践,探讨儿童腹部NB的手术技术。     

儿童腹部神经母细胞瘤手术技术探讨CSCD

儿童神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是一种发生于交感神经系统的异质性实体肿瘤,最常见于腹膜后。手术在NB多学科治疗中起着重要的作用,其主要目的是切除肿瘤病灶和尽可能保持周围组织结构的完整。关于NB的最佳手术方案目前尚未达成共识。手术入路很大程度上取决于肿块的解剖位置及对周围组织的侵犯程度。本文结合文献及作者多年临床实践,探讨儿童腹部NB的手术技术。     

血清蛋白质标记物在神经母细胞瘤中的诊断意义

目的 寻找特异的蛋白质标记物,探讨神经母细胞瘤血清蛋白质标记物的检测及初步诊断模型的构建和临床应用.方法 收集血清样本87例,其中47例为神经母细胞瘤患儿,30例为其它恶性实体肿瘤患儿,10例为健康儿童;用ZUCI-Protein Chip Data Analyze System分析软件进行数据处理;经留一法交叉验证,...