N-乙酰基转移酶活性测定方法综述

N-乙酰基转移酶（N-acetyltransferase,NAT）是人体最为重要的Ⅱ相药物代谢酶,在体内药物代谢和毒物解毒方面具有重要作用。NAT的活性存在明显的种族和个体差异,其活性强弱可直接影响药物疗效和毒性反应。NAT活性测定可用于评估人体经乙酰化代谢药物的体内处置和代谢程度。通过查阅文献和相关资料,本文系统归纳了NAT的活性测定方法并对特点和优势进行了总结,可为NAT活性评估提供方法学参考,为基于NAT活性的临床个体化用药提供依据。     

猪苓多糖通过JAK2-STAT3通路抑制N-甲基-N''-硝基-N-亚硝基诱导的GES-1细胞上皮间充质转化

目的 研究猪苓多糖抑制胃黏膜上皮细胞（GES-1）间充质转化的作用和机制。方法 应用N-甲基-N''-硝基-N-亚硝基（MNNG，40 μmol·L^-1）诱导GES-1细胞间充质转化模型，造模同时给予猪苓多糖（1.25、2.50、5.00、10.00 mg·mL^-1）处理24、48 h后，CCK-8法检测细胞增殖能力；造模同时给予猪苓多糖（5.00 mg·mL^-1）处理48 h后，实时定量PCR（qRT-PCR）法检测猪苓多糖对N-cadherin、Snail、Twist、Fibronection及Vmention mRNA表达的影响；Western blotting法检测E-cadherin、N-cadherin、Snail、Twist、Fibronetin、Vimentin、STAT3、p-STAT3、JAK2、p-JAK2蛋白表达。裸鼠分别sc经MNNG 40 μmol·L^-1处理48 h后的GES-1细胞（5×10⁷·mL^-1 ，0.2 mL）、胃癌细胞SGC7901（5×10⁷·mL^-1 ，0.2 mL ，阳性对照），1个月后观察各组成瘤及体质量情况，注射局部进行HE染色后行组织病理学观察，验证GES-1细胞经MNNG处理后是否达到肿瘤阶段。结果 与模型组比较，随猪苓多糖浓度的增加，GES-1细胞增殖能力逐渐上升，到达5 mg·mL^-1时增殖能力最高，差异显著（P<0.01、0.001）；猪苓多糖组N-cadherin、Snail、Twist、Fironetion及Vimentin的mRNA表达均显著下降（P<0.05、0.01、0.001）；猪苓多糖组E-cadherin蛋白表达显著上升（P<0.05），N-cadherin、Snail、Twist、Fibronetion、Vimentin及通路蛋白STAT3、p-STAT3、JAK2、p-JAK2表达显著下降（P<0.05、0.01、0.001）。对照组和MNNG处理的GES-1组未见瘤体形成，阳性对照SGC7901组注射后1周左右局部出现瘤体，1个月瘤体长至6 cm左右；MNNG处理的GES-1组裸鼠精神较差，体质量明显减轻，SGC7901组裸鼠状态差，体质量大幅减轻；对照组和MNNG组病理染色显示为正常的皮肤组织，阳性对照组显示为肿瘤组织。结论 猪苓多糖可能通过抑制JAK2-STAT3通路干预MNNG诱导的GES-1细胞上皮间充质化。     

N-(4-取代氨基-4-氧代丁酰基)-N-取代甘氨酸的合成

血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)是近年发展的一类新型抗高血压和治疗心力衰竭的有效药物。有关研究工作还在世界范围内广泛进行。 本研究组前曾报道一类具有降压活性的N-取代甘氨酸的合成。作者等根据Cushman等的血管紧张素转化酶(ACE)与底物的作用模型和构效关系,在保持3个主要作用部分(即ACE     

脑室注射N-甲基-D-门冬氨酸对小鼠学习记忆的影响

采用一次性被动回避性条件反射方法,给小鼠icv N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)10,1和0.1 ng。结果表明:对正常小鼠,在跳台法中NMDA 10 ng能明显增强记忆巩固过程,在避暗法中NMDA 1 ng能显著增强记忆再现过程;在两种方法中,NMDA 1 ng均能显著改善乙醇及亚硝酸钠所致记忆障碍;而NMDA对记忆获得过程无影响。进一步研究表明,NMDA改善记忆的作用可被其受体特异性拮抗剂AP5所拮抗。结合以前报道和电生理研究结果提示,谷氨酸受体NMDA亚型在记忆过程中起着重要的作用,脑室给药作用的环节主要是影响记忆巩固和再现过程。     

N-硬脂酰酪氨酸的理化性质研究

目的 表征N-硬脂酰酪氨酸及其盐的理化常数和血浆蛋白结合率。方法 采用摇瓶法及HPLC-UV法测定N-硬脂酰酪氨酸及其盐在不同介质和pH值下的溶解度、表观脂水分配系数,采用平衡透析法测定血浆蛋白结合率。结果 N-硬脂酰酪氨酸盐的溶解度和血浆蛋白结合率明显优于其原型药物;N-硬脂酰酪氨酸的溶解度为（27.62±0.43）mg/L,其二钾盐的溶解度为（51.70±0.29）mg/L;N-硬脂酰酪氨酸及其二钾盐的血浆蛋白结合率分别为20.96%～23.11%、35.41%～40.38%。结论 N-硬脂酰酪氨酸成盐后其理化性质得到明显改善。     

N-乙酰基-L-谷氨酰基-泼尼松龙肾靶向前体药物研究

目的通过研究N-乙酰基-L-谷氨酰基-泼尼松龙的体内分布，考察该前体药物的肾靶向性。方法小鼠iv后，采用高效液相法，在规定时间段测定各组织脏器的泼尼松龙浓度, 并采用大鼠骨密度的测定仪确证前体药物的副作用。结果小鼠给药后15 min，前体药物组肾脏中泼尼松龙浓度为(86±8) μg·g^-1，泼尼松龙组为(57±4) μg·g^-1，60 min后前体药物组肾脏药物浓度为 (67±5) μg·g^-1；泼尼松龙组(42±4) μg·g^-1。大鼠给药30 d后，股骨的骨密度分别为(0.08±0.03) g·cm^-2 （泼尼松龙）和(0.14±0.06) g·cm^-2(前体药物组)。结论前体药物具有肾靶向性, 并能降低致骨质疏松的副作用。     

N-肉豆蔻酰基转移酶——抗真菌药物作用新靶点

目前抗真菌药物主要针对羊毛甾醇14α去甲基化酶(唑类抗真菌药物)[1]、真菌细胞膜脂质(多烯类抗真菌抗生素)[2]和真菌细胞壁β1,3葡聚糖合成酶(脂肽类抗真菌药物)[3]这3个靶酶,但所研发的药物均存在一定的局限性,如抗菌谱窄、耐药性严重、生物利用度低、毒副作用较强等问题[4～     

N-(4-甲氧羰基-4-邻苯二甲酰亚氨基丁酰基)-N-取代甘氨酸、脯氨酸和焦谷氨酸的合成

报道11个预期有血管紧张素转化酶抑制活性的N-(4-甲氧羰基-4-邻苯二甲酰亚氨基丁酰基)-N-取代甘氨酸(VII_1～9)、脯氨酸(VII₁₀)和焦谷氨酸(VIl₁₁)的合成和鉴定。所有上述化合物以及与VⅡ_1～9相应的叔丁酯(VI_1～9)均未见文献报道。药理初试结果显示，化合物VII₈，VII₉和VI₁₀均有明显降压活性。     

LC-MS/MS测定中成药中非法添加物N-乙基他达拉非

目的 建立LC-MS/MS定性及定量测定中成药中非法添加N-乙基他达拉非。方法 采用DAD检测器进行初步定性筛查,用质谱检测器进行定性确证,再用DAD检测器进行定量。初筛及定量选用SHISEIDO C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以流动相A[磷酸三乙胺溶液（取三乙胺7 mL,用水稀释至1 000 mL,用磷酸调pH至2.8）-甲醇-乙腈（60：20：20）]与流动相B[磷酸三乙胺溶液（取三乙胺7 mL,用水稀释至1 000 mL,用磷酸调pH至2.8）-甲醇-乙腈（8：46：46）]梯度洗脱,体积流量1 mL·min^-1,检测波长230 nm;确证选用Dikma Spursil C₁₈柱（150 mm×2.1 mm,3 μm）,以甲醇-乙腈-含0.1%冰乙酸的0.02 mol·L^-1乙酸铵溶液（30：25：45）等度洗脱,体积流量0.2 mL·min^-1。结果 N-乙基他达拉非质量浓度在0.003~0.3 mg·mL^-1内与峰面积有良好线性关系,平均回收率为97.8%,RSD为0.7%（n=9）;通过对30批次壮阳类中成药进行测定,其中2批检测结果为阳性,含量分别为4.8,4.1 mg·g^-1。结论 该方法快速、准确、灵敏度高,可作为分析检测壮阳类中成药中非法添加N-乙基他达拉非的有效方法。     

“质量源于设计”在制备N-乙酰半胱氨酸注射液中的应用

目的 基于质量源于设计（quality by design,QbD）理念优化N-乙酰半胱氨酸（NAC）注射液的处方及制备工艺。方法 以QbD理念为核心,通过查阅文献获得关键质量属性（critical quality attributes,CQAs）,采用鱼骨图结合失效模式与效应分析法（failure mode and effects analysis,FMEA）筛选影响注射液质量的关键工艺参数（critical process parameters,CPPs）,使用Minitab软件进行试验设计,建立设计空间。结果 以灭菌前后pH值变化量,以主药含量为评价指标,通过鱼骨图结合FEMA确定了依地酸钙钠添加量、配液温度和灭菌条件为影响实验结果的关键工艺参数,方差分析结果显示建立的工艺参数与评价指标的数学模型P值均小于0.05,表明预测能力较好,得到的最佳参数为：依地酸钙钠添加量0.049 192%,最佳配液温度60℃,灭菌条件116℃,40 min。结论 基于QbD理念设计的NAC注射液处方合理,工艺参数稳定,建立的设计空间提高了工艺的耐用性,保证了制剂质量的均一可控。     

N-乙酰半胱氨酸预防亚硒酸钠诱导大鼠白内障的研究

目的 对亚硒酸钠诱导白内障大鼠采用N-乙酰半胱氨酸进行预防性治疗,探讨N-乙酰半胱氨酸对白内障大鼠模型氧化损伤和晶状体浑浊程度的影响。方法 30只SD乳鼠随机分为3组,模型组ip 3.46 mg/kg亚硒酸钠溶液造模后,ip 0.1 mL/10 g生理盐水;实验组ip N-乙酰半胱氨酸10 mg/g,30 min ip亚硒酸钠溶液造模;对照组ip 0.1 mL/10 g生理盐水。所有动物均为隔日注射,连续6次。比较大鼠晶状体浑浊程度和SOD活性、NOS活性和MDA水平。结果 在晶状体核区、后囊区、前囊区+后囊区、前囊区+皮质区+核区+后囊区中,实验组与模型组比较得分差异具有统计学意义（P<0.05）;实验组SOD活性和MDA活性与模型组比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 N-乙酰半胱氨酸能够预防后囊和核区白内障的发生,其作用是通过减少MDA水平、提高SOD活性、改善氧化应激实现的。     

蝙蝠葛中的新生物碱——N-去甲基蝙蝠葛碱

A new phenolic dauricine-type alkaloid together with the know dauricine, were iso-lated from the rhizoma of Menispermum dauricum DC cultivated in Xianning district, Hubei province.Dauricine was obtained as the major alkaloid and was confirmed by comparison with authentic sample.The new alkaloid is an unstable white powder. Based on spectrometric analysis (UV, IR, FAB--MSand ¹HNMR) and N-methylation which offered clauricine dimethiodide(Ⅴ), the structure was elucidat-ed as RR, N-desmethyldauricine(Ⅱ), which was isolated for the first time from nature.     

氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片和原代神经元缺糖/缺氧和N-甲基-D-天冬氨酸损伤的保护作用

目的观察氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片和原代神经元的缺糖/缺氧(OGD)和N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)损伤的潜在保护作用及其机制。方法海马脑片OGD以无葡萄糖的人工脑脊液中通95% N₂+5% CO₂诱导。通过测定TTC染色后形成的红色产物来分析脑片活性。结果氟哌啶醇(1和10 μmol·L^-1)抑制OGD损伤,抑制率分别为17.7%和25%,而D₂多巴胺受体拮抗剂多潘立酮无此作用。NMDA也能显著降低海马脑片及原代神经元的活性,而氟哌啶醇可抑制这一损伤作用。结论氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片OGD和原代神经元NMDA损伤有保护作用。     

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定基因工程人细胞生成素的N-连接糖谱

目的建立重组人红细胞生成素（EPO）中影响体内生物学活性的含唾液酸和去唾液酸的N-连接糖的糖谱。方法用肽糖苷酶F释放EPO中与天冬酰胺连接的寡糖，再用唾液酸酶脱去糖末端的唾液酸，采用荧光试剂APTS标记后，以毛细管凝胶电泳-激光诱导荧光法分离和检测糖的各种形态。结果EPO样品含有大致相同的N-连接糖谱；去唾液酸后的N-连接糖组分的保留时间延长；体内生物学活性不同的样品，其N-连接糖也有差异。结论此法可用于判断EPO产品的来源及批间差异，与肽图相结合可作为EPO的指纹鉴别图谱，用于 EPO的常规质检。     

中成药中非法添加物N-苄基他达拉非的结构确证

目的 鉴定中成药中一种新型他达拉非类似物。方法 采用HPLC-DAD初筛和制备液相色谱仪对中成药中非法添加物进行分离和纯化，采用高分辨质谱确定其精确分子量和结构碎片，结合碳谱和氢谱，最终确定该添加物的结构。结果 该添加物为N-苄基他达拉非。结论 N-苄基他达拉非的化学结构已有文献报道，但作为一种非法的中成药添加物首次被检出。     

丁基苯酞对氯化钾及 N-甲基-D-门冬氨酸诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的保护作用

用原代培养大鼠皮质神经细胞的方法,观察l-丁基苯酞(l-NBP)和d-丁基苯酞(d-NBP)对KCl及N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的保护作用。结果表明:l-NBP和d-NBP能剂量依赖性地抑制NMDA诱导的大鼠皮质神经细胞内乳酸脱氢酶的释放,降低细胞死亡率,改善受损细胞的形态;此外l-NBP和d-NBP还能明显减轻KCl诱导的神经细胞损伤。提示:l-NBP和d-NBP对KCl及NMDA诱导的大鼠皮质神经细胞损伤有明显保护作用。     

HS-GC-MS/MS测定富马酸丙酚替诺福韦中微量的基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺

目的 采用顶空进样气相色谱三重四级杆质谱联用（HS-GC-MS/MS）法测定富马酸丙酚替诺福韦中微量的基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺（NDMA）。方法 采用三重四极杆GC-MS/MS，Agilent VF-WAX ms（30 m×0.25 mm，1 μm）色谱柱，载气：氦气；恒流模式1.0 mL·min^-1；程序升温，进样口温度230℃，顶空温度130℃；质谱采用电子轰击电离源（EI），电离能量为70 eV，离子源温度230℃，多反应监测（MRM）模式进行检测，溶剂为N-甲基吡咯烷酮（NMP）。进行专属性、系统适用性、检测限与定量限、线性与范围、准确度、精密度、溶液稳定性、耐用性考察。结果 NDMA与相邻色谱峰之间分离效果良好；NDMA在7.0～105.0 ng·mL^-1线性关系良好，检测限为3.5 ng·mL^-1，定量限为7.0 ng·mL^-1；NDMA低、中、高质量浓度（56、70、84 ng·mL^-1）回收率为95.6%～109.3%，RSD为4.0%（n=9）；重复性试验NDMA质量浓度RSD为6.5%，中间精密度RSD为6.1%；对照品溶液室温放置24 h稳定，供试品溶液室温放置90 h内溶液稳定；保持其他条件不变，分别改变进样口温度（230、225、235℃）、离子源温度（230、225、235℃）、载气体积流量（1.0、0.9、1.1 mL·min^-1）、顶空温度（130、128、132℃），方法耐用性良好。结论 所建立的方法准确度好、灵敏度高、简便可靠，对仪器污染小，可用于富马酸丙酚替诺福韦中NDMA的质量控制。     

温敏性吲哚美辛/β-环糊精包合物的制备及体外评价

目的合成兼具温敏性及药物包合能力的新型药物载体聚(N-异丙基丙烯酰胺)-β-环糊精(PNIPA-β-CD)，以吲哚美辛为模型药物，考察该载体的释药行为。方法末端带羧基的PNIPA与改性后的环糊精衍生物在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳二亚胺(EDC)的作用下缩合，得到PNIPA-β-CD，采用冻干法制备吲哚美辛/PNIPA-β-CD包合物。红外、¹H NMR和DSC表征载体的结构及包合物的形成；用分光光度法测定载体材料的LCST，并进行包合物体外释药研究。结果PNIPA-β-CD在35 ℃发生相转变，吲哚美辛/PNIPA-β-CD包合物的载药量为5.8％，药物与载体摩尔比为0.97∶1。体外释放研究表明吲哚美辛/PNIPA-β-CD包合物在37 ℃的释药比其在25 ℃的释放要慢，在LCST以上具有一定的缓释作用。结论该载体既具有温敏性，又具有药物包合作用，并且在体温条件下具有缓释作用，是一种新型的温敏性药物载体。     

N-(1-乙氧羰基-3-苯氨甲酰基丙基)甘氨酰甘氨酸衍生物的合成

报道4个N-(1-[1-乙氧羰基-3-(对甲)苯氨甲酰基]丙基甘氨酰｝-N-取代甘氨酸(XI_1～4)和5个1-[1-乙(或甲)氧羰基-3-(对甲)苯氨甲酰基]丙基-4-取代-1,4-哌嗪-2,5-二酮(XII_1～5)共9个估计有血管紧张素转化酶抑制活性化合物的合成和鉴定。所有这些化合物及9个相应的酯(X_1～9)均未见文献报道。药理初试结果,化合物XII₂,XII₅,XI₄和XII₁均有较强降压活性。