重症肌无力AChRAb与培养神经元nAChR免疫结合反应研究

目的 从离体细胞水平对重症肌无力（MG）患者伴有中枢神经系统（CNS0受损的机制进行探讨。方法 从MG患者和正常人血中提取IgG。体外培养新生SD大鼠皮层，脑干、海马神经元，同时培养TE-671细胞株作阳性对照，然后其与神经元特异性抗体及胆碱能神经元特异性抗体进行间接免疫荧光双标记，观察其免疫结合反应。结果 MG患者IgG可与离体培养的皮层，脑干、海马神经元及TE671免疫结合，而正常人血中提取的IgG则否。结论 MG患者外周IgG(AChRAb)可与离体培养的神经-烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR)结合。是MG患者CNS受损的可能机制。     

重症肌无力中枢损害脑内神经胶质细胞的变化

目的　为了探讨神经胶质细胞凋亡在重症肌无力 ( MG)中枢神经系统 ( CNS)受损机制中的作用。方法　将 MG患者血中 Ig G ( ACh RAb)注入大鼠侧脑室 ,建立 MG大鼠中枢损害模型 ,并应用透射电镜来观察该模型大鼠中枢神经胶质细胞凋亡情况。结果　侧脑室注射 ACh RAb后 ,在 MG中枢损害模型大鼠海马及大脑皮层可见神经胶质细胞凋亡。结论　在 MG中枢损害机制中 ,神经胶质细胞凋亡可能发挥重要作用。 ACh RAb与CNS内神经 -ACh R结合 ,导致包括神经胶质细胞凋亡在内的 CNS损害 ,引起 CNS功能障碍。     

重症肌无力CNS损害和神经细胞关系

目的　探讨神经细胞凋亡与重症肌无力 ( MG)中枢神经系统 ( CNS)损害之间的关系。方法　MG患者血中提取纯化的 Ig G注入 SD大鼠脑室系统 ,然后用透射电镜观察大鼠中枢神经细胞形态学变化。结果　侧脑室注射 MG患者 Ig G后 ,在大鼠大脑皮层、海马神经细胞中观察到神经细胞凋亡现象。结论　 MG中枢损害过程中 ,神经细胞凋亡可能起重要的作用。 MG患者乙酰胆碱受体抗体 ( ACh RAb)与 CNS神经 -ACh R结合 ,诱发神经细胞凋亡 ,从而可能致 MG CNS功能障碍。     

NGF对AChRAb脑内注射所致中枢神经损害的保护作用

目的　探讨神经生长因子 (NGF)对乙酰胆碱受体抗体 (ACh RAb)脑内注射所致重症肌无力 (MG)大鼠中枢神经系统 (CNS)损害神经细胞凋亡的影响。方法　分别从 MG患者和健康者血中提取 Ig G,注入大鼠脑室系统。以原位末端标记法 (TUNEL)检测脑细胞凋亡情况及动态变化。另一组在注入 ACh RAb后予以 NGF并观察结果。结果　 MG组脑阳性细胞于注 ACh RAb后第 2周出现 ,脑内多部位均有凋亡细胞且逐渐增多 ,以皮层和海马区较明显。NGF组凋亡细胞数少于 MG组 (P <0 .0 5 )。结论　脑室注入 MG患者 ACh RAb可引起大鼠CNS功能障碍 ,神经细胞发生凋亡 ,细胞凋亡在 MG脑损害中可能起重要作用。 NGF能减轻凋亡程度 ,补充NGF可能有助于防治 MG CNS损害。     

乙酰胆碱受体抗体与大鼠中枢神经元烟碱型乙酰胆碱受体之间免疫结合反应

本研究旨在探讨长期以来无定论的重症肌无力（MG）患者血和脑脊液（CSF）中的乙酰胆碱受体抗体（AChRab）能否与中枢神经元烟碱型乙酰胆碱受体（神经-nAChR）结合，并引起中枢神经系统（CNS）功能障碍。用免疫亲和层析法从AChRab阳性的全身型MG患者血中提取纯化AChRab，然后用免疫组化法探讨AChRab与大鼠中枢神经-nAChR之间的免疫结合反应。结果首次表明，AChRab与神经-nAChR之间的阳性免疫结合反应广泛分布于大鼠大脑皮层、脑干颅神经运动核团、脊髓前角运动神经元等部位，提示MG患者AChRab不仅可与神经肌接头（NMJ）处肌-nAChR结合引起肌无力等症状，还可与CNS神经-nAChR结合，并可能引起CNS功能障碍。     

重症肌无力患者烟碱型乙酰胆碱受体抗体致鼠脑干听觉诱发电位

目的神经肌接头（NMJ）处乙酰胆碱（ACh）传递障碍，是重症肌无力（MG）发病机制。然而，近年有研究表明部分MG患者有中枢神经系统（CNS）受损的症状和神经电生理方面的异常表现，本研究为探讨其机制。方法从烟碱型乙酰胆碱受体抗体（nAChR－ab）阳性的全身型MG患者血清中提取IgG，将其注入SD大鼠脑室系统，观察其对脑干听觉诱发电位（BAEP）的影响。结果nAChR－ah使脑干听觉传导功能异常，表现为Ⅰ波后各波消失，Ⅰ－Ⅲ、Ⅰ－ⅤIPLs延长，Ⅴ／Ⅰ波幅比值降低。表明MG患者nAChR－ab可能与CNS中的神经－烟碱型乙酰胆碱受体（神经－nAChR）结合，BAEP异常可能与nAChR－ab结合听觉通路中继核团有关。结论nAChR－ah的病理作用不仅只限于NMJ处的nAChR，还可波及到脑干处的nAChR。     

重症肌无力患者IgG脑室内注射对大鼠EEG及BAEP的影响

目的 观察重症肌无力(myasthenia gravis，MG)患者IgG(AChRAb)经大鼠脑室内注入对其脑电图(electroencephalography，EEG)及脑干听觉诱发电位(brain stem auditory evoked potential，BAEP)的影响，并探讨AChRAb影响大鼠中枢神经系统(CNS)的机制。方法将从确诊的、AChRAb阳性的MG患者血清中提纯的IgG(AChRAb)，注射到实验组大鼠侧脑室，对照组大鼠则注射健康人IgG，观察大鼠行为学、BAEP、EEG改变。结果实验组大鼠术后出现类似于实验性自身免疫性MG的行为学改变，部分大鼠出现癫痫发作BAEP峰间潜伏期(IPLs)延长EEG异常，即δ、θ增多与痫性波发放增加。结论 MGAChRAb可致大鼠CNS损害，AChRAb与大鼠CNS神经元型乙酰胆碱受体结合，可能是其病理生理机制。     

重症肌无力cICAM-1及TNF-α水平的检测

目的　探讨神经免疫性疾病重症肌无力 ( MG)患者血清中循环细胞间黏附分子 -1 ( c ICAM-1 )及肿瘤坏死因子 -α( TNF-α)水平变化 ,并观察伴或不伴胸腺瘤 MG患者特异性 T细胞的免疫应答及细胞因子对 MG的影响。方法　采用 ELISA法对 1 5例 MG患者血清 c ICAM-1和 TNF-α水平进行检测 ,并以 1 5例健康献血员作为对照。比较伴或不伴胸腺瘤 MG患者上述因子的变化。结果　 1 5例 MG患者血清 c ICAM-1水平显著高于对照组 ( P<0 .0 5 ) ,血清 TNF-α水平非常显著高于对照组 ( P<0 .0 1 )。MG伴胸腺瘤 MG患者 c ICAM-1及 TNF-α水平高于不伴胸腺瘤组 ,但无统计学意义 (均 P>0 .0 1 )。结论　 MG患者血中高水平 TNF-α可直接破坏乙酰胆碱受体 ( ACh R)或直接促进 B细胞分化、生长 ,从而增加乙酰胆碱受体抗体 ( ACh RAb)的产生。 c ICAM-1可能在中枢神经系统炎症反应的调节中起重要作用。     

重症肌无力AChRAb致中枢损害时TNF-α的变化及意义

目的　探讨重症肌无力(MG)中枢神经系统(CNS)损害时肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化及其意义。方法　将MG患者血中提取的IgG注入大鼠脑室系统,建立CNS损害的MG大鼠模型,然后用放免法(RIA)测定其脑、胸腺、周围血中TNF-α的水平及其变化。 结果　侧脑室注入MG患者IgG后,大鼠脑组织、胸腺、血清TNF-α水平显著升高,脑组织中TNF-α水平与胸腺及血清正相关,r值分别为0 .768、0 .516,P<,0 .001。结论　TNF-α在MG患者IgG引起的大鼠CNS损害过程中起重要作用,MG中枢损害与外周免疫功能之间可能存在内在联系。     

重症肌无力患者血清sIL—2R水平检测

对100例临床确诊为重症肌无力（MG）、血清乙酰胆碱受体抗体阳性的患者进行血清可溶性白细胞介素-2受体（sIL－2R）检测。结果表明：（1）MG患者治疗前血清中sIL-2R水平与正常对照组无显著性差异。其中全身型MG组较正常对照组sIL－2R水平明显增高，但眼肌型MG组与正常对照组间无显著差异；（2）全身型MG组经强的松治疗4周后sIL－2R水平明显下降；（3）胸腺瘤切除术后1年后sIL－2R水平较术前显著降低。上述结果提示sIL－2R水平可能与MG疾病状态有密切关系。     

大鼠重症肌无力中枢损害运动诱发电位研究

目的 探讨乙酰胆碱受体抗体（AChRAb)与中枢神经系统（CNS）运动传导通路之间的关系。方法 从AChRAb阳性的全身型重症肌无力（MG）患者血清中提取纯化IgG,然后注入大鼠侧脑室,观察其对运动诱发电位（MEP）的影响。结果 注入大鼠侧脑室内的AChRAb可致大鼠MEP异常,表现为MEP波消失或潜伏期延长。结论 本研究进一步证实MGhRAb不仅可以作用于NMJ处的AChR,而且还可作用于大鼠CNS,致CNS运动传导通路功能异常。     

Analysis of immunoglobulin secretion by lymph organs with myasthenia gravis

OBJECTIVES: To investigate in vitro anti-acetylcholine receptor (AChR) antibody secretion by lymph organs with myasthenia gravis (MG) with special attention to clinical status and stages. MATERIALS AND METHODS: Twenty MG patients before therapy were included in this study. Four patients were negative for serum anti-AChR antibodies (AChRAb). All patients received extended thymectomy. Thymic cells, bone marrow (BM) cells and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were cultured for 1 week. AChRAb secretion and IgG secretion in the culture medium were determined by immunoprecipitation assays and ELISA respectively. RESULTS: PBMC secreted AChRAb and IgG most efficiently, followed by BM cells, and then thymic cells. Even in patients whose diseases were of short duration (less than 2 months), the tendency was not changed. AChRAb secretion by BM cells and PBMC significantly correlated with serum AChRAb levels. Thymectomy did not change AChRAb or IgG secretion by PBMC within 3 months. AChRAb secretion by PBMC paralleled the clinical status. Some seronegative patients turned positive by culturing PBMC. CONCLUSION: PBMC is the most efficient site at producing AChRAb, even in patients of short duration (equal to, or less than, 2 months). Monitoring AChRAb secretion by PBMC is useful to estimate the autoimmune activity of MG.     

乙酰胆碱受体抗体IgG对大鼠隔斜角带核胆碱能神经元损害的研究

目的研究乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)IgG对大鼠隔斜角带核区胆碱能神经元的损害作用。方法大鼠一侧隔斜角带核区注入重症肌无力(MG)患者AChRAbIgG或等量健康人IgG,14d后应用免疫组化方法测定隔斜角带核A、B、C3区胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性神经元数目。结果大鼠内侧隔斜角带核区ChAT阳性细胞数实验组注射侧明显少于非注射侧(P<0.01),实验组注射侧明显少于对照组注射侧(P<0.001),实验组非注射侧明显少于对照组非注射侧(P<0.05);实验组注射侧与非注射侧ChAT阳性细胞比率明显少于对照组注射侧与非注射侧的比率(P<0.01)。结论内侧隔斜角带核区定向注射AChRAbIgG可损害该处胆碱能神经元,使其明显减少,且其毒性效力存在一定的距离效应。表明AChRAb可被动转移损伤大鼠隔斜角带核区胆碱能神经元。     

重症肌无力中枢神经系统损害与乙酰胆碱酯酶关系的研究

目的　研究重症肌无力 (MG)中枢神经系统 (CNS)损害大鼠模型乙酰胆碱酯酶 (AChE)的变化。方法　将MG患者血中提取的IgG注入大鼠脑室系统 ,致大鼠CNS损害 ,然后分别观察实验组和对照组大鼠脑、血中AChE的变化。结果　脑室注射后脑组织中AChE水平升高 ,与对照组比较差异显著 (P <0 .0 1) ,而血中AChE水平无明显变化。结论　MG患者IgG致大鼠CNS损害时脑组织AChE水平显著升高 ,表明MG患者CNS损害与CNS胆碱能神经系统功能障碍有关。     

重症肌无力中枢神经系统损害与Fas关系

目的 探讨细胞凋亡与重症肌无力（MG）中枢神经系统（CNS）损害之间关系。方法 将MG患者血中提取的IgG注入大鼠脑室系统，建立大鼠MGCNS损害模型。用免疫细胞化学方法观察Fas在脑组织中的表达。结果 在MG组脑内Fas抗原表达于大脑皮质区和海马的神经元胞膜和树突上，而正常对照组脑内无阳性Fas抗原表达。结论 Fas-FasL凋亡过程在MG CNS损害中可能起一定作用。     

Cytokine secretion by peripheral blood mononuclear cells in myasthenia gravis.

We studied spontaneous secretion of anti-acetylcholine receptor antibody (AChRAb), IgG and cytokines by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 19 MG patients without therapy and 10 normal controls. IgG secretion was higher in the culture medium of MG than in that of normal controls. AChRAb secretion was correlated with IgG secretion in MG. Interleukin (IL)-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13, interferon (IFN)-gamma and tumor necrosis factor (TNF)-alpha secreted by PBMC from MG patients were not different from those produced by those from normal controls. IgG secretion was, however, correlated with the secretions of IL-5 and IL-6 in MG. Spontaneous B cell activation was suspected in patients with MG.