Rapid identification of Propionibacterium acnes from blood cultures by fluorescence in situ hybridization

A newly designed probe for rapid identification of Propionibacterium acnes by fluorescence in situ hybridization was evaluated using 111 isolates from subculture and showed 100% sensitivity and specificity. A sensitivity of 95% and a specificity of 100% were achieved with direct application on 55 blood cultures containing Gram-positive rods.     

连续R显带和荧光原位杂交技术在白血病诊断中的应用

目的探讨连续R显带和荧光原位杂交技术(FISH)在鉴定自血病染色体复杂变异易位中的应用。方法对15例核型分析有疑问的标本在R显带基础上再进行荧光原位杂交。对比分析同一中期分裂相的显带和FISH结果。结果4例应用BCR／ABL探针；4例PML／RARa探针；4例AML1／ETO探针；2例IgH探针；1例MLL探针。经显带结果与FISH结果对比分析，9例疑似的复杂易位得到确证，并精确定位。6例核型结果得到修正。结论连续R显带和FISH方法在复杂变异易位的鉴定方面与传统的核型分析和直接FISH检测相比具有明显的优势。在自血病的诊断方面．对于未知异常染色体的检出将具有更广泛的应用前景。     

骨髓形态学染色联合荧光原位杂交技术在急性白血病鉴别诊断中的应用

目的 探讨联合骨髓形态学染色和荧光原位杂交(MGG-FISH)技术在Ph染色体阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)和慢性粒细胞白血病急性淋巴细胞白血病变(CML-LBC)鉴别诊断中的临床应用价值.方法 应用BCR(绿色)和ABL(橘红色)双色双融合探针,通过MGG-FISH技术对4例Ph+ALL患者、4例CML-LBC患者、1例CML急性白血病变合并淋巴瘤、1例CML急性混合细胞白血病变患者的骨髓涂片标本进行检测,依据形态学分别检测10份标本红细胞系、粒细胞系和淋巴细胞系的BCR/ABL融合信号阳性细胞百分率.结果 通过MGG-FISH方法分析,4份Ph+ALL骨髓标本红细胞系未累及,BCR/ABL融合信号阳性细胞百分率均为0%;粒细胞系阳性率分别为11%(1/9)、8%(1/12)、0%(0/8)、10%(1/10);淋巴细胞系阳性率分别为97%(76/78)、98%(87/89)、98%(97/99)、97%(75/77).4份CML-LBC骨髓标本红细胞系阳性率分别为100%(8/8)、91%(10/11)、82%(9/11)、88%(7/8);粒细胞系阳性率分别为89%(8/9)、96%(94/98)、100%(47/47)、98%(40/41);淋巴细胞系阳性率分别为96%(78/81)、93%(52/56)、96%(68/71)、95%(58/61).其余2份标本阳性率均超过80%,且通过MGG-FISH分析鉴定了恶性克隆的来源.结论 MGG-FISH技术可以准确、快速地对原发性Ph+ALL和CML-LBC进行鉴别,并可进行克隆源性分析.     

间期荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤基因组异常的临床意义

目的 探讨I-FISH技术检测MM基因组异常的临床意义.方法 应用CC技术(常规R显带)和I-FISH技术[包括GLP13q14(RB1基因)、GLP17p13.1(P53基因)、GLP13q14.3(D13S319)、GLP1q21及GLP14q32(IgH基因)DNA序列探针]分别对20例初治的MM患者(按Bataille分期,Ⅰ期7例、Ⅱ期5例、Ⅲ期8例)进行基因组检测;比较两种方法对MM染色体和基因组异常的检出率;并分析基因组异常与Bataille分期的关系.结果 CC技术从20例MM患者中检出1例[5%(1/20)]染色体异常,且为复杂核型--46,XX,-2,del(3)(p21),add(6)(q26),der(10)(q26),der(14)(32),+mar,inc[6].I-FISH检出12例[60%(12/20)]基因组异常,其中基因组异常发生频率在RB1、D13S319和P53均为30%(6/20),IgH和1q21均为20%(4/20);经配对χ2检验,I-FISH的检出率高于CC技术(χ2=9.09,P=0.001).在20例MM患者中,RB1基因异常的6例,Ⅰ期占1/20,Ⅱ期占1/20,Ⅲ期占4/20;D13S319异常的6例,Ⅰ期占2/20,Ⅱ期占1/20,Ⅲ期占3/20;P53基因异常的6例,Ⅰ期占2/20,Ⅲ期占4/20;1q21异常的4例,Ⅰ期和Ⅲ期占2/20;IgH基因异常的4例,Ⅰ期占1/20,Ⅲ期占3/20.结论 I-FISH对MM患者基因组异常检出率较高,其可检出不同Bataille分期的MM患者.

Abstract：

Objective To investigate the clinical significance of I-FISH for detection of genomic abnormalities in MM. Methods Twenty newly diagnosed MM patients(seven cases at stage Ⅰ , five cases at stage Ⅱ and eight cases at stage Ⅲ according to Bataille staging) were analyzed by combining the technique of CC (R-binding stain) and I-FISH [ including GLP13q14 (RBI gene), GLP17p13. 1 (P53 gene),GLP13q14. 3(D13S319) ,GLP1q21 ,GLP14q32(IgH gene) DNA sequence probes]. These two methods were compared for the detection rates of chromosomal and genomic abnormalities in MM and the association between genomic abnormalities and Bataille stages was also analyzed. Results CC examination showed only 1 case [5% (1/20) ] was found complex chromosomal abnormalities--46,XX,-2,del(3) (p21) ,add(6)(q26) ,der(10)(q26),der(14)(q32), + mar, inc[6]. While I-FISH assay showed that 12 cases [60%(12/20) ] were found genomic abnormalities. The frequencies of RB1, D13S319 and P53 were all 30%(6/20), and the frequencies of IgH gene and 1q21 were both 20% (4/20). The detection rate of the I-FISH was much higher than CC (χ2 = 9. 09, P = 0. 001) according to paired χ2 test. Of 20 patients,6 cases had RB1 gene abnormality, 1 case at stage Ⅰ , 2 cases at stage Ⅱ and 4 cases at stage Ⅲ. Of 20 patients, 6 cases had D13S319 gene abnormality, 2 cases at stage Ⅰ , 1 case at stage Ⅱ and 3 cases at stage Ⅲ. Of 20 patients, 6 cases in 20 had P53 gene abnormality, 2 cases at stage Ⅰ and 4 cases at stage Ⅲ. Of 20 patients, 4 cases had 1q21 gene abnormality, 2 cases at stage Ⅰ and 2 cases at stage Ⅲ. Of 20 patients, 4 cases had IGH gene abnormality, 1 case at stage Ⅰ and 3 cases at stage Ⅲ. Conclusion Ⅰ-FISH has higher detection rate for the genomic abnormalities in MM and can be used in detection of MM patients in different Bataille stages.     

应用荧光原位杂交技术筛选bcr基因探针及分析微小残留病

目的　定量检测慢性髓细胞白血病（ Ｃ Ｍ Ｌ） 造血干细胞移植（ Ｈ Ｓ Ｃ Ｔ） 后ｂｃｒ 基因重排。方法　应用荧光原位杂交（ Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ） 技术,从 Ｃ Ｅ Ｐ Ｈ 酵母人工染色体（ Ｙ Ａ Ｃ） 文库的３ 个ｂｃｒ 相关候选克隆中筛选探针,并对７ 例造血干细胞移植后病人进行检测,同时进行细胞遗传学和逆转录聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ） 分析。结果　确定了定位于２２ｑ１１ ｂｃｒ 基因区域且可在 Ｐｈ 染色体阳性细胞中易位至９ｑ３４的 Ｙ Ａ Ｃ 克隆７６５ Ｅ３ ,应用该 Ｙ Ａ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针进行荧光原位杂交,发现７ 例病人中５ 例存在ｂｃｒ 易位阳性细胞（６ ％ ～９８ ％ ） ,常规 Ｇ 显带检出３ 例, Ｐ Ｃ Ｒ 检出６ 例。结论　 Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ 可能成为白血病造血干细胞移植后疗效观察和微小残留病定量监测的重要手段。     

Potential clinical benefit of the in situ hybridization method for the diagnosis of sepsis

Despite the significant development of antibiotics, sepsis is still associated with high morbidity and mortality rates. The identification of pathologic organisms at an early stage of sepsis is critical to improve the outcome, but this is difficult to achieve with the conventional method of blood culture (BC). It has been demonstrated that the genes of pathogenic organisms surviving in neutrophils were detectable with in situ hybridization (ISH) and this method was useful for the accurate and rapid diagnosis of sepsis. In this study, we applied ISH to blood smears 60 patients with suspected sepsis. BC was also carried out using the same blood samples to investigate the diagnostic value of ISH. The number of positive results obtained by ISH was approximately four times higher than that obtained by BC (ISH, 25 [41.7%]; BC, 7 [11.7%]). The positive rate in the 21 patients given antibiotics was 61.9% by ISH (13 patients) and 4.7% by BC (1 patient). The antibiotic treatments targeting the organisms detected by either procedure showed a beneficial clinical outcome. Positive results by ISH were obtained earlier than those with BC (ISH, within 1 day; BC, several days). We conclude that ISH is a useful method for the rapid diagnosis of sepsis.     

Fusobacterium necrophorum determined as abortifacient in sheep by laser capture microdissection and fluorescence in situ hybridization

Fluorescent in situ hybridization (FISH) has been extensively used for identification of individual microbial cells within their natural environment. The present work describes the identification of Fusobacterium necrophorum in formalin-fixed tissue samples from three sets of ovine twins aborted at late pregnancy by a technique that combines laser capture microdissection (LCM) and fluorescent in situ hybridization (LCM-FISH). Cultural bacteriological examination had failed to identify an infectious agent but by histological examination, large colonies of bacteria associated with tissue inflammation were seen. In situ hybridization visualized the bacteria in the tissue samples and micro-colonies closely associated with lesions were isolated by LCM. PCR-amplification and sequencing of 16S rRNA gene from the microdissected bacteria identified the organisms as Fusobacterium necrophorum. A rRNA-targeting oligonucleotide probe specific for F. necrophorum was used in a FISH assay. In situ hybridization showed a high density of F. necrophorum in all examined tissue sections. Simultaneous probing with a general bacterial probe EUB338 and the specific probe for F. necrophorum showed that no other bacteria could be detected in the tissue sections. We therefore conclude that F. necrophorum was the likely cause of abortion in these sheep.     

荧光原位杂交技术检测急性淋巴细胞白血病异常染色体

目的　研究荧光原位杂交技术（ＦＩＳＨ） 在检测异常染色体中的应用价值及其意义。方法　用ＦＩＳＨ方法和染色体Ｇ分带技术对比观察急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ） 患者染色体的变化。结果　对３８ 例患者１７ ,１８ 和２１ 号染色体进行Ｇ分带技术检查,结果分别有１１,１３ 和１８ 例患者细胞染色体存在三倍体细胞。ＦＩＳＨ 检查结果,除上述病例发现三倍体细胞外,染色体Ｇ分带检查正常者中也有部分病例存在三倍体。结论　ＦＩＳＨ检测异常染色体,方法简便、灵敏、可靠,与常规细胞遗传学方法比较,ＦＩＳＨ 方法不需要培养细胞,对分裂期和分裂间期细胞均可进行基因定位检测,尤其在有核细胞少等不适于进行细胞遗传学分析的情况下,ＦＩＳＨ 方法仍可得到有意义的数据。     

荧光原位杂交技术快速诊断胎儿常见染色体数目异常

目的探讨荧光原位杂交（FISH）技术在产前诊断中的应用价值。方法采集116名孕妇孕16~23周的羊水标本,应用荧光标记的21号染色体特殊位点探针（21q22,DSCR2）、13号染色体特殊位点探针（13q14,DLEU1）及18号染色体探针、X/Y染色体着丝粒探针（CEP）对未经培养的羊水间期细胞进行FISH检测;同步进行羊水细胞培养,行常规细胞遗传学染色体核型分析。结果 FISH与羊水细胞核型分析相符的染色体数目正常108例,数目异常6例,另各有1例染色体核型分析分别显示为平衡易位、臂内倒位异常,FISH结果显示正常。6例数目异常胎儿引产时抽脐血染色体检查结果与羊水产前诊断结果一致。结论 FISH技术用于快速诊断胎儿常见染色体数目异常,具有简便、快速、特异性强等优点,临床有较高的应用价值。     

荧光原位杂交技术在急性早幼粒细胞白血病诊断中的应用

目的　探讨临床表现急性早幼粒细胞白血病 (APL)明显特征而核型分析正常或非典型t(15 ;17)患者是否伴有分子异常及荧光原位杂交 (FISH)技术在APL诊断中的应用价值。方法　应用常规细胞遗传学分析APL初诊患者 193例 ,选取其中 32例进行FISH法检测。部分病例应用RT PCR作补充检测。结果　 193例APL患者中 132例 (6 8.4 % )常规核型分析检出t (15 ;17) (q2 2 ;q12 )。 193例中选出 32例按核型分析结果分为 3组 :第 1组 14例检出t(15 ;17) ;第 2组 13例未检出t(15 ;17) ;第 3组 5例为涉及 15和 17号染色体的变异复杂易位。第 1组病例FISH检测结果均为阳性 ,与核型分析相符。第 2组核型分析未发现t(15 ;17) ,但FISH结果证实该组病例均具有PML/RARα融合基因。第 3组FISH检测不但检出PML/RARα融合基因 ,而且确定其阳性信号不在 15 q上 ,而位于除 15 ,17号染色体外的其他染色体上。结论　临床表现APL特征的患者 ,不论核型分析是否发现典型t(15 ;17) ,FISH和RT PCR检测均存在PML/RARα融合基因。在APL的诊断方面 ,FISH法不仅具有高灵敏度和高准确度 ,而且可以精确定位复杂核型中融合信号的位置。因此对于常规细胞遗传学分析不能确定的APL初诊患者 ,FISH检测是必要的补充。     

荧光原位杂交技术快速诊断胎儿常见染色体数目异常

目的探讨荧光原位杂交(FISH)技术在产前诊断中的应用价值。方法采集116名孕妇孕16~23周的羊水标本,应用荧光标记的21号染色体特殊位点探针(21q22,DSCR2)、13号染色体特殊位点探针(13q14,DLEU1)及18号染色体探针、X/Y染色体着丝粒探针(CEP)对未经培养的羊水间期细胞进行FISH检测;同步进行羊水细胞培养,行常规细胞遗传学染色体核型分析。结果 FISH与羊水细胞核型分析相符的染色体数目正常108例,数目异常6例,另各有1例染色体核型分析分别显示为平衡易位、臂内倒位异常,FISH结果显示正常。6例数目异常胎儿引产时抽脐血染色体检查结果与羊水产前诊断结果一致。结论 FISH技术用于快速诊断胎儿常见染色体数目异常,具有简便、快速、特异性强等优点,临床有较高的应用价值。     

荧光原位杂交技术在膀胱癌诊断中的临床应用研究

目的探讨利用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）技术提高早期诊断膀胱癌的可能性。方法收集20例健康成人的晨尿用FISH技术检测3号、7号、9号p16位点和17号染色体的变异情况,统计出相应阈值。收集100例膀胱癌疑似患者的晨尿,分别进行尿脱落细胞学检查和FISH技术检测。统计学方法分析FISH技术的敏感性、特异性及与膀胱癌发生、发展的关系。结果100例膀胱癌疑似患者的尿液FISH检测的敏感度为87．50％,特异度为80．00％,总阳性率为79．00％;尿脱落细胞学检查的敏感度为61．54％,特异度为83．33％,总阳性率为49．00％。两种检测方法在敏感度和总阳性率上的差异均具有统计学意义,特异度上差异无统计学意义。FISH检测与膀胱癌的病理分级和临床分期均无相关性。结论FISH技术能成为一种提高中国人群膀胱癌早期诊断及监测膀胱癌预后的新方法。     

荧光原位杂交法快速鉴定金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌

目的 建立一种新的荧光原位杂交法,快速鉴定血培养中的金黄色葡萄球菌(金葡菌)和凝固酶阴性葡萄球菌。方法 将荧光同位素标记的针对金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌的核糖体16SrRNA序列的互补的DNA寡核苷酸探针,在同一张玻片上50℃杂交1 h,用杂交缓冲液50℃洗涤10min,干燥后置荧光显微镜下观察,全过程大约2 h。结果 探针的特异性经标准菌株和临床分离菌株证实。将259份临床标本测试与培养法比较,金葡菌的特异性和敏感性均为100％,CoNs的特异性和敏感性分别为100％和95.5％,荧光原位杂交法的最低检出限为103CFU/ml。结论 本方法适用于血培养中的金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌的快速鉴定。     

应用荧光原位杂交技术检测慢性淋巴细胞白血病的基因组异常

目的 探讨应用组合荧光原位杂交(panel fluorescence in situ hybridization,panel FISH)技术对慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukaemia,CLL)基因组异常检测的价值.方法 分别应用序列探针D13S25(13q14.3)、RB1、p53、ATM(11q23)和着丝粒探针12号(CSP12)等5种荧光素标记的DNA探针,对17例CLL患者进行FISH检测,并和常规细胞遗传学检测结果进行比较.结果 17例CLL患者中,常规细胞遗传学检测出1例(1/17)有染色体异常,为49,XX,+3,+8,+18;组合FISH检测出10例(10/17)有染色体异常,包括D13S25缺失4例、ATM缺失2例、p53缺失1例、D13S25合并RB1同时缺失2例、多种异常1例.FISH检测的总检出率高于常规细胞遗传学检测.结论 组合FISH技术是检测CLL患者染色体基因组异常的有效手段,与常规细胞遗传学方法相结合则可明显提高CLL染色体异常的检出率.     

多重荧光原位杂交检测骨髓增生异常综合征患者复杂核型异常

目的 探讨多重荧光原位杂交（M-FISH）技术存骨髓增牛异常综合征（MDS）患者复杂核型异常检测中的应用价值。方法 对10例常规R显带具有复杂染色体异常（CCA）的MDS患者应用M-FISH确定复杂染色体的重排及标记染色体的组成，识刖并确定微小易位。结果 M-FISH共检出37种结构重排，包括插入易位、缺夫、易值及衍生染色体，其中34种为不平衡重排；3种为平衡重排，包括：t（6；22）（q21；q12）、t（9；19）（q13；p13）和t（3；5）（？；？），有7种重排文献未见报道，涉及17号染色体的异常及-5／5q-最为常见（10例患者中两种异常各占7例）。结论 对伴有CCA的MDS患者M-FISH技术可以明确常规细胞遗传学（CC）分析中复杂染色体异常，并发现和纠正CC分析中漏检及误检的异常，为MDS患者染色体异常的分析提供了一种较理想的方法。     

荧光原位杂交在膀胱尿路上皮癌诊断中的应用

目的评价尿脱落细胞荧光原位交（fluorescenceinsituhybridization,FISH）检测在膀胱肿瘤诊断中的应用价值。方法分别对69例疑似膀胱尿路上皮癌及20例对照组的尿液标本进行FISH及细胞学检测,比较两者诊断的敏感性及特异性,统计膀胱尿路上皮癌各个染色体畸变的几率。结果 FISH诊断膀胱尿路上皮癌的总的敏感度高于尿脱落细胞学检查（分别为79.7%、22.0%,P〈0.05）,两者的特异度分别为93.3%、100%（P〉0.05）。结论 FISH在诊断膀胱尿路上皮癌中敏感性高于尿细胞学检查,同时其特异性亦较高,在早期诊断中具有重要意义。     

荧光原位杂交技术与染色体核型分析在产前诊断中的应用

目的探索荧光原位杂交技术(FISH)在产前诊断中的临床应用价值及相对于羊水细胞染色体核型分析的优缺点。方法对2012年4月至2013年11月在梅州市人民医院进行唐氏综合征筛查并诊断为高危的183例孕妇进行羊水细胞核型分析及FISH诊断,并对结果进行分析。结果核型分析结果显示,183例孕妇中有核型异常者9例,其中3例18-三体,3例21-三体,1例XXY和2例XO;FISH诊断结果显示8例异常,其中2例18-三体,3例21-三体,1例XXY和2例XO。结论 FISH技术用于产前诊断效率和成功率高,但单纯FISH诊断会出现小概率的漏诊,可与核型分析互补缺陷,使产前诊断效能最大化。     

TTV感染的肝组织病理学特点及病毒DNA原位检测

目的 观察单一ＴＴＶ（ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｔｒｓｎｓｍｉｔｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）急性感染患者肝组织病理损害特点及病毒ＤＮＡ的表达。方法 对某职业学校ＴＴＶ感染流行期间,１８例血清ＴＴＶ阳性住院患者的肝活检组织进行ＨＥ、浸银Ｇｏｍｏｄｒｉ染色检查,以及地高辛标记ＴＴＶ ＤＮＡ（Ｄｉｇ－ＴＴＶ ＤＮＡ）探针原位杂交。结果 １８例肝穿刺标本中出现汇管区炎１４例（７７．８％）,胆小管损害６例（３３．４％）,肝小叶内灶状坏死７例（３８．９％）,微脂滴３例（１６．７％）,汇管区纤维化２例（１１．１％）,原位杂交阳性８例（４４．４％）,ＴＴＶ阳性表达细胞散在分布于肝小叶内,坏死区及汇管区旁较密集。结论 单一ＴＴＶ急性感染可致患者肝组织轻度炎性病变,其特征是汇管区炎及胆小管损害。ＴＴＶ可能是一种嗜肝病毒。     

采用原位杂交法检测移植患者外周血白细胞中HCMV DNA

目的建立DNA原位杂交方法（ISH）检测移植患者外周血白细胞中的人巨细胞病毒（HCMV），并与HCMV-pp65抗原血症（免疫组织化学法，IHC）结果比较。方法选取本院肾移植患者标本60例，移植前后采集外周血标本250例，分离获得白细胞经涂片固定后分别采用ISH和IHC检测HCMV。结果ISH检测阳性率高于IHC，ISH检测的HCMV DNA阳性细胞见于外周血单个核细胞，IHC检测的HCMV抗原阳性细胞主要见于中性粒细胞，ISH检出的阳性细胞数明显高于IHC，且显然早于IHC。结论原位杂交检测HCMV DNA，敏感性高、特异性强，有利于早期、快速监测HCMV的激活。     

常规细胞遗传学检查联合多重荧光原位杂交技术确定急性白血病患者复杂核型异常

目的 探讨多重荧光原位杂交(M-FISH)技术在急性白血病(AL)患者复杂核型异常和标记染色体检测中的应用价值.方法 对11例常规R显带检测显示具有复杂核型异常和标记染色体的AL患者应用M-FISH技术确定复杂染色体重排和标记染色体的组成,识别并确定微小易位和隐匿易位.结果 11例AL患者应用常规细胞遗传学(CC)技术共检出27种染色体数目异常和41种结构异常.CC技术检出的3种染色体增加和9种染色体丢失以及12种结构异常与M-FISH分析结果一致,CC技术检出的15种染色体丢失经M-FISH证实为衍生染色体,M-FISH还检出3种CC检查未发现的染色体数目增加.CC检查所检出的其余29种结构异常(包括17种标记染色体)的性质被M-FISH进一步明确.M-FISH共检出33种结构重排,有6种异常未见文献报道,分别为t(5q-;16)(?q14;q24)、der(9)(Y::9::Y::9)、der(7)(7::8::9)、ins(20;21)、der(11)(11::21::20)和der(3)t(3p-;13)(3p-;q21),这些复杂染色体重排主要由染色体不平衡易位所致.复杂核型异常几乎涉及所有染色体,在AML患者以涉及17、5、7、15和11号染色体的异常较为常见;在ALL患者则以涉及8、9、14和22号染色体的异常较为多见.结论 联合应用CC和M-FISH检查可以提高CC核型分析的分辨率,对伴复杂核型和标记染色体的AL具有一定的临床应用价值.