TSHR在甲状腺相关眼病中表达的研究

目的:检测甲状腺相关眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)患者球后组织和眼外肌中是否有促甲状腺激素受体(TSHR)蛋的表达。方法:选用27例TAO患者球后脂肪、结缔组织和眼外肌标本和4例正常脂肪、结缔组织及眼外肌标本,常规石蜡切片,3％H2O2灭活内源性过氧化物酶,pH 6.0柠檬酸缓冲液高压锅修复抗原,加兔抗人TSHR抗体4℃过夜,     

甲状腺相关眼病眼眶组织透明质酸酶mRNA表达的研究

目的 探讨透明质酸酶1(HYAL1)mRNA在甲状腺相关眼病(TAO)球后脂肪组织及眼外肌中的表达情况,为透明质酸酶用于TAO患者的治疗提供实验依据.方法 收集我院2000～2005年确诊并行眼眶减压术或斜视矫正术的TAO患者共21例为TAO组,获得眼外肌标本18例,脂肪标本17例;正常肌肉组织标本17例和脂肪组织标本11例作为对照组.所有标本通过原位杂交的方法,测量累计光密度(IOD)值均值,比较HYAL1mRNA的表达.结果 TAO肌肉组织中HYAL1 IOD均值高于对照组(P<0.01);而TAO和对照组脂肪组织中HYAL1 IOD均值比较差异无统计学意义.结论 TAO患者肌肉组织中有高的HYAL1 mRNA表达量,可能与眼外肌的纤维化有关;脂肪组织中有低水平的HYAL1 mRNA表达,是造成眶后透明质酸堆积的原因之一.     

甲状腺相关眼病眼眶组织病理结构与细胞因子的相关性研究

目的:研究甲状腺相关眼病(TAO)眼眶软组织的病理组织学特点及细胞因子的分布。方法:收集2007年～2010年于吉大二院住院患者,经临床表现及CT证实为TAO,并行眼眶减压术或眼外肌手术的患者23例,收集眼眶软组织标本,行HE染色,采用免疫组织化学方法检测组织中IL-4,TNF-α、IFN-γ的表达。结果:脂肪结缔组织间有不同程度免疫细胞和炎性细胞浸润及成纤维细胞增生,浸润细胞大多为淋巴细胞。IL-4,TNF-α和IFN-γ分别在4、12、11例中表达。在细胞外基质中明显。结论:TAO的眼眶脂肪纤维结缔组织增生明显,新生血管形成,细胞因子在其发病过程中起作用。     

Galectin-1在鼻咽癌中的表达与意义

目的 探讨Galectin-1在人鼻咽癌(NPC)组织中的mRNA和蛋白表达水平,及其在鼻咽癌发病中的意义.方法 Real-time RT-PCR法检测32例鼻咽癌组织及10例正常鼻咽上皮组织中Galectin-1的mRNA表达;免疫组织化学法检测对应组织石蜡切片中Galectin-1的蛋白表达.结果 Galectin-1在鼻咽癌中mRNA和蛋白的表达明显高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05),Galectin-1的高表达在转录水平上受到调节.结论 鼻咽癌中Galectin-1基因高表达在NPC发病机制中具有重要意义.     

非小细胞肺癌患者血清外泌体中表皮生长因子受体的表达情况及其对NCI-H1299细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清外泌体中表皮生长因子受体(EGFR)的表达情况以及对NSCLC细胞NCI-H1299增殖和侵袭的影响。方法选取10例原发NSCLC患者(NSCLC组)及8例健康者(正常组)的血清标本,提取分离血清中的外泌体并进行鉴定后,检测外泌体中EGFR蛋白的表达水平。收集15例NSCLC患者的癌组织和癌旁组织,检测组织中EGFR mRNA的表达水平,并分析NSCLC患者血清外泌体EGFR蛋白表达水平与NSCLC组织EGFR mRNA表达水平的相关性。取对数生长期NCI-H1299细胞,分为NSCLC组、正常组、对照组,NSCLC组、正常组细胞分别加入NSCLC患者、正常健康人血清外泌体悬液,检测培养24 h、48 h、72 h、96 h后细胞增殖情况,以及培养48 h后细胞的侵袭能力。结果 NSCLC组外泌体中EGFR蛋白的相对表达水平高于正常组,NSCLC组织中EGFR mRNA相对表达水平高于癌旁组织,两者呈正相关(均P<0.05)。NSCLC组NCI-H1299细胞培养48 h、72 h、96 h后的细胞增殖情况以及培养48 h后的侵袭能力均高...     

甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞CD90表达的研究

目的检测培养的不同来源眼眶成纤维细胞(OF)是否存在表达CD90抗原的差异,为研究眼眶成纤维细胞潜在的功能异质性奠定基础。方法培养甲状腺相关眼病(TAO)患者和正常对照眼眶成纤维细胞,流式细胞术检测CD90的表达。结果正常人、TAO患者的眼外肌、眼眶脂肪/结缔组织来源的成纤维细胞均有部分细胞表达CD90。正常人/眼外肌来源OF、TAO患者/眼外肌来源OF、正常人/眼眶脂肪来源OF、TAO患者/眼眶脂肪来源OF的CD90 细胞的比例分别为82.95%±6.49%,80.83%±7.14%,64.55%±4.45%,59.20%±11.19%。眼外肌来源的成纤维细胞中CD90 的细胞比例高于眼眶脂肪/结缔组织来源的成纤维细胞(P<0.05),而正常人与患者之间差异没有统计学意义(P>0.05)。结论正常人和TAO患者OF表达CD90抗原不一致,且与解剖部位有关。     

地塞米松对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响

目的 探讨地塞米松对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OF)细胞间粘附分子(ICAM-1)表达的影响.方法 取10例TAO患者和5例正常对照的眼眶脂肪组织与眼外肌,体外培养OF,在培养基中分别加入10-6 mol/L地塞米松、300 U/mL 干扰素-γ(IFN-γ)或10-6 mol/L地塞米松与300 U/mL IFN-γ的混合液,作用72 h,用流式细胞仪检测OF上ICAM-1的表达水平.结论 体外培养的OF均表达ICAM-1,TAO患者的表达量高于正常对照者(P＜0.05).IFN-γ促进OF表达ICAM-1,地塞米松不仅抑制OF表达ICAM-1,而且能抑制IFN-γ诱导的ICAM-1表达.结论 TAO患者OF表达ICAM-1增强可能是促进眶内炎症发生的原因之一,糖皮质激素发挥治疗作用的可能机制之一是其抑制OF表达ICAM-1以及IFN-γ诱导的ICAM-1表达.     

香烟烟雾提取物及尼古丁诱导甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞氧化应激反应并上调NF-κB表达

目的 探讨香烟烟雾提取物(CSE)及尼古丁对甲状腺相关眼病(TAO)氧化应激的影响,并以NF-κB为靶点探索其可能的分子机制.方法 取5例无吸烟史的TAO患者和3例无吸烟史的因其他原因行眼外科手术的患者(对照患者)的眼外肌组织,原代培养眼外肌来源的眼眶成纤维细胞(OFs).将OFs经10％ CSE、0.5 μg/mL尼古丁、10 μg/mL尼古丁分别作用,即为CSE组、低浓度尼古丁组和高浓度尼古丁组.分别培养24、72 h后分别采用MTT法、ELISA法和分光光度计法检测各组细胞活性、8-羟脱氧鸟苷(8-OHdG)水平及丙二醛(MDA)含量;24 h后采用酶标仪法检测活性氧(ROS)水平,RT-PCR法检测NF-κB mRNA水平.结果 干预24及72 h后,TAO患者及对照患者OFs的细胞活力在CSE作用下均下降(P＜0.05),且TAO患者对OFs更敏感.高浓度尼古丁干预24 h后,TAO患者OFs的8-OHdG水平增加(P＜0.05);低浓度尼古丁干预72 h时,OFs的8-OHdG水平也增加(P＜0.05).TAO患者及对照患者OFs经CSE或不同浓度尼古丁干预72 h后的MDA含量均增加(P＜0.01).高浓度尼古丁干预24 h后,TAO患者OFs中ROS水平上升(P＜0.01).CSE干预24 h后,TAO患者OFs中NF-κB mRNA的表达上升(P＜0.05);而对照患者OFs NF-κB mRNA的表达经CSE及高浓度尼古丁干预后下降(P＜0.05).结论 吸烟可通过激活TAO患者OFs的氧化应激参与TAO的病理过程,即使吸烟量较少,经时间累积也可能发挥作用,其机制可能是通过上调NF-κB mRNA的表达来实现的.     

TAO眼眶成纤维细胞上CCR1的表达

目的 研究趋化因子受体CCR1在甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)的眼眶成纤维细胞(orbital fibroblasts,OFs)上的表达,探讨其在发病机制中的作用.方法 采用免疫组织化学SP法检测25例TAO患者和10例正常对照的眼眶组织中OFs上CCR1的...     

结节病患者皮肤及淋巴结组织中分枝杆菌基因的检测和鉴定

目的 探讨分枝杆菌在结节病发病中的作用.方法 采用巢式聚合酶链式反应.限制性片段长度多态性和PCR产物测序的方法,对31例福尔马林固定.石蜡包埋的结节病组织标本(皮肤19例,淋巴结12例)、14例正常皮肤石蜡标本和3例皮肤结核石蜡标本进行检测.结果 19例结节病皮肤标本中,有4例(21.1%)扩增出相对分子质量为65 000的分枝杆菌热休克蛋白基因,其中l例为结核分枝杆菌,2例为龟分枝杆菌,1例为戈登分枝杆菌.12例结节病淋巴结组织和14例正常皮肤组织标本中均未检测到分枝杆菌基因.3例皮肤结核标本中检测出结核分枝杆菌基因.结论 分枝杆菌可能与皮肤结节病发病有关.     

促甲状腺激素受体在甲状腺相关眼病眼外肌原位表达的研究

OBJECTIVE: To investigate the expression of thyrotropin receptor (TSHR) in the extraocular muscles (EOM) of the eyes of patients with thyroid-associated ophthalmopathy (TAO). METHODs: EOM specimens were obtained from 12 patients with severe TAO and 10 healthy subjects within 1 hour after accidental death and the paraffin-embedded sections were observed by streptavidin-peroxidase (SP) immunohistochemical methods. RESULT: The expression of TSHR was observed in the perimysium, cytomembrane and cytoplasm in 10 of the 12 TAO specimens, accounting for a TSHR expression rate of 83.3% in the EOM of TAO patients. No TSHR protein was found in the healthy subjects. CONCLUSION: High TSHR expression in the EOM of TAO patients indicates that as a common antigen between the orbit and thyroid, TSHR play a key role in the pathogenesis of TAO.     

甲状腺相关眼病眼外肌组织病理及超微结构

目的:观察甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)眼外肌光学显微镜病理和透射电子显微镜超微结构的改变.方法:手术获得眼外肌分为两组:正常组和TAO组.采用光学显微镜和透射电子显微镜对其进行结构观察.结果:光镜检查显示,正常组未见特殊变化.TAO组眼外肌间质纤维组织增生,大量淋巴细胞和浆细胞浸润.间质内血管组织增生.部分组织纤维瘢痕形成.透射电镜检查显示,正常组眼外肌组织结构清晰.TAO组眼外肌肌原纤维部分Z线紊乱、消失.肌原纤维部分溶解破坏、形成空泡.重者可见肌细胞完全破坏,纤维化.可见肌纤维母细胞.间质血管内皮细胞肿胀,胞浆成空泡样变,内皮细胞间连接增宽,毛细血管周围可见多个巨噬细胞聚集.结论:TAO眼外肌细胞有不同程度的破坏,提示眼外肌可能是甲状腺相关眼病的主要靶组织之一.     

CC趋化因子受体1在TAO眼眶组织免疫细胞上的表达

目的研究CC趋化因子受体1(CCR1)在甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)的眼眶免疫细胞上的表达。方法采用SP免疫组织化学方法检测25例TAO患者和10例正常对照的眼眶免疫细胞CCR1的表达情况,并将CCR1表达与TAO患者的临床病理特征进行相关性分析。结果 TAO患者的眼眶免疫细胞可明显表达CCR1,CCR1的阳性表达率为84%;正常人的眼眶免疫细胞表达CCR1不明显或呈弱阳性,与TAO患者相比CCR1阳性表达率差异具有统计学意义(P<0.05)。TAO患者眼眶免疫细胞CCR1的表达与临床活动性评分(clinical activity scores,GAS)间呈正相关(r=0.701,P=0.000)。结论趋化因子受体CCR1可表达于TAO的眼眶免疫细胞,其在TAO的发病机制中可能发挥重要作用。     

甲状腺相关眼病患者与正常人眼眶前脂肪细胞表面抗原表达的比较

目的:研究甲状腺相关眼病(TAO)与正常人眼眶前脂肪细胞表面抗原的表达.方法:采用组织块培养法对TAO和正常人的眼眶前脂肪细胞进行体外培养,用流式细胞术对其细胞表面抗原CD29,CD44,CD49d,HLA-DR进行检测.结果:TAO和正常人眼眶前脂肪细胞均表达CD29,CD44和CD49d,TAO患者较正常人表达HLA-DR明显增强(P＜0.05).结论:TAO患者与正常人的眼眶前脂肪细胞均来源于间充质干细胞,TAO的眼眶前脂肪细胞可能参与了TAO的眶内炎症.     

MRI在甲状腺相关眼病严重度分级的应用

目的探讨甲状腺相关眼病（TAO）不同严重度分级的MRI影像变化。方法64例TAO患者采用NOSPECS标准评分及磁共振（MRI）行眼眶扫描,对MRI诊断及NOSPECS评分进行比较。结果NOSPECS2级1例,MRI表现为眼眶软组织影增厚;3级13例,其中8例MRI显示眼外肌增厚;4级45例,MRI表现为眼外肌增粗,以肌腹部增厚为主;5级3例,MRI对角膜的显示欠满意;6级2例,MRI表现为视神经轴受压、行程改变。MRI对眼外肌受累的显示率明显高于NOSPECS评分（P〈0.05）。结论MRI显示TAO不同严重度分级的病理改变,增加了早期不典型4级TAO的发现率,克服NOSPECS评分滞后的缺陷。     

TSHR基因上新发现SNP及其在GD致病中的评价

目的探讨TSH受体上单核苷酸多态性(SNP)与Graves病(GD)的相关性。方法(1)以一GD家系的12个成员(包括3例患者、9例家系成员)为研究对象,抽提外周血DNA,设计引物,扩增TSHR的全部外显子和部分内含子,PCR产物纯化后测序,对TSH受体的SNP进行筛查。(2)应用病例-对照研究方法,检测筛查出的SNP基因型和等位基因变化频率与GD有无相关性。结果共发现8个多态位点,其中第8外显子上的多态位点在SNP库中未见报道,为首次发现。这些多态位点的变化频率在患者与正常组间相比较,无明显统计学差异。结论新发现的SNP及其他多态位点与GD不连锁;提示汉族人TSH受体基因与GD无相关性;该基因的多态位点在不同的人种间存在明显差异。     

甲状腺相关性眼病患者外周血CD4+、CD8+T细胞百分比及细胞表面程序性死亡蛋白1表达的改变及其意义

目的 观察甲状腺相关性眼病(TAO)患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+、CD8+T细胞百分比及细胞表面程序性死亡蛋白1(PD-1)的表达水平,探索这两者变化在TAO发病机制及疾病诊断中的意义.方法 收集21例TAO患者、21例Graves病(GD)无眼病患者及20例健康对照者资料,采用流式细胞术检测所有受试者PBMC中CD4+、CD8+T细胞百分比及其表面PD-1的表达率,比较组间差异,分析其与患者病程、甲状腺功能、甲状腺相关抗体及TAO疾病活动性和严重程度之间的关系.结果 (1) TAO患者PBMC中CD4+、CD8+T细胞百分比分别为(35.9±14.5)％、(22.2±8.4)％,GD患者分别为(33.1±13.0)％、(18.6±9.2)％,均高于健康对照者[(17.4±7.4)％、(7.7±4.8)％,P＜0.01].(2) TAO及GD患者PBMC中CD4+T细胞表面PD-1表达率分别为(8.3±6.4)％、(28.0±26.6)％,均低于健康对照者[(52.2±28.6)％,P＜0.01.P＜0.05],且TAO患者低于GD患者(P＜0.05);TAO患者PBMC中CD8+T细胞表面PD-1表达率低于健康对照者r(12.7±13.4)％vs(38.2±24.2)％,P＜0.01].(3) TAO患者PBMC中CD8+T细胞百分比与病程呈正相关(r=0.478,P＜0.05).(4) TAO患者活动期组与非活动期组、轻度组与中重度组间CD4+、CD8+T细胞百分比及其表面PD-1表达率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 TAO患者PBMC中CD4+、CD8+T细胞百分比及细胞表面PD-1表达存在异常,可能参与TAO的自身免疫过程.     

血栓闭塞性脉管炎患者血浆源性外泌体miR-223-5p对人血管平滑肌细胞的影响

目的 探究血栓闭塞性脉管炎（thromboangiitis obliterans,TAO）患者血浆源性外泌体中miRNAs对人血管平滑肌细胞（human vascular smooth muscle cell,HVSMC）的影响。方法 从TAO患者和健康对照的血浆中提纯外泌体,进行miRNA测序。通过生物信息学分析鉴定差异表达的miRNA(differentially expressed miRNA,DEmiRNA),用RT-qPCR进一步验证。将PKH67荧光标记的外泌体与HVSMC共培养,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测HVSMC的细胞活力和凋亡。使用双荧光素酶报告分析并确认miR-223-5p的下游靶点。结果 在TAO患者和健康对照之间共发现39个DE-miRNA,其中miR-223-5p是显著上调的miRNA。TAO患者血浆外泌体或miR-223-5p模拟物能降低HVSMC的细胞活力并促进细胞凋亡,miR-223-5p抑制剂可削弱TAO患者血浆源性外泌体的抑制和促凋亡作用。血管内皮细胞黏附分子1(vascular endothelial cell adhesion mole...