干细胞白血病基因在白血病中的表达

干细胞白血（ＳＣＬ）基因编码一种ｈｅｌｉｘ－ｌｏｏｐ－ｈｅｌｉｘ（ＨＬＨ）家族的转录因子，它与许多组织的分化和发育有关，我们采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，检测了１１６例各型白血中ＳＣＬ基因的表达情况。总表达率为７１．５５％。在ＡＮＬＬ，ＣＭＬ，ｃ－ＡＬＬ和ＣＬＬ中的表达率分别与６２．９６％，８８．２４％，８５．７１％及１００％，同时，分析了８１例ＡＮＬＬ各亚型中ＳＣＬ基因的表达情况，其中ＭＯ和Ｍ     

Gas2基因在肝细胞癌中的表达及意义

已知Ｇａｓ2在细胞周期阻滞时特异性表达 ,并因其被证实参与细胞凋亡而引起人们的关注[1] 。我们对肝细胞肝癌(ＨＣＣ)和癌旁及正常肝组织中Ｇａｓ2的原位表达作对比观察 ,结合ＨＣＣ中细胞增殖及凋亡状况 ,分析Ｇａｓ2在ＨＣＣ发生、发展中的可能作用。一、材料与方法1.标本处理 :36例ＨＣＣ及相应癌旁组织取自 1999年复旦大学附属中山医院首次住院手术患者 ,另有 8例正常组织 ,取自同期因良性肿瘤而部分切除的肝手术标本。2 .原位杂交检测Ｇａｓ2ｍＲＮＡ :探针由上海肿瘤研究所提供 (与ＧｅｎｅＢａｎｋ的Ｇａｓ2ｍＲＮＡ序列有 98.6 %同…     

CEA-HBD2重组基因在人结肠癌细胞中表达初步研究

目的构建高表达人源化HBD2人结肠癌表达体系.方法构建人pLNCX2-CEA信号肽-HBD2抗菌肽(成熟肽序列)逆转录表达载体,DOTAP转染逆转录包装细胞,产生的含融合基因的侵袭性逆转录病毒,转染人结肠癌HCT116细胞,用免疫印迹法法鉴定转化细胞中HBD2蛋白的表达.结果正确构建了表达HBD2成熟肽的重组信号肽HBD2的人结肠癌表达体系,并出现正确的目的基因表达.结论此HBD2表达体系表达的特异性多肽经纯化后,可进行下一步检测等实验.     

人GLIPR-2基因的克隆及在原核中可溶性表达

目的构建pQE80L-GLIPR-2载体,并检测融合蛋白RGS·His-GLIPR-2在原核中的表达水平。方法采用RTPCR方法,将克隆人GLIPR-2(glioma pathogenesis related-2,GLIPR-2)基因全长编码区的cDNA连接到原核表达载体pQE80L中,经IPTG诱导原核表达,通过Western blot检测融合蛋白RGS·His-GLIPR-2的表达水平。超声破壁后,通过SDS-PAGE电泳分析表达产物的表达形式。结果成功构建pQE80L-GLIPR-2载体;经IPTG的诱导,GLIPR-2可与RGS·His以融合蛋白的形式高效表达。经Western blot鉴定,pQE80L-GLIPR-2在原核内表达产物相对分子质量为18000,与预期融合蛋白大小一致。对表达产物可溶性分析表明,表达蛋白在上清液中和包涵体中均有表达。结论成功构建的重组质粒能够在大肠杆菌中高效表达可溶性目的蛋白,为进一步研究GLIPR-2基因的功能和意义奠定了基础。     

CEA-HBD2重组基因在人结肠癌细胞中表达初步研究

目的　构建高表达人源化HBD2人结肠癌表达体系 .方法　构建人pLNCX2 -CEA信号肽—HBD2抗菌肽(成熟肽序列 )逆转录表达载体 ,DOTAP转染逆转录包装细胞 ,产生的含融合基因的侵袭性逆转录病毒 ,转染人结肠癌HCT116细胞 ,用免疫印迹法法鉴定转化细胞中HBD2蛋白的表达 .结果　正确构建了表达HBD2成熟肽的重组信号肽HBD2的人结肠癌表达体系 ,并出现正确的目的基因表达 .结论　此HBD2表达体系表达的特异性多肽经纯化后 ,可进行下一步检测等实验     

JARID2在人舌鳞状细胞癌中的表达

目的探讨Jumonji富含AT结合结构域2(Jumonji AT-rich interactive domain 2,JARID2)在舌鳞状细胞癌(Tongue squamous cell carcinoma)中的表达。方法利用生物信息学软件,分析JARDI2在舌鳞状细胞癌中的表达。收集5例人舌鳞状细胞癌及癌旁正常组织,提取组织总蛋白进行蛋白免疫印记检测JARID2蛋白表达。Image J软件分析JARID2蛋白灰度值,利用t检验分析JARID2在舌鳞状细胞癌中的表达。结果生物信息学预测JARID2在舌鳞状细胞癌中表达增高,蛋白印记检测JARID2在5例舌鳞状细胞癌病例中表达明显高于癌旁正常组织。结论 JARID2在舌鳞状细胞癌中高表达,可能参与舌鳞状细胞癌的发病机制。     

肿瘤转移抑制基因nm23在人肝细胞癌中的表达

为探讨ｎｍ２３－ＨＩｍＲＮＡ表达水平与人肝细胞癌转移倾向的相关性，同时进行定位分析，采用地高辛标记的ｎｍ２３－ＨＩ反意ｃＲＮＡ探针进行原位杂交的方法，对人肝细胞癌及癌旁肝组织中肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３－ＨＩｍＲＮＡ进行检测。初步研究结果表明：原位杂交染色阳性者为胞浆型颗粒状或团块状。ｎｍ２３－ＨＩｍＲＮＡ表达水平与人肝细胞癌转移倾向呈负相关（Ｐ＜０．０５）。ｎｍ２３－ＨＩｍＲ－ＮＡ表达水平与肝癌的大小、肝脏疾病背景等临床病理指标无关（均Ｐ＞０．０５）。     

人胰腺癌中MDM2癌基因的表达和对野生型p53的拮抗作用

为研究ＭＤＭ２癌基因和ｐ５３在胰腺癌中的相互关系和作用，我们用基因重组、基因转移和分子杂交技术探讨了ＭＤＭ２在胰腺癌细胞系中的表达和扩增情况，并研究了ＭＤＭ２对野生型（ｗｔ）ｐ５３的拮抗作用。结果显示，５株人胰腺癌细胞系均有ＭＤＭ２基因不同程度的表达。ＭＤＭ２表达载体转染转化的胰腺癌细胞系ＰＣ－２／ｓ－ｗｔｐ５３细胞（已转染有野生型ｐ５３的胰腺癌细胞）后，ＭＤＭ２可以部分地解除野生型ｐ５３对胰腺癌细胞生长的抑制作用，证实ＭＤＭ２基因对野生型ｐ５３的功能有拮抗作用。     

肝细胞癌中ZHX2基因启动子甲基化增强AFP的表达

目的探讨肝细胞癌中锌指和同源框2(ZHX2)基因启动子甲基化表达与血清AFP水平的关系,分析AFP基因的表达调控机制。方法以0.5、1.0及5.0μmol/L甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-Dc)培养人肝癌细胞株HepG2,采用RT-PCR及Western blot法检测用药前后ZHX2及AFP基因的mRNA和蛋白表达差异。运用甲基化特异性PCR检测肝细胞癌组织38例中ZHX2基因启动子表达情况,分析其与血清AFP水平的关系。结果 HepG2可见少量ZHX2 mRNA扩增,未检测到ZHX2蛋白表达,而AFP却高表达;应用终浓度为1.0μmol/L和5.0μmol/L的5-Aza-Dc处理肝癌细胞6 d,ZHX2表达明显增加,而AFP却表达下调。血清AFP高于25 ng/mL肝细胞癌组织中ZHX2启动子甲基化51.6%,明显高于血清AFP小于25 ng/mL组(P<0.05)。结论 ZHX2基因启动子甲基化与AFP基因的表达有关。     

食管鳞状细胞癌中HER-2基因扩增和蛋白表达

目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中HER-2基因扩增和蛋白表达状况以及与临床病理指标的关系。方法收集96例ESCC组织,采用免疫组化法检测HER-2蛋白表达,采用FISH法检测HER-2基因扩增,并对患者进行随访。结果免疫组化结果显示3例HER-2呈3+,15例2+,11例1+,67例-,3+的病例中2例HER-2基因扩增,15例2+的病例中1例拷贝数6.0。HER-2蛋白过表达与基因扩增存在显著相关性(P0.000 1)。HER-2基因扩增/蛋白过表达与肿瘤组织无坏死(P=0.012)、低临床分期(P=0.040)存在一定相关性。HER-2基因扩增/蛋白过表达患者呈预后好的趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。结论 HER-2在ESCC中有一定的基因扩增率和蛋白过表达率,两者具有相关性,且HER-2基因/蛋白过表达是潜在预后好的指标。     

肿瘤相关基因在肝细胞癌及癌旁正常肝组织中表达

目的　探讨肿瘤相关基因dek、cyclinD1、胰岛素样生长因子Ⅱ (IGF Ⅱ )、GPC3、核糖体蛋白 0 (rpP0 )mRNA在肝细胞癌 (HCC)组织中及癌旁正常肝组织中的表达及其临床意义。方法　应用RT PCR方法检测 32例HCC组织及相应癌旁正常肝组织中dek、cyclinD1、IGF Ⅱ、GPC3和rpP0mRNA的表达情况。 结果　dek、cyclinD1、IGF Ⅱ、GPC3、rpP0mRNA在癌组织中阳性表达率为 78 1%、87 5 %、87 5 %、75 0 %和 81 3% ,在癌旁正常肝组织中阳性表达率为 15 6 %、4 0 6 %、 37 5 %、2 1 9%和 31 3% ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。dek、cyclinD1、IGF Ⅱ、GPC3、rpP0mRNA在高分化HCC组织中阳性率为89 0 %、6 6 7%、6 6 7%、6 6 7%和 77 8% ,在低分化HCC组织中阳性率为 73 9%、95 7%、95 7%、95 7%和 82 6 % ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。在AFP阴性的HCC中其阳性率分别 90 0 %、80 0 %、90 0 %、90 0 %和 90 0 % ,而AFP阳性的HCC这些基因mRNA的阳性率为 72 7%、86 3%、77 3%、90 9%和 6 8 2 % ,差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。结论　dek、cyclinD1、IGF Ⅱ、GPC3、rpP0mRNA在HCC组织中呈高表达状态 ,即使是AFP阴性的HCC也呈高表达 ,因此它们可以作为诊断HCC的基因标志 ,而且联合应用时意义更大。这些基因在     

在人白血病中检测人逆转录病毒序列

人的T细胞白血病-淋巴瘤病毒(HTLV)是一种与所有已知动物的逆转录病毒都不同的人外源性逆转录病毒.HTLV与成人T细胞恶性病变的一种亚型有密切联系,而且除个别孤立病例以外未发现它与任何其他类型的白血病、淋巴瘤或其他癌肿有联系.HTLV在体外能传染给脐带血T淋巴细胞.而且被感染的细胞表达被转化的瘤性T细胞的特征.作者近来已克隆了来自HTLV基因组5＇和3＇端约1kb的DNA序列,以及位于序列侧面的4～5     

PPARγ对人胰腺癌细胞中抑癌基因PTEN表达的影响

目的:观察PPARγ对人胰腺癌细胞中抑癌基因PTEN表达的影响。方法:采用体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1,使用罗格列酮、GW9662细胞处理,运用RT-PCR检测PANC-1细胞中的PTEN基因变化情况。结果:PPARγ激动剂罗格列酮可诱导抑癌基因PTEN的高表达,随着罗格列酮浓度增加,表达也逐渐增强。结论:胰腺癌细胞中PPARγ的表达和抑癌基因PTEN的表达呈一致性,PPARγ可能是通过一定信号的转导通路来调节抑癌基因PTEN的表达,以发挥抗肿瘤的作用。     

PPARγ对人胰腺癌细胞中抑癌基因PTEN表达的影响

目的:观察PPARγ对人胰腺癌细胞中抑癌基因PTEN表达的影响.方法:体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1,使用罗格列酮和GW9662细胞分别处理PANC-1细胞,RT-PCR检测PANC-1细胞中PTEN基因表达的变化;SABC法检测PTEN蛋白表达的变化,FCM法检测PTEN蛋白表达的百分率的变化.结果:PPARγ激动剂罗格列酮能够诱导抑癌基因PTEN的高表达,同时抑制剂GW9662能够抑制抑癌基因PTEN的表达,并呈一定的量效关系.结论:胰腺癌细胞中PPARγ的表达与抑癌基因PTEN的表达呈一定的平行关系,PPARγ可能通过一定信号转导通路调节抑癌基因PTEN的表达,从而发挥抗肿瘤的作用.     

PPARγ对人胰腺癌细胞中抑癌基因PTEN表达的影响

AIM: To explore the relationship between the expression of PTEN gene and the expression of PPARgamma, and the human pancreatic cancer cells PANC-1 were cultured in vitro. METHODS: The effects of rosiglitazone and GW9662 on the expression of PTEN gene and PTEN protein in the human pancreatic cancer cells PANC-1 were detected by RT-PCR and immunohistochemistry respectively. In addition, the percentage of the expression of PTEN protein was analyzed by flow cytometry. RESULTS: The expression of PTEN gene and PTEN protein in human pancreatic cancer cells PANC-1 were all increased significantly after treated with rosiglitazone. While those were markedly reduced in GW9662 treated groups, and it has a dose-effect relationship between them. CONCLUSION: The expression of PTEN gene were paralleled with the expression of PPARgammain human pancreatic cancer cells PANC-1, which may be related to its inhibitory effects on pancreatic tumor cells.     

人胃癌细胞中COX-2基因的表达及其生物学活性

目的 为研究环氧合酶－２（ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２,ＣＯＸ－２）或通过前列腺素（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ,ＰＧ）引起的肿瘤免疫机制,我们检测了人胃癌细胞中ＣＯＸ－２ｍＲＮＡ及蛋白质水平的表达,ＰＧＥ２的释放和ＣＯＸ－２酶活性的抑制剂消炎痛（ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ,Ｉｎｄｏ）对ＰＧＥ２４ 释放和肿瘤细胞生长的影响。方法 采用免疫细胞化学染色,ＲＴ－Ｐ 及ＭＴＴ比色试验方法研究人胃癌细胞Ｃ     

IRF-1基因在白血病中的表达及其临床意义

目的 :初步分析了白血病细胞IRF 1基因表达水平及其临床意义。方法 :采用逆转录 聚合酶链反应扩增IRF 1基因 ,以 β actin基因作为对照 ,结合凝胶图象扫描 ,以IRF 1/ β actin作为IRF 1相对表达量进行分析。分析白血病 77例 ,难治性贫血RAEB 2例及 4个白血病细胞系。结果 :急性白血病 18例未检测到IRF 1基因 ,急白组及慢粒组IRF 1表达低于正常组(P <0 0 5 )。HL6 0 ,K5 6 2 ,U9373个白血病细胞系IRF 1表达明显降低。慢粒患者应用IFN治疗后IRF 1表达量增加。结论 :IRF 1基因是影响白血病发病的一个重要的抑癌基因 ,在白血病可能存在缺失或部分失活的异常改变 ,对白血病的诊治有参考价值。     

逆转录病毒载体介导人类G6PD基因在人红白血病细胞中的表达

目的：探讨逆转录病毒载体介导人类G6PD基因在人白血病细胞中的表达。方法：构建G6PD cDNA的逆转录病毒表达载体pLG6PDSN,转染包装细胞PA317，病毒上清感染人红白血病细胞K562，以PCR方法检测病毒载体是否整合于细胞基因组，定量法测定G6PD表达。t检验比较转染组与对照组间的表达差异。结果：酶切鉴定表明，G6PD cDNA准确插入pLXSN相应位点，载体构建成功。转染后PCR扩增NeoR基因，证明细胞DNA整合有逆转录病毒载体。转染组与对照组酶活性测定差异有显著性（P＜0．01）。结论：本试验所构建的重组载体pLG6PDSN为严重G6PD缺陷症的基因治疗提供了表达载体。