miR-646调控BIRC5基因表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭的影响

目的检测微小RNA-646(miR-646)与含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)基因在结直肠癌组织表达情况,探讨miR-646对结直肠癌细胞(HT-29)增殖、迁移及侵袭的影响。方法 2018年4月-2020年12月在本院行手术治疗的结直肠癌患者72例,手术中取结直肠癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-646、BIRC5 mRNA表达水平。体外培养结直肠癌细胞系HT-29细胞并随机分为对照组、miR-646阴性对照(NC)组和miR-646模拟物(mimics)组(设正常结肠上皮细胞CCD841对照),RT-qPCR检测各组HT-29细胞miR-646、BIRC5 mRNA的表达;MTT法检测HT-29细胞存活率变化;Transwell小室法检测HT-29细胞迁移与侵袭情况;Western blot检测HT-29细胞凋亡抑制蛋白Survivin、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达的变化;双荧光素酶报告验验证miR-646与BIRC5基因的靶向关系。结果与癌旁组织和正常结肠上皮细胞CCD841细胞比较,结直肠癌组织与HT-29细胞miR-646相对表达水平显著降低,BIRC5 mRNA相对表达水平显著升高(P0.05)。targetscan数据库预测miR-646与BIRC5基因3’UTR区有结合位点。与BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 NC组(0.81±0.09)比较,BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 mimics组(0.28±0.04)荧光素酶活性降低(P0.05);与对照组[(3.04±0.21)个、(3.41±0.24)个、(98.56±0.64)%]和miR-646 NC组[(2.96±0.25)个、(3.32±0.23)个、(97.94±0.57)%]相比,miR-646 mimics组HT-29细胞miR-646表达水平显著升高(P0.05),细胞存活率[(47.34±1.78)%]、迁移数[(1.35±0.08)个]与侵袭数[(1.48±0.05)个]、BIRC5和Survivin蛋白、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(均P0.05)。结论 miR-646与BIRC5基因存在靶向关系,可能通过靶向抑制BIRC5基因的表达抑制HT-29细胞的增殖、迁移与侵袭。     

长链非编码RNA PCGEM1靶向miR-433-3p调控结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)PCGEM1影响结直肠癌HT-29细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法甲四基偶氮唑蓝(MTT)法测定HT-29细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证PCGEM1基因的转录活性,qRT-PCR检测PCGEM1和miR-433-3p mRNA表达。结果 qRT-PCR结果表明,与正常对照NCM460细胞相比,结直肠癌细胞HT-29中PCGEM1表达显著升高(P0.05),miR-433-3p表达显著下降(P0.05);下调PCGEM1表达可以抑制HT-29细胞增殖、迁移和侵袭;过表达miR-433-3p可抑制结直肠癌HT-29细胞增殖、迁移、侵袭;PCGEM1参与负向调控miR-433-3p的表达;抑制miR-433-3p表达逆转了下调PCGEM1表达对HT-29细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论 PCGEM1通过下调miR-433-3p表达诱导结直肠癌HT-29细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-503在结直肠癌组织和细胞中的表达及对细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨microRNA-503(miR-503)在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测54例结直肠癌组织及4种结直肠癌细胞(SW480、Lovo、LS174T和HT-29)中的miR-503水平,分析结直肠癌组织miR-503表达与常见临床病理参数的关系,采用脂质体转染miR-503模拟物(mimics)至miR-503水平最低的细胞,采用MTT法、流式细胞仪及Transwell法检测过表达miR-503对细胞增殖、凋亡、细胞周期和侵袭的影响。结果 54例结直肠癌组织的miR-503相对表达量为(0.257±0.011),低于癌旁组织(P0.05),且miR-503水平与TNM分期、分化情况、肿瘤大小和术前癌胚抗原均有关(P0.05);与人正常结肠细胞系CCD-18Co相比,4种不同恶性程度结直肠癌细胞SW480、Lovo、LS174T和HT-29的miR-503相对表达量依次为(0.342±0.072)、(0.161±0.054)、(0.260±0.041)和(0.415±0.086),差异均有统计学意义(P0.05);与对照组相比,转染miR-503 mimics后的细胞增殖抑制率和凋亡率均升高,G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期细胞比例均降低,穿膜细胞数减少(P0.05)。结论 miR-503在结直肠癌组织和细胞中低表达,且与结直肠癌的临床病理参数有关,上调miR-503水平可抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭并诱导细胞周期阻滞和凋亡。     

miR-21靶向调控TET1促进结直肠癌HCT15和HT29细胞增殖、侵袭及迁移

目的探究miR-21对结直肠癌细胞生物学行为的影响以及潜在调控机制。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织中miR-21和TET1的表达水平并分析其相关性;利用生物信息学网站预测miR-21潜在靶基因TET1,利用双荧光素酶实验进行验证;利用细胞转染实验对两种结直肠癌细胞株进行miR-21 mimics、miR-21 inhibitor、si-TET1及相关对照的细胞转染,采用CCK-8分析、Transwell实验及细胞划痕实验检测转染后细胞增殖、侵袭及迁移能力的变化;利用Western blotting实验检测转染后细胞中TET1蛋白的表达。结果 qRT-PCR结果显示,结直肠癌组织中miR-21呈高表达水平,TET1 mRNA呈低表达水平,且两者表达水平呈负相关。靶基因预测及验证实验结果显示TET1是miR-21的靶基因,miR-21表达引起结直肠癌细胞中TET1表达下调。细胞转染实验结果显示,miR-21促进细胞增殖、侵袭及迁移。Western blotting实验结果显示,转染miR-21 mimics抑制TET1蛋白表达,转染miR-21 inhibitor促进TET1蛋白表达。结论 miR-21通过靶向调控TET1促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移。     

七氟醚通过上调miR-34a抑制结直肠癌细胞的迁移和侵袭的机制研究

目的研究七氟醚对人结直肠癌HCT116细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制.方法以细胞计数法(CCK-8)检测七氟醚对HCT116细胞增殖能力的影响;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-34a表达水平, Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白免疫吸附法(Western blot)检测细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平.结果通过CCK-8实验筛选出七氟醚的作用浓度为4%.以4%七氟醚处理HCT116细胞4h后miR-34a表达水平升高了79%.转染miR-34a inhibitor后,细胞中miR-34a的表达水平下降了81%.七氟醚干预后迁移细胞数由(97.75±16.10)降低到(36.60±8.58),侵袭细胞数由(64.22±6.25)降低到(26.48±3.10),MMP-2蛋白表达水平由(0.68±0.11)下调到(0.24±0.04), MMP-9蛋白表达水平由(0.48±0.07)下调到(0.13±0.02);而抑制miR-34a的表达后,迁移细胞数由(40.15±9.02)提高到(88.65±12.74),侵袭细胞数由(26.12±3.02)提高到(59.24±4.68),MMP-2蛋白表达水平由(0.22±0.03)上调到(0.61±0.09),M M P-9蛋白表达水平由(0.14±0.03)上调到(0.43±0.06).结论七氟醚通过上调miR-34a的表达抑制人结直肠癌HCT116细胞的迁移和侵袭,可能与下调MMP-2和MMP-9蛋白表达有关.     

miR-152靶向下调DNMT1表达对宫颈癌细胞株Siha侵袭转移的影响北大核心CSCD

目的研究miR-152靶向下调DNA甲基化转移酶1(DNMT1)表达对宫颈癌细胞株Siha侵袭转移的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-152在宫颈癌细胞株Siha及人正常宫颈上皮细胞HUCEC中的表达水平;体外培养Siha细胞,随机分为对照组、miR-152 mimics阴性对照组、miR-152 mimics组,分组转染后采用CCK-8试验检测细胞增殖情况,采用Transwell侵袭试验和细胞划痕试验检测细胞侵袭转移情况,采用qRT-PCR检测miR-152及DNMT1 mRNA水平,采用Western blot检测DNMT1和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果与HUCEC细胞相比,miR-152在Siha细胞中[(0.43±0.08)比(1.02±0.25)]表达水平明显下降(P<0.05);与对照组相比,miR-152 mimics组细胞miR-152[(2.61±0.47)比(1.00±0.21)]和E-cadherin表达水平[(0.85±0.16)比(0.42±0.07)]显著升高(均P<0.05),相对生存率[(45.53±10.15)%比(100)%]、迁移细胞数[(28.86±4.91)个比(387.75±56.43)个]、侵袭细胞数[(108.54±19.53)个比(273.68±47.36)个]、DNMT1 mRNA[(0.46±0.09)比(1.01±0.23)]及DNMT1[(0.28±0.05)比(1.01±0.22)]和Vimentin蛋白表达[(0.12±0.03)比(0.94±0.15)]水平均显著降低(均P<0.05)。miR-152 mimics阴性对照组细胞各指标均无显著变化(均P>0.05)。结论 miR-152在宫颈癌细胞株Siha中低表达,上调其表达可下调DNMT1表达,抑制癌细胞的增殖,降低癌细胞的侵袭转移能力。     

miR-152靶向下调DNMT1表达对宫颈癌细胞株Siha侵袭转移的影响

目的研究miR-152靶向下调DNA甲基化转移酶1(DNMT1)表达对宫颈癌细胞株Siha侵袭转移的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-152在宫颈癌细胞株Siha及人正常宫颈上皮细胞HUCEC中的表达水平;体外培养Siha细胞,随机分为对照组、miR-152 mimics阴性对照组、miR-152 mimics组,分组转染后采用CCK-8试验检测细胞增殖情况,采用Transwell侵袭试验和细胞划痕试验检测细胞侵袭转移情况,采用qRT-PCR检测miR-152及DNMT1 mRNA水平,采用Western blot检测DNMT1和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果与HUCEC细胞相比,miR-152在Siha细胞中[(0.43±0.08)比(1.02±0.25)]表达水平明显下降(P0.05);与对照组相比,miR-152 mimics组细胞miR-152[(2.61±0.47)比(1.00±0.21)]和E-cadherin表达水平[(0.85±0.16)比(0.42±0.07)]显著升高(均P0.05),相对生存率[(45.53±10.15)%比(100)%]、迁移细胞数[(28.86±4.91)个比(387.75±56.43)个]、侵袭细胞数[(108.54±19.53)个比(273.68±47.36)个]、DNMT1 mRNA[(0.46±0.09)比(1.01±0.23)]及DNMT1[(0.28±0.05)比(1.01±0.22)]和Vimentin蛋白表达[(0.12±0.03)比(0.94±0.15)]水平均显著降低(均P0.05)。miR-152 mimics阴性对照组细胞各指标均无显著变化(均P0.05)。结论 miR-152在宫颈癌细胞株Siha中低表达,上调其表达可下调DNMT1表达,抑制癌细胞的增殖,降低癌细胞的侵袭转移能力。     

长链非编码RNA CASC2通过靶基因miR-514b-5p调控结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移的作用机制

目的探讨肿瘤易感候选基因(CASC)2对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞SW480中CASC2和miR-514b-5p的表达水平;将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-CASC2组(转染pcDNA-CASC2 mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-CASC2组(转染si-CASC2)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-514b-5p组(转染anti-miR-514b-5p)、pcDNA-CASC2+miR-NC组(共转染pcDNA-CASC2 mimics和miR-NC)、pcDNA-CASC2+miR-514b-5p组(共转染pcDNA-CASC2 mimics和miR-514b-5p)、WT-CASC2+miR-NC组(共转染WT-CASC2和miR-NC)、WT-CASC2+miR-514b-5p组(共转染WT-CASC2和miR-514b-5p mimics)、MUT-CASC2+miR-NC组(共转染MUT-UCA1和miR-NC)、MUT-CASC2+miR-514b-5p组(共转染MUT-CASC2和miR-514b-5p mimics)均用脂质体法转染至SW480细胞;采用细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测荧光活性。结果结直肠癌SW480细胞于正常结肠黏膜上皮细胞NCM460、CASC2的表达水平显著降低,miR-514b-5p的表达水平显著升高(P0.05);过表达CASC2、抑制表达miR-514b-5p均可抑制SW480细胞增殖、迁移和侵袭;CASC2可靶向调控miR-514b-5p的表达。miR-514b-5p过表达可部分逆转CASC2过表达对结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论长链非编码RNA CASC2可抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向miR-514b-5p基因有关,将可为结直肠癌的预防和治疗提供新靶点。     

miR-520f-3p靶向LAMA3对结直肠癌细胞增殖、迁移的影响

目的 探讨miR-520f-3p靶向层黏连蛋白(LAMA)3对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测病理组织样本、正常结直肠细胞FHC及CRC细胞SW480、LOVO、HCT116、HT29中miR-520f-3p表达;Western印迹检测病理组织样本中LAMA3蛋白表达。将对数生长期的LOVO细胞分为对照组、inhibitor NC组、miR-520f-3p inhibitor组、mimics NC组、miR-520f-3p mimics组、miR-520f-3p mimics+pcDNA组、miR-520f-3p mimics+pcDNA-LAMA3组;qRT-PCR检测各组细胞中miR-520f-3p表达;CCK-8法检测各组细胞增殖;划痕实验检测各组细胞迁移;Western印迹检测各组细胞中LAMA3、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达;荧光素酶报告基因实验检测miR-520f-3p与LAMA3的靶向关系;采用裸鼠皮下注射上述LOVO细胞以构建裸鼠体内...     

LncRNA SOX21-AS1靶向调控miR-202-5p影响结直肠癌细胞生物学行为的实验研究

背景:长链非编码RNA(lncRNA)可通过调控miRNA的表达来参与肿瘤发生、发展过程,但lncRNA在结直肠癌发展和转移中的分子机制尚未阐明。目的:探讨lncRNA SOX21-AS1通过调控微小RNA-202-5p(miR-202-5p)的表达影响结直肠癌细胞生物学过程的分子机制。方法:以SOX21-AS1小分子干扰RNA(si-SOX21-AS1)、miR-202-5p模拟物及其抑制剂转染结直肠癌HCT116、SW480细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株SOX21-AS1、miR-202-5p mRNA表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况,双萤光素酶报告实验检测SOX21-AS1与miR-202-5p的靶向调控关系,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白1(cyclin D1)、MMP-2、cleaved caspase-3蛋白表达。结果:结直肠癌细胞中SOX21-AS1 mRNA表达显著高于人正常结肠黏膜上皮细胞(P 0. 05),miR-202-5p mRNA表达显著降低(P 0. 05)。沉默SOX21-AS1或上调miR-202-5p表达可显著抑制HCT116、SW480细胞增殖、迁移和侵袭,细胞凋亡率显著增加(P 0. 05),并可抑制cyclin D1、MMP-2蛋白表达(P 0. 05),促进cleaved caspase-3蛋白表达(P 0. 05)。SOX21-AS1可靶向结合miR-202-5p,并可负向调控miR-202-5p的表达和活性;抑制miR-202-5p表达可逆转沉默SOX21-AS1对结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:沉默SOX21-AS1表达可通过上调miR-202-5p的表达从而抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,并可诱导细胞凋亡。     

miR-199对结直肠癌细胞增殖、侵袭的影响及机制

目的 探讨微小RNA-199(miR-199)对结直肠癌细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制。方法 常规培养人正常结肠上皮细胞系（HCoEpiC细胞）、结直肠癌细胞系（LOVE、SW620、SW480、HT29、DLD-1细胞），用实时定量PCR法检测细胞中miR-199表达。将SW620细胞随机分为miR-199过表达组、阴性对照组及miR-199+转铁蛋白受体1(TFR1)共表达组（miR-199mimics+TFR1组），分别将miR-199mimics、mimic-NC、miR-199mimics+TFR1过表达质粒转染至细胞内；另取部分未转染细胞作为空白对照组。实时荧光定量PCR法检测TFR1 mRNA表达，MTT实验检测细胞增殖能力，Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力，Western blotting法检测TFR1蛋白表达，生物学软件TargetScan及双荧光素酶报告基因实验分析miR-199的靶基因。结果 人结直肠癌细胞系中miR-199相对表达量均低于人结肠上皮细胞系（P均<0.05），且SW620细胞中miR-199相对表达量最低，故选SW620细胞为实验...     

CTHRC1对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的观察胶原三股螺旋重复蛋白(CTHRC)1对结直肠癌HT29细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测结直肠癌组织中CTHRC1的表达情况。采用电穿孔转染法,将pc DNA3.1-CTHRC1和CTHRC1 si RNA转染HT29细胞中,通过克隆形成实验检测CTHRC1对HT29细胞增殖的影响;通过伤口愈合实验和Boyden小室检测CTHRC1对HT29细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和免疫组织化学检测显示,CTHRC1在结直肠癌组织中的表达显著高于正常对照组织。增殖、迁移和侵袭实验结果显示,对照组、转染CTHRC1和转染CTHRC1 si RNA的结直肠癌HT29细胞克隆形成数分别为(147.34±15.86)、(234.17±27.86)和(66.03±8.95);伤口宽度百分比分别为(1.00±0.00)、(0.37±0.12)和(1.48±0.35);发生侵袭的细胞数分别为(201.24±33.54)、(415.36±45.63)和(96.13±15.46);转染CTHRC1可显著促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;而转染si-CTHRC1可显著抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论 CTHRC1可明显增加HT29细胞增殖、迁移和侵袭能力,这可能是CTHRC1参与结直肠癌发生发展的机制。     

miR-219a-5p通过调控NEK6基因表达抑制视网膜母细胞瘤增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨miR-219a-5p对视网膜母细胞瘤(RB)增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法 qRT-PCR检测人RB细胞Y79与正常人视网膜血管内皮细胞ACBRI-181中miR-219a-5p和NEK6 mRNA的表达,Western印迹检测NEK6蛋白表达。分别转染miR-219a-5p mimics和si-NEK6至Y79细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western印迹检测周期蛋白依赖性激酶(CDK)1、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-219a-5p和NEK6的靶向关系。结果 Y79细胞中miR-219a-5p低表达,NEK6 mRNA和蛋白高表达。miR-219a-5p过表达或抑制NEK6表达可抑制Y79细胞增殖、迁移和侵袭,下调Y79细胞CDK1、Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达。miR-219a-5p在Y79细胞中靶向负调控NEK6表达,NEK6过表达可逆转miR-219a-5p过表达对Y79细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-219a-5p调控NEK6表达抑制Y79细胞的增殖、迁移和侵袭能力,是治疗RB的新靶点。     

miR-485-5p靶向CKS1B对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-485-5p对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-485-5p在人永生化鼻咽上皮细胞系NP69和人鼻咽癌细胞系CNE2中的表达情况;将体外培养的CNE2细胞分为Con组(正常培养)、NC组(转染mimics阴性对照)和mimics组(转染miR-485-5p mimics),实时荧光定量PCR测定miR-485-5p表达,噻唑蓝法、Transwell小室、流式细胞术分别检测细胞增殖活性、侵袭和迁移、凋亡,免疫印迹法检测细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白和CDC28蛋白激酶调节亚基(CKS)1B蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-485-5p和CKS1B靶向关系。结果 与NP69细胞比较,miR-485-5p在CNE2细胞中的表达水平明显降低(P<0.05)。与Con组、NC组比较,mimics组细胞中miR-485-5p表达水平、细胞凋亡率和E-钙黏蛋白表达水平均明显升高,而增殖活力、侵袭与迁移能力和N-钙黏蛋白、波形蛋白、CKS1B蛋白表...     

大黄酸通过miR-29c-3p调节FSCN1的表达影响胃癌细胞的生物学行为

目的 探讨大黄酸(Rhein)对人胃癌细胞(SGC-7901)增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其机制.方法 通过qRT-PCR检测大黄酸处理后细胞中miR-29c-3p的表达以及miR-29c-3p的转染效率;miR-29c-3p mimics组、NC mimics组、Rhein+miR-29c-3p inhibitor...     

RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及STAT3信号通路的影响

目的探讨RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭及信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法 Western blotting法检测人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞及正常结肠NCM460细胞中CST1的蛋白表达。以Lipofectamine~(TM) 2000为载体,将设计合成的CST1的特异性siRNA及阴性对照siRNA转染HCT116细胞(si-CST1组和NC组),并设置空白对照组。转染48 h,MTT法检测细胞活力,Transwell小室检测穿膜细胞数,Western blotting法检测STAT3、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的蛋白表达。结果人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞中CST1蛋白的表达均显著高于正常结肠NCM460细胞(P0.05)。si-CST1组HCT116细胞中CST1蛋白的表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,si-CST1组细胞活力和侵袭能力显著降低,p-STAT3、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白的表达显著降低(P0.05)。结论 RNA干扰CST1基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭,其机制可能与下调STAT3信号通路有关。     

miR-138-5p通过靶向SETD6基因调控Raf/MEK/ERK通路抑制肝癌细胞迁移、侵袭的分子机制

目的探究miR-138-5p通过靶向赖氨酸甲基转移酶(SETD6)基因调控Raf/MEK/细胞外信号调节激酶(ERK)通路抑制肝癌细胞迁移、侵袭的分子机制。方法qRT-PCR、Western印迹检测正常肝细胞L02、肝癌细胞HepG2、Hep3b、HuH-7细胞中miR-138-5p、SETD6的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力,Western印迹检测转染后Hep3b细胞中CyclinD1、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达水平,双荧光素酶报告实验及Western印迹检测miR-138-5p与SETD6的联系。结果与人正常肝细胞L02比较,肝癌细胞HepG2、Hep3b、HuH-7中miR-138-5p的表达水平显著降低,SETD6水平显著升高(P<0.05),选择Hep3b细胞进行后续实验;与NC、miR-con组比较,miR-138-5p mimics组miR-138-5p的表达水平显著升高,细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、SETD6、CyclinD1、MMP-2水平显著降低(P<0.05);与NC、si-con组比较,si-SETD6组中SETD6蛋白水平显著降低,细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、CyclinD1、MMP-2水平显著减少(P<0.05);TargetScan生物信息学软件预测显示,miR-138-5p与SETD63'UTR存在结合位点,双荧光素酶报告实验显示,miR-138-5p与SETD63'UTR区域特异性结合,Western印迹进一步检测显示miR-138-5p与SETD6直接结合负向调控SETD6的表达;与miR-138-5p+pcDNA组比较,过表达SETD6后,miR-138-5p+pcDNA-SETD6组细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、SETD6、CyclinD1、MMP-2蛋白水平显著升高(P<0.05);与miR-con组比较,过表达miR-138-5p后,miR-138-5p组Raf、p-MEK、p-ERK蛋白水平显著降低,与miR-138-5p+pcDNA组比较,过表达SETD6后,miR-138-5p+pcDNA-SETD6组Raf、p-MEK、p-ERK蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移受到miR-138-5p及SETD6的双重调控,miR-138-5p可能通过调节SETD6的表达调控Raf/MEK/ERK通路进而调节肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移,可为肝癌患者分子靶向治疗研究提供思路。     

基于IL-6/STAT3信号通路探讨miR-34a-5p过表达对溃疡性结肠炎的影响及小檗碱的干预作用

目的 基于白细胞介素6(IL-6)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路探讨微小RNA-34a-5p(miR-34a-5p)过表达对溃疡性结肠炎（UC）的影响及小檗碱（BBR）的干预作用。方法 体外传代培养人结肠癌HT-29细胞。取传3代、对数生长期、生长状态良好的HT-29细胞,随机分为空白对照组、NC mimics组、miR-34a-5p mimics组,NC mimics组和miR-34a-5p mimics组分别转染NC mimics、miR-34a-5p mimics,空白对照组不予转染。转染6 h更换新鲜培养基继续培养48 h,收集细胞,采用RT-qPCR法验证转染效率。收集三组转染后细胞,采用CCK-8法检测细胞活力;分离三组培养上清液,采用ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α含量;收集三组转染后细胞,分别采用RT-qPCR法、Western blotting法检测IL-6、STAT3 mRNA和蛋白表达。取HT-29细胞,加入LPS刺激48 h,建立UC细胞模型。取UC细胞,分别加入0、2.5、5、10、20、40、80、160、320μg/mL ...     

miR-130a调控肿瘤抑制因子对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的通过检测miR-130a的表达情况及miR-130a与肿瘤抑制因子(CYLD)的靶向关系,探讨miR-130a是否可通过调控CYLD对结直肠癌SW480细胞生物学行为产生影响。方法将结直肠癌SW480细胞设置为对照组、阴性转染组、miR-130a inhibitor组,采用qRT-PCR检测各组miR-130a的表达; MTT法、Transwell法、流式细胞术分别检测各组SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况;双荧光素酶报告基因检测miR-130a与CYLD靶向关系; Western blot检测各组细胞CYLD、增殖、凋亡、侵袭迁移相关蛋白表达情况。结果与对照组相比,miR-130a inhibitor组的miR-130a表达水平显著降低(P 0.05)。与对照组相比,miR-130a inhibitor组SW480细胞凋亡率显著增加,而存活率、侵袭迁移数显著降低(P 0.05)。与对照组相比,miR-130a inhibitor组c-Myc、CyclinD1、MMP7、Bcl-2表达水平显著降低,Bax、Caspase-3、CYLD表达水平显著增加(P 0.05)。靶基因预测结果显示,CYLD是miR-130a的潜在目标基因,与pmirGLO-CYLD-wt+miR-NC组相比,pmirGLO-CYLD-wt+miR-130a mimics组荧光素酶活性显著降低。结论 miR-130a表达沉默可能通过促进CYLD表达抑制SW480细胞的增殖、侵袭、迁移,促进细胞凋亡。     

基于AKT信号通路探讨替吉奥对大肠癌细胞株增殖、迁移和侵袭的影响

目的 基于蛋白激酶B(AKT)信号通路探讨替吉奥对大肠癌细胞株增殖、迁移和侵袭的影响。方法 体外培养大肠癌细胞株HT-29细胞,设置对照组(HT-29细胞)、20μg/ml替吉奥组(HT-29细胞+20μg/ml替吉奥)、50μg/ml替吉奥组(HT-29细胞+50μg/ml替吉奥)和100μg/ml替吉奥组(HT-29细胞+100μg/ml替吉奥)。CCK-8法检测HT-29细胞增殖情况;Transwell法检测HT-29细胞迁移、侵袭情况;Western印迹法检测HT-29细胞中AKT、磷酸化(p)-AKT、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、p-PI3K、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达情况。结果 与对照组相比,20、50、100μg/ml替吉奥组HT-29细胞OD450值、迁移细胞数、侵袭细胞数、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K、PCNA、MMP-9蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);随着替吉奥浓度升高,HT-29细胞OD450值、迁移细胞数、侵袭细胞数、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K、PCNA、MMP-9蛋白表达水平...