蓖麻毒素温敏型凝胶瘤内注射治疗耐药卵巢癌的实验研究

目的 探讨超声介导下蓖麻毒素缓释剂瘤体内注射对荷紫杉醇耐药人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤增殖的抑制作用.方法 采用开环聚合法合成聚乳酸羟基乙酸-聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸(PLGA-PEG-PLGA),并制成蓖麻毒素温敏型凝胶、紫杉醇凝胶.采用浓度梯度递增法建立人卵巢癌耐药细胞株A2780/PTX,建立荷紫杉醇耐药人卵巢癌细胞的...     

小干扰RNA抑制卵巢癌模型裸鼠移植瘤葡萄糖调节蛋白94的表达及意义

背景：一些实验在模型鼠移植瘤中葡萄糖调节蛋白94被敲除后,细胞黏附中断,刺激肝起源细胞增殖,进而促进肝肿瘤的发生,推测葡萄糖调节蛋白94在肝癌中起到保护作用。 目的：应用小干扰RNA技术抑制裸鼠卵巢癌模型皮下移植瘤内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白94的基因表达,探讨移植瘤中葡萄糖调节蛋白94基因及蛋白表达的变化对移植瘤生长的影响。 方法：从GeneBank中选取人类葡萄糖调节蛋白94基因序列,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6 的真核表达载体psiSTRIKETM/葡萄糖调节蛋白94。建立人卵巢癌HO-8910细胞株裸鼠皮下接种模型,并将真核表达载体转染入裸鼠移植瘤体内,观察肿瘤生长情况。卵巢癌裸鼠模型经过不同给药方案干预后分为特异性小干扰RNA组,非特异性小干扰RNA组和生理盐水对照组, RT-PCR和免疫组化SP法检测葡萄糖调节蛋白94 mRNA和蛋白在肿瘤内的表达情况,并观察模型裸鼠的移植瘤生长情况。 结果与结论：成功构建RNA干扰质粒载体,所有裸鼠模型均接种成功,5 d后即可见皮下肿瘤形成,14 d左右肿瘤直径达7-10 mm。转染质粒完毕后抑瘤率为65.1%,与非特异性小干扰RNA组和生理盐水对照组比较,差异有显著性意义(P < 0.01)。psiSTRIKETM/GRP94治疗后瘤体内葡萄糖调节蛋白94 mRNA和蛋白显著下调(P < 0.01)。说明靶向葡萄糖调节蛋白94 mRNA的小干扰RNA可显著抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能是诱导葡萄糖调节蛋白94 mRNA和蛋白表达下调所致。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

抗体靶向性和高增强分辨率的多重散射无花果式纳米造影剂的构建及验证

目的 在有限纳米尺寸内最大化增强超声造影剂成像对比度,同时,通过特异性靶向抗体修饰增强成像准确度。方法 构建以磷脂纳米囊泡为外壳,沿内壁负载中空自解离二氧化硅纳米粒子,表面修饰葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)特异性抗体的多重散射“无花果”式纳米造影剂,并在体内外模型中探究该纳米造影剂成像准确度和对比度。结果 体外脱气水指套模型成像结果显示,抗体靶向和非靶向的纳米造影剂成像效果相当,但二者的成像效果均优于声诺维(Sonovue);体内成像结果显示,抗体靶向的纳米造影剂成像效果优于非靶向造影剂,且二者均优于Sonovue。结论 抗体靶向的多重散射“无花果”式纳米造影剂兼具高靶向性和高增强分辨率特性。     

人胰腺癌PANC-1细胞裸鼠移植瘤模型建立及其用于观察载siRNA纳米微粒体内效应的研究

 目的：探讨建立人胰腺癌PANC-1裸鼠移植瘤模型的最佳实验方法,并应用该模型进行载基因纳米微粒体内效应的研究。方法：将不同数量PANC-1细胞悬液接种于BALB/c (nu/nu)小鼠右侧背部皮下,当肿瘤体积达100 mm3时尾静脉注射siRNACY5.5纳米复合物进行活体荧光成像。此外,于尾静脉注射负载siRNAKras纳米复合物,蛋白印迹及免疫组织化学染色法观察肿瘤组织Kras蛋白表达水平。结果：1×107 cells/300 μL 接种成瘤率达100%,成瘤时间＜2周。荧光呈像及组织学检查显示载siRNA纳米微粒可靶向聚集在肿瘤组织发挥体内基因沉默效应。结论:本研究报道的人胰腺癌裸鼠移植瘤模型建立方法成瘤率达100%,成瘤时间短,是研究药物示踪和观察疗效的理想模型。     

血清HE4和CA125联检在卵巢癌中的临床价值

本文应用化学发光免疫定量分析法对100名正常健康女性、66例卵巢癌患者和62例卵巢良性疾病患者进行血清HE4和CA125测定,旨在探讨人附睾分泌蛋白-4(HE4)和CA125联检在卵巢癌诊断中的临床应用价值和意义.     

lncRNA H19靶向miR-29b-3p对卵巢癌细胞运动和模型裸鼠生存能力的影响

目的探索长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA) H19对卵巢癌细胞运动及模型小鼠生存能力的影响。方法 RT-PCR检测H19和miR-29b-3p mRNA在不同癌组织、癌旁组织、正常卵巢上皮细胞及多种卵巢癌细胞中的表达差异。生物学信息预测两者的靶向关系并验证。检测体外培养细胞增殖、迁移、侵袭能力,移植瘤体内生长、裸鼠存活情况,及细胞凋亡和增殖相关蛋白表达。结果 H19和miR-29b-3p mRNA在不同癌组织、癌旁组织、正常卵巢上皮细胞及多种卵巢癌细胞中均存在差异表达。si-H19能显著逆转miR-29b-3p inhibitor对细胞增殖、Ki-67表达、划痕闭合率、侵袭细胞数及VEGF、MMP-2、MMP-9表达的影响。体内实验发现,si-H19能显著逆转miR-29b-3p inhibitor对移植瘤生长、荷瘤裸鼠存活率、细胞凋亡率、Ki-67和VEGF表达的影响。结论 H19通过靶向miR-29b-3p提高卵巢癌细胞运动能力,降低荷瘤裸鼠的生存能力。     

曲妥珠单抗联合吉西他滨对卵巢癌小鼠移植瘤生长及免疫功能的影响

目的:探讨曲妥珠单抗联合吉西他滨对卵巢癌小鼠移植瘤生长及免疫功能的影响。方法:将40只健康BALB/c裸小鼠随机分为4组:对照组、模型组、吉西他滨组和联合组,每组10只。除对照组外,其余三组利用人卵巢癌SKOV3细胞株建立卵巢癌裸鼠移植瘤模型。吉西他滨组给予吉西他滨治疗;联合组在吉西他滨组基础上,给予曲妥珠单抗治疗。连续治疗6周后,观察各组裸鼠质量、移植瘤体积,并计算抑瘤率;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组裸鼠治疗前后细胞中环氧合酶-2(Cox-2)蛋白表达情况,ELISA法检测各组裸鼠血清中IFN-γ及IL-4水平,并计算IFN-γ/IL-4比值。结果:吉西他滨组移植瘤的生长抑制率为(87. 40±9. 06)%,联合组移植瘤的生长抑制率为(94. 87±9. 59)%,联合用药对移植瘤生长的抑制作用更明显(P0. 05)。与模型组比较,吉西他滨组和联合组肿瘤细胞数目减少,较多散在的凋亡细胞核固缩,可见凋亡小体。对照组模型组血清中IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4水平分别为(101. 67±10. 45) pg/ml、(72. 14±9. 66) pg/ml、1. 40±0. 12;模型组血清中Cox-2表达、IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4水平分别为0. 69±0. 08、(41. 91±5. 06) pg/ml、(39. 52±2. 83) pg/ml、1. 05±0. 08,吉西他滨组和联合组血清中IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P0. 05)。吉西他滨组和联合组Cox-2蛋白表达均明显降低,血清中IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4水平均明显升高,且联合组变化趋势更明显,差异有统计学意义(P0. 05)。结论:曲妥珠单抗联合吉西他滨可有效抑制裸鼠移植瘤生长,机制可能与下调Cox-2蛋白表达有关,且联合治疗可改善裸鼠免疫功能,对卵巢癌裸鼠具有一定治疗效果。     

铕掺杂氧化钆纳米颗粒的核磁共振成像与荧光标记应用探究

目的制备双模态造影剂铕掺杂氧化钆（Gd2O3：Eu3＋）纳米颗粒,探究其应用于核磁共振成像（MRI）及荧光标记的可行性。方法通过液体环境激光烧蚀固体Gd203：Eun靶材,得到Gd2O3：Eu3＋胶体纳米颗粒,通过透射电镜观察该纳米材料形貌特征：S18细胞增殖MTF实验表征其生物毒性;3．0T磁共振成像系统观察其在体外和Balb／c裸鼠体内鼻咽癌S18裸鼠移植瘤的显像特点：荧光显微镜观察其在细胞内荧光标记效果。结果液体环境激光熔蚀技术制备的纳米颗粒分散性良好。平均粒径为7．2nm;材料生物毒性低;体外MRI成像呈明显梯度;将该材料尾静脉注射裸鼠后约30min．鼻咽癌S18裸鼠移植瘤信号强度逐渐增高;细胞与纳米颗粒共同培养4h后,荧光显微镜显示纳米颗粒被细胞吞噬并发出红色荧光。结论成功研制了分散性良好,生物毒性低的双模态造影剂Gd2O3：Eu3＋并将其应用与小鼠体内MRI成像和细胞荧光成像．得到了良好的成像效果,为结合MRI与荧光成像技术提供一种途径。     

IL-37联合CA125、HE4对上皮性卵巢癌的诊断价值

目的:探讨白细胞介素-37(interleukin-37,IL-37)联合糖类抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)、人附睾蛋白4(human epididymis protein 4,HE4)对上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)的诊断价值.方...     

曲古抑菌素A体内外杀伤卵巢癌细胞

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)在卵巢癌靶向治疗中的作用及机制.方法 以2种正常卵巢上皮细胞系IOSE-29和IOSE-329及3种卵巢癌细胞系ES-2、SKOV-3和OVCAR-8为研究对象,应用XTT法和流式细胞术检测TSA对卵巢癌细胞的抗增殖及诱导凋亡作用,并观察其体内疗效.结果 对比正常卵巢上皮,卵巢癌及其细胞系中HDAC6蛋白呈强阳性表达,其抑制剂TSA对ES-2,SKOV-3和OVCAR-8卵巢癌细胞系有明显杀伤作用,但正常卵巢上皮细胞对TSA不敏感,TSA处理组的卵巢癌细胞凋亡率和死亡率较未处理组高.体内实验表明:TSA处理组的ES-2裸鼠体内移植瘤生长速度较未处理组慢.结论 TSA可在体内外有效杀伤卵巢癌细胞,其机制部分是通过抑制HDAC6而实现的.     

siRNA特异沉默卵巢癌细胞CD59基因的裸鼠移植瘤研究

目的:通过体内动物实验研究CD59-siRNA对卵巢癌细胞CD59的沉默效应及抑瘤作用,探讨CD59在肿瘤免疫逃逸中的作用.方法:将转染CD59干扰质粒的A2780细胞(T组)、转染空质粒的A2780细胞(V组)及未转染的A2780细胞(C组)分别接种于裸鼠皮下,通过绘制肿瘤生长曲线,裸鼠移植瘤组织切片CD59 mRNA原位杂交及CD59蛋白的免疫组化研究其抑瘤效应及对CD59的沉默效应.结果:肿瘤生长曲线显示,与对照组相比,CD59干扰质粒转染组肿瘤生长明显受抑制(P<0.05).原位杂交及免疫组化结果表明,干扰组的CD59 mRNA及CD59蛋白与对照组相比显著降低(P<0.05).结论:裸鼠体内实验表明,特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体可以明显抑制CD59的表达,增加了卵巢癌细胞对补体攻击的敏感性,从而抑制卵巢癌在体内的生长,进一步说明了CD59在肿瘤免疫逃逸中的作用.     

超声造影剂在高强度聚焦超声治疗肝癌中的应用

高强度聚焦超声(high-intensityfocusedultrasound,HIFU)技术是将体外低能量的超声波汇聚于体内肿瘤靶区,通过高温效应、空化效应和机械效应,使肿瘤组织产生凝固性坏死,从而达到治疗肿瘤的目的。超声造影剂(ultrasoundcontrastagents)在HIFU治疗肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)中也有很大的应用价值。探讨了超声造影剂在HIFU治疗肝癌前定性、定位及治疗后疗效评定等方面的作用,尤其是造影剂在HIFU治疗过程中通过增强空化效应,改变声学环境从而提高HIFU治疗肝癌的生物学效应,使超声造影剂成为一种备受重视的HIFU增效剂。     

新型纳米造影剂和常规碘海醇造影剂用于肿瘤显像的对比研究

目的比较纳米氧化钨造影剂和碘海醇造影剂对模型肿瘤大鼠探测的可行性及效能。方法选取18只健康新西兰雄性大鼠,随机法分为3组,每组6只,即A组(普食对照组)、B组(炎性假瘤组)和C组(恶性肿瘤组)。分别于5、10、15周末注射氧化钨造影剂和碘海醇造影剂,并于注射后2.5 h行SPECT/CT显像。10、15周末显像前行血管内超声(IVUS)检查对照。采用配对t检验分析数据。结果在A组显像中,腹腔区域几乎无放射性浓聚;在B组显像中,纳米氧化钨造影剂组的放射性分布较碘海醇造影剂组略高;在C组纳米氧化钨造影剂明显高于碘海醇造影剂。结论纳米氧化钨造影剂和碘海醇造影剂均可用于早期肿瘤显像。纳米氧化钨造影剂可先于碘海醇造影剂探测到肿块,且可提供信噪比更高的图像,更有助于得到癌症的相关信息。     

99mTc-反义寡聚核苷酸DNA肿瘤显像的实验研究

拟探讨放射性标记反义寡聚核苷酸(Antisense oligonucleotide,ASON)DNA在荷瘤裸鼠体内显像的可行性。采用两种不同肿瘤细胞系KB-G2和KB-31,并肿瘤内注射的方法;设立ASON的对照正义寡聚核苷酸(Sense oligonucleotide,SON);用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定所用经MAG3偶联的寡聚核苷酸的杂交活性;完成99mTc-MAG3-ASON和99mTc-MAG3-SON DNA肿瘤内注射后在荷瘤裸鼠体内的显像及其生物分布研究。经MAG3偶联的寡聚核苷酸与天然寡聚核苷酸具有相同的杂交活性。在荷KB-G2瘤裸鼠肿瘤内,99mTc-MAG3-ASON DNA的分布明显高于其对照99mTc-MAG3-SON DNA的分布(14.7vs8.5%ID/g)。但在荷KB-31瘤裸鼠肿瘤内,两者的分布无显著性差异(8.6vs4.3%ID/g)。全身显像显示99mTc-MAG3-ASON DNA较其对照正义DNA寡聚核苷酸在荷KB-G2瘤裸鼠肿瘤内的靶向分布增高,但在荷KB-31瘤裸鼠肿瘤内的靶向分布则未见显著性差异。结果表明:99mTc-MAG3-ASON DNA较其对照正义DNA寡聚核苷酸在荷瘤裸鼠肿瘤内的分布有显著性统计学差异,本研究证实了活体动物体内肿瘤反义显像的可行性。     

HBV X siRNA与5-氮-2'-脱氧胞苷对裸鼠肝癌皮下移植瘤作用的研究

目的 目的 探讨靶向HBV X的siRNA(X-siRNA)和5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-dC)对HBV相关肝细胞癌生长的影响及可能机制.方法 设计合成X-siRNA及对照siRNA,用siRNA处理HepG2/GFP-HBx细胞,RT-PCR法测定处理细胞的HBV X基因表达;将HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx细胞接种于裸鼠皮下建立裸鼠肝癌皮下移植瘤,分别用X-siRNA、5-aza-dC单独或联合处理裸鼠并观察移植瘤生长;甲基化PCR测定移植瘤组织p16基因甲基化.结果 RT-PCR检测示X-siRNA处理的细胞HBV X mRNA水平明显降低;裸鼠体内实验显示HepG2/GFP-HBx组的皮下移植瘤体积明显大于HepG2/GFP组(P＜0.05);X-siRNA与5-aza-dC处理组移植瘤体积明显小于未处理组(P＜0.05);甲基化PCR检测示HepG2/GFP-HBx组移植瘤组织存在p16甲基化而HepG2/GFP组未检出p16甲基化;X-siRNA、5-aza-dC处理的移植瘤组织中p16基因甲基化减低.结论 X-siRNA及甲基化抑制剂可能通过逆转p16甲基化而能有效抑制肝细胞癌生长,具有潜在应用价值.     

白桦脂醇通过抑制PI3K / AKT 途径抑制宫颈癌小鼠移植瘤增殖

目的:阐明白桦脂醇对宫颈癌细胞系c4-1移植瘤模型裸鼠的影响和机制。方法:皮下注射宫颈癌细胞系c4-1建立异种移植瘤模型,将移植瘤BALB/c裸鼠模型随机分为3组:对照组(DMSO)、白桦脂醇低剂量组(Betulin 50)、白桦脂醇高剂量组(Betulin 200),进行后续使用。白桦脂醇治疗后,检测移植瘤体积和裸鼠存活率;免疫组化检测Ki67和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平; TUNEL实验检测移植瘤细胞凋亡情况; Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT通路蛋白表达情况和磷酸化情况。结果:与对照组(DMSO)相比较,白桦脂醇低剂量组(Betulin 50)、白桦脂醇高剂量组(Betulin 200)肿瘤体积明显减小(P0. 01),裸鼠存活率明显增加(P0. 01),Ki67和VEGF表达水平明显下降(P0. 01),且PI3K/AKT磷酸化水平明显被抑制(P0. 01)。结论:白桦脂醇能抑制c4-1移植瘤体积,增加移植瘤裸鼠存活率,下调Ki67和VEGF表达水平和PI3K/AKT磷酸化水平。白桦脂醇可能通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制宫颈癌细胞系c4-1移植瘤。     

RNAi沉默livin基因对裸鼠移植瘤生长及Ki67蛋白表达的影响

目的利用慢病毒携带的livin基因短发夹RNA(shRNA)干扰裸鼠移植瘤中Livin蛋白表达,探讨其对肺腺癌裸鼠移植瘤生长及Ki67蛋白表达的影响。方法建立肺腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,待移植瘤长至100mm3左右时,以携带livin基因shRNA慢病毒载体注入移植瘤,观察肿瘤生长情况。用免疫组织化学方法检测各组Livin蛋白、Ki67蛋白表达,分析二者相关性。结果 livin基因shRNA干预组与空白对照组和阴性载体对照组相比,瘤体生长减缓,移植瘤质量明显减小(P<0.01),Livin蛋白、Ki67蛋白的表达明显降低(P<0.01,P<0.01),且Livin蛋白与Ki67蛋白的表达呈正相关(r=0.54,P<0.01)。结论利用livin基因shRNA可抑制移植瘤生长,Livin蛋白表达明显降低,Ki67蛋白的表达也降低,两者呈显著正相关。     

HE4和CA125监测老年卵巢癌转归的价值.

探讨血清人附睾分泌蛋白4(HE4)和CA125在监测老年卵巢癌转归中的价值.选取年龄大于60岁、经手术和病理证实的卵巢癌患者75例、盆腔良性疾病患者73例、其它恶性肿瘤患者53例和健康人103名,采集血清进行HE4和CA125测定,并对其中12例老年卵巢癌患者的血清HE4和CA125水平进行17～32个月的随访研究,研...     

肝癌靶向载多烯紫杉醇聚多巴胺修饰琥珀酸酯-聚乳酸纳米粒子的研究

目的 建立一种简便的、具有肝癌靶向的聚多巴胺表面修饰聚合物纳米粒子以增加聚合物膜层和功能化的方法.方法 采用聚多巴胺修饰聚乙二醇1000-琥珀酸盐-聚乳酸纳米粒子(pD-TPGS-PLA/NPs),并用其包载多烯紫杉醇(DTX).为了达到靶向治疗肝癌的作用,再将半乳糖胺连接在pD-TPGS-PLA/NPs表面,从而通过配体-受体介导的作用提高DTX的递送效率.结果 聚多巴胺-琥珀酸酯-聚乳酸纳米粒子(pD-TPGS-PLA/NPs)和半乳糖胺-聚多巴胺-琥珀酸酯-聚乳酸纳米粒子(Gal-pD-TPGS-PLA/NPs)在粒径和形态学上与琥珀酸酯-聚乳酸纳米粒子(TPGS-PLA/NPs)有明显的不同.体外研究结果显示,TPGS-PLA/NPs、pD-TPGS-PLA/NPs和Gal-pD-TPGS-PLA/NPs对DTX有相似的释放行为.激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞仪结果显示,HepG2细胞对于包载香豆素-6的Gal-pD-TPGS-PLA/NPs有较高地细胞摄取效率.相比于TPGS-PLA/NPs、pD-TPGS-PLA/NPs和临床应用的DTX药物多西他赛,载DTX的Gal-pD-TPGS-PLMNPs对HepG2细胞的生长有更强的抑制能力.体内抗肿瘤研究结果显示,在荷瘤裸鼠上注射包载DTX的Gal-pD-TPGS-PLA/NPs能有效减小肿瘤尺寸.结论 Gal-pD-TPGS-PLA/NPs可通过配体-受体识别与肝癌细胞发生特有的相互作用,有望成为一种极具潜力的靶向治疗肝癌的药物递送系统.     

携双抗体纳米微泡对卵巢癌细胞增殖活性的影响

背景：免疫治疗可通过多种途径增强抗肿瘤免疫反应，联合免疫治疗是一个更好的选择。超声靶向微泡破坏技术可将药物、基因、抗体和细胞因子直接输送到免疫细胞的细胞质中，进一步增强免疫应答。然而，通过超声靶向微泡破坏技术将携趋化因子受体4抗体和细胞程序性死亡配体1抗体双靶向纳米微泡应用于卵巢癌的治疗尚未见报道。目的：探讨超声辐照携趋化因子受体4抗体和程序性死亡配体1抗体双靶向纳米微泡对卵巢癌细胞增殖、迁移的影响。方法：对IOSE-80正常卵巢上皮细胞及SKOV3、CAOV3卵巢癌细胞进行培养及扩增，采用双标记荧光免疫法对3种细胞中的趋化因子受体4和细胞程序性死亡配体1蛋白进行共定位，蛋白质印迹法检测3种细胞中趋化因子受体4和程序性死亡配体1蛋白相对表达量，并筛选出实验细胞。制备携不同配体的靶向纳米微泡后，即单纯的纳米微泡、携趋化因子受体4抗体的纳米微泡、携趋化因子受体4和程序性死亡配体1抗体的纳米微泡。取对数生长期的SKOV3卵巢癌细胞，分6组处理：A组加入McCoy’s 5A培养基，B组加入含基质细胞衍生因子1的McCoy’s5A培养基，C组加入单纯的纳米微泡溶液与含基质细胞衍生因子1的McCo...