福氏志贺菌毒力蛋白IpaC的表达与纯化

目的表达和纯化福氏志贺菌毒力蛋白IpaC,研究福氏志贺菌的致病机制。方法将含有ipaC基因的pET32a-i-paC表达质粒载体转化大肠杆菌BL21(λDE3),在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达,对诱导后的表达产物进行SDS-PAGE鉴定,并采用QIA expressionistTM蛋白纯化系统来纯化目的蛋白。结果诱导后的表达产物经SDS-PAGE发现有一相对分子质量约为63 000的条带,其含量约占总蛋白量的11%,以350 mmol/L咪唑洗脱液洗脱,目的蛋白纯度可达90%以上。结论pET32a-ipaC重组表达质粒转入大肠杆菌后,可稳定、高效地表达目的蛋白,QIA-expressionistTM蛋白纯化系统是一种简便、高效的纯化系统,可获得高纯度的目的蛋白。     

福氏志贺菌毒力蛋白IpaC的表达、纯化及免疫活性鉴定

目的表达、纯化福氏志贺菌毒力蛋白IpaC并对其免疫活性进行鉴定。方法将含有ipaC基因的pET32a．ipaC表达质粒载体转入大肠杆菌BL21（kDE3）中表达,表达产物进行SDS—PAGE鉴定,并采用QIA expressionist^TM蛋白纯化系统纯化IpaC蛋白;用纯化的蛋白免疫动物获得抗血清,Western-blot检测抗原的免疫活性。结果诱导后的表达产物经SDS—PAGE发现有一相对分子量约为63000的条带,其含量约占总蛋白量的11％,对融合蛋白进行纯化纯度可达90％以上,抗His的抗体Western-blot分析,发现特异性区带出现在63000u处,证明该蛋白是所要表达的融合蛋白,制备的免疫血清可与Ipac发生特异免疫反应。结论pET32a-ipaC重组表达质粒转入大肠杆菌后,可稳定、高效地表达毒力蛋白IpaC,且纯化后的蛋白具有免疫活性。     

福氏志贺菌感染豚鼠和HeLa细胞的毒力

目的 研究福氏志贺菌感染豚鼠和HeLa细胞后细菌致病能力的差异，探讨痢疾的防治。方法 选用28株福氏志贺菌感染豚鼠眼角膜，观察角膜结膜病变反应，并进行细胞学、细菌学、病理组织切片检查。然后再选出12株福氏志贺菌强毒株和两株弱毒株，通过噬斑形成实验，观察对HeLa细胞的侵袭能力。结果 28株福氏志贺菌均在3d之内引起豚鼠发病，但症状表现有差异，除2株福氏志贺菌感染豚鼠后发病时间延长、症状轻微外。其余菌株则引起较为严重的角膜结膜炎，尤其在感染第3天，出现最为典型的临床表现。噬斑形成试验结果与豚鼠感染试验基本相符。结论 检测福氏志贺菌的毒力可用HeLa细胞噬斑形成试验替代Sereny试验。利用Sereny试验和HeLa细胞噬斑形成试验鉴定出26株福氏志贺菌的强毒株和2株弱毒株，用于毒力基因的进一步分析。     

福氏志贺菌耐药情况与临床选药

目前我国细菌性痢疾(简称菌痢)发病率在细菌性腹泻中仍居首位,也是严重威胁人群健康的一种常见病、多发病。自80年代开始已有疗效较好的喹诺酮类抗生素应用于临床,然而到1999年下半年以来,细菌性痢疾在我院平均住院日明显延长,治疗难度较前几年明显增大,为指导临床用药,提高疗效,缩短住院日,现将我院1997年1月—1999年11月,已培养出的福氏志贺菌的抗菌药物敏感结果进行总结和分析。材料和方法1　菌株来源　105株福氏志贺菌为我院1997年1月—1999年11月间,急诊科、传染科、内科、儿科住院患者粪便培养分离所得,同一患者在2个月内连续培养出同…     

福氏志贺菌药敏试验结果分析

细菌性痢疾是一种急性肠道传染病,菌型较多,各地流行的菌型不一.我市以福氏2a志贺菌流行较为严重,现将我科细菌室1996年6月至2004年10月分离培养的106株福氏志贺菌的鉴定及药敏结果统计分析如下.     

永州市福氏志贺菌临床分离株毒力基因的研究

目的对2012年湖南省永州市医院分离的144株福氏志贺菌进行毒力基因的检测,以了解其毒力基因的携带情况。方法针对毒力基因,设计特异性引物,采用PcR方法检测临床分离株中ial、ipaH和icsP毒力基因的分布情况。结果I44株福氏志贺菌中,其中F1a65株（451％）,F2a50株（208％）,F×24株（167％）,其他25株（173％）。ip＆H、icsP基因的阳性率为1oo％（144／144）,而iaI基因的阳性率为53．4％（77／I44）。结论永州市的福氏志贺菌的ipaH和FcsP携带率非常高,而iaI基因携带率相对较低。     

组氨酸蛋白激酶EnvZ抑制剂对福氏志贺菌毒力影响的初步研究

目的初步研究福氏志贺菌组氨酸蛋白激酶EnvZ抑制剂对福氏志贺菌毒力的影响。方法通过构建志贺菌：EnvZ胞内段（SF-EnvZc）蛋白的原核表达质粒,表达并纯化SF-EnvZc蛋白,在SPECS公司的小分子化合物库中模拟筛选出的10个候选EnvZ抑制剂的基础上,通过体外磷酸化的方法筛选出能够有效地抑制SF- EnvZc蛋白磷酸化的小分子化合物（EnvZ抑制剂）,然后采用表面等离子共振（SPR）技术检测EnvZ抑制剂与SF-EnvZc蛋白的结合力,并采用小鼠角结膜志贺菌感染模型检测EnvZ抑制剂对福氏志贺菌株Sf9380毒力的影响。结果在10个候选EnvZ抑制剂中,化合物1、2、3能够有效地抑制SF-EnvZc蛋白的磷酸化,其IC50值分别为（70．17±5．83）、（10．18±0．86）和（37．66±9．64）μmol／L,且上述3个化合物表现出对SF-EnvZc蛋白的高亲和力,其平衡解离常数（Kd）分别为4．08、3．57和2．94μmol／L,其中化合物1和2能够明显抑制福氏志贺菌株Sf9380导致的小鼠角结膜炎症反应（由＋＋＋变为-）,化合物3能够明显降低其炎症反应（由＋降为＋）,化合物1、2、3的最小有效浓度分别为12．5、12．5和100μmol／L结论筛选出3个EnvZ抑制剂,化合物1、2、3能够不同程度地抑制或降低福氏志贺菌导致的小鼠角结膜炎症反应,提示EnvZ抑制剂能够降低福氏志贺菌的毒力。     

福氏志贺菌引起皮肤伤口感染1例

志贺菌属的细菌 ,是人类细菌性痢疾 (菌痢 )的病原菌。福氏志贺菌是肠杆菌科志贺菌属中最常见的一种病原菌 ,主要经消化道传播 ,一般只引起人类肠道传染病 (痢疾及急性胃肠炎 )。尚未见引起皮肤软组织感染的病例 ,现报道 1例。1　临床资料患者男性 ,5 4岁 ,因臀部溃疡于 2 0 0 2年 5月 2 0日入包头医学院三附院皮肤科治疗。患者于就诊前半年曾发烧、腹泻 ,次数较多 ,为粘液稀便 ,口服止泻药(品名及剂量不详 ) 3天后治愈。当时 ,臂部皮肤有破损未引起注意 ,后逐渐扩大、变深 ,内呈蜂窝状。经当地乡村诊所给予对症处理 (具体不详 )效果差 ,即…     

兰州市志贺菌相关毒力基因

目的调查兰州市分离志贺菌株的毒力基因型。方法常规分离志贺菌,应用聚合酶链反应检测志贺菌肠毒素1基因（set1A和set1B）、志贺菌肠毒素2基因（sen）、侵袭性质粒抗原H基因（ipaH）、侵袭相关位点基因（ial）和多重调控基因（virA）。结果兰州市志贺菌毒力基因virA、set1A阳性率为100％;ipaH阳性率为93．7％;ial、sen、set1B阳性率分别为56．2％、62．5％、25．0％,set1B仅在福氏志贺菌Ⅳ型中检出。结论兰州市志贺菌中携带的毒力基因存在差异,virA、set1A和ipaH较稳定,可作为靶基因用于兰州市志贺菌的检验,set1B可用于筛选福氏志贺菌Ⅳ型菌株。     

儿童福氏志贺菌超广谱β内酰胺酶CTX-M基因型的研究

目的 了解唐山地区产CTX-M型超广谱B内酰胺酶（EsBk）福氏志贺菌的流行基因型,为有效预防和控制该类感染提供理论依据。方法临床分离的无重复产ESBLs的福氏志贺菌43株,采用CLSI推荐的表型筛选和确证试验检测ESBLs,采用聚合酶链反应（PCR）检测CTX-M基因型。结果43株产ESBLs的福氏志贺菌中,产CTX-M基因型的有19株（44．2％）,经PCR扩增及测序,19株具有ESBLs表型的福氏志贺菌中有17株表达CTX-M-14,1株表达CTX-M-57,1株表达CTX-M-3。结论唐山地区存在着CTX-M基因的流行,应加强唐山地区产CTX-M型ESBLs菌株的检测。     

志贺菌全菌蛋白质双向电泳技术的建立

目的:建立针对志贺菌全菌蛋白质组学研究的双向电泳及其相关技术体系.方法:采用超声兼尿素-3-[(3-胆酰胺丙基)-乙二胺]-1-丙磺酸(CHAPS)-二硫苏糖醇(DTT)裂解法提取临床分离志贺菌全菌蛋白,利用固相pH梯度等电聚焦对全菌蛋白进行双向电泳,银染后获得的双向电泳图谱进行Image Master 2D Platinum软件分析,并对实验条件进行调整优化. 结果:成功构建了高重复性的志贺菌全菌蛋白质双向电泳图谱,共获得946±37个蛋白质斑点, pI值主要集中在4.94～7.23之间.结论:通过相关条件的调整优化提高了双向电泳的分辨率,为后续志贺菌蛋白质组学研究奠定了基础.     

结核杆菌抗原MPT64基因在大肠杆菌中的表达及纯化

近几年来,结核病的发病有上升的趋势,全世界每年约有300万人死于结核病,800万人患结核病[1].尤其是多重耐药菌株的出现及与艾滋病共同感染更加重了结核病对人类健康的危害.……     

176株福氏2a型志贺氏菌耐药性检测

福氏2a型志贺氏菌是本地多年来引起肠道传染病(痢疾及急性胃肠炎)中最常见的病原菌之一，为了解该菌近几年来对抗生素的耐药情况，对本院1998年10月-2000年10月门诊及住院胃肠道疾病患者的大便标本中分离出来的176株福氏2a型志贺氏菌，用10种抗生素进行了耐药性检测。结果如下。     

弓形虫表面抗原SAG2重组蛋白的表达及纯化

目的在大肠埃希氏菌（E．coli）中表达弓形虫表面抗原2（SAG2）,纯化制备重组蛋白rSAG2。方法采用聚合酶链反应（PCR）技术从弓形虫基因组中扩增出SAG2编码基因片段,以pMD-18T质粒作TA克隆,序列测定后亚克隆入表达载体pGEX-4T-2,并转化E．coliJMl09感受态菌,IPTG诱导表达rSAG2蛋白,重组rSAG2蛋白采用B—PER谷胱甘肽巯基转移酶（GsT）融合蛋白纯化试剂盒纯化并进行SDS—PAGE与免疫印迹（Western—blot）鉴定。结果SAG2编码基因扩增片段大小为469bp;测序结果显示,克隆的SAG2基因序列与GenBank中弓形虫RH株的同源序列（序列号GI：161925）完全一致;所诱导表达的含GST的融合rSAG2蛋白大小约43kDa,纯化后的rSAG2经SDS—PAGE电泳显示一条纯化条带;蛋白免疫印迹结果显示rSAG2能够被兔弓形虫感染血清所识别。结论在大肠埃希氏菌中融合表达了弓形虫SAG2重组蛋白,纯化的rSAG2蛋白具有一定的免疫活性。     

重组人Jo-1抗原的表达、纯化以及免疫特异性检测

目的 表达纯化重组人Jo-1抗原,免疫印迹和ELISA检测其免疫特异性.方法 IPTG诱导含有Jo-1基因的重组菌,获得高表达的可溶性融合蛋白(MBP-Jo-1),亲和层析纯化该表达蛋白,免疫印迹和ELISA分别检测其抗原性并与生化提取的Jo-1抗原比对.结果 表达的重组Jo-1蛋白具有Jo-1抗原的特异性.结论 重组Jo-1蛋白与天然Jo-1抗原具有相同的免疫原性和免疫原特异性.