白藜芦醇对高糖诱导足细胞损伤的改善作用及机制探讨

[目的]观察白藜芦醇(RSV)对高糖诱导足细胞凋亡的影响及作用机制。[方法]采用体外高糖诱导作为足细胞损伤模型,细胞分为3组:对照组为5 mmol/L低糖培养液(LG);模型组为30 mmol/L高糖培养液(HG);RSV干预组:HG+5μmol/L RSV;HG+10μmol/L RSV,培养48 h后采用流式细胞术检测足细胞的凋亡情况;DHE探针观察细胞内活性氧自由基(ROS)生成;激光共聚焦检测线粒体膜电位及线粒体内ROS合成;Western blot检测线粒体凋亡途径相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3、caspase 9的表达情况。[结果]与HG组相比,RSV可呈剂量依赖性的抑制高糖诱导的足细胞凋亡;荧光探针结果显示,RSV干预后细胞内及线粒体ROS生成明显低于HG组;JC-1染色显示,与HG组相比,RSV干预可显著提高线粒体膜电位;Western blot结果显示,随RSV干预浓度的提高,caspase 3、caspase 9表达水平明显下调,差异具有统计学意义(P0.05)。[结论]RSV呈浓度依赖性的抑制高糖诱导的足细胞凋亡,其保护作用可能与抑制氧化应激,改善线粒体功能障碍相关。     

川芎嗪与黄芪甲苷配伍对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制

摘要：目的：研究川芎嗪与黄芪甲苷及不同浓度配伍对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化损伤模型的保护作用及机制。方法：建立H2O2诱导损伤模型,将细胞分为十七组,空白对照组、过氧化氢(0.2mmol/L)模型组,川芎嗪（40,80,160μg/mL）剂量组、黄芪甲苷（10,20,40μg/mL）剂量组及两两配伍组,MTT法检测不同浓度川芎嗪、黄芪甲苷及其配伍对氧化损伤人脐静脉内皮细胞的增值影响,筛选出最佳配伍比例;检测最佳配伍组MDA含量和SOD活性,Annexin V- FITC/PI 染色荧光显微镜观察细胞凋亡率, Western Blot 检测 p- Akt 和Akt 蛋白的表达 ,RT-PCR检测AKt mRNA的表达。结果： 与模型组相比,川芎嗪与黄芪甲苷不同浓度配伍组均能提高细胞存活率,且川芎嗪（80μg/mL）剂量组 黄芪甲苷（40μg/mL）剂量组具有极显著差异(P<0.001);川芎嗪、黄芪甲苷配伍组降低细胞MDA含量(P<0.001),提高细胞SOD活力(P<0.001)。同时,川芎嗪、黄芪甲苷配伍组能降低细胞凋亡率（P<0.01）,上调 p-Akt/Akt蛋白（P<0.01）,上调Akt基因mRNA的表达（P<0.001）。结论：川芎嗪（80μg/mL） 黄芪甲苷（40μg/mL）对 H2O2诱导的 HUVECs氧化损伤有保护作用,能缓解氧化应激诱导的 HUVECs 凋亡,其机制与 PI3K/Akt 信号通路有关     

黄芪甲苷联合大黄素通过Smads通路抑制TGF-β1诱导的足细胞凋亡

目的:探讨黄芪甲苷联合大黄素是否通过Smads通路抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导小鼠足细胞株凋亡。方法:①体外培养小鼠足细胞株。②应用不同浓度TGF-β1(10-1¹04ng/L)诱导小鼠足细胞凋亡。③TGF-β1不同刺激时间(12、24、48 h)诱导小鼠足细胞凋亡。④黄芪甲苷、大黄素联用抑制TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡,实验分为正常组、TGF-β1组、黄芪甲苷+TGF-β1组(黄芪甲苷组)、大黄素+TGF-β1组(大黄素组)、黄芪甲苷+大黄素+TGF-β1组(黄芪甲苷+大黄素组)。⑤采用流式细胞仪检测Annexin V、Caspase 3。⑥实时定量PCR及Western印迹法检测Smad2、Smad3 mRNA及蛋白质表达。结果:①随着TGF-β1浓度增加(10-1104ng/L)诱导小鼠足细胞凋亡。③TGF-β1不同刺激时间(12、24、48 h)诱导小鼠足细胞凋亡。④黄芪甲苷、大黄素联用抑制TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡,实验分为正常组、TGF-β1组、黄芪甲苷+TGF-β1组(黄芪甲苷组)、大黄素+TGF-β1组(大黄素组)、黄芪甲苷+大黄素+TGF-β1组(黄芪甲苷+大黄素组)。⑤采用流式细胞仪检测Annexin V、Caspase 3。⑥实时定量PCR及Western印迹法检测Smad2、Smad3 mRNA及蛋白质表达。结果:①随着TGF-β1浓度增加(10-1¹04ng/L)、刺激时间增加,足细胞凋亡比率增多(P<0.05),足细胞Smad2、Smad3 mRNA表达增加。TGF-β1103ng/L为最佳诱导小鼠足细胞凋亡浓度,24 h为最佳诱导凋亡时间。②TGF-β1组与正常组相比Caspase 3阳性细胞比率增加(P<0.01);Smad2、Smad3蛋白质表达明显增加(P<0.01)。③黄芪甲苷+大黄素组与TGF-β1组、黄芪甲苷组、大黄素组比较:足细胞凋亡比率明显减少(P<0.05);Caspase 3阳性细胞比率减少(P<0.05);Smad2、Smad3蛋白质表达减少(P<0.05)。④黄芪甲苷+大黄素组较TGF-β1组Smad2、Smad3 mRNA表达减少。结论:①TGF-β1能通过Smads通路诱导小鼠足细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性。②黄芪甲苷联合大黄素能通过Smads通路阻断足细胞凋亡,其机制可能与减少TGF-β1的表达,阻止其激活Smads蛋白,从而阻止Caspase家族诱导的足细胞凋亡有关。     

黄芪甲苷抗肾纤维化的相关分子机制研究

通过综述肾纤维化的发生机制、黄芪甲苷(astragaloside IV,AS-IV)抗肾间质纤维化的分子机制及含AS-IV的抗肾纤维进程的相关中成药及注射剂探讨AS-IV抗肾纤维化的相关分子机制研究进展,指出已有研究证实AS-IV主要通过剂量依赖等方式阻止及防范足细胞凋亡及抑制肾脏纤维化.     

高糖对小鼠足细胞黏附功能的影响及黄芪多糖的干预作用

目的观察高糖对体外培养足细胞的黏附功能及黏附分子的影响,以及中药组分黄芪多糖改善这种损伤的效果。方法采用永生化小鼠足细胞株,通过温度选择的培养方法诱导足细胞分化,分为正常糖对照组（NG）（5mmol/L）、甘露醇高渗对照组（MA）、高糖组（HG）（30μmol/L）、高糖＋黄芪多糖组（APS）（0.2g/L）,干预3、6、12、24h后收集细胞,分别用荧光定量法和物理离心法检测足细胞黏附功能;干预6、12h后,应用实时定量PCR法及Western印迹法分别检测足细胞α3、β1整合素mRNA和蛋白表达水平。结果作用6、12h后,HG组α3、β1整合素mRNA及蛋白表达水平较NG组下降,差异有统计学意义,而给予黄芪多糖后,其下降不明显。结论高糖可明显抑制足细胞的黏附功能,黄芪多糖对高糖诱导的足细胞损伤有改善作用。     

黄芪甲苷调控长链非编码RNA防治动脉粥样硬化的机制研究

目的：观察黄芪甲苷防治动脉粥样硬化（AS）的作用机制是否与靶向调控长链非编码RNA-TUG信号通路相关。方法：高脂饮食法建立ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型，黄芪甲苷干预8周后观察小鼠主动脉AS病理变化，ELISA法测定外周血清中ICAM-1、VCAM-1、IL-8和MCP-1等炎性因子水平，Real-time PCR法检测主动脉TUG1、p38总蛋白（T-p38）的mRNA表达水平，Western blot检测主动脉T-p38、磷酸化p38(p-p38)蛋白水平。炎性诱导因子脂多糖（LPS）刺激法建立内皮细胞炎症损伤模型，黄芪甲苷药物血清干预后，MTT法检测细胞活性，ELISA法检测细胞液中ICAM-1、VCAM-1、IL-8和MCP-1等炎症分子水平，Real-time PCR法检测细胞TUG1、p38总蛋白（T-p38）、磷酸化p38(p-p38)的mRNA表达水平。结果：与模型组相比，黄芪甲苷组主动脉LA较大、IMT较薄、PA和LCA较小，差异有统计学意义（均P <0.05），黄芪甲苷组小鼠外周血清中ICAM-1、VCAM-1、IL-8和MCP-1水平明显降低（均P &...     

黄芪甲苷对高糖诱导的乳鼠心肌细胞氧化应激的影响

目的:观察高糖对心肌细胞的氧化损伤及黄芪甲苷(ASIV)对心肌细胞的保护机制。方法:培养SD乳鼠原代心肌细胞,用33.3mmol/L葡萄糖诱导心肌细胞,观察不同浓度黄芪甲苷(20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)和NOX4抑制剂apocynin(100μmol/L)对高糖诱导的心肌细胞的影响。MTT法检测各组细胞存活率,DHE荧光染色检测各组心肌细胞活性氧簇(ROS)含量,使用试剂盒定量检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力及丙二醛(MDA)的含量,Western blot法检测心肌细胞中NOX4蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,高糖组细胞受到损伤,细胞存活率明显下降,细胞内ROS、MDA生成增加,SOD、GSH-Px活力下降。高糖+黄芪甲苷(20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)各组和高糖+NOX4抑制剂apocynin(100μmol/L)组均能有效抑制高糖对乳鼠心肌细胞氧化应激方面的损伤,表现为细胞存活率提高,细胞内的ROS、MDA表达明显下降,而SOD、GSH-Px活力显著增加,Western blot实验结果中NOX4的蛋白表达减少,且黄芪甲苷的药物作用具有一定的剂量依赖性。结论:黄芪甲苷能够通过减少NOX4的表达抑制高糖对乳鼠心肌细胞造成的氧化损伤。     

黄芪甲苷抑制缺氧缺糖复氧复糖PC12细胞凋亡的研究

目的:研究黄芪甲苷对缺氧缺糖复氧复糖PC12细胞凋亡的抑制作用。方法:取对数期PC12细胞随机分为6组:正常对照组(Normal组)、黄芪甲苷溶剂对照组(DMSO组)、模型组(缺氧缺糖复氧复糖组,Model组)、黄芪甲苷高剂量组(AST H组,100μmol/L)、黄芪甲苷中剂量组(AST M组,50μmol/L)、黄芪甲苷低剂量组(AST L组,25μmol/L)。正常对照组正常培养不进行任何处理;其余各组均进行缺氧缺糖复氧复糖造模:缺氧缺糖4 h后复氧复糖24 h;黄芪甲苷各剂量组和溶剂对照组于造模前0.5 h给药,直至培养结束。用MTT方法检测细胞存活率,倒置显微镜下观察细胞的形态,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:与正常组相比,模型组细胞折光性差,细胞肿胀簇状聚集,甚至脱落,细胞之间的突触消失,细胞本身明显肿胀,存活率明显降低,细胞凋亡率增加(P0.05)。与模型组相比,溶剂对照组和黄芪甲苷低剂量组细胞形态无明显变化,存活率和凋亡率差异没有显著性(P0.05),但黄芪甲苷高、中剂量组细胞肿胀等变化明显减轻,存活率均增加,细胞凋亡率降低(P0.05)。黄芪甲苷高剂量组比中、低剂量组细胞存活率高和凋亡率低(P0.05)。结论:黄芪甲苷可抑制PC12细胞缺氧缺糖复氧复糖后的损伤和凋亡,其最佳作用浓度是100μmol/L。     

黄芪甲苷对肾小球系膜细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制

目的:研究黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASⅣ)对H2O2诱导肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMC)氧化应激损伤的保护作用,并进一步探讨其分子机制.方法:将培养的肾小球系膜细胞随机分为5组:正常对照组、H2O2模型组、AS Ⅳ(12.5,100 nmol·L-1)组、阳性药(Tempol,1×105nmol·L-1)组.采用MTT法观察细胞活力;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;DHE染色检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生;流式细胞术检测细胞周期变化情况;Western blot方法测定细胞周期蛋白Cyclin D1,Cyclin A及磷酸化p38,T-p38的表达.结果:1×105,2×105,3×105,4×105nmol·L-1H2O2均能诱导肾小球系膜细胞发牛氧化应激损伤:细胞存活率明显降低,细胞活力与H2O2浓度及其作用的时间呈正相关下降趋势.100 nmol·L-1黄芪甲苷能够显著减轻H2O2(3×l05nmol·L-1)诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤:提高细胞存活率及细胞活力,抑制细胞凋亡,降低胞内ROS产量;恢复细胞周期蛋白Cyclin D1表达及各细胞周期的百分比,恢复细胞的正常增殖;降低磷酸化p38的表达.结论:黄芪甲苷对H2O2诱导肾小球系膜细胞氧化应激损伤有一定的保护作用.其机制可能与抑制p38/MAPK信号通路,影响细胞周期蛋白Cyclin D1的表达及降低H2O2诱导的细胞内ROS氧化应激损伤有关.     

黄芪甲苷抑制放线菌素D诱导的HepG2细胞凋亡作用研究

目的:探究不同浓度的黄芪甲苷(Astragaloside IV,As-IV)对肝癌细胞的作用及其作用机制。方法:采用不同浓度黄芪甲苷,按照不同作用时间处理肝癌细胞;采用MTT法检测不同浓度黄芪甲苷对肝癌细胞的毒性作用;运用放线菌素D(Actinomycin D,ActD)诱导细胞凋亡构建肝癌细胞凋亡模型,采用Hoechst33258染色法和流式细胞术验证肝癌细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测一定浓度的黄芪甲苷处理放线菌素D诱导后的肝癌细胞凋亡率,采用western blot法验证黄芪甲苷对蛋白激酶α(Protein kinase Cα,PKC-α)蛋白和细胞外调节蛋白激酶(ExtracelluLar reguLated protein kinases,ERK)通路蛋白的影响。结果:浓度为40μmol/L的黄芪甲苷处理24h细胞活性为0μmol/L时的80%,不会显著影响肝癌细胞活性,且黄芪甲苷对肝癌细胞活性的影响呈剂量和时间依赖性。放线菌素D浓度为2μg/mL处理24h时肝癌细胞凋亡率为45%,可有效诱导肝癌细胞凋亡。40μmol/L黄芪甲苷处理24h可有效抑制2μg/mL放线菌素D诱导的肝癌细胞凋亡,细胞凋亡率为8%,显著低于2μg/mL放线菌素D处理组细胞凋亡率27%(P0.05),并可有效抑制细胞膜PKC-α和p-ERK1/2表达量升高。结论:黄芪甲苷可通过抑制PKC-α活化后从细胞质向细胞膜迁移,有效抑制放线菌素D诱导的肝癌细胞凋亡。     

桃叶珊瑚苷通过ROS/P38通路抑制UVA诱导的HSF细胞凋亡机制研究

目的:研究桃叶珊瑚苷通过ROS/P38通路抑制UVA诱导HSF细胞凋亡的机制。方法:HSF细胞随机分为正常对照组、模型组及桃叶珊瑚苷高、中、低剂量组。检测ROS相对含量及LDH活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测p-P38蛋白的表达量,RT-PCR检测Caspase-9、Caspase-3 mRNA的表达,试剂盒检测Caspase-9、Caspase-3的活性。结果:不同浓度桃叶珊瑚苷干预的光损伤HSF细胞ROS含量及LDH、Casepase-9、Caspase-3活性降低,p-P38蛋白表达量减少,细胞凋亡率下降,其作用呈现浓度依赖性;中、高浓度组与模型组比较,差异具有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:桃叶珊瑚苷通过清除ROS减轻细胞的氧化损伤,通过下调p-P38、Casepase-9、Caspase-3表达,抑制细胞凋亡,保护受损的HSF细胞。     

低剂量雷公藤甲素抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性改善高剂量D-葡萄糖诱导的足细胞转分化

探讨雷公藤甲素（triptolide,TP）改善高剂量D-葡萄糖（高糖）诱导的足细胞上皮-间充质转分化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用和分子机制。将体外培养的小鼠永生化足细胞分为正常组（normal group,N）、高剂量D-葡萄糖组（high dose of D-glucose group,H-TP）、低剂量TP组（low dose of TP group,L-TP）、高剂量TP组（high dose of TP group,H-TP）以及甘露醇组（mannitol group,MNT）,分别进行不同的干预：N组加入D-葡萄糖（D-glucose,DG,5 mmol·L^-1）;HG组加入HG（25mmol·L^-1）;L-TP组加入HG（25 mmol·L^-1）＋TP（3μg·L^-1）;H-TP组加入HG（25 mmol·L^-1）＋TP（10μg·L^-1）;MNT组加入DG（5 mmol·L^-1）＋MNT（24.5 mmol·L^-1）。在干预后的各时间点（24,48,72 h）,首先,观察TP对足细胞增殖活性的影响;其次,检测足细胞上皮细胞标志性分子（nephrin和podocin）、间充质细胞标志性分子（desmin和Ⅰ型胶原）以及EMT相关介质snail的蛋白表达水平;最后,检测足细胞Wnt3α/β-catenin信号通路关键信号分子Wnt3α和β-catenin蛋白表达水平。结果表明,HG不仅能引起足细胞nephrin和podocin蛋白低表达,desmin,Ⅰ型胶原和snail蛋白高表达,诱导足细胞EMT,而且,能促使足细胞Wnt3α和β-catenin蛋白高表达,激活Wnt3α/β-catenin信号通路。此外,L-TP对足细胞增殖能力没有影响,与HG联合干预不仅能明显恢复足细胞nephrin和podocin蛋白表达水平,抑制其desmin,Ⅰ型胶原和snail蛋白表达水平,改善足细胞EMT,而且,能明显降低HG诱导的足细胞Wnt3α和β-catenin蛋白高表达,抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性。总之,HG在体外能激活Wnt3α/β-catenin信号通路而诱导足细胞发生EMT;L-TP在体外能明显抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性而改善足细胞EMT,这可能是其干预足细胞EMT的作用和分子机制之一。     

黄芪多糖及丹酚酸对高糖诱导小鼠足细胞凋亡的影响

目的观察黄芪多糖与丹酚酸对高糖诱导的小鼠足细胞凋亡的影响。方法采用小鼠足细胞株,通过温度选择的培养方法诱导足细胞分化,分为正常对照组（5mmol/L）、甘露醇高渗对照组、高糖组、高糖＋黄芪多糖组、高糖＋丹酚酸组,分别于干预3h、6h、12h和24h后收集细胞;采用Annexin V-FITC和PI双染方法,用流式细胞仪观察各组足细胞的凋亡率。结果高糖组各时间点足细胞细胞凋亡率均高于同期正常对照组与高渗对照组（P〈0.01）;高糖＋黄芪多糖组、高糖＋丹酚酸组各时间点足细胞凋亡率均较高糖组降低（P〈0.05,P〈0.01）;高糖＋黄芪多糖组与高糖＋丹酚酸组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论高糖可诱导足细胞凋亡,黄芪多糖与丹酚酸对高糖诱导的足细胞凋亡均有抑制作用。     

金丝桃苷对高糖诱导视网膜周细胞损伤的保护作用

目的 探讨金丝桃苷对高糖诱导视网膜周细胞（RPCs）损伤的保护作用，并对其可能机制做出初步探索。方法 将RPCs正常培养传代后接种至细胞培养板，按不同处理分为5组：正常葡萄糖（NG）组（葡萄糖5 mmol/L）、高糖（HG）组（葡萄糖20 mmol/L）、甘露醇（MT）组（葡萄糖5 mmol/L、渗透压20 mmol/L）、高糖+低浓度金丝桃苷（HG+L-HY）组（葡萄糖20 mmol/L、金丝桃苷100μg/mL）、高糖+高浓度金丝桃苷（HG+H-HY）组（葡萄糖20 mmol/L、金丝桃苷400μg/mL）。培育相应时间后，CCK-8法检测各组RPCs活性，Annexin V/PI及TUNEL法检测RPCs凋亡率，Real-time PCR及Western Blot法检测RPCs中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)、Gasdermin-D蛋白-N(GSDMD-N)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-18(IL-18)mRNA及蛋白表达水平。结果 与NG组比较，HG组RPCs活性降低，凋亡率升高（P<0.01）,NLRP3、c...     

黄芪甲苷减轻异丙肾上腺素诱导H9c2细胞肥大损伤的机制研究

目的:探讨黄芪甲苷减轻异丙肾上腺素(ISO)诱导H9c2心肌细胞肥大损伤的保护作用及潜在机制。方法:以100μmol/L ISO作用H9c2细胞建立细胞肥大损伤模型。将细胞分为正常对照组、模型组及黄芪甲苷6.25、12.5、25μmol/L组,黄芪甲苷预给药2 h,ISO作用24 h。CCK-8法检测细胞活力,荧光染色测定细胞表面积,Hoechst 33342和TUNEL染色测定细胞凋亡率。比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,荧光探针DCFH-DA检测活性氧(ROS)水平,WST-8法测定超氧化物歧化酶(SOD)水平。q RT-PCR检测Bcl-2、Bax、P62、LC3 m RNA水平。Western Blot检测Sirt1、P62、Caspase-3、Beclin、P53蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平。结果:黄芪甲苷能显著减轻ISO诱导的H9c2细胞肥大损伤,减少心肌细胞表面积及LDH的释放,降低细胞凋亡率及细胞内ROS水平,升高SOD水平,上调自噬相关m RNA及蛋白的表达,下调凋亡相关m RNA及蛋白的表达。结论:黄芪甲苷能有效抑制ISO诱导的H9c2细胞肥大及凋亡,其机制可...     

黄芪甲苷改善高糖受损内皮祖细胞生物学功能的实验研究

目的:研究黄芪甲苷(Astragaloside IV,AS-IV)干预高糖受损人内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)增殖的最佳浓度,并探讨AS-IV对高糖受损EPCs生物学功能的影响。方法:取足月新生儿脐带血分离、培养并鉴定EPCs,将鉴定成功的EPCs用30 mmol/L的葡萄糖预处理120 h后,随机分为实验组(HG+AS-IV组)和对照组(HG组),同时设置正常组(NC组)。用CCK8检测不同浓度AS-IV(0、25、50、100、200、400 mg/L)干预EPCs 24 h后的增殖情况,绘制增殖曲线,初步得出AS-IV干预高糖受损人EPCs增殖的最佳浓度。进而通过CCK-8增殖实验、黏附能力测定试验、细胞划痕试验及Matrigel体外成血管实验检测最佳浓度的AS-IV对高糖受损EPCs增殖、黏附、迁移和成管功能的影响。结果:AS-IV促高糖受损EPCs增殖的最佳浓度为100 mg/L;与对照组比较,100 mg/L AS-IV干预后的高糖受损EPCs增殖能力、黏附细胞数、细胞迁移率、体外成管数均明显增加,差异均有统计学意义(P1<0.05);同时检测实验组与正常组差异无统计学意义(P2>0.05)。结论:AS-IV可显著改善体外高糖受损的人EPCs的生物学功能,恢复其原有活力并具有介导血管新生的潜能。     

黄芪甲苷在高糖条件下对Dll4/Notch-VEGF信号通路主要信号分子的调控

目的:观察黄芪甲苷在高糖条件下对Dll4/Notch-VEGF信号通路主要信号分子Dll4、Notch1、Notch4、VEGF的调控作用,并探讨其抗血管生成的机制。方法:采用30mmol/L葡萄糖培养人脐静脉内皮细胞,设置高糖细胞组(HG)、黄芪甲苷干预组(HQJG+HG)和DAPT组(DAPT+HG)。RT-PCR和Western Blot法检测Dll4、Notch1、Notch4、VEGF的表达。结果:与正常对照组相比,高糖细胞组Dll4、Notch1、VEGF表达上调,Notch4表达下降;采用黄芪甲苷和DAPT干预后可抑制Dll4、Notch1、VEGF表达,上调Notch4表达。结论:黄芪甲苷参与高糖条件下Dll4/Notch-VEGF信号通路的调控,并具有潜在抗血管生成的作用。     

和厚朴酚对热打击F98细胞的保护作用机制研究

目的探讨和厚朴酚(HNK)对热打击F98细胞的保护作用机制。方法建立F98细胞热打击模型,实验分为正常对照组、模型组(热打击组,HS组)、HNK组(10,20μmol·L-1)剂量组。采用CCK-8检测细胞活力、流式细胞仪分析ROS探针荧光强度、Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,采用WesternBlot检测丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPKs)及其下游激酶MK2、PRAK磷酸化水平,分别给予MAPKs家族抑制剂、转染MK2及PRAK失活性腺病毒、不同剂量HNK预处理细胞,检测各组细胞ROS及细胞凋亡水平。结果 1.热打击可诱导F98细胞内ROS水平升高介导细胞凋亡,ROS具有促凋亡作用,经过HNK预处理的细胞ROS、细胞凋亡水平明显下降,以高剂量组作用更为明显(P0.05)。2.热打击可激活F98细胞内MAPKs家族的p-p38、p-ERK、p-JNK,并证实只有p38MAPK参与调节F98细胞内ROS累积并介导细胞凋亡,经过HNK预处理F98细胞后,可明显抑制p38、ERK的磷酸化水平,并可下调ROS及细胞凋亡水平。3.热打击可激活细胞内的p-MK2、p-PRAK,加入MAPKs家族抑制剂预处理后证实二者均为p38的下游激酶;加入HNK可显著抑制MK2及PRAK,给MK2特异性抑制剂CMPD-1及转染MK2、PRAK失活性腺病毒预处理细胞,结果表明,经过CMPD-1及转染MK2失活性腺病毒预处理的F98细胞的ROS水平及细胞凋亡水平明显下降,高剂量HNK可显著抑制平p38、MK2的磷酸化,明显降低热打击F98细胞的ROS及细胞凋亡水平。结论 HNK通过抑制p38/MK2路径下调ROS水平对热打击F98细胞发挥保护作用。     

当归芍药散对高糖诱导的足细胞损伤的保护作用研究

目的 探讨当归芍药散对高糖诱导的足细胞损伤的保护作用。方法 用含有高、中、低剂量的当归芍药散的药物血清以及厄贝沙坦含药血清对高糖诱导的足细胞损伤进行干预,观察足细胞的凋亡及其活性,并运用免疫荧光对各组Nephrin与Podocin蛋白表达进行检测,运用Western blot对自噬相关蛋白进行检测。结果 和对照组(Normal)相比高糖组(HG)的足细胞存活率、细胞凋亡情况、免疫荧光中Nephrin与Podocin蛋白表达、Western blot中LC3Ⅱ与Beclin-1的蛋白表达明显降低(P<0.01);和HG组相比当归芍药散含药血清高(HG+DS-H)、中剂量(HG+DS-M)组,足细胞在厄贝沙坦含药血清组的干预下存活率显著增加,足细胞凋亡率降低,免疫荧光中Nephrin与Podocin蛋白表达均显著增加,Western blot中LC3Ⅱ的蛋白表达与Beclin-1的蛋白表达也都显著增加(P<0.01)。结论 当归芍药散可以调节高糖诱导足细胞的损伤,但具体机制有待进一步明确。     

芒果苷对高糖诱导的β细胞凋亡的影响及机制研究

目的:研究芒果苷对胰岛β细胞的保护作用及并探讨其可能的作用机制。方法:建立高糖诱导INS-1细胞凋亡模型,用不同浓度的芒果苷预处理细胞,MTT法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达,荧光探针法检测细胞内ROS水平,丙二醛(MDA)检测试剂盒检测细胞内MDA水平。结果:33 mmol/L葡萄糖能显著诱导INS-1细胞凋亡,芒果苷能以浓度依赖性保护INS-1细胞,降低细胞凋亡率,同时能恢复高糖引起的Bcl-2蛋白表达降低,降低Bax蛋白表达;33 mmol/L葡萄糖能诱导INS-1细胞产生ROS及MDA,芒果苷处理细胞能显著降低ROS及MDA水平。结论:芒果苷可能通过降低细胞内氧化压力抑制高糖诱导的INS-1细胞凋亡。