内皮素及其受体拮抗剂与肾间质纤维化

内皮素是目前已知体内作用最强和作用时间最持久的缩血管物质,除此之外,内皮素还是一个强大的炎性介质,在许多炎性反应中起了重要作用。现在,越来越多证据显示内皮素在生理及病理情况下对肾脏均有强大作用。有研究表明,内皮素作为细胞因子之一参与了肾间质纤维化的发生和发展,而内皮素受体拮抗剂通过拮抗内皮素的作用,而发挥肾保护作用。本文即就内皮素及其受体拮抗剂与肾间质纤维化的关系进行综述。     

依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的:动态观察血管紧张素转换酶抑制剂依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响.方法:采用单侧输尿管梗阻模型,雄性SD大鼠64只随机分为假手术组(n=16)、模型组(n=24)和依那普利治疗组(n=24).治疗组从造模前24 h开始以依那普利10 nag/(kg·d)灌胃,模型组和假手术组以等体积的生理盐水灌胃.分别于造模后第3,7,14,21天处死大鼠,取梗阻侧肾组织,行HE染色和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,采用real-time PCR方法检测肾组织Ⅰ型胶原mRNA的表达,应用Westem免疫印迹检测结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达.结果:随着梗阻时间的延长,模型组大鼠肾间质损伤指数评分逐渐增加,肾间质胶原相对面积逐渐增大,Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达逐渐增加.依那普利治疗后,肾间质损伤指数和肾间质胶原相对面积下降,Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达均减少,与模型组比较,差异在第3,7,14天有统计学意义(P<0.05),而在第21天无统计学意义(P>0.05).结论:依那普利可减轻梗阻肾间质纤维化,这一作用可能与其能抑制肾组织Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达有关.     

大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化动物模型的实验研究

目的观察单侧输尿管梗阻大鼠模型中肾功能、肾病理改变、肾组织-αSMA表达的变化,验证UUO制作RIF动物模型的可行性。方法将32只Waster大鼠随机分为假手术组、模型组,每组16只。在术后3、10、203、0 d每组各处死4只,处死前1 d测定各组大鼠24 h尿蛋白定量,处死时抽取其腹主动脉血测定血清肌酐、尿素氮水平;左肾组织行HE染色,动态观察肾病理学变化,评定各组大鼠肾间质损害程度;免疫组化方法测定肾间质-αSMA,并分析其与肾间质损伤指数的相关性。结果各组大鼠24 h尿蛋白无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠血肌酐、尿素氮在第3天时无统计学意义(P>0.05)。模型组血清肌酐、尿素氮在10 d时高于假手术组(P<0.01),20d达到高峰,继之出现下降。模型组的肾间质损伤指数及-αSMA的表达明显高于假手术组(P<0.01),-αSMA表达的相对量与肾间质损伤指数呈正相关(r=0.92,P<0.001)。结论UUO可以快速建立RIF动物模型,并作为延缓肾功能损害治疗的理想模型。     

罗格列酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用及其机制

罗格列酮（rosiglitszone，RSG）属于噻唑烷二酮类（thiazolidinediones，TZDs）药物，是新型的胰岛索增敏剂。近来的研究发现它除了改善机体胰岛素抵抗等代谢调节作用外，还有抗炎症、抗肿瘤和抗脏器纤维化等作用，这些作用提示其可能对肾脏疾病有独特效果。在肾脏病中肾间质纤维化是许多不同病因的进展性肾病变的重要组成部分，并直接影响了慢性肾疾病的预后。单侧输尿管梗阻模型（unilateral ureteral obstruction，UUO）是以进行性肾间质纤维化为特征的肾损伤。此模型相对避免了高血压和高血脂的代谢异常的影响。本实验用UUO模型观察RSG在肾间质纤维化中的作用。     

内皮素1及内皮素受体A拮抗剂对人肾间质成纤维细胞的作用

目的 探讨内皮素1（ET－1）受体A拮抗剂（ETaRA）对人肾间质成纤维细胞（hRIF）的作用。方法 在体外培养的hRIF中进行如上试验：（1）MTT比色法检测细胞增殖情况。（2）逆转录多聚酶链反应法（RT－PCR）观察Ⅰ型胶原（ColⅠ）、转化生长因子β（TGF－β）、基质金属蛋白酶1（MMP－1）、金属蛋白酶组织抑制物1,2（TIMP－1,TIMP－2）mRNA表达的变化。结果 （1）ET－1（10^-11-10^-7mol/L,24h）可以促进hRIF增殖,10^-7mol/L增殖最显著（P＜0.05）,呈剂量相关;10^-7mol/L刺激8h,hRIF即明显增殖,24h达高峰（P＜0.01）。（2）ET－1（10^-11-10^-7mol/L,16h）可上调hRIFr ColⅠ、TGF-β、MMP-1、TIMP-1、TIMP-2mRNA表达,10^-7mol/L作用最显著（P＜0.05）,呈剂量相关。10^-7mol/L刺激hRIFs时,ColⅠmRNA在8h表达显著增加（P＜0.05）,24h达高峰;TGF－βmRNA在8h表达显著增加（P＜0.05）且达高峰;TIMP－1及TIMP－2mRNA在16h表达显著增加（P＜0.05）,24h达高峰;MMP－1mRNA在16h表达显著增加（P＜0.05）,且达高峰。（3）上述作用可特异地被ETaRA阻断。结论 ET－1可刺激hRIF增殖,并上调ColⅠ、TGF－β、MMP－1、TIMP－1、TIMP－2mRNA的表达,ETaRA可抑制上述反应。ET－1可能在上参与肾间质纤维化过程。     

单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中氧化应激的变化

目的采用单侧输尿管结扎（UUO）致肾间质纤维化大鼠模型，观察UUO后肾脏病理和肾组织羟脯氨酸（Hyp）含量及各氧化应激指标的改变，探讨氧化应激在肾间质纤维化中的作用。方法 成年健康Wistar大鼠24只，随机分为两组（n=12）：模型组（UUO组）大鼠麻醉后打开腹腔分离左侧输尿管，并于靠近肾盂段行左输尿管结扎；假手术组（Sham组）仅分离输尿管，不行结扎。两组大鼠于手术后10d处死取左侧肾脏，HE和Masson染色观察大鼠肾脏常规病理；以化学比色法测定梗阻侧肾组织匀浆中羟脯氨酸（Hyp）的含量、总抗氧化能力（T-AOC）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和丙二醛（MDA）的含量。组间比较采用单因素方差分析，P〈0.05为差异有统计学意义。结果 大鼠行单侧输尿管结扎10d后，梗阻侧肾脏肿大、肾实质变薄，肾间质水肿，弥漫炎细胞浸润，肾小管扩张或萎缩，部分肾小管腔内有蛋白或细胞管型，间质趋向纤维化。与Sham组相比，UUO组梗阻侧肾脏病理改变明显，且肾组织中Hyp和MDA含量增加（P〈0．01），T—AOC含量和T—SOD活性下降（P〈0．01）。相关分析显示肾组织中Hyp和MDA含量与Masson染色中胶原沉积成正相关，（r1=0.69，r2=0.66，P〈0．01）；肾组织中T—SOD活性和T—AOC含量与Masson染色中胶原沉积成负相关，（r3=-0．57，P〈0．05，r4=-0．59，P〈0．01）。结论 单侧输尿管梗阻可以诱导大鼠肾间质纤维化，氧化应激参与肾间质纤维化的形成。     

羟苯磺酸钙对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的:评价羟苯磺酸钙对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化影响,并探讨其作用机制。方法:21只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、肾间质纤维化组(UUO组)及羟苯磺酸钙组(CDT组),分别采用病理及免疫组织化学方法观察UUO术后14 d大鼠梗阻侧肾脏的组织学变化和MMP-9、TIMP-l表达情况。结果:与Sham组相比,UUO组大鼠肾间质纤维组织面积显著增加(P<0.01),MMP-9、TIMP-1表达均有显著增高(P<0.01)。与UUO组相比,CDT组大鼠肾间质纤维组织面积减少,MMP-9表达增强、TIMP-1表达减弱(P<0.01),UUO组和CDT组大鼠左肾MMP-9/TIMP-1与肾间质纤维化面积成负相关,且有统计学意义(P<0.01)。结论:羟苯磺酸钙可缓解输尿管梗阻导致的肾间质纤维化,其机制可能与其调节MMP-9/TIMP-1紊乱、改善基质代谢有关。     

单侧输尿管梗阻法制作大鼠肾间质纤维化模型的改进

目的建立改良的大鼠肾间质纤维化模型。方法用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,动态观察4周。治疗的第12、、3周末检测血肌酐、尿素氮含量等指标,观察肾功能变化;4周末采用HE染色、六胺银(periodic acid-silver methenamine,PASM)染色和丽春红染色观察肾组织病理变化。结果模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;模型组大鼠大部分肾小球呈玻璃样变,硬化的肾小球周围所属肾小管萎缩、基底膜增厚,部分肾小管消失;少数残存的肾小球肥大并周围肾小管扩张严重;肾间质胶原纤维增生和大量炎细胞浸润。结论该模型有明显的肾间质纤维化特征,且死亡率低,适合肾间质纤维化的实验研究。     

曲尼司特对单侧输尿管梗阻后肾间质纤维化调节作用的实验研究

目的　探讨曲尼司特 (Tranilast)对单侧输尿管梗阻 (UUO)大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制。方法　将3 6只大鼠行右侧输尿管结扎 ,另 18只行假手术 (SIAM) ,结扎后大鼠随机分成模型组 (UUO)组和药物组 (Tranilast) ,用药组于术前一天开始给予Tranilast 2 0 0mg·kg-1·d-1,术后第 5、10及 15天分别处死各组大鼠中的 6只 ,用免疫组化方法测定肾间质转化生长因子 β(TGF -β) ,α 平滑肌动蛋白 (α SMA)及Ⅰ型 ,Ⅲ型胶原 (coIⅠ .coIⅢ )的表达并行HE、MASSON染色 ,并观察肾脏病理变化。结果　Tranilast可显著减少TGF -β ,α SMA ,coIⅠ ,coIⅢ的表达 (P <0 0 5 ) ,有效地改善肾脏的病理学改变。结论　曲尼司特抑制输尿管梗阻后肌成纤维细胞 (MyoF)释放TGF -β而调节胶原的合成 ,减少肾间质Ⅰ型 ,Ⅲ型胶原的沉积 ,从而改善UUO所致肾损伤 ,对实验性肾间质纤维化有一定的防止作用     

他莫昔芬对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用

目的:探讨他莫昔芬对肾组织纤维化的影响及作用机制.方法:雌性SD大鼠,建立单侧输尿管梗阻模型(UUO),设:①模型组(n=6),行左侧输尿管结扎术,0.3 ml无菌生理盐水灌胃,每天2次;②治疗组(n=6),他莫昔芬5 rmg/kg(0.3 ml无菌生理盐水配置)灌胃,每天2次;③假手术组(n=6).术后第9天处死各组大鼠.采用光镜和免疫组化观察肾组织纤维化和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的变化.结果:①治疗组大鼠肾间质纤维化程度较模型组明显减轻.②UUO模型第9天时大鼠肾组织α-SMA表达明显增强,采用他莫昔芬治疗后,肾组织α-SMA表达的异常增强能得到有效抑制.结论:昔芬类药物具有减轻肾组织纤维化的作用,而这一作用与其能有效阻抑肾组织上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)有关.     

新型内皮素受体拮抗剂ETP-508对实验性大鼠肺纤维化的干预作用

目的：研究新型内皮素受体拮抗剂ETP-508对实验性大鼠肺纤维化的干预作用,并探讨其机制．方法：实验分为4组：博莱霉素组、ETP-508组、地塞米松组和正常对照组．博莱霉素组、ETP-508组和地塞米松组均给以博莱霉素（5mg／kg）气管内注射复制大鼠肺纤维化模型,正常对照组给以气管内注射等量生理盐水替代．ETP-508组和地塞米松组造模开始后次日又分别给以腹腔注射ETP-508（100μg／kg）和地塞米松（1mg／kg）,隔日1次．博莱霉素组和正常对照组以等量生理盐水替代．造模后第28日处死所有大鼠,测定肺组织ET-1和羟脯氨酸含量,并进行组织病理学观察．结果：博莱霉素组肺组织内羟脯氨酸明显高于正常对照组,病理为肺纤维化改变．博莱霉素组的ET-1水平高于正常对照组和地塞米松组,差异有统计学意义（P〈0．01）;ETP-508组ET-1水平均高于上述各组,与博莱霉素组（P〈0．05）,正常对照组和地塞米松组比较（P〈0．01）有统计学意义;地塞米松组与正常对照组比较,无统计学意义（P〉0．05）．结论：ETP-508对肺纤维化的形成有一定的干预作用,其机制可能通过拮抗ET-1与内皮素受体结合的作用有关．     

氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效观察

目的：观察氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效,探讨氟非尼酮对肾间质纤维化大鼠肾 组织中I型胶原(collagen type I,Col I),III型胶原(collagen type III,Col III),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA),结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和血小板源性生长因子(platelet derived growth factor, PDGF)表达的影响。方法：将15只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和氟非尼酮组(n=5)。对模型组和氟非尼酮 组大鼠行左侧输尿管结扎术建立单侧输尿管梗阻模型。氟非尼酮组从造模前24 h开始以氟非尼酮[125 mg/(kg.d)]溶于 0.5%羧甲基纤维素钠(sodium carboxyl methyl cellulose,CMC-Na)中灌胃,模型组和假手术组以等体积0.5% CMC-Na灌 胃。于术后14 d处死大鼠,取梗阻侧肾组织行HE和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变;用免疫组织化学检测 Col I,Col III,α-SMA,PDGF,CTGF的蛋白表达;用RT-PCR检测Col I,Col III,PDGF,CTGF mRNA表达。结果：模 型组肾间质损伤指数、胶原相对面积评分及Col I,Col III mRNA和蛋白表达均较假手术组增高(P<0.05),氟非尼酮治 疗后明显改善(P<0.05)。模型组肾组织α-SMA,PDGF,CTGF蛋白表达及PDGF,CTGF mRNA表达均较假手术组明显 增加(P<0.05),氟非尼酮治疗后表达均明显减少(P<0.05)。结论：氟非尼酮(125 mg/kg.d)能够显著改善单侧输尿管梗阻 大鼠肾间质纤维化,其作用机制与抑制肌成纤维细胞的活化及关键促纤维化因子PDGF和CTGF的表达有关。     

Effects of Mycophenolate Mofetil on Renal Interstitial Fibrosis after Unilateral Ureteral Obstruction in Rats

Theseverityoftubulointerstitialfibrosishaslongbeenconsideredasthecrucialdeterminantinprogres siverenalinjuryandlong term prognosisinbothhu manandexperimentalglomerulonephritis[1] Howtoimpedeinterstitialfibrosisandlimittheprogressionofchronicrenaldiseasestowardsend stagerenaldisease(ESRD)becomeanewfocusinthisfield Mycophenolatemofetil (MMF)isahighlyspe cificimmunosuppressor Interestingly ,MMFisanimmunosuppressivedrugthatisalsoknowntohaveaneffectoncellsoutsideimmunesystemandparticu larlyhav…     

黄芪当归合剂对梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的 :研究黄芪当归合剂 (A&A)对梗阻性肾病大鼠肾小管间质纤维化的防治作用 ,探讨其抗纤维化作用的可能机制。方法 :采用单侧输尿管梗阻 (UUO)诱导肾间质纤维化的动物模型 ,以目前公认具有肾脏保护作用的血管紧张素转换酶抑制剂 (ACEI)作为阳性对照 ,将大鼠随机分为假手术组 (Sham)、模型组 (UUO)、黄芪当归合剂组 (A&A)、依那普利组 (ACEI) ,术后第 1 0天处死大鼠 ,收集血清测定肌酐、尿素氮水平 ,肾组织用Masson染色后进行图像分析评定各组肾小管间质损害程度 ,免疫组化半定量检测各组肾间质的α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)、转化生长因子 β1 (TGF β1 )、纤维连接蛋白 (FN)和层粘连蛋白 (LN)的表达。结果 :UUO组的肾小管间质损伤指数及α SMA、TGF β1 、FN和LN的表达明显高于Sham组 ,肾小管间质损伤指数与肾间质的α SMA、TGF β1 、FN和LN的表达均呈正相关关系。A&A组、ACEI组的肾小管间质损伤指数及α SMA、TGF β1 、FN和LN的表达均明显低于UUO组 ;两治疗组间比较 ,A&A对TGF β1 表达的抑制作用弱于依那普利的作用 ,而其余各指标差异无显著性。结论 :在单侧输尿管梗阻诱导的肾间质纤维化大鼠模型中 ,中药复方A&A的防治作用与ACEI相似 ,可能是通过减少肾间质肌成纤维细胞的数量、抑制TGF β1 表达     

1,25-二羟维生素D_3对大鼠肾间质纤维化的作用研究

目的：研究1,25-二羟维生素D3〔1,25-（OH）2D3〕对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的影响。方法：45只大鼠随机分为假手术组（n=15）、UUO组（n=15）和1,25-（OH）2D3干预组（n=15）,建立UUO大鼠肾间质纤维化模型,干预组于术后第1天起每天腹腔注射1,25-（OH）2D3,假手术组及UUO组腹腔注射等量生理盐水。分别于术后第3天、第7天和第14天处死大鼠,每次5只,取梗阻侧肾脏行HE、Masson染色及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化标记,观察肾损伤程度和肾间质纤维化程度;取血测定肌酐和尿素氮水平观察肾功能;处死前1天收集24 h尿液,检测尿中蛋白含量。结果：与假手术组相比,UUO组和干预组各时间点HE、Masson染色和α-SMA表达变化明显,呈逐渐加重趋势,差异有统计学意义（P〈0.05）;肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白含量术后第3和第7天时表现为升高,术后第14天时出现下降,差异有统计学意义（P〈0.05）。与UUO组相比,干预组各时间点各项指标变化明显改善,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：1,25-（OH）2D3可抑制UUO大鼠肾间质纤维化进程,改善肾功能。     

水蛭素对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质损伤及MCP-1、ICAM-1的干预效应研究

[目的]观察水蛭素对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的干预作用,并探索其作用机制。[方法]健康雄性SD大鼠120只,随机分为假手术组24只和造模组96只。造模组再分为模型组24只、水蛭素高剂量组24只、水蛭素低剂量组24只、贝那普利组24只。各组于术后第3、7、14天分批随机处死。取梗阻侧肾组织行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western Blot）分子技术,检测梗阻侧肾组织单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的分子表达变化。[结果]苏木精-伊红（HE）染色显示,与模型组相比：各用药组肾间质损伤及纤维化程度均有不同程度改善。RT-PCR显示,与模型组相比：水蛭素高剂量组各时间点及水蛭素低剂量组第7、14天ICAM-1相对表达量均明显降低（P<0.05）;水蛭素高剂量组第7、14天MCP-1表达显著降低（P<0.01）;水蛭素高剂量组第3天及水蛭素低剂量组各时间点MCP-1表达量明显降低（P<0.05）。Western Blot显示,与模型组相比：水蛭素高剂量组第7天ICAM-1蛋白表达量显著减少（P<0.01）;水蛭素高剂量组第3、14天及水蛭素低剂量组第14天各时间点ICAM-1蛋白表达均明显降低（P<0.05）;水蛭素高剂量组第14天MCP-1蛋白表达显著降低（P<0.01）;水蛭素高剂量组第3、7天MCP-1蛋白表达明显降低（P<0.05）。[结论]水蛭素能不同程度地改善UUO大鼠肾间质损伤程度,延缓间质纤维化进展,其机制可能与水蛭素干预了UUO大鼠肾间质MCP-1、ICAM-1 mRNA及蛋白质的表达有关。     

Expression of BMP-7 and its receptors in renal tubolo-interstitial fibrosis induced with unilateral ureteral obstruction in rats

Objective:To study the changes of the expression of bone morphogenetic protein-7(BMP-7) and its receptors(BMPR- Ⅰ ,ALK2,ALK3 and ALK6) in the renal tubulointerstitial fibrosis induced with unilateral ureteral obstruction in rats. Methods: Sixty Wistar male rats were divided randomly into the normal control,sham-operation and unilateral ureteral obstruction(UUO) groups and the rats were killedon the 1^st , 3^rd, 7^th and 14^th postoperative days respectively. The mRNA level of BMP-7, BMPR- Ⅰ , ALK2, ALK3 and ALK6 was determined with RT-PCR. The site and level of protein expression of BMP-7 were observed with immunohistochemical staining. Results: The mRNA level of BMP-7, BMPR- Ⅰ ,ALK2 and ALK3 was significantly decreased in the rats of UUO group than in those of the sham-operation group but the mRNA level of ALK6 showed no obvious changes in all the rats. Immunohistochemical staining revealed that the protein of BMP-7 was mainly expressed in the renal tubules and interstitial tissue of the kidneys in normal rats but it was decreased gradually along with the unilateral ureteral obstruction. Conclusion: It is found that the loss of BMP-7 and its receptors including BMPR- Ⅰ ,ALK2 and ALK3 occursin the early phase of renal tubulointerstitial fibrosis before the appearance of other pathological changes in the kidney and may play an important role in the occurrence and progress of renal tubulointerstitial fibrosis.