气虚证大鼠垂体高表达且上调的基因

目的：通过筛选正常气虚、高血压气虚、糖尿病气虚等气虚大鼠垂体高表达且上调的基因,探索气虚证在垂体基因表达层面的物质基础。方法：采用16 周龄Wistar 大鼠、自发性高血压大鼠（SHR大鼠）、自发性糖尿病大鼠（GK大鼠）,综合应用标准化大鼠诊法,及GeneChip Rat Gene 1.0 ST Array 等技术,检测正常Wistar 大鼠、正常气虚Wistar 大鼠、SHR 气盛大鼠、SHR 气虚大鼠、GK 气盛大鼠、GK 气虚大鼠等垂体基因的表达,重点关注3 个气虚证中垂体基因表达大于1000 且较正常一致上调的基因。结果：共筛选得到34 个基因：Arhgdia、Arfgap1、Rab 21、Arf5、Arf3、Cdipt、Cds2、Pld3、Ppp3ca、Ppp3cb、Trim35、Itm2b、Itm2c、Tob1、Oaz1、Maged1、Gpc4、Glg1、wdr6、Scarb2、Grn、Hnrpd、Hnrnpab、Snrpb、Gtf2i、As原cl1、Pnrc1、Eef2 、Eno2、Gls、Ucp2、Atp6v0c、Pomc、Syp。结论：鉴于以上基因中参与基因转录和翻译有关的基因,以及参与能量代谢相关基因表达活跃,一些调控有关靶器官的功能性基因,如POMC 亦表达活跃,且大多与细胞活动有关的基因表达增加,提示气虚证大鼠垂体处于一种积极的代偿状态,这可能是气虚证在垂体层面的物质基础。     

气虚证大鼠肾上腺下调的基因筛选

目的 筛选气虚证大鼠肾上腺下调的基因.方法 采用16周龄Wistar大鼠、自发性高血压大鼠(SHR大鼠)、自发性糖尿病大鼠(GK大鼠),运用标准化大鼠诊法,及 Gene Chip Rat Exon1.0 ST Array等技术,检测正常Wistar大鼠、正常气虚Wistar大鼠、SHR气虚和气盛大鼠、GK气虚和气盛大鼠等肾上腺基因表达谱,进而以倍数法筛选3个气虚证肾上腺一致性下调的基因.结果 ①3个气虚证同时下调的高表达基因有22个,主要包括参与代谢、运输类的Cyp11b3、Hsd3b6、Psmb4、Atpif1、Clic4、Gnai3、Ndufc2、Txnl1;参与信号转导、转录调控类的Jak2、Rhoa、Commd3、Tsc22d1、Polr2g、Capza2.②3个气虚证同时下调中等表达基因有10个,包括参与代谢、运输类的Glyat、Hpd、Slc22a2、Slc7a13;参与转录调控及信号转导类的Pcna、Cbx3、Umod、Serpine1、Emd、MGC108823等.③部分生物学功能不明确的基因,包括Calm2、Papd4、Myd116、Spg21、Emcn、Dhx40、LOC681219、RGD1359616等.结论 气虚证Wistar、SHR与GK大鼠肾上腺组织下调表达的基因主要涉及代谢、运输、调控转录、信号转导等生物学过程的紊乱.     

荷瘤小鼠气阴阳诸虚证垂体独特上调和下调基因的表达及特征

目的：筛选荷瘤小鼠中晚期气阴阳诸虚证垂体独特上调和下调的基因并描述其特征。方法：采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法，及Gene Chip Mouse Exonl．0ST Array等技术，检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候垂体基因表达的差异，重点关注那些表达量大、差异显著的基因，筛选气阴阳虚证独特上调和下调的基因。结果：筛选到气阴阳虚证独特上调的基因13个：Apoe、S100a8、Anxal、LOC383949、Iq2-Ea、S100a6、Vim、Tjnf2、Ngp、Gbp5、Myc、Cls、Ltf；独特下调的基因5个：Klklb5、A1bl、Scdl、Bglap2、Gc。结论：①存活到中晚期的气阴阳虚证荷瘤小鼠，垂体细胞的增殖与代谢十分活跃；②这些基因的表达变化可能是肿瘤小鼠气阴阳诸虚证的标志之一。     

阳气虚证H22荷瘤小鼠垂体差异表达的基因

目的:筛选荷瘤小鼠阳气虚证垂体差异表达的基因,并简要分析其功能特征.方法:采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,及GeneChip Mouse Exon1.0 ST Array等技术,检测H122荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候垂体基因表达的差异,重点关注那些表达量大、差异显著的基因,筛选阳气虚证差异表达的基因.结果:筛选到阳气虚证独特上调的基因14个:LOC669166、Cd8b1、Cd3d、Ly6d、Lat、Orm2、Dntt、1700021K02Rik、A130072A22Rik、IDC669782、Ptpre、Igk-V21-9、Cxcll3、LDC668417,其中多数基因在正常小鼠及其他证候小鼠的垂体表达很低或几乎关闭;独特下调的基因3个:Wfdc1、Spook3、Mfan4.结论:H22荷瘤小鼠阳气虚证垂体基因表达与其他证候存在较大差异,其中部分可能是阳气虚证的标志基因.     

正常气虚小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴相关基因转录的特征

目的:观察正常气虚小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴与睾酮合成调节相关基因的转录特征。方法:采用小鼠标准化诊法和辨证方法,筛选出正常气虚小鼠与正常小鼠,采用GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测其下丘脑-垂体-睾丸轴有关基因的转录水平。结果:与正常对照小鼠比较,正常气虚小鼠下丘脑Gnrh1表达略增;垂体上Gnrh受体上调,但Cga、Fshb和Lhb下调;睾丸Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd3b1、Hsd3b6等与睾酮合成相关酶一致上调。结论:正常小鼠出现气虚证时,垂体促性腺激素表达量略减,而睾丸合成睾酮的系列关键酶的表达活跃,这构成了正常气虚证小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴的特征。     

构建以肺纤维化为病理基础的肺气虚证大鼠模型

目的:通过观测大鼠一般情况、肺组织病理和免疫学指标,评价以博莱霉素致肺纤维化为病理基础构建的肺气虚大鼠模型。方法:48只SD大鼠,随机分为空白组和模型组,每组各24只,复制BLMA5致大鼠肺间质纤维化的模型,两组均于造模后每天给予生理盐水灌胃,观测动物一般表现并记录体质量变化,分别于第7、14、28d处死8只大鼠,依次收集大鼠血清和肺组织。通过病理切片HE染色观察肺泡炎分度、MASSON染色观察肺纤维化分级的变化;用ELISA法测定血清中INF-γ、IL-4、IgG含量的变化。结果:(1)模型组大鼠与正常组大鼠比较,呼吸急促,心率加快,精神疲惫,活动量减少,行动迟缓,食量减少,体质量增幅减轻,与气虚的证候特点符合。(2)模型组大鼠早期肺组织以中性粒细胞为主,其次为嗜酸性粒细胞浸润,后期以淋巴细胞、成纤维细胞增生为主。(3)模型组大鼠血清中IgG表达在各时期呈逐渐下调趋势,与正常组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。(4)模型组大鼠血清中IL-4的表达在各个时期呈增高趋势,而IFN-γ的表达在各时期呈逐渐下调趋势,并且IFN-γ/IL-4比值在各时期呈逐渐下降趋势,与正常组比较其差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:以肺纤维化为病理基础构建肺气虚模型是可行的。     

荷瘤小鼠早期邪毒壅盛和气虚证睾丸下调的基因

目的:观察H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛和气虚证睾丸组织一致下调的基因。方法:采用荷瘤小鼠标准化四诊和辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和早期气虚证睾丸组织基因表达谱的差异,重点关注早期阶段2个证候一致下调且表达量较大的基因。结果:筛选出早期邪毒壅盛和气虚证一致下调的基因共150个,其中有11类可以简单归类的基因;气虚与邪毒壅盛证这些基因的表达量差异不大,前者略高于后者;中晚期荷瘤小鼠这些基因表达接近正常对照组,甚至上调。结论:肿瘤发生的早期睾丸基因改变以下调为主,一些基因涉及精子发生,提示荷瘤小鼠生殖受到影响;鉴于两个证候这些基因表达的差异不大,及中晚期表达有增加趋势,提示这些基因下调可能与肿瘤早期应激有关;多数基因在睾丸组织中的功能还不清楚,提示有大量探索工作。     

脾肾气虚证2型糖尿病大鼠模型的复制

目的:观察通过饮食劳倦所伤复合腹腔注射丁胺卡那霉素及链脲佐菌素作为造模要素能否成功复制出脾肾气虚证2型糖尿病病证结合动物模型。方法:健康雄性SD大鼠60只,体质量(180±20)g,按体质量随机分成二组:空白对照组(n=20)和模型组(n=40)。模型组大鼠单日用200%的大黄浓煎液灌胃,4 m L/只,游泳至耐力极限;双日高糖高脂膳食持续喂养,共计12周,第4周后给予丁胺卡那霉素及链脲佐菌素腹腔注射。结果:模型组大鼠造模4周后出现游泳耐力逐日下降,体毛光亮度减退,倦怠,懒动,喜聚堆、弓背蜷缩,粪便时软、时塘,血糖增高;第6周后体质量开始显著增加;甘油三酯和高密度脂蛋白分别从第2周后表现出异常;实验结束后模型组出现高胰岛素血症、胰岛素抵抗,符合本研究拟建立的脾肾气虚证、2型糖尿病的评估标准。结论:通过饮食劳倦所伤复合腹腔注射丁胺卡那霉素及链脲佐菌素造模方法可成功复制出脾肾气虚证2型糖尿病病证结合动物模型。     

肾阳虚大鼠垂体-甲状腺轴与垂体-性腺轴相关性研究

目的：了解肾阳虚时垂体-甲状腺轴及垂体-性腺轴功能之间的相互关系。方法：肌肉注射氢化可的松复制肾阳虚大鼠模型。采用分批宰杀的方法观察早期、中期和晚期肾阳虚大鼠垂体-甲状腺轴及垂体-性腺轴功能指标,对测试数据进行相关性分析,探讨垂体-甲状腺轴及垂体-性腺轴之闻的变化规律和特征。结果：正常组垂体-性腺轴激素中T与FSH有相关性且为负相关。模型组中期LH与FSH有正相关性。模型组垂体-甲状腺轴与垂体-性腺轴激素中T与偈H有显著正相关性,T4与T有正相关性。结论：肾阳虚时垂体-甲状腺轴与垂体-性腺轴不是相互抑制作用,而是平行关系,二轴同时受损．     

试用自然衰老的方法建立心气虚证大鼠模型

目的:研究自然衰老大鼠心气虚证候的生物学特点.方法:雄性SD大鼠清洁级饲养满18个月,从心气虚证候(心率、呼吸频率、力竭性游泳时间和心功能)、体重和耳温等方面在其近中年月龄(12月龄)和近老年月龄(18月龄)时进行量化观察,并对一般情况进行非量化观察.结果:动物18月龄与12月龄比较,力竭性游泳时间普遍缩短,呼吸频率变慢(P＜0.01)、CI下降(P＜0.05),耳温下降(P＜0.01).结论:近老龄大鼠出现了心气虚等证的表现,且情况与人有一定的同一性,所以近老龄、老龄大鼠可用来研究人类衰老的心气虚证.     

白虎加人参汤对气阴两虚型糖尿病模型大鼠肺功能的影响

目的探讨白虎加人参汤对气阴两虚型糖尿病(DM)大鼠肺功能的影响。方法将60只SPF级SD系6周龄雄性大鼠随机抽取6只为对照组,余54只通过高脂高糖饲养联合一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)30mg/kg溶解于0.1mol/L灭菌枸橼酸钠缓冲液(pH4.0)制备DM大鼠模型。筛选符合气阴两虚型的糖尿病模型大鼠30只,随机分为5组,即模型组、白虎加人参汤高、中、低剂量组、二甲双胍组,每组6只。白虎加人参汤高、中、低剂量组分别予27.5 g·kg-1、13.8 g·kg-1·d-1、6.9 g·kg-1·d-1的白虎加人参汤煎液进行灌胃,连续给药3周。干预3周后,观察不同剂量的白虎加人参汤对气阴两虚型DM模型大鼠的血糖、体质量、一般情况及肺功能参数的影响。结果与模型组比较,白虎加人参汤高、中、低剂量均可改善DM模型大鼠的用力肺活量(FVC),呼吸后期瞬间流速(FEF25%或V25),吸气峰流速(PIF)等肺功能参数。结论白虎加人参汤可降低DM模型大鼠的血糖,对气阴两虚型DM大鼠的肺功能有显著的改善作用,以高剂量效果最为显著。     

老年高血压病肾气亏虚证诊断性试验

目的 对老年高血压病肾气亏虚证诊断标准进行临床诊断效能测试.方法 按照临床科研设计、衡量与评价中诊断性试验的原则,用前期建立的诊断量表进行400例高血压病患者的临床流行病学调查.数据集按3:1的比例随机分为训练集和测试集.用老年高血压病肾气亏虚证诊断模型分别对两组资料进行诊断,并与专家辨证结果比较,计算灵敏度、特异度、正确诊断指数、准确度、阳性似然比、阴性似然比及kappa值.结果 回顾性检验与前瞻性检验的灵敏度分别为96.35％和95.31％,特异度分别为95.37％和91.67％,正确诊断指数分别为0.91和0.87,准确度分别为96％和94％,阳性似然比分别为65.78和36.15,阴性似然比分别为0.12和0.16,Kappa值分别为0.91和0.87.结论 老年高血压病肾气亏虚证诊断标准临床判别效能理想.     

高血压阴虚证大鼠主动脉铁死亡相关基因表达研究

目的探究高血压阴虚证大鼠主动脉铁死亡的潜在机制。方法 10只SPF级WKY大鼠作为对照组。将20只SPF级SHR大鼠随机分为两组,每组10只,分别为高血压组、高血压阴虚证组。高血压阴虚证组采用温燥伤阴法复制阴虚证模型,造模药物由淡附片、肉桂、吴茱萸组成,3种药物按照1∶1∶1比例混合,煎煮浓缩,每毫升药液含生药1 g,按照1 mL/100 g灌胃,灌胃30 d。实验结束后,HE染色观察大鼠主动脉组织形态,RT-qPCR法观察主动脉组织铁死亡相关因子p53、GPX4及xCT/SLC7A11 mRNA水平,WB法观察主动脉组织铁死亡相关因子p53、GPX4及xCT/SLC7A11蛋白表达情况。结果 HE染色显示高血压组和高血压阴虚证组血管内皮细胞肿胀,高血压阴虚证组损伤更显著。与对照组相比,高血压组和高血压阴虚证组主动脉组织p53 mRNA和蛋白表达水平显著上升,GPX4、xCT/SLC7A11 mRNA和蛋白表达水平显著下降。与高血压组相比,高血压阴虚证组主动脉组织p53 mRNA和蛋白表达水平显著上升,GPX4、xCT/SLC7A11 mRNA和蛋白表达水平显著下降。结论高血压阴虚证大鼠主动脉铁死亡程度更显著,血管内皮损伤更严重。     

脾气虚大鼠胃黏膜细胞线粒体自噬相关蛋白表达的研究＊

目的 通过检测PTEN诱导激酶1（PTEN-induced putative kinase protein 1，PINK1）-Parkin通路及自噬相关蛋白表达，探讨脾气虚胃黏膜细胞线粒体损伤的可能机制。方法 16只雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚证模型组（模型组），每组8只；透射电镜观察胃黏膜细胞线粒体形态，JC-1法测量其膜电位（ΔΨm）；比色法测定其ATP含量和呼吸链复合物（respiratory chain complex，RCC）I-IV活性；Western blot法检测其RCCV、PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein light chain 3，LC3）-I和II及p62等表达。结果 与正常组比较，模型组胃黏膜细胞的线粒体嵴减少，ΔΨm和ATP水平下降，RCCI和IV活性降低，RCCV、PINK1、Parkin和LC3-II表达下降，但LC3-I和p62表达上升。结论 脾气虚胃黏膜细胞线粒体结构和功能损伤与PINK1-Parkin通路抑制所导致的线粒体自噬水平低下有关。     

阴虚体质与相关疾病的探究

阴虚体质是因体内阴液亏耗所致的一种以虚热内生为主要特征的体质状态。本文通过Pubmed、Web of Science、中国知网等数据库,检索近10年有关阴虚体质与某些疾病的相关性。整理研究发现阴虚体质人群易罹患糖尿病、高血压病两大疾病。因此本文利用中医基础理论知识进一步分析阴虚体质与糖尿病、高血压病2种疾病之间的关系,以及在2种疾病的病因病机与防治方面提出见解以期为临床治疗研究提供思路。     

心气虚证动物模型的研制

目的 :探索心气虚证动物模型的制作方法。方法 :80只 NIH小白鼠采用连续控食 2 4 d,每日强迫负重游泳 1 0 min,大剂量灌服心得安 (0 .5ml,1 mg/ml)和注射垂体后叶素 (0 .2 ml,5U/ml)等综合方法制造心气虚证动物模型。结果 :造模小鼠的临床表现与心气虚证诊断标准基本一致。心气虚证小鼠同时出现强迫负重游泳时间缩短 ,心率减慢 ,结代脉发生频率增高 ,心功能减退 ,超氧化物歧化酶 (SOD)活性降低 ,丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶 (LDH)和肌酸激酶 (CK)均值增大 ,与气虚组和对照组比较差别有显著性 (P<0 .0 5)或高度显著性 (P<0 .0 1 ) ,其中尤以心气虚 组各项检测变化更为明显。结论 :采用控食、惊劳、大剂量心得安灌胃和大剂量垂体后叶素腹腔注射等综合方法制造心气虚证动物模型具有一定的研究价值     

脾气虚证的本质研究

在证候规范化工作开展多年之后,脾气虚证本质的研究在很大程度上得到了规范。医学工作者们从不同角度、不同方面对其进行研究,试图找到一个统一的客观标准。但迄今为止,在医学界仍存在着、正在诞生各种诊断标准。对近年来有关脾气虚证的本质研究进展作一综述。     

浅谈脾气虚在肝纤维化中的作用

肝纤维化是慢性肝病进展的共同病理阶段,属于中医的"症积""胁痛"等疾病范畴。在慢性肝病的早期及中期阶段,由于正气不足,无力抵邪外出;病程日久,正虚加剧,脾气虚证为其常见证型,并贯穿疾病始终。目前临床使用的治疗肝纤维化有效方药中多含有"健脾""益气""扶正"等作用的药物。因此在临床治疗肝纤维化时应重视健脾益气。     

慢性阻塞性肺病肺气虚证和肺阴虚证患者细胞因子变化的研究

目的研究慢性阻塞性肺病（COPD）肺气虚证和肺阴虚证患者细胞因子的水平及差异。方法分别对COPD肺气虚证患者30例、COPD肺阴虚证患者30例和健康对照者30例血清白细胞介素（IL）-8、IL-1β、肿瘤坏死因子α（TNF—α）的水平进行检测。结果COPD肺气虚证和肺阴虚证患者血清IL-8、IL-1β、TNF-α的水平均较健康对照者显著增高（P〈0．01）,且肺阴虚组高于肺气虚组,组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论COPD肺气虚证和肺阴虚证患者存在高水平的细胞因子,肺阴虚证患者更明显。