蚯蚓纤溶酶的纯化及pH值、温度和胰蛋白酶对其纤溶活性的影响

目的纯化并鉴定蚯蚓纤溶酶 ,研究pH、温度和胰蛋白酶对其纤溶活性的影响。方法以赤子爱胜蚓为材料 ,采用硫酸铵盐析、DEAESepharoseCL 6B离子交换色谱、SephadexG 75凝胶过滤和制备电泳等分离技术纯化蚯蚓纤溶酶 ;利用纤维平板和聚丙烯酰胺凝胶电泳研究pH、温度和胰蛋白酶对蚯蚓纤溶酶纤溶活性的影响。结果分离得到纤溶酶 4种单一组分 :EFE 1、EFE 2、EFE 3、EFE 4 ;分子量分别为 2 70 0 0、2 80 0 0、2 30 0 0、330 0 0 ;4种组分对温度的适应范围较广 ;pH值对其纤溶活性的影响不尽相同 ,但都在pH低于 1.5时纤溶活性完全丧失 ;胰蛋白酶对纤溶酶 4种组分均无降解作用 ,对其纤溶活性无影响。结论纤溶酶口服药制剂宜制成肠溶型     

快速蛋白液相色谱法纯化威廉环毛蚓纤溶酶及其活性研究

摸索威廉环毛蚓纤溶酶的分离纯化工艺和研究蚯蚓纤溶酶(earthw fibrinolytic enzyme，EFE)体内外的抗栓溶栓活性。通过提取，分步盐析，再经AKTAbasic蛋白快速液相色谱进一步纯化，得一组有纤溶活性的同工酶，其中一种比活较大达2000IU／mg。药理试验表明该酶有明显的抗拴溶栓活性。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及抗栓活性研究

目的摸索蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺和研究蚯蚓纤溶酶的抗血栓活性。方法采用分步盐析、透析、凝胶色谱和亲和色谱法分离纯化蚯蚓纤溶酶 ;此酶的体内抗栓活性检测采用动静脉旁路血栓形成抑制实验法。结果分离纯化得到的蚯蚓纤溶酶比活高 ,为 16 0 5IU/mg ;蚯蚓纤溶酶的体内血栓形成抑制效果比尿激酶作用显著。 结论该法分离纯化工艺简单 ,特异性好 ,纯化的纤溶酶比活高 ;体内抗栓活性比尿激酶作用显著     

蚯蚓纤溶酶新组分的分离纯化及部分性质

采用以大豆胰蛋白酶抑制剂为配基的亲和色谱分离蚯蚓纤溶酶，以DEAE-纤维素-52离子交换柱色谱和制备电泳纯化各单组分。结果表明新组分8、9、10都是能水解纤维蛋白的糖蛋白。组分8是一种纤溶酶原激活剂，有2个亚基，Mr为25．5k和17．8k；组分9仅一条肽链，Mr为33．6k；组分10含有Mr为18．7k和10．9k的2个亚基。组分9、10均兼有纤溶酶原激活活性和直接纤溶活性。     

一种体内溶栓活性优于总蚯蚓纤溶酶的组分

目的筛选高效低毒的蚯蚓纤溶酶单一组分。方法通过亲和色谱从赤子爱胜蚓获得含多组分的总蚯蚓纤溶酶(EFE)，经离子交换分离得到3个主要溶栓组分EfP-0-2，EfP-I-1和EfP-I-2，与EFE比较体内外溶栓效果和毒副作用。结果与其他组分比较，EfP-I-1的体外溶栓作用较强；当静脉注射4.5 mg·kg^-1时，各组分对纤维蛋白原的影响均不明显，只有EfP-I-1能显著溶解动静脉旁路血栓；当静脉注射达6 mg·kg^-1时，只有该组分对延长出血时间的影响不明显；急性毒性实验表明，该组分的LD₅₀是EFE的2.17倍。结论EfP-I-1有较高的体内外溶栓活性和较低的毒副作用。由于该组分在总EFE中所占比例较高，并易于分离纯化，故适于作为单一组分的溶栓药物进行开发。     

延胡索纤溶酶的分离纯化及部分性质

目的从延胡索(Rhizoma corydalis)中分离纯化具有溶解纤维蛋白活性的单体蛋白单一组分,并对粗酶性质做初步研究。方法利用硫酸铵分级沉淀和阴离子交换色谱从延胡索中纯化纤溶酶。结果从延胡索中纯化出两种纤溶酶,表观相对分子质量分别为33 000和59 000。粗酶用丝氨酸蛋白酶抑制剂鉴定为丝氨酸蛋白酶,ED-TA对酶活没有抑制作用。延胡索纤溶酶粗酶体外溶纤性质主要表现为激酶活性,在4~50℃活性稳定,50~75℃酶活有所下降;最适pH值为8.0,在pH 3.0左右,仍能保留大部分酶活;能抵抗胰蛋白酶水解和胃蛋白酶的作用。结论延胡索纤溶酶性质稳定,有希望研发成为一种溶栓新药。     

广西菲牛蛭中一种纤溶酶的分离纯化

目的从广西菲牛蛭消化液中分离纯化出一种纤溶酶,并研究其生化性质。方法应用有机溶剂沉淀、DEAESepharoseCL-6B离子交换柱和SephadexG-75凝胶柱过滤的方法分离纯化出广西菲牛蛭纤溶酶,用纤维蛋白平板法测定其纤溶活力,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定纤溶酶相对分子质量(Mr)。结果从广西菲牛蛭中分离出一种单一组分的纤溶酶,其Mr约为42×103,在普通纤维蛋白平板和加热平板上都能溶解纤维蛋白,收率为0.43%。结论此方法成功地从广西菲牛蛭中分离出一种纤溶酶,其纤溶机理是直接溶解纤维蛋白。     

中草药桃仁纤溶酶的亲和层析分离

目的分离出高效、特异、安全、不良反应较小的纤溶酶,为溶栓药物的研究奠定基础。方法利用硫铵沉淀法提取出桃仁纤溶酶,测定其比活力,并比较不同蛋白酶抑制剂对桃仁纤溶酶活性的抑制作用,采用亲和层析法对桃仁纤溶酶进行分离纯化。结果亲和层析法分离得到了纤溶酶活性单一组分,比活力为89.08 U.mg？1,比纯化前提高了7.37倍,该组分属于丝氨酸蛋白酶家族。结论利用大豆胰蛋白酶抑制剂作为配基,采用亲和层析法分离桃仁纤溶酶可以得到单一活性成分,且比活力相对提高。     

中草药桃仁纤溶酶的亲和层析分离

目的 分离出高效、特异、安全、不良反应较小的纤溶酶,为溶栓药物的研究奠定基础。方法 利用硫铵沉淀法提取出桃仁纤溶酶,测定其比活力,并比较不同蛋白酶抑制剂对桃仁纤溶酶活性的抑制作用,采用亲和层析法对桃仁纤溶酶进行分离纯化。结果 亲和层析法分离得到了纤溶酶活性单一组分,比活力为89.08 U·mg^-1,比纯化前提高了7.37倍,该组分属于丝氨酸蛋白酶家族。结论 利用大豆胰蛋白酶抑制剂作为配基,采用亲和层析法分离桃仁纤溶酶可以得到单一活性成分,且比活力相对提高。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及其部分酶学性质的研究

以野生环毛蚓(Pheretima)为材料，经匀浆抽提、热变性、硫酸铵分步沉淀、Sephadex G-75凝胶过滤和DEAE—纤维素离子交换柱层析等纯化步骤，得到纯度较高的蚯蚓纤溶酶(EFE)，具有强烈的溶解血纤维蛋白的作用。同时对酪蛋白和BAEE也具有较强的水解作用，但对ATEE无水解活性。实验表明蚯蚓纤溶酶能被苯甲磺酰氟强烈抑制，说明该酶是丝氨酸蛋白酶、属胰蛋白酶类。金属离子Na^ 、K^ 、Mg^2 对此酶有一定的抑制作用，Hg^2 对EFE有强烈抑制作用，而Ca^2 可提高此酶活力。     

溶栓素的分离纯化及特性测定

目的研究一种高效分离纯化溶栓素的方法并测定其pI和相对分子质量(Mr)。方法采用阴、阳离子交换色谱等技术分离纯化溶栓素并通过对缓冲体系的pH值、离子强度的调节及对初始供试品pH值的调节来优化纯化过程,以等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳(IEF PAGE)和SDS PHGE方法分别测定纯品的pI和Mr。结果溶栓素达到简捷、高效分离纯化的目的,电泳鉴定为一条蛋白质带,并测定溶栓素的pI为4 .5 0、Mr 为35 10 0。结论溶栓素的纯化工艺达到高纯度纯化程度,为进一步研究溶栓素奠定了基础     

蚯蚓纤溶酶的抗肿瘤作用

目的　观察蚯蚓纤溶酶 (EFE)对体外人癌细胞株及体内人癌裸鼠移植性肿瘤生长的影响 ,对该药进行临床前抗肿瘤药效学评价。方法　采用MTT法观察蚯蚓纤溶酶对体外人癌细胞的生长抑制作用 ;用人胃癌BGC82 3和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤模型对蚯蚓纤溶酶进行体内抗肿瘤药效学观察。结果　蚯蚓纤溶酶在体外对人癌细胞的生长无抑制作用 ;灌胃给予蚯蚓纤溶酶 2 0 0～ 10 0 0mg·kg-1,可明显抑制人胃癌BGC82 3和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤的生长。结论　蚯蚓纤溶酶具有抗肿瘤作用。     

蚯蚓组织中促髓系细胞增殖组分的提取及其性质和作用

用硫酸铵分段盐析、DEAE纤维素-DE52离子交换柱层析、SephadexG100凝胶过滤柱层析等方法．从蚯蚓组织中提取有促髓系幼稚细胞增殖活性的蛋白质，提纯倍数达190倍。用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测行5条区带；蛋白酶复印结果显示其中3条具有蛋白酶活性。该活性蛋白质有一定耐热性（55C，60min），促增殖活性强的部分其纤清活性也强。提示该活性蛋白属于蛋白酶，可能是细胞增殖信息传递链的组分或是使传递链组分活化的物质。     

白唇竹叶青蛇(Trimeresurus albolabris)毒降纤酶的分离纯化以及性质

目的从白唇竹叶青蛇(T.albolabris)毒中分离纯化无出血作用的降纤活性组分,探讨其理化性质及部分生物功能。方法用DEAE-SephadexA-25,SephadexG-100和CM-SephadexC-50三步色谱法进行分离纯化。SDS-PAGE和HPLC鉴定其纯度和相对分子质量,平板法测定其降纤活性。结果从白唇竹叶青蛇毒中分离纯化获得单一的降纤组分,能迅速水解纤维蛋白原或纤维蛋白原Aα链,缓慢水解Bβ链,而对γ链无作用,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量为56000。EDTA能抑制其纤维蛋白原水解活性,而PMSF、β-巯基乙醇对其活性无影响,提示该组分为单链α金属蛋白酶。结论从白唇竹叶青蛇毒中分离纯化得到1种无出血作用且降纤活性强的新蛇毒降纤酶。