大萼香茶菜甲素对急性早幼粒细胞性白血病细胞体外作用的影响

目的:观察大萼香茶菜甲素(Macrocalyxin A,MA)体外对急性早幼粒细胞性白血病(NB4细胞)增殖抑制、诱导凋亡及诱导分化的作用,并探讨其作用机制。方法:将不同浓度MA在体外与NB4细胞共同培养,采用细胞计数、MTT细胞活性检测体外观察MA对NB4细胞增殖抑制作用;采用细胞形态观察、Hoechst33258荧光染色、DNA亚二倍体检测和Annexin V/PI双染色方法研究MA诱导NB4细胞凋亡作用;采用细胞形态学观察、NBT试验、细胞免疫表型CD11b检测等方法研究MA诱导NB4细胞分化作用;采用流式细胞技术分析凋亡调控基因Bcl-2、bax、bad、Fas、p53表达情况和线粒体膜蛋白、线粒体跨膜电位(△ψm)的改变探讨MA体外诱导NB4细胞凋亡和分化机制。实验设置空白对照和全反式维甲酸(ATRA)阳性对照。结果:不同浓度MA在体外对NB4细胞增殖有明显抑制作用,呈现剂量和时间的量效关系;较低浓度MA作用48h后可以诱导NB4细胞分化,较高浓度MA则显著地促进细胞凋亡;在凋亡调控基因中,Bcl-2、Fas表达无明显改变,bax、bad、Bcl-2/bax、p53随着药物作用浓度的增高表达逐渐增高...     

芪红胶囊对柯萨奇病毒引起细胞凋亡的影响

目的 探讨柯萨奇病毒是否能够引起心肌细胞凋亡,以及芪红胶囊对凋亡发生是否有抑制作用。方法 将培养细胞分为4组：病毒感染对照组、芪红胶囊加病毒组、芪红胶囊对照组和正常细胞对照组。应用原位末端标记法(TUNEL)、Hoechst33258染色和Annexin-V／PI染色观察各组细胞凋亡发生情况;并通过流式细胞仪分析各组细胞的凋亡发生率;应用RT-PCR方法观察与凋亡相关细胞因子的表达改变。结果 病毒感染对照组细胞经Hoechst33258染色发现病毒感染后的细胞核出现强亮度的蓝色荧光,可观察到凋亡细胞的典型变化;Annexin-V／PI染色可见HeLa细胞膜呈强绿色荧光,细胞核显强红色荧光;通过流式细胞仪检测PI染色的细胞DNA,发现病毒感染组出现明显凋亡峰;芪红胶囊加病毒组凋亡发生率明显下降,正常对照组细胞未发生凋亡;同时芪红胶囊能够调节与凋亡相关细胞因子的表达。结论 芪红胶囊能够抑制柯萨奇病毒引起的细胞凋亡。     

葡萄柚黄酮抑制白血病细胞株增殖的体外实验研究

目的研究葡萄柚黄酮组分(PTFC)对Kasumi-1、K562细胞株的生长抑制作用及诱导凋亡情况,从而为白血病的临床治疗提供实验基础。方法不同浓度的PTFC(0、0.125、0.25、0.5、1、2 mg/mL)作用于Kasumi-1、K562细胞株,采用MTT法检测PTFC对Kasumi-1、K562细胞株的生长抑制作用;AnnexinⅤ/PI流式细胞术检测PTFC诱导Kasumi-1、K562细胞株的凋亡情况;Hoechst 33258染色法观察PTFC诱导白血病细胞凋亡的形态学改变;Western Blot法检测PTFC作用后Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、PARP蛋白表达变化。结果 0.125～2 mg/mL PTFC可明显抑制Kasumi-1、K562细胞株增殖,与空白对照组(PTFC 0 mg/mL)比较,细胞存活率明显降低(P0.05),对Kasumi-1的IC_(50)(24、48 h)分别为1.99、0.89 mg/mL,对K562的IC_(50)(24、48 h)分别为1.23、1.03 mg/mL;通过AnnexinⅤ/PI流式细胞术检测,0.125～2 mg/mL PTFC作用24 h可诱导Kasumi-1、K562细胞凋亡,诱导Kasumi-1凋亡率分别为2.98%、3.2%、3.66%、8.6%、19.8%,K562的凋亡率分别为3.19%、3.19%、3.49%、7.25%、16.87%;Hoechst 33258染色法检测发现PTFC作用后Kasumi-1、K562细胞中出现明显凋亡小体;与空白对照组比较,Caspase-3、Caspase-9、PARP被激活(P0.05)。结论 PTFC可抑制Kasumi-1、K562细胞增殖并诱导其凋亡,其凋亡相关机制与PARP、Caspase-3,Caspase-9蛋白表达变化相关。     

薏苡仁油对人原位胰腺癌BxPC-3细胞生长及VEGF和bFGF表达的影响

目的研究薏苡仁油(康莱特注射液)体外对人原位胰腺癌BxPC-3细胞生长和血管生长因子的影响,探讨薏苡仁油抗肿瘤作用机制。方法薏苡仁油作用BxPC-3细胞后,经瑞氏染色观察细胞形态,Hoechst 33258荧光染色、DNA梯度电泳观察细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的变化;ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)的变化。结果薏苡仁油(2 mg/mL,20μL/mL)作用于BxPC-3细胞后,瑞氏染色可见细胞出现典型的凋亡小体,Hoechst33258荧光染色可见BxPC-3细胞出现特征性凋亡变化,琼脂糖电泳观察到明显的细胞凋亡特征性DNA梯形条带;细胞周期阻滞在G0/G1期;细胞上清液中VEGF、bFGF的表达水平明显下调。结论薏苡仁油能影响BxPC-3细胞生长周期,导致细胞周期阻滞,下调VEGF和bFGF的表达水平,可能对抑制胰腺癌细胞的扩散产生一定作用。     

冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的:探讨冬凌草甲素对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法:以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA表达水平的变化。结果:冬凌草甲素可显著的抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48~60h后在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低。结论:冬凌草甲素能抑制BEL-7402细胞的生长及诱导细胞发生凋亡;降低端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

美洲大蠊提取物诱导Hct 116细胞凋亡的实验研究

目的:探讨美洲大蠊提取物诱导人结肠癌Hct 116细胞凋亡的作用。方法:用不同浓度的美洲大蠊提取物7.0、7.5、8.0、8.5、9.0mg/ml处理人结肠癌Hct 116细胞,采用MTS法检测细胞增殖的变化并计算IC_(50)值;HE染色和Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学变化;TUNEL染色和Annexin V-FITC/PI双标记检测Hct 116细胞凋亡;PI/RNase流式检测Hct 116细胞周期变化。结果:与对照组相比,美洲大蠊提取物7.0、7.5、8.0、8.5、9.0mg/ml处理Hct 116细胞24h具有增殖抑制的作用,抑制率为15.99%～51.55%且具有浓度依赖性,24h的IC_(50)值为9.05mg/ml;HE染色显示细胞出现凋亡形态学变化,Hoechst33258荧光染色、TUNEL阳性染色、Annexin V+/PI-单阳性和Annexin V+/PI+双阳性显示细胞凋亡增多且与美洲大蠊提取物作用浓度呈正相关。美洲大蠊提取物7.5mg/ml可阻滞Hct 116细胞于G0/G1期。结论:PKA可抑制Hct 116细胞增殖,具有诱导Hct 116细胞凋亡的作用。     

冬凌草甲素对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对白血病NB 4细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法以不同质量浓度(8、16、24和32μm o l/L)的冬凌草甲素作用于体外培养的NB 4细胞。应用四氮唑蓝(M TT)比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;采用Hoechst 33258荧光染色法和琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡;采用蛋白印迹(W estern b lot)和比色法测定细胞凋亡前后caspase-3表达水平及其活性的变化。结果冬凌草甲素(16μm o l/L以上浓度)对白血病NB 4细胞具有显著的增殖抑制及诱导凋亡作用,并且呈现出一定的时间-效应和剂量-效应关系。Hoechst 33258荧光染色观察到典型的核浓缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳观察到细胞凋亡时的DNA“梯形”条带;W estern b lot检测结果表明32 kD a的caspase-3酶原被激活,出现20 kD a的亚单位活化片段,同时在细胞凋亡过程中,caspase-3活性显著增高。结论冬凌草甲素能够通过激活caspase-3的表达而诱导NB 4细胞发生凋亡,可为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供实验依据。     

来源于海洋真菌的Oxalicumone A诱导肝细胞L-02凋亡的毒性作用机制研究

目的评价来源于海洋真菌Penicillium sp.的新药候选化合物Oxalicumone A(POA)对人正常肝细胞L-02的细胞毒性作用,初步探讨POA诱导其凋亡的作用机制。方法以体外培养的L-02为实验对象,CCK-8检测细胞存活率;Hoechst 33258染色观察细胞形态学的改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率和增殖周期;Western blot检测凋亡相关蛋白Fas、Bax以及Bcl-2的表达。结果 CCK-8检测结果表明,POA对L-02细胞有一定的时间、浓度依赖性的抑制作用;Hoechst 33258染色可见细胞出现核固缩、碎裂、浓染等典型的凋亡细胞形态学改变;流式细胞仪检测显示细胞早期凋亡率和Sub-G1、S、G2/M期出现了相应比例的增加;Western blot法表明POA显著增加了凋亡蛋白Fas、Bax表达(P0.05),降低了抗凋亡蛋白Bcl-2表达(P0.05)。结论 POA体外诱导L-02细胞毒活性,产生凋亡并经过线粒体信号通路,其作用机制与Bcl-2表达下调以及Fas、Bax表达上调有关。     

复尔康注射液对肝癌HepG2细胞凋亡和VEGF表达的影响

目的 研究复尔康注射液对肝癌HepG2细胞凋亡和VEGF表达的影响.方法 复尔康注射液干预HepG2细胞48 h后,CCK8试剂盒检测细胞的增殖活性,Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡率,免疫组化SABC法检测细胞VEGF的表达.结果 复尔康注射液可抑制HepG2细胞的增殖,IC50值为(29.63±1.22)mg/L.复尔康注射液5、10 mg/L干预HepG2细胞48h后,Hoechst 33258荧光染色可见核浓缩、核碎裂等凋亡形态学改变,Annexin V/PI双染法检测显示细胞凋亡率明显升高,免疫组化SABC法检测显示VEGF的表达明显减弱,且呈现出一定的量效关系.结论 复尔康注射液可诱导HepG2细胞凋亡,减弱VEGF的表达.     

冬凌草甲素对白血病NB4细胞的生长抑制作用

目的：探讨冬凌草甲素对急性白血病NB4细胞的生长抑制作用。方法：以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的NB4细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用Hoechst 33258荧光染色法观察药物作用后细胞形态学的变化。结果：冬凌草甲素可显著抑制NB4细胞的生长并诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的量-效与时-效关系，在Hoechst染色图片上可见细胞核染色质浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变：结论：冬凌草甲素能抑制NB4细胞的生长及诱导细胞凋亡，具有显著的体外抗白血病作用，这为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗白血病提供了有力的试验依据。     

镰形棘豆诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及初步的机制研究

目的:观察镰形棘豆总黄酮对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响及初步的机制探讨.方法:不同剂量的镰形棘豆总黄酮处理SMMC-7721细胞24 h后,MTT法观察总黄酮对细胞增殖的抑制作用;应用光学和荧光显微镜观察总黄酮对SMMC-7721细胞形态的影响;应用流式细胞仪检测SMMC-7721细胞周期的变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测总黄酮对SMMC-7721细胞凋亡的影响.结果:MTT实验结果表明,镰形棘豆总黄酮抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈现出一定的浓度依赖性.Hoechst33258染色结果显示,经镰形棘豆总黄酮处理的细胞出现了多种凋亡特征和超微结构的变化.镰形棘豆总黄酮作用SMMC-7721细胞后可观察到G1期细胞明显增多,凋亡细胞的比例升高,并且呈浓度依赖性.结论:镰形棘豆总黄酮抑制SMMC-7721细胞的增殖,与其诱导细胞周期阻滞和使细胞形态发生变化而引起细胞凋亡的活性有关.值得进一步深入研究和阐述镰形棘豆抗肿瘤的作用机制.     

冬凌草甲素通过激活ERK途径诱导U937细胞凋亡

目的:研究冬凌草甲素诱导人组织淋巴瘤U937细胞凋亡的机制及ERK激酶在凋亡过程中的作用。方法:噻唑蓝(MTT)法,Hoechst 33258染色法,DNA凝胶电泳及Western blot检测法。结果:冬凌草甲素对U937细胞生长抑制作用呈时间剂量依赖性。27μmol.L^-1冬凌草甲素作用细胞12 h后,Hoechst 33258染色细胞,出现明显凋亡小体,并诱导ERK发生磷酸化。ERK磷酸化抑制剂PD98059阻断了冬凌草甲素诱导的细胞生长抑制及DNA片段化。细胞内抑制凋亡蛋白Bcl-X_L表达量时间依赖性减少,促凋亡蛋白Bax表达量增加,而ERK抑制剂可逆转这种作用。结论:冬凌草甲素(27μmol.L^-1)诱导U937细胞凋亡,这种作用是通过活化ERK激酶,改变其下游Bax/Bcl-X_L的表达比率,从而促进U937细胞发生凋亡。     

白黎芦醇对人口腔鳞癌KB细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨白藜芦醇对人口腔鳞癌KB细胞的增殖及凋亡影响。方法:应用MTT比色法检测Res对KB细胞体外生长的抑制作用;流式细胞仪测定细胞的周期和凋亡;Hoechst33258荧光染料染色,显示凋亡细胞形态;Western blot方法检测survivin、Caspase-3、Smac蛋白的表达。结果:Res能以剂量和时间依赖的方式抑制KB细胞生长,以剂量依赖的方式使KB细胞周期阻滞在S期、诱导细胞凋亡;Hoechst33258染色,可见细胞呈明显的凋亡特征;Western blot方法测得Res下调KB细胞的Survivin蛋白表达水平、增加KB细胞胞浆的Smac蛋白含量(P<0.01)、同时活化Caspase-3蛋白。结论:Res可抑制KB增殖,使细胞周期呈S阻滞并可诱导细胞发生凋亡,Survivin、Caspase-3和Smac基因参与了Res诱导KB细胞凋亡的作用。     

芦荟大黄素对Jurkat T细胞增殖和凋亡的作用及机制

目的 研究芦荟大黄素对Jurkat T细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨可能的机制.方法 应用细胞计数测定增殖,Hoechst/PI双染法及DNA片断化分析细胞凋亡特征,流式细胞术检测细胞周期分布.进一步应用二氢乙锭荧光染色测量活性氧产物,Western blotting检测胞浆细胞色素C(Cyt-c)的量,比色法检测caspase-3和caspase-9活性.结果 芦荟大黄素剂量和时间依赖性地抑制Jurkat T细胞增殖.芦荟大黄素诱发细胞核皱缩,核DNA片断化,细胞周期出现亚G1期凋亡峰,且停滞于G2/M期.芦荟大黄素介导细胞内活性氧水平显著提高,线粒体释放Cyt-c量显著增加,caspase-3和caspase-9活性显著增强.结论 芦荟大黄素剂量依赖性地抑制Jurkat T细胞增殖并诱导其凋亡.诱导凋亡的机制中,包括增加活性氧产物和线粒体损伤途径.     

姜黄素联合光照对人胃腺癌BGC-823细胞凋亡作用的研究

目的：研究在光照条件下姜黄素诱导人胃腺癌BGC-823细胞凋亡的效应,探讨其作为光动力学治疗肿瘤新型光敏剂的可能性。方法：体外培养的胃腺癌BGC-823细胞加姜黄素后光照处理,MTT法测定细胞增殖能力,荧光显微镜和电镜观察细胞核及超微结构的改变,流式细胞术检测细胞周期分布变化。结果：姜黄素在光照条件下可显著抑制BGC-823细胞的增殖;经5μmol/L姜黄素联合光照处理24h细胞即呈现典型的凋亡形态;流式细胞术检测光照条件下姜黄素诱导BGC-823细胞周期阻滞于G0/G1期。结论：光照条件下姜黄素对人胃腺癌BGC-823细胞具有显著的凋亡诱导作用,可望进一步开发成光动力学治疗肿瘤的新型光敏剂。     

七叶皂苷钠抑制人白血病Jurkat细胞增殖的机制研究

目的研究七叶皂苷钠抑制人白血病Jurkat细胞增殖的作用及其机制。方法 MTT法分析七叶皂苷钠对Jurkat细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33258染色、FITC-Annexin V/PI双染、DNA Ladder、流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blotting法分析凋亡相关蛋白变化。结果七叶皂苷钠呈质量浓度和时间相关方式抑制Jurkat细胞增殖;经七叶皂苷钠处理后的Jurkat细胞出现凋亡的形态学特征、DNA条带,Annexin V+/PI细胞(早期凋亡细胞)显著增加;七叶皂苷钠可活化Jurkat细胞中Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3,引起PARP的切割,并减少Bcl-2蛋白的表达。结论七叶皂苷钠能有效地通过诱导细胞凋亡抑制Jurkat细胞增殖。     

雷公藤红素对白血病细胞Akt信号通路的影响及在细胞凋亡中的作用

目的 研究雷公藤红素（celastrol)对人类白?∠赴闗562细胞Akt信号通路的影响及其作用。     

反左金丸水提物对人胃癌细胞SGC-7901凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响

目的:观察反左金丸水提物(waterextractsofRetro-zuojinPill,WERZP)对人胃癌细胞(SGC-7901)生长的抑制和凋亡诱导效果,及其对bcl-2和bax表达的影响。方法:采用MTT比色法观察不同浓度的WERZP对SGC-7901的生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色观察细胞形态学变化以及Westernblot方法检测WERZP对人胃癌细胞SGC-7901中bcl-2、bax蛋白表达的影响。结果:WERZP作用SGC-7901细胞24h后,细胞存活率显著降低(P<0.05),且与时间、剂量呈依赖关系。流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析,0.1,0.5,1,5和10mg·mL^-1WERZP作用SGC-7901细胞24h,细胞凋亡率分别为(4.02±1.33),(36.10±0.23),(55.91±0.95),(56.50±1.55)和(60.27±3.58)%,其中(0.5～10)mg.mL^-1组与对照组(2.66±1.33)%比较差异均有统计学意义(P<0.01)。Hochest染色结果显示细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征。WERZP可降低SGC-7901细胞bcl-2基因表达和增加bax基因表达。结论:WERZP对SGC-7901生长有明显的抑制作用并可诱导SGC-7901的凋亡,bcl-2基因表达降低和bax基因表达增加可能是其凋亡机制之一。     

Verticinone induces cell cycle arrest and apoptosis in immortalized and malignant human oral keratinocytes

Although verticinone, a major alkaloid isolated from the bulbus of Fritillaria ussuriensis, has been shown to induce differentiation in human leukemia cells, the exact mechanism of this action is not completely understood in cancer cells. Verticinone was used to conduct growth and apoptosis-related experiments for two stages of oral cancer on immortalized human oral keratinocytes (IHOKs) and primary oral cancer cells (HN4). The procedures included MTT assay, three-dimensional (3-D) raft cultures, Western blotting, cell cycle analysis, nuclear staining and cytochrome c expression related to the apoptosis signaling pathway. Verticinone inhibited the proliferation of immortalized and malignant oral keratinocytes in a dose- and time-dependent manner. In 3-D organotypic culture, verticinone-treated cells were less mature than the control cells, displaying low surface keratinization and decreased epithelial thickness. The major mechanism by which verticinone inhibits growth appears to be induced apoptosis and G(0)G(1) cell cycle arrest. This finding is supported by the results of the cell cycle analysis, FITC-Annexin V staining, DNA fragmentation assay and Hoechst 33258 staining. Furthermore, the cytosolic level of cytochrome c was increased, while the expression of Bcl-2 protein was gradually down-regulated and Bax was up-regulated, accompanied by caspase-3 activation. The data suggests that verticinone may induce apoptosis through a caspase pathway mediated by mitochondrial damage in immortalized keratinocytes and oral cancer cells.