凋亡相关蛋白酶Caspase-10在早期妊娠丢失患者蜕膜组织中的表达研究

目的分析凋亡相关蛋白酶Caspase-10在早期妊娠丢失（EPL）患者蜕膜组织中的表达情况。方法通过生物信息学方法预测EPL患者蜕膜组织中差异表达miRNAs的相关靶基因,对其进行基因功能富集（GO）分析及靶基因信号转导通路富集（KEGG）分析。采用Westernblot和免疫组化实验检测EPL患者（EPL组,20例）与正常早孕要求终止妊娠行人工流产者（对照组,20例）的蜕膜组织Caspase-10的表达情况。结果3个下调差异表达miRNAs（miR-378a-3p、miR-422a、miR-378a-5p）同时靶向凋亡相关蛋白酶Caspase-10。EPL组患者蜕膜组织Caspase-10蛋白表达水平高于对照组（P＜0.05）。EPL组患者蜕膜组织Caspase-10在蜕膜细胞、腺上皮和腔上皮细胞中强阳性表达,而在对照组中弱阳性表达,并且主要表达在细胞的胞质中。EPL组患者蜕膜组织Caspase-10表达强度较对照组高（P＜0.05）。结论凋亡相关蛋白酶Caspase-10在EPL患者蜕膜组织中的表达上调,Caspase-10或参与EPL发生、发展。     

β-catenin和YAP通路在Klotho蛋白调节硫酸吲哚酚诱导巨噬细胞极化中的作用

目的探讨茁-连环蛋白（茁-catenin）和Yes相关蛋白（YAP）在Klotho蛋白调节硫酸吲哚酚（IS）诱导巨噬细胞极化中的作用。方法THP-1细胞经丙二醇甲醚醋酸酯处理诱导成THP-1源巨噬细胞,构建Klotho过表达质粒,转染THP-1源巨噬细胞并分为4组。（1）对照组：转染未经处理的pIRES2-ZsGreen1质粒;（2）对照+IS组：转染未经处理的pIRES2-ZsGreen1质粒,并予IS（2mmol/L）干预;（3）过表达组：转染构建的Klotho过表达质粒;（4）过表达+IS组：转染Klotho过表达质粒并予IS（2mmol/L）干预。4组细胞采用流式细胞术检测M1极化标志物HLA-DR和M2极化标志物CD206,qRT-PCR法检测茁-catenin和YAPmRNA表达水平,Westernblot法检测β-catenin、YAP和磷酸化YAP（p-YAP）蛋白表达水平,细胞免疫荧光染色法检测茁-catenin、YAP入核率。结果与对照组比较,对照+IS组HLA-DR标记的阳性细胞百分比明显增加（P＜0.01）,CD206标记的阳性细胞百分比无明显变化（P＞0.05）;与对照+IS组比较,过表达+IS组HLA-DR标记的阳性细胞百分比明显减少（P＜0.01）,而CD206标记的阳性细胞百分比明显增加（P＜0.01）。与对照组比较,对照+IS组茁-cateninmRNA及蛋白表达水平均明显降低,入核率明显下降（均P＜0.01）;而与对照+IS组比较,过表达+IS组茁-cateninmRNA及蛋白表达水平均升高,入核率增加（均P＜0.05）。与对照组比较,对照+IS组YAP蛋白表达水平明显升高,p-YAP蛋白表达水平明显降低,YAP入核率增加（均P＜0.01）;与对照+IS组比较,过表达+IS组YAP蛋白表达水平明显降低（P＜0.01）,p-YAP蛋白表达水平升高（P＜0.05）。结论Klotho可通过茁-catenin通路抑制IS诱导的巨噬细胞极化。     

过氧化物还原酶3在胚胎停育患者绒毛及蜕膜组织中的表达变化

目的探讨过氧化物还原酶3（PRX3）在胚胎停育患者绒毛及蜕膜组织中的表达变化。方法选取因胚胎停育实施人工流产的患者60例作为胚胎停育组,同期因意外怀孕要求终止妊娠的非胚胎停育患者60例作为对照组。人工流产术后,均无菌操作留取两组患者的绒毛及蜕膜组织。采用实时定量PCR法检测绒毛及蜕膜中PRX3mRNA表达水平。采用Westernblot法检测绒毛及蜕膜中PRX3蛋白表达水平。结果胚胎停育组患者绒毛及蜕膜组织中PRX3mRNA和蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论胚胎停育患者存在氧化应激状态,PRX3在绒毛及蜕膜组织中具有重要的抗氧化功能。     

白细胞介素-23在急性肝损伤模型中调控Kupffer细胞M1型极化的作用机制

目的探讨IL-23在急性肝损伤模型中调控Kupffer细胞M1型极化的作用机制。方法体外培养Kupffer细胞,用佛波酯（PMA）、脂多糖（LPS）和重组人IFN-酌诱导其M1型极化,将Kupffer细胞分为IL-23+anti-IL-23组、IL-23组、对照组;采用流式细胞术检测M1型细胞比例,采用ELISA法检测一氧化氮合酶（iNOS）、TNF-α、IL-6的水平,采用Westernblot法检测JAK1、p-JAK1、STAT1及p-STAT1蛋白表达水平。将小鼠分为anti-IL-23组、IL-23组、模型组、对照组,采用四氯化碳诱导小鼠肝损伤;采用ELISA法检测小鼠肝脏组织中iNOS、TNF-琢、IL-6的水平,免疫组织化学染色检测CD11c+的表达情况,HE染色观察小鼠肝脏病理改变,Westernblot法检测小鼠肝脏组织中JAK1、p-JAK1、STAT1及p-STAT1蛋白表达水平。结果IL-23组中M1型细胞的比例为（12.05±1.32）%,而IL-23+anti-IL-23组中M1细胞的比例为（7.55±1.08）%,对照组中M1型细胞的比例为（8.32±1.32）%,IL-23组明显高于对照组（P＜0.05）。IL-23组中iNOS、TNF-α、IL-6水平均明显高于对照组（均P＜0.05）,而IL-23+anti-IL-23组中iNOS、TNF-琢、IL-6水平均明显低于IL-23组（均P＜0.05）。IL-23组中JAK1、p-JAK1、STAT1以及p-STAT1蛋白表达水平均明显高于对照组（P＜0.05）;而IL-23+anti-IL-23组JAK1、p-JAK1、STAT1以及p-STAT1蛋白表达水平均明显低于IL-23组（P＜0.05）。对照组小鼠iNOS、TNF-α、IL-6水平较其余3组均为低（均P＜0.05）;而模型组iNOS、TNF-α、IL-6水平较IL-23组、anti-IL-23组均为低（P＜0.05）。对照组小鼠肝组织中未见CD11c+的表达,而模型组小鼠CD11c+表达明显,IL-23组小鼠CD11c+的表达较模型组增高。对照组小鼠肝组织无明显损伤或细胞炎症反应;而模型组小鼠肝组织出现明显的炎症反应和细胞损伤;IL-23组小鼠肝组织损伤较模型组明显;而anti-IL-23组小鼠肝组织损伤较IL-23组减轻。与对照组比较,IL-23组、模型组小鼠JAK1、p-JAK1、STAT1及p-STAT1蛋白表达水平较明显升高（均P＜0.05）;anti-IL-23组、IL-23组JAK1、p-JAK1、STAT1及p-STAT1蛋白表达水平与模型组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论IL-23可以促进Kupffer细胞M1型极化,在急性肝损伤患者中发挥促炎作用。     

糖尿病肾病患者单核细胞趋化蛋白-1与小管间质损害关系的研究

目的探讨局部单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达和分泌与人糖尿病肾病(DN)病变的关系.方法采用免疫组化和原位杂交检测人DN肾组织MCP-1蛋白和mRNA表达,并用免疫组化检测CD68;尿液和血清MCP-1水平测定采用ELISA法.结果DN肾小管间质MCP-1表达明显增高(P＜0.01),小管间质病变越重,MCP-1表达越高(P＜0.01).DN肾小管间质CD68表达明显增高(P＜0.01),小管间质病变间差异明显(P＜0.01).DN肾小球MCP-1、CD68表达较正常对照明显增高(P＜0.05).DN尿液MCP-1水平明显较正常对照组增高(P＜0.01),与间质纤维化密切相关,且与临床蛋白尿程度呈正相关.结论DN患者肾组织内MCP-1表达与肾病变发生发展密切相关,尤其与肾小管间质病变的形成有关,这可能与MCP-1具有强烈趋化和激活单核/巨噬细胞而致肾小管间质损害有关,尿液MCP-1水平可能是反映肾小管间质病变程度的最佳指标之一.     

外周血单核细胞COX-2表达与MPA形成和冠心病的关系研究

目的观察冠心病患者外周血单核细胞环氧化酶-2（COX-2）表达和单核细胞-血小板聚集物（MPA）水平,探讨COX-2与MPA形成和冠心病的关系。方法测定66例冠心病患者和30例健康体检者外周全血细胞计数、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、血清单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和MPA形成水平,采用密度梯度离心法分离外周血单核细胞,Westernblot法检测细胞COX-2表达水平,分析COX-2表达与MPA的相关性,并采用logistic回归分析COX-2与冠心病风险关系。结果冠心病组hs-CRP、MCP-1、WBC和中性粒细胞-淋巴细胞比值（NLR）水平均高于对照组（均P＜0.01）;不稳定型心绞痛组hs-CRP、MCP-1、WBC和NLR水平以及MPA和COX-2表达均高于稳定型心绞痛组（均P＜0.01）。COX-2表达水平与MPA、MCP-1、NLR和hs-CRP均呈正相关（r=0.703、0.631、0.603、0.532,均P＜0.01）。COX-2水平升高的冠心病患者MPA高于COX-2水平正常者,MPA水平升高者COX-2表达水平高于MPA水平正常患者（P＜0.01）。多因素回归分析显示,COX-2和MPA均为冠心病的独立危险因素（OR=6.322、5.877,95%CI：4.544~8.978、4.122~7.991,均P＜0.01）。结论冠心病患者外周血单核细胞COX-2水平增高与MPA形成有关,COX-2可作为冠心病的风险指标。     

SOCS3诱导反复自然流产患者蜕膜及绒毛组织Th1/Th2转换的作用

[目的]探讨细胞因子信号转导负调控因子(SOCS3)诱导反复自然流产(RSA)患者蜕膜及绒毛组织Th1/Th2转换的作用.[方法]采用ELISA方法检测27例RSA患者蜕膜及绒毛组织Th1细胞因子(IL-2、IFN-γ)和Th2细胞因子(IL-4、IL-10)的表达水平,采用流式细胞仪检测蜕膜及绒毛组织中Th1和Th2细胞水平及其比率,采用western-blot方法检测蜕膜及绒毛组织SOCS3蛋白表达水平,同时与30例正常妊娠行人工流产者比较.[结果]RSA组患者蜕膜及绒毛组织中IL-2、IFN-γ表达水平明显高于对照组(P＜0.05),而RSA组患者蜕膜及绒毛组织中IL-4、IL-10表达水平明显低于正常对照组(P＜ 0.05);RSA组患者蜕膜及绒毛组织中Th1细胞水平及Th1/Th2比率明显高于对照组(P＜0.05),而Th2细胞水平明显低于对照组(P＜ 0.05);RSA组患者蜕膜及绒毛组织中SOCS3蛋白表达水平明显低于对照组(P＜0.05).[结论]RSA患者蜕膜及绒毛组织中SOCS3蛋白表达过低可诱导Th1/Th2失衡,使得Th1细胞介导的免疫损伤作用占主导地位,最终导致RSA发生.     

Notch1干扰对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织中细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨缺口受体-1（Notch1）干扰对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠肺组织中细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法18只SPF级雄性大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组和干扰组,每组6只。制备COPD大鼠模型。造模前1天干扰组大鼠尾静脉注射1mLNotch1干扰腺病毒（3×109pfu/mL）,对照组和模型组注射等体积0.9%氯化钠注射液。HE染色观察大鼠肺组织病理形态变化并测定半定量评分;测定肺血管壁厚度;Tunel染色检测肺组织中细胞凋亡情况;使用活性氧（ROS）检测试剂盒测定肺组织ROS水平;采用Westernblot法测定肺组织Notch1、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3蛋白表达。结果与模型组相比,干扰组大鼠肺组织半定量评分显著下降（P＜0.01）,管壁厚度占外径的百分比和管壁面积占血管总面积的百分比均显著降低（均P＜0.01）,Tunel染色阳性细胞凋亡率显著下降（P＜0.01）,肺组织中ROS水平显著降低（P＜0.01）,Notch1和Caspase-3蛋白表达灰度值均显著降低（均P＜0.01）,Bcl-2蛋白表达灰度值显著升高（P＜0.01）。结论Notch1干扰可减少COPD大鼠肺组织的细胞凋亡,下调ROS水平,下调Notch1和Caspase-3蛋白表达及上调Bcl-2蛋白表达。     

基质金属蛋白酶及其抑制物在胎盘粘连发生中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶（MMP）-9、MMP-2及基质金属蛋白酶抑制物（TIMP）-1、TIMP-2在胎盘粘连发生中的作用。方法选择孕足月胎盘粘连产妇23例作为胎盘粘连组,其中9例分娩后即刻取蜕膜组织作为蜕膜粘连组;芷常足月分娩产妇28仍j作为正常胎盘组,其中1i例分娩后即刻取蜕膜组织作为正常蜕膜组。采用免疫组化PicTmeTM二步法分别梭测4缉产妇MMP-9、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2蛋白的表达水平;免疫组化结果采用彩色图像分析软件定量分析。结果①胎盘粘连组与正常胎盘组相比,MMP-9蛋白表达水平明显高于正常眙盘组,TIMP-1蛋白表达水平低于正常胎盘组,差异有统计学意义（PMMP-9〈0．05,PTIMP-1〈0．05）。②蜕膜粘连组较之正常蜕膜组相比,MNP-9蛋白表达的水平无统计学差异（P〉0．05）,TIMP-1蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。③胎盘粘连组与正常胎盘组相比,MMP-2蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义（PMMP-2〈0．05）,TIMP-2蛋白表达无统计学差异（PTIMP-2〉0．05）。④蜕膜粘连组较之正常蜕膜组相比,MMP-2表达水平无统计学差异（P〉0．05）,TIMP-2表达水平明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论母胎界面MMP和TIMP比例失衡导致子宫细胞外基质降解增加造成胎盘粘连。在胎盘界面以MMPs升高为主要机制,而在蜕膜界面则以TIMPs降低不能有效抑制MMPs的降解作用而导致胎盘粘连。     

z-DEVD-fmk对甲基苯丙胺依赖大鼠脑海马组织caspase-3活性及其蛋白表达的影响

目的：观察z-DEVD-fmk（caspase-3抑制剂）对甲基苯丙胺（methamphetamine,MA）依赖大鼠海马组织caspase-3活性及其蛋白表达的影响.方法：选取健康Wistar大鼠40只,随机分为空白对照组、MA依赖组、MA＋ z-DEVD-fmk干预组和z-DEVD-fmk组,各10只.参考文献建立MA依赖大鼠实验动物模型,经侧脑室注射z-DEVD-fmk干预治疗,采用酶标仪法检测caspase-3活性,采用免疫组化法检测Caspase-3蛋白的表达.结果：与空白对照组比较,MA依赖组和MA ＋z-DEVD-fmk干预组海马组织caspase-3活性明显升高（P＜0.01）,Caspase-3蛋白表达增多（P＜0.01）;与MA依赖组比较,Ma＋ z-DEVD-fmk干预组caspase-3活性明显降低（P＜0.05）,Caspase-3蛋白表达减少（P＜0.05）.结论：z-DEVD-fmk能够抑制MA依赖大鼠海马组织caspase-3活性,降低Caspase-3蛋白表达,z-DEVD-fmk具有干预与保护MA致大鼠脑组织损伤作用.     

芳香烃受体与原因不明自然流产关系的初步研究

目的 初步探讨早孕蜕膜和绒毛组织中芳香烃受体(AhR)的表达及其与原因不明自然流产的关系.方法 采用Real-Time PCR和Western blotting技术检测34例原因不明自然流产患者(流产组)蜕膜和绒毛组织中AhR的mRNA和蛋白表达水平;以38例正常孕早期妇女作为对照(对照组).结果 对照组和流产组绒毛组织AhR mRNA和蛋白表达水平均高于蜕膜组织(P＜0.01,P＜0.05);流产组蜕膜组织中AhR mRNA和蛋白表达均高于对照组(P＜0.01,P＜0.05);流产组绒毛组织中AhRmRNA和蛋白表达均高于对照组(P＜0.01,P＜0.05).结论 早孕绒毛组织中AhR mRNA和蛋白的表达水平均明显高于蜕膜组织,其表达上调可能与原因不明自然流产的发生和发展有关.     

增生性玻璃体视网膜病变组织中的单核细胞趋化因子-1的意义

目的：增生性玻璃体视网膜病变（PVR）是多种细胞和细胞因子参与的一种眼内创伤修复反应。单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）对巨噬细胞和淋巴细胞有特异趋化作用。本研究目的在于了解视网膜脱离后不同时期的组织中MCP-1的表达与巨噬细胞和淋巴细胞的关系。方法：选用视网膜手术取材标本,包括孔源性视网膜脱离的视网膜下液中的细胞成份,B级PVR玻璃体手术集取物以及PVR C/D的视网膜增殖膜,免疫组化法检测其中MCP-1,CD68和CD3表达状态。结果：视网膜下液中细胞成份MCP-1的表达均为阴性或弱阳性,B级PVR手术集取物以及增殖膜中,MCP-1表达阳性程度随PVR等级的升高而逐渐增高。CD68阳性细胞（巨噬细胞）与CD3阳性细胞（T-淋巴细胞）的比例随PVR病变程度的增加而降低。结论：MCP-1对视网膜脱离后的愈合过程和PVR增殖膜的形成有调节作用。     

ALCAM沉默对新生大鼠坏死性小肠结肠炎的保护作用研究

目的研究活化白细胞黏附分子（ALCAM）沉默对坏死性小肠结肠炎（NEC）的影响及作用机制。方法24只雄性SD新生大鼠按随机数字表法分为对照组、NEC组、沉默阴性对照组、ALCAM沉默组,每组6只。NEC组、沉默阴性对照组和ALCAM沉默组分别尾静脉注射0.9%氯化钠注射液、阴性对照腺相关病毒载体和ALCAM腺相关病毒载体;除对照组外,各组大鼠采用人工饲养与缺氧复氧和冷刺激诱导以建立NEC模型。采用ELISA法测定各组大鼠血清IL-1β、IL-6水平,采用HE染色法、Tunel染色法评价肠组织病理改变和细胞凋亡情况,采用免疫组化染色法测定CD166表达率,采用qRT-PCR法检测肠组织ALCAM的mRNA相对表达量,采用Westernblot法检测肠组织ALCAM、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、β-连环蛋白（β-catenin）相对表达量。结果与对照组比较,NEC组大鼠血清IL-1β、IL-6水平升高,肠组织病理改变明显,细胞凋亡率增加,CD166表达率升高,肠组织ALCAM的mRNA及蛋白、β-catenin蛋白相对表达量升高,E-cadherin蛋白相对表达量降低,差异均有统计学意义（均P＜0.01）。与沉默阴性对照组比较,ALCAM沉默组新生大鼠血清IL-1β、IL-6水平降低,肠组织病理改变减轻,细胞凋亡减少,CD166表达率降低,肠组织ALCAM的mRNA及E-cadherin蛋白相对表达量升高,ALCAM蛋白、β-catenin蛋白相对表达量降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论沉默ALCAM表达对NEC新生大鼠的肠道损伤具有保护作用,其作用与炎性细胞因子水平下降、E-cadherin/β-catenin通路蛋白表达改变有关。     

miR-140靶向PD-L1在小鼠脓毒症免疫抑制中的作用

【摘要】 目的 探讨miR-140靶向PD-L1在小鼠脓毒症免疫抑制中的作用。 方法 取90只小鼠随机分成对照组（Control组）、脓毒症模型组（CLP组）和CLP+miR 140组，每组30只。盲肠结扎穿孔法（CLP法）建立小鼠脓毒症模型，尾静脉注射转染miR-140 agomir，记录30天生存率，ELISA法检测血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素2（IL-2）表达，流式细胞术检测血清CD4+T和CD8+T细胞百分率，提取腹膜巨噬细胞，流式细胞术分析PD L1阳性百分率，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-140和PD-L1基因表达，蛋白印迹（Western blot）检测PD-L1蛋白表达，荧光素酶报告实验检测miR-140和PD-L1靶向作用关系。 结果 与control组相比，CLP组在1 、7、14 d的TNF α、IL-2水平升高（P＜0.01），而TNF-α、IL-2水平呈时间依赖性降低（P＜0.05）；CLP组较control组小鼠生存率降低（P＜0.01），CD4+和CD8+细胞百分比升高（P＜0.01），巨噬细胞PD-L1阳性细胞率升高（P＜0.01），miR-140表达水平降低（P＜001），PD-L1基因和蛋白表达水平升高（P＜0.01）；与CLP组比较，CLP+miR-140组小鼠生存率升高（P＜0.01），CD4+和CD8+细胞百分比升高（P＜0.01），巨噬细胞PD-L1阳性细胞率下降（P＜0.01），miR-140表达水平升高（P＜0.01），PD-L1基因和蛋白表达水平降低（P＜0.01）；荧光素酶报告实验结果显示miR-140和PD-L1存在靶向作用关系。 结论 miR-140可靶向作用于PD-L1，从而改善小鼠脓毒症引起的免疫抑制。     

麝香注射液对急性脑梗死患者血单核细胞趋化蛋白-1水平及中性粒细胞CD11b/CD18表达的影响

目的  探讨麝香注射液对急性脑梗死炎症反应及临床疗效的影响。方法  46例急性脑梗死患者随机分为2组,对照组23例,采用常规药物治疗;麝香组23例,采用麝香注射液加常规药物治疗。动态观察患者急性期、病程第6天、12天时的血清单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattactant protein-1,MCP-1)水平、周围血中性粒细胞（polymorphnuclear,PMN）表面黏附分子CD11b/CD18表达以及临床疗效,并与23名健康人比较。结果  两组急性期患者血清MCP-1水平及PMN-CD11b/CD18表达显著升高(P＜0.01)。第6天时麝香组血清MCP 1降至健康组水平（P＞0.05）;对照组有所下降但仍高于健康组(P＜0.05),第12天测得值与健康组相当（P＞0.05）。两组CD11b/CD18表达于第6天呈现峰水平,第12天时显著回落(P＜0.01),麝香组达健康组水平（P＞0.05）,对照组仍高于健康组水平(P＜0.05);治疗30d时,麝香组显效、治愈率高于对照组(χ2＝4.29,P＜0.05)。结论  麝香注射液对脑梗死炎症反应具有抑制作用,并通过这种作用,提高了疗效。     

复发性流产患者MIF、TLR4的表达及其临床意义

【摘要】目的 探讨复发性流产患者巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、Toll样受体4（TLR4）的表达及其临床意义。方法 选取2016年3月~2018年3月西安交通大学第二附属医院收治的复发性流产患者48例设为复流组，选取同期48例人工流产的正常妊娠妇女设为对照组，采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白 过氧化物酶连接法检测蜕膜组织中MIF、TLR4表达水平，采用酶联免疫吸附法检测血清MIF水平，比较两组MIF、TLR4水平。结果 对照组蜕膜组织的病理HE染色可见结构清晰、完整，复流组蜕膜组织结构水肿、变性、缺损、炎性细胞浸润及滋养细胞增生、变性、坏死；蜕膜组织和血清中MIF水平明显低于对照组，复流组蜕膜组织TLR4水平明显高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；Pearson相关性分析结果显示，蜕膜组织和血清中MIF与TLR4水平呈负相关（P＜0.05）。结论 复发性流产可能导致了蜕膜组织和血清MIF、TLR4的异常表达，MIF、TLR4在复发性流产发病中可能存在相互影响作用，提示MIF低表达和TLR4高表达可能可作为评估复发性流产发生的重要参考指标。     

Ghrelin 对妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化的影响

目的：探讨Ghrelin对妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化的影响。方法实验将子宫基质细胞分为3组,每组6孔：（1）对照组（只加培养基）;（2）Ghrelin组（细胞培养液中加入100 ng／mL重组Ghrelin细胞因子）;（3）Gh－relin抗体组（细胞培养液中加入30μg／mL Ghrelin抗体）。通过RT－PCR和免疫组织化学技术,观察Ghrelin及其受体在妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化过程中的表达变化;通过子宫基质细胞的分离、培养及宫角注射技术,观察Ghre－lin在离体及在体状态下对妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化的影响。结果（1）RT－PCR显示：随着妊娠期和蜕膜化的进展,Ghrelin mRNA表达水平明显升高,至妊娠第8天,其表达水平达到最高。（2）在妊娠第5天,GHS－R蛋白主要表达于腔上皮、腺上皮及胚胎植入位点的蜕膜。至妊娠第6天,其表达水平进一步升高,主要表达于胚胎周围的蜕膜。至妊娠第8天,蜕膜中GHS－R蛋白的表达水平渐进下降。（3）与对照组相比,Ghrelin组子宫基质细胞HoxA10蛋白的表达水平明显升高（P＜0．01）,而Ghrelin抗体组子宫基质细胞HoxA10蛋白的表达水平明显下降（P＜0．01）。（4）与对照组相比,重组Ghrelin对胚胎植入位点没有明显的影响（P＞0．05）,却明显增加的子宫重量（P＜0．05）;对于Ghrelin抗体组,能明显抑制胚胎植入位点,且妊娠子宫重量的明显下降（P＜0．01）。结论Ghrelin具有明显促进妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化的作用。     

TGF-茁1诱导胃癌细胞上皮间质转化与CD133表达研究

目的研究转化生长因子-茁1（TGF-茁1）促进胃癌侵袭能力,诱导胃癌MKN-45细胞发生上皮间质转化（EMT）的机制及其与PI3K/Akt信号通路调控肿瘤起始细胞标志物CD133表达的关系。方法设空白对照,应用TGF-茁1处理MKN-45细胞(TGF-茁1处理组),观察其对细胞形态学的影响;Transwell检测细胞侵袭能力的改变;RT-PCR及Westernblot检测细胞EMT相关因子Snail、E-cadherin、N-cadherin、p-Akt及CD133的表达水平;PI3K特异性抑制剂LY294002预处理后再应用TGF-茁1处理细胞（TGF-茁1+LY294002处理组）,检测p-Akt与CD133表达水平的变化;免疫磁珠分选CD133+与CD133-亚群细胞,检测CD133+组与CD133-组细胞EMT相关因子的表达差异。结果TGF-茁1处理72h后,TGF-茁1处理组细胞由上皮形态转化为间质形态。TGF-茁1处理组Snail、N-cadherinmRNA、蛋白表达水平均高于对照组（均P＜0.05）;而E-cadherinmRNA、蛋白表达水平均低于对照组（均P＜0.05）;Transwell检测发现TGF-茁1处理组穿膜细胞数高于对照组（P＜0.05）;TGF-茁1处理组p-Akt蛋白与CD133mRNA、蛋白表达水平均高于对照组（均P＜0.05）;TGF-茁1+LY294002处理组p-Akt蛋白与CD133mRNA、蛋白表达水平均低于TGF-茁1处理组（均P＜0.05）。CD133+组Snail、N-cadherinmRNA、蛋白表达水平均高于CD133-组（均P＜0.05）,而E-cadherinmRNA、蛋白表达水平均低于CD133-组（均P＜0.05）。结论TGF-茁1诱导胃癌细胞发生EMT,并通过PI3K/Akt信号通路调控CD133表达从而增强胃癌MKN-45细胞的侵袭能力。     

姜黄素调控miR-134对癫痫海马突触重塑的实验研究

目的探讨姜黄素通过调控miR-134发挥神经保护及潜在抗癫痫作用的机制。方法按照随机数字表法将48只大鼠分为对照组、癫痫组和姜黄素组3组,每组16只。除对照组外,其余两组采用氯化锂-匹罗卡品诱导制备癫痫持续状态大鼠模型。造模后第2天开始,姜黄素组大鼠每天固定时间腹腔注射2mL/kg姜黄素,而癫痫组和对照组每天固定时间腹腔注射等量二甲基亚砜溶液,持续10d。在造模后第14天,通过颈椎脱臼法处死3组大鼠,采用Timm染色观察大鼠海马组织中苔藓纤维出芽程度,qRT-PCR法检测大鼠海马组织及血清中miR-134表达水平,Westernblot法检测大鼠海马组织中LIM激酶1（LIMK1）蛋白表达水平。结果与对照组比较,癫痫组大鼠齿状回和CA3区苔藓纤维出芽程度评分均升高（均P＜0.05）;与癫痫组比较,姜黄素组大鼠齿状回和CA3区苔藓纤维出芽程度评分均降低（均P＜0.05）。与对照组比较,癫痫组大鼠海马组织中miR-134表达水平升高（P＜0.05）,LIMK1蛋白表达水平下降（P＜0.05）;与癫痫组比较,姜黄素组大鼠海马组织中miR-134表达水平下降（P＜0.05）,LIMK1蛋白表达水平升高（P＜0.05）。与对照组比较,癫痫组和姜黄素组大鼠血清中miR-134表达水平均下降（均P＜0.05）。结论姜黄素可抑制癫痫持续状态大鼠海马组织中miR-134表达,上调LIMK1蛋白表达水平,影响突触重塑,可能因此发挥神经保护及潜在的抗癫痫作用。     

ATP合酶在糖尿病大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞病变中的作用机制

目的探讨三磷酸腺苷（ATP）合酶在糖尿病大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞病变中的作用机制。方法体内实验：40只SD大鼠随机分为正常对照组与糖尿病组（按60mg/kg腹腔内注射链脲佐菌素后72h、1周、2周随机血糖水平＞16.7mmol/L为造模成功）,饲养10周后比较大鼠阴茎勃起功能;处死后取阴茎海绵体组织,采用胶原纤维染色法检测纤维化程度,免疫组化法检测Caspase-3表达,Westernblot法检测F1-ATPase蛋白表达。体外实验：取正常大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞进行细胞培养,分为对照组（正常培养基培养）、高糖组（含30mmol/L葡萄糖的培养基培养）、高糖+ATP酶过表达组（ATPase高表达质粒转染阴茎海绵体平滑肌细胞24h后,再用含30mmol/L葡萄糖的培养基培养）。48h后采用Westernblot法检测F1-ATPase、转化生长因子茁1（TGF-茁1）、结缔组织生长因子（CTGF）蛋白表达。结果在体内实验中,与正常对照组比较,糖尿病组30min内阴茎勃起次数明显减少（P＜0.05）,阴茎海绵体胶原纤维/肌纤维比例明显增加（P＜0.05）,Caspase-3阳性的平滑肌细胞比例明显升高（P＜0.05）,阴茎海绵体F1-ATPase蛋白表达明显降低（P＜0.05）。在体外实验中,与高糖组比较,高糖+ATP酶过表达组F1-ATPase蛋白水平较高糖组明显升高（P＜0.05）,CTGF、TGF-茁1蛋白表达明显降低（P＜0.05）。结论高糖状态会导致阴茎海绵体纤维化,促进阴茎海绵体平滑肌细胞凋亡。通过线粒体ATP酶的上调,可以抑制TGF-茁1途径,改善阴茎海绵体平滑肌纤维化程度,恢复平滑肌的功能,促使阴茎勃起功能得到改善。