正常大鼠视网膜苗勒（Müller）细胞的形态学结构特点

目的观察正常大鼠视网膜Müller细胞的形态特征及其与神经细胞之间的区别,从形态学方面探索Müller细胞的生理功能。方法应用透射电镜技术观察正常大鼠视网膜Müller细胞形态结构。结果电镜下视网膜Müller细胞的胞体发出放射状突起,这些坚韧的突起纵贯视网膜全层,几乎占据了神经细胞所没有占据的空间。结论Müller细胞不仅是视网膜的支架,而且是神经节细胞能量的重要来源、是维持视网膜内环境的稳定及保护神经突触传递的重要的神经胶质细胞。     

高糖下视网膜Müller细胞生长活性的变化

目的 测量Müller细胞不同程度的高糖培养条件下生长活性的变化,推测Müller细胞在糖尿病性视网膜病变进展中的活性变化。方法 通过组织块贴壁培养法进行视网膜Müller细胞体外培养,MTT法测定其在不同程度的高糖及作用时间下的活性OD值。结果 高糖组Müller细胞培养时间为1d时表现生长增强;培养时间延长到3d以上,高糖组内见Müller细胞折光增加,随培养时间及浓度不同程度加强,其OD值逐渐呈下降趋势。结论 视网膜Müller细胞在高糖作用下其生长受到显著的抑制。     

高糖下视网膜Müller细胞生长活性的变化

目的 测量Müller细胞不同程度的高糖培养条件下生长活性的变化，推测Müller细胞在糖尿病性视网膜病变进展中的活性变化。方法 通过组织块贴壁培养法进行视网膜Müller细胞体外培养，MTT法测定其在不同程度的高糖及作用时间下的活性OD值。结果 高糖组Müller细胞培养时间为1d时表现生长增强；培养时间延长到3d以上，高糖组内见Müller细胞折光增加，随培养时间及浓度不同程度加强，其OD值逐渐呈下降趋势。结论 视网膜Müller细胞在高糖作用下其生长受到显著的抑制。     

神经胶质成熟因子-β诱导糖尿病大鼠视网膜Müller细胞炎症反应的机制研究

目的 研究神经胶质成熟因子-β(GMFB)对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞活化的作用及相关机制。方法SPF级雄性SD大鼠60只，采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ,55 mg/kg)制备糖尿病模型后分为STZ组、STZ+AAVGMFB组和STZ+AAV-GMFB+K252a组，每组15只。另取15只正常大鼠作为CON组。STZ+AAV-GMFB组和STZ+AAV-GMFB+K252a组大鼠于成模8周后玻璃体腔单次注射AAV-GMFB腺病毒载体5μL。STZ+AAV-GMFB+K252a组在注射腺病毒基础上给予腹腔注射25μg/（kg·d）的K252a。12周后，免疫荧光检测GMFB在Müller细胞中的表达，免疫组织化学染色检测视网膜胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达，酶联免疫吸附试验检测视网膜炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素（IL）-1β、IL-6的表达，Western blot检测GMFB、脑源性神经营养因子（BDNF）及磷酸化酪氨酸激酶受体B(p-TrkB)蛋白相对表达水平。HE染色检测视网膜病理改变。结果 GMFB在Müller细胞中大量表达。与CON组比较，S...     

胰岛素对兔视网膜Müller细胞生长活性的影响

目的通过观察不同浓度的胰岛素对视网膜Müller细胞生长活性的影响,探讨其在眼底病变中所起的作用。方法运用组织块贴壁培养法培养兔视网膜Müller细胞,利用MTT法测定其在不同浓度胰岛素及作用时间下培养板中各孔的光吸收值。结果当高浓度胰岛素作用时间≥3 d,光吸收(OD)值均明显下降,并随着浓度的增高及作用时间的延长而进一步减小。结论当高浓度胰岛素作用达到一定时间时,对兔视网膜Müller细胞生长活性起着显著的抑制作用。     

离体培养的大鼠下丘脑神经细胞突起反应的衰老性变化

目的　研究长期培养的大鼠下丘脑神经细胞突起的衰老性变化。方法　通过在不同培龄的神经细胞突起端注入谷氨酸 ,观察其突起的转向、伸长、缩短等可塑性反应的一个衰老性变化。结果　 1.谷氨酸可使一定比例的神经细胞突起伸长 ,但随着细胞的衰老 ,神经突起这种伸长功能减弱或消失。 2 .随着细胞的衰老 ,由谷氨酸诱发的突起缩短的比例增加。 3.钙通道阻滞剂可影响谷氨酸诱发的神经突起的伸长 ,但不影响其缩短反应。结论　培养的下丘脑神经细胞的衰老进程是进行性的 ,且随其进展会导致神经细胞突起的伸长能力趋于降低     

胶质瘤细胞诱导神经干细胞迁移作用的实验研究

目的观察胶质瘤细胞在体外培养条件下对神经干细胞是否有诱导迁移的作用。方法①从新生1～2dSD大鼠脑皮层分离培养神经干细胞,进行神经干细胞及其增殖能力鉴定。②胶质瘤细胞与神经干细胞限定区域联合培养,观察神经干细胞的生长及其形态学变化。结果①所获得神经细胞球Nestin染色阳性,传代神经细胞球抗BrdU染色阳性。②可观察到神经干细胞球周围长出细胞突起,在靠近胶质瘤细胞的一侧,细胞突起的密度及长度均大于其他方向上的突起并且可见部分干细胞向胶质瘤细胞方向的移动。结论胶质瘤细胞在体外对神经干细胞有诱导迁移作用。     

rhEPO对高糖状态下大鼠Müller细胞凋亡及对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant hu-man erythropoietin,rhEPO)对高浓度葡萄糖作用下体外培养大鼠视网膜Müller细胞凋亡的保护作用及对Bcl-2和Bax表达的影响。方法提取大鼠视网膜神经细胞及胶质细胞进行混合培养,反复胰酶消化法提纯Müller细胞,随机分为空白组,高糖组及不同浓度rhEPO干预组,培养48 h后应用TUNEL法检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果 TUNEL法检测显示空白组见少量凋亡阳性细胞,高糖组阳性细胞明显增多(P<0.05),各rhEPO干预组同高糖组相比凋亡细胞明显减少(P<0.05)。酶联免疫吸附法见高糖组Bcl-2蛋白的表达降低而Bax蛋白表达增高,与对照组相比活性下降,而各浓度rhEPO干预组与高糖组相比细胞活力明显增强,Bcl-2蛋白的表达增加(P<0.05),Bax蛋白的表达降低(P<0.05)。结论高糖能够引发大鼠视网膜Müller细胞发生凋亡,而rhEPO能减少体外培养高浓度葡萄糖状态下大鼠视网膜Müller细胞的凋亡,并能明显增强Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达。提示上调Bcl-2及下调Bax蛋白的表达可能是rhEPO对视网膜Müller细胞抗凋亡保护作用的机制之一。     

银杏内酯B促进体外培养胚胎大鼠脊髓神经细胞生长发育的研究

目的探讨GB对体外培养的胚鼠脊髓神经元存活和生长发育的作用。方法胚胎大鼠脊髓神经细胞原代培养,相差显微镜下进行细胞计数和显微测量,观察GB对神经元存活和生长发育的作用。对培养7d细胞行NSE免疫组化染色,光镜下观察GB对NSE染色阳性神经元生长发育的影响。结果GB及NGF能够促进体外培养胚胎大鼠脊髓神经细胞及NSE染色阳性神经元的存活,促进其细胞及突起的生长。其促进脊髓神经细胞的存活、胞体及突起发育的作用与NGF一致,而其促进神经突起分化与生长的作用强于NGF。结论NGF和GB能促进培养大鼠发育期脊髓神经元存活、分化和生长,并且表现出各自作用的特异性。     

糖尿病视网膜病变神经细胞凋亡及褪黑素对其影响的实验研究

目的 探讨褪黑素对2型糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响.方法 将48只Wistar雄性大鼠完全随机分为正常组(12只)、模型组(18只)和褪黑素组(各18只).制作2型糖尿病大鼠模型.褪黑素组以褪黑素10 mg/(kg·d)剂量灌胃,共12周.取出视网膜组织,分别在光镜和透射电镜下观察视网膜结构变化,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法观察视网膜神经细胞的凋亡.结果 电镜变化:模型组神经节细胞结构改变,部分神经节细胞出现凋亡;褪黑素组变化较模型组轻微.TUNEL方法检测结果:模型组、褪黑素组和正常组凋亡细胞数分别为(20.07 ±0.24)、(14.42 ±0.51)和(4.22±0.54)个,模型组和褪黑素组视网膜凋亡细胞均明显多于正常组(均P＜0.01),但褪黑素组明显少于模型组(P＜0.01).结论 糖尿病视网膜病变早期存在着视网膜神经细胞的凋亡现象,褪黑素能够抑制视网膜神经细胞的凋亡.     

乌头类生物碱对bcl-2基因表达的影响

目的研究乌头类生物碱对大鼠视网膜神经细胞细胞增殖周期和bcl-2基因表达的影响,探讨乌头类中药神经毒性的作用机制。方法体外培养大鼠视网膜神经细胞,分别以0.5%的乌头碱、新乌头碱和次乌头碱作用细胞5min后,流式细胞仪检测。结果与阴性对照组比较,乌头碱作用组G2/M期细胞比例从2.3%增加到19.5%,细胞增殖活动被抑制;而bcl-2基因表达量显著增加,表达荧光均值从0.78增加到1.45。新乌头碱和次乌头碱作用组结果与乌头碱类似。结论在本试验条件下,bcl-2基因可能在乌头类生物碱的神经毒性作用机制中具有重要意义。     

高糖培养大鼠Müller细胞中红景天苷对炎症反应和细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨高糖培养大鼠Müller系(retinal Mtller cell line,rMC-1)细胞中红景天苷(salidroside,SAL)对炎症反应和细胞凋亡的抑制作用.方法 用高糖(35.5 mmol·L-1)培养rMC-1细胞,CCK8法检测不同浓度红景天苷对高糖环境下rMC-1细胞活力的影响,ELISA...     

紫杉醇类药物眼部不良反应及其防治研究进展

紫杉醇类药物的眼部不良反应可累及眼表、眼附属器及眼内各组织结构,临床表现多样,如干眼、泪道阻塞、结膜炎、角膜炎、黄斑水肿、视网膜损伤、视神经损伤等,可导致不可逆的视功能损害。眼部不良反应发生机制尚不清楚,紫杉醇导致黄斑水肿可能与其导致视网膜色素上皮细胞和Müller细胞功能障碍有关,其他不良反应可能与紫杉醇的细胞毒性有...     

新生大鼠大脑皮层神经细胞培养及影响因素

神经细胞是近代神经学科中研究重点之一，在体外特定环境中，通过培养可以连续地直接观察神经细胞或神经胶质细胞的形态、生长、分化、迁移、突触形成、理化改变以及对环境的反应。本文结合新生大鼠大脑皮层神经细胞的培养，对影响神经细胞培养的诸因素及其作用做了初步探讨。     

DNA抑制剂在新生大鼠脑神经干细胞体外培养中的作用

<正>神经胶质细胞和成纤维细胞是神经元培养的支持细胞,前者可提供神经细胞营养因子,后者可以提供成纤维细胞生长因子,二者均有维持神经细胞存活和神经细胞突起生长的功能,但过度增殖反而影响神经细胞的生长、分化,使神经     

视网膜Müller细胞的胶质化激活在实验性青光眼大鼠模型中的作用——复旦大学神经生物学研究所杨雄里院士访谈录

正怎样把基础研究成果、技术与临床问题更紧密地结合起来?在京召开的第六届中国眼科学基础研究大会暨研究生导师论坛上,杨雄里院士开门见山地谈到了他近年来一直思考的这一问题和最大心愿。他所做的"慢性高眼压大鼠视网膜Müller细胞胶质化激活及其机制"的研究报告,反映了他和同事们在这方面所取得的一些成果。这一项目也包含了复旦大学神经生物学研究所研究人员(基础)和复旦大学附属眼耳鼻喉科医院孙兴怀院长(临床)共同合作的出色成果。     

碱性成纤维细胞生长因子对培养大鼠胚胎脊髓神经细胞的作用

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对大鼠胚胎脊髓神经细胞的作用。方法在培养孕 18d的大鼠胚胎脊髓神经细胞中加入bFGF ,通过培养细胞并计数存活的脊髓神经细胞集落数 ,检测超氧化物歧化酶(SOD)的活力及丙二醛的含量 ,并观察bFGF对脊髓神经细胞生长发育的影响。结果bFGF可促进脊髓神经细胞分化、增殖 ,SOD活力、丙二醛含量明显变化 ,脊髓神经细胞胞体较大、突起较长 ,培养 14d后脊髓神经细胞的数量也明显增高。结论bFGF能促进脊髓神经细胞生长发育 ,增加脊髓神经细胞的胞体和突起长度 ,增强脊髓神经细胞内SOD活力 ,降低丙二醛含量。     

果糖二磷酸锌对体外培养新生大鼠海马神经细胞生长发育的影响

目的研究不同剂量果糖二磷酸锌(ZnFDP)对体外培养新生大鼠海马神经细胞的生长发育的影响.方法采用体外培养的新生大鼠海马神经细胞,在血清培养液中加入低、中、高剂量ZnFDP,使之终浓度分别为2.5、12.5、125μg*ml-1,通过细胞形态学观察,神经元突起和胞体生长状况的定量比较,不同培养期细胞存活数和培养液中乳酸脱氢酶(LDH)渗漏量的测定,分析研究了ZnFDP对海马神经细胞生长发育的影响.结果培养36h后与对照组比,中剂量ZnFDP组海马神经元的突起数目增多,突起长度增加,胞体长径没有显著性变化;低剂量ZnFDP组与对照组比各项指标没有显著差别;高剂量ZnFDP则明显抑制神经细胞分化.培养3d、7d、10d,中剂量ZnFDP组细胞存活数明显高于对照组;培养7d、10d,中剂量ZnFDP组LDH渗漏量明显低于对照组.结论一定量的ZnFDP能促进海马神经细胞的生长发育.     

成人骨髓间充质干细胞体外向视网膜细胞的诱导分化

目的研究取材于成人骨髓的间充质干细胞在一定诱导条件下向视网膜神经细胞的分化。方法成人骨髓经密度梯度离心得到的细胞,根据其高黏附特性体外培养获得间充质干细胞。利用流式细胞仪分析其细胞表型,在体外诱导使其向视网膜神经细胞分化并用免疫荧光法进行鉴定。结果从骨髓中分离培养的细胞具有成纤维细胞样形态,贴壁生长,表型相对均一,表面标志为CD90、CD44、CD147阳性;而CD34、CD38、CD45、CD14、HLA-DR阴性。体外诱导后可以得到表达nestin(神经干细胞标志物)、GFAP(神经胶质细胞标志物)和Rhodopsin(视网膜光感受器细胞标志物)阳性的细胞。结论从人骨髓中分离培养得到的间充质干细胞具有向视网膜神经细胞分化的潜能。     

补肾活血方对去卵巢模型大鼠脑内免疫细胞超微结构的影响

目的观察补肾活血中药黄芪三仙汤对去卵巢雌性大鼠脑内神经胶质细胞的超微结构的影响.方法将32只雌性大鼠随机分为4组,即正常对照组、假手术组、模型组和治疗组.模型组、治疗组行大鼠背部切口切除双侧卵巢造模;假手术组切除同样大小的脂肪;治疗组用黄芪三仙汤灌胃,另外三组以等容积的氯化钠液处理.于4周后用透射电镜观察脑组织中神经胶质细胞超微结构变化.结果模型组海马区可见神经胶质细胞增生,其中以小胶质细胞为主,星形胶质细胞次之;可见变性的神经细胞,在变性神经细胞的周边和血管周围增生活跃的小胶质细胞,还见脂褐素.治疗组中,以上变化明显减少.假手术和正常对照组也可见脂褐素,但较模型组少,其余超微结构基本正常.结论黄芪三仙汤能明显抑制神经胶质细胞的增生和活化,抑制中枢神经的免疫炎性反应,从而达到神经保护作用.