子宫颈鳞状细胞癌组织中DNMT1mRNA表达和E-cad甲基化检测

目的:探讨宫颈鳞状细胞癌组织中DNA甲基化转移酶(DNMT1)mRNA的表达和上皮钙粘附素(E-cad-herin)的甲基化状况,分析其与宫颈鳞状细胞癌发生发展的关系.方法:应用原位杂交技术检测20例正常宫颈、60例CIN(CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CINⅢ各20例)和40例宫颈鳞状细胞癌组织中DNMT1 mRNA的表达情况;利用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)方法检测E-cad基因启动子区甲基化状况,分析官颈鳞状细胞癌中DNMT1 mRNA的表达与E-cad启动子区甲基化状况及2者之间的相关性.结果:DNMT1 mRNA在正常官颈、CIN和宫颈鳞状细胞癌组织中表达逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);DNMT1 mRNA在CIN Ⅰ、CINIⅡ、CINⅢ组织中表达的差异有统计学意义(P<0.05).E-cad启动子甲基化率在正常宫颈、CIN、宫颈鳞状细胞癌组织中依次升高,差异有统计学意义(P<0.05).E-cad启动子甲基化与DNMT1 mRNA的表达呈正相关(r=0.401,P<0.05).结论:DNMT1 mRNA过表达和E-cad启动子异常甲基化与子宫颈鳞状细胞癌的发生发展关系密切;E-cad启动子甲基化过程可能是在DNMT1的催化作用下完成的.     

乳腺癌组织及血浆中RASSF1A,CDH1甲基化的检测及临床意义

目的 研究乳腺癌组织、乳腺良性肿瘤组织及相应患者血浆中Ras相关区域家族1A(RASSF1A)、上皮型钙黏附素(CDH1)基因启动子区异常甲基化状态及其临床意义.方法 应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法对乳腺癌组织、乳腺良性肿瘤组织及相应血浆中RASSF1A,CDH1基因甲基化状态进行检测.结果 34例乳腺癌组织RASSF1A基因启动子甲基化率为73.53%(25/34),CDH1基因启动子甲基化率为50.00%(17/34),相应血浆中RASSF1A的甲基化检出率为55.88%(19/34);CDH1的甲基化检出率为35.29%(12/34);联合检测血浆中RASSF1A和CDH1基因启动子区甲基化的敏感性为64.71%(22/34);而25例良性肿瘤组织RASSF1A基因启动子甲基化率为12.00%(3/25),CDH1基因启动子甲基化率为4.00%(1/25),相应血浆中未检测出甲基化的RASSF1A和CDH1基因.RASSF1A,CDH1甲基化率与肿瘤病理类型、患者年龄、有无淋巴结转移的差异无显著性(P>0.05).结论 联合检测血浆中RASSF1A和CDH1基因启动子区甲基化,可用于乳腺癌的辅助诊断.     

乳腺癌患者血浆RASSF1A基因启动子甲基化的意义

目的:探讨乳腺癌患者血浆、肿瘤组织中RASSF1A基因启动子甲基化与临床病理等因素的相关性.方法:采用甲基化特异性PCR方法,分别检测68例乳腺癌患者血浆、肿瘤组织及癌旁腺体组织,以及12例良性乳腺疾病患者的血浆和乳腺组织中RASSF1A基因启动子甲基化状况.结果:乳腺癌组织RASSF1A基因启动子甲基化频率47.1%(32/68),患者血浆中同样DNA变异检出率33.8%(23/68).血浆中DNA甲基化状况与乳腺癌组织的甲基化状况显著相关(r=0.906,P=0.001).检测血浆中RASSF1A基因启动子甲基化的敏感性71.8%,特异性97.2%,肿瘤组织及血浆中游离DNA甲基化异常与临床分期,病理类型,肿瘤大小,ER,PR和cerbB-2状况无相关性(P＞0.05).乳腺癌组织中未检测到RASSF1A基因启动子甲基化的血浆中、乳腺良性疾病患者血浆中均未检测到该基因甲基化变异.结论:乳腺癌患者血浆中RASSF1A基因启动子甲基化与肿瘤组织中的变异频率相关.     

浸润性乳腺癌SFRP1基因的表达及其启动子甲基化的意义

目的探讨浸润性乳腺癌及相应癌旁乳腺组织中分泌型卷曲相关蛋白1(the secreted frizzled-relat-ed protein 1,SFRP1)基因的表达及其启动子CpG岛的异常甲基化状态,并分析其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR技术及甲基化聚合酶链反应(MSP)技术检测58例浸润性乳腺癌组织和相应癌旁乳腺组织中SFRP1基因的mRNA表达及其启动子CpG岛的异常甲基化情况,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于癌旁乳腺组织组(P<0.05);腋窝淋巴结有转移的浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于腋窝淋巴结无转移组(P<0.05),而与其他临床病理参数无关。SFRP1在浸润性乳腺癌组的mRNA表达量与乳腺癌旁组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在23例SFRP1基因启动子CpG岛发生异常甲基化的浸润性乳腺癌组,均未检测到SFRP1的mRNA表达。结论 SFRP1基因异常甲基化可能影响其mRNA的转录水平;SFRP1基因启动子的甲基化与浸润性乳腺癌的发生发展有关,对其进行检测有可能为浸润性乳腺癌的早期诊断和判断预后提供帮助。     

E-钙黏素基因甲基化与肿瘤的关系

E-钙黏素是一肿瘤浸润抑制基因,与肿瘤分化状态有关.近年来发现人类许多恶性上皮肿瘤如食管癌、前列腺癌、肝癌、胃癌等存在E-钙黏素表达下降或缺失.越来越多研究认为,E-钙黏素基因启动子区域CpG岛甲基化是其失活的原因,参与了肿瘤的形成、发生和发展.本文就E-钙黏素基因甲基化与肿瘤的进展综述如下.     

上皮性钙黏素及其基因启动子区甲基化与葡萄胎恶变关系

目的研究上皮性钙黏素(E-cadherin)及其基因启动子区CpG岛甲基化在葡萄胎恶变中的作用,探讨去甲基化制剂5′-氮杂-2′脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导绒癌细胞株中E-cadherin基因恢复表达的可能性。方法采用免疫组化SP法,检测10例正常早孕绒毛和37例葡萄胎组织中E-cadherin的表达。采用甲基化特异性PCR(MSP)检测正常早孕绒毛、非恶变葡萄胎、恶变葡萄胎及绒癌细胞株JAR中E-cadherin基因CpG岛的甲基化状态,并用RT-PCR检测绒癌细胞株JAR经5-Aza-CdR处理后E-cadherin mRNA表达。结果正常早孕绒毛、非恶变葡萄胎、恶变葡萄胎组织E-cadherin蛋白表达阳性率及甲基化率分别为100%、90.00%、41.18%和0、15.00%、41.18%,差异均有显著性(χ2=12.903、4.573,P0.05)。E-cadherin蛋白表达在甲基化组低于非甲基化组(Ken-dall tau-b=0.769,P0.05),且恶变葡萄胎组织中E-cadherin基因甲基化率与解剖学分期、预后评分有关(Kendalltau-b=-0.757、-0.663,P0.05)。在JAR细胞株中E-cadherin基因启动子区呈甲基化状态,且其mRNA弱表达,经5-Aza-CdR处理后的JAR细胞株E-cadherin mRNA表达明显增强。结论 E-cadherin基因启动子区过度甲基化可能是E-cadherin失活的机制之一,与葡萄胎的恶性进展有关。5-Aza-CdR能逆转JAR细胞株中E-cadherin基因甲基化状态,从而恢复E-cadherin基因的转录活性。     

黏附分子E-cad在乳腺浸润性癌组织表达与预后的研究

目的　研究E -cad对浸润性乳腺癌侵袭、转移、预后的作用。方法　采用免疫组化S -P法检测 10 3例乳腺癌标本 ,结合临床和病理资料分析其作用。结果　E -cad总表达率为 35 .0 % (36 / 10 3) ,主要定位于细胞浆 ,其阳性表达率在不同组织学类型之间无显著性差异 ,与患者年龄大小、随访结果无关 (p >0 .0 5 ) ,E -cad的表达与组织学分级、肿瘤组织浸润程度、肿瘤大小、腋淋巴结转移有关 (p <0 .0 5 )。 结论　E -cad表达降低与患者预后之间有显著关系 ,E -cad可作为一个与乳腺癌预后密切相关的预后指标。     

喉癌组织中TSLC1基因启动子过甲基化及mRNA表达

目的:探讨TSLC1基因启动子区过甲基化与喉癌的关系.方法:采用甲基化特异性PCR和RT-PCR法分析喉部正常粘膜、声带息肉、喉癌细胞Hep-2和喉癌组织中TSLC1基因启动子区过甲基化及其mRNA表达状况.结果:40例喉癌组织中,有21(52.5%)例TSLC1基因启动子区过甲基化,其在各病理分级、临床分期和分型之间差异无统计学意义(P＞0.05),而在N分级(N0和N1)之间差异有统计学意义(P＜0.05).喉癌细胞Hep-2也显示TSLC1基因启动子区过甲基化.RT-PCR结果显示,TSLC1 mRNA在所有甲基化的喉癌组织和喉癌细胞Hep-2中均无表达,而喉部正常组织,声带息肉组织和非甲基化的喉癌组织中均有表达.结论:喉癌组织中TSLC1基因启动子区过甲基化与其mRNA失表达有关,可能是喉癌发生、发展的原因之一,可作为喉癌诊断和预后分析的检测指标.     

COX-2与E-cad在子宫内膜腺癌组织表达及其意义

目的探讨环氧合酶-2（COX-2）与上皮型钙黏素（E-cad）在子宫内膜腺癌组织表达及其临床意义。方法应用免疫组化EnviSion法检测20例正常子宫内膜和70例子宫内膜腺癌中COX-2、E-cad表达情况。结果子宫内膜腺癌组织中COX-2表达阳性率则明显高于正常子宫内膜组织（P=0.000 0）,而E-cad表达阳性率则明显低于正常子宫内膜组织（χ^2=18.79,P〈0.001）;COX-2表达阳性率与病人年龄、病理分级及手术-病理分期均无关（Hc=1.050、5.566、5.358,P〉0.05）,而与子宫肌层浸润深度及淋巴结转移有关（uc=3.015、5.237,P〈0.01）;E-cad表达阳性率与病理分级、手术-病理分期、子宫肌层浸润深度及淋巴结转移均有关（χ^2=4.389,P〈0.05、0.01）;子宫内膜腺癌组织COX-2的表达与E-cad呈负相关（r=-0.264,P〈0.05）。结论在子宫内膜腺癌的发生发展中COX-2和E-cad可能起重要作用;COX-2表达与子宫内膜腺癌侵袭和转移关系密切,E-cad可能是COX-2表达调控的重要因子之一。     

p16基因启动子甲基化与乳腺癌临床病理特征的关系

目的探讨p16基因在乳腺癌组织中的表达及其启动子区域甲基化情况,并分析p16基因启动子甲基化与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学SP方法和甲基化PCR(MSP)方法检测47例乳腺癌和20例乳腺增生组织p16蛋白表达及其启动子甲基化情况。结果乳腺癌组织p16蛋白阳性表达率低于乳腺增生组织(48.9%vs.70.0%),启动子甲基化率高于乳腺增生组织(38.3%vs.20.0%),但差异均无统计学意义(P>0.05);p16基因表达下降与其高甲基化呈负相关(r=-0.33,P=0.02);p16基因启动子甲基化与年龄、肿瘤直径、临床分期、雌激素受体(ER)以及孕激素受体(PR)无关(P>0.05),而与组织分级、淋巴结转移有关(P<0.05)。结论p16基因启动子甲基化诱导p16蛋白低表达在乳腺癌早期发生过程中作用有限,但在乳腺癌发展过程中发挥作用。     

胶质母细胞瘤中HOXD10基因启动子的甲基化检测及与预后的关系

目的 探讨同源异形盒基因D10(HOXD10)在胶质母细胞瘤中的启动子甲基化状态,并分析其基因启动子甲基化与患者预后的关系。方法 选取49例人脑胶质母细胞瘤和30例正常脑组织,采用甲基化特异性PCR技术检测HOXD10基因启动子甲基化状态,免疫组织化学法分别检测HOXD10蛋白表达,分析HOXD10基因启动子甲基化状态与患者临床病理特征的关系。Kaplan-Meier法分析HOXD10基因启动子甲基化状态与患者预后关系,Cox回归模型分析影响患者预后因素,Spearman相关性分析HOXD10基因启动子甲基化与其蛋白表达相关性。结果 与正常脑组织相比,胶质母细胞瘤HOXD10启动子甲基化阳性率升高(P<0.05)。HOXD10启动子甲基化状态与患者性别、年龄、KPS无关(P>0.05),肿瘤直径>5 cm患者的HOXD10启动子甲基化阳性率高于肿瘤直径≤5 cm患者(P<0.05),病理分级为高级别(Ⅲ～Ⅳ级)患者HOXD10启动子甲基化阳性率高于病理分级为低级别患者(P<0.05)。胶质母细胞瘤HOXD10启动子甲基化阳性患者PFS和OS均低于阴性患者PFS和OS(P<0.05)。病理分级和HOXD10基因启动子甲基化状态是影响患者预后的独立危险因素(P<0.05)。胶质母细胞瘤HOXD10基因启动子甲基化阳性患者HOXD10蛋白阳性率低于阴性患者(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,胶质母细胞瘤中HOXD10基因启动子甲基化与其蛋白表达呈负相关(r=-0.731,P<0.05)。结论 胶质母细胞瘤中HOXD10基因启动子甲基化阳性率升高,阳性表达患者预后较差,可作为患者预后评估的重要参考指标。     

Cyclin E在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌预后的关系

目的　通过研究细胞周期蛋白E (cyclinE)在乳腺癌组织中的表达 ,探求cyclinE判断乳腺癌预后的潜在价值。方法　用免疫组织化学的方法检测 80例乳腺癌以及 18例良性乳腺肿瘤患者的病理组织切片标本上cyclinE、HER 2 /neu、nm2 3 H1、肌动蛋白 (actin)的表达 ,分析cyclinE与患者临床资料、HER 2 /neu、nm2 3 H1,actin间的关系。结果　CyclinE的表达率 :乳腺癌明显高于良性乳腺肿瘤 (P <0 0 1) ;乳腺癌晚期高于早期 (P <0 0 5 ) ;雌激素受体 (ER)阳性者明显低于ER阴性者 (P <0 0 5 ) ;孕激素受体 (PR)阳性者与阴性者无明显差异 (P >0 0 5 ) ;HER 2 /neu阳性者高于阴性者 (P <0 0 5 ) ,ER、PR、HER 2 /neu均阳性者表达率更高 (P <0 0 1) ;在nm2 3 H1阴性和阳性者中 ,表达无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;在actin阳性且呈连续分布者中明显低于actin阴性或不连续分布者(P <0 0 5 )。结论　CyclinE的表达水平同乳腺癌患者的预后有着密切的关系。     

食管癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化检测及其临床意义

目的探讨Ras相关结构域家族基因1A（RASSF1A）启动子区异常甲基化与食管癌发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法,检测66例食管癌组织及相应的癌旁正常组织RASSF1A基因启动子区异常甲基化。分析食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化与临床病理特征的关系。结果在食管癌组织、癌旁正常组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率分别为48．5％（32／66）、6．1％（4／66）。淋巴结转移者食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率（61．1％）明显高于无淋巴结转移者（33．3％）（χ^2=5．055,P=0．025）;晚期（Ⅲ～Ⅳ期）食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率（69．2％）明显高于早期（Ⅰ～Ⅱ期）（35．0％）（χ^2=7．392,P=0．007）;食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化与肿瘤分化程度无相关性（P〉0．05）。结论食管癌组织中存在RASSF1A基因启动子区的异常甲基化,甲基化与食管癌病理分期和淋巴结转移有关。     

散发性三阴乳腺癌中BRCA1启动子甲基化与蛋白表达

目的：通过检测散发性三阴乳腺癌（TNBC）中乳腺癌易感基因（breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1）启动子甲基化和蛋白表达,探讨BRCA1与散发性TNBC的关系.方法：应用重亚硫酸盐测序PCR（bisulfite sequencing PCR,BSP）法检测50例散发性TNBC组织及配对癌旁组织中BRCA1启动子甲基化状态,用免疫组织化学方法检测上述组织中BRCA1蛋白的表达情况,分析BRCA1启动子甲基化与蛋白表达的相关性.结果：散发性TNBC组织中BRCA1启动子甲基化率为42.0％（21/50）,癌旁组织未检测出甲基化,两者比较差异有统计学意义（P=0.000）.BRCA1蛋白在散发性TNBC癌组织中的表达率为32.0％（16/50）,明显低于癌旁组织68.0％ （34/50）（P＜0.05）.散发性TNBC癌组织中BRCA1蛋白表达与启动子甲基化呈负相关（r=-0.323,P=0.022）.结论：BRCA1启动子的高甲基化引起BRCA1蛋白表达下降或缺失,可能是散发性TNBC重要的发病机制之一.     

启动子甲基化下调宫颈鳞癌组织miR-34a表达

目的:探讨宫颈鳞癌组织miR-34a下调的表达机制。方法:应用茎环RT Realtime-PCR方法检测48例宫颈鳞癌和20例正常宫颈组织中miR-34a的表达;通过甲基化特异PCR检测miR-34a启动子甲基化情况,分析5-Aza-dC去甲基化处理的Caski宫颈癌细胞miR-34a表达变化,观察miR-34a启动子甲基化对miR-34a失调表达的影响。结果:miR-34a在宫颈鳞癌组织中的表达明显低于正常宫颈组织,差异有统计学意义(P<0.05)。甲基化特异PCR检测显示,宫颈鳞癌组织miR-34a启动子区甲基化比率明显高于正常宫颈组织(P<0.05)。5-Aza-dC去甲基化处理人类乳头状瘤病毒(HPV)16阳性的Caski细胞后,miR-34a表达明显升高(P<0.05)。结论:除HPV16 E6外,启动子甲基化也是抑癌基因miR-34a在宫颈鳞癌组织中异常表达的原因。     

乳腺癌组织中基质金属蛋白酶-9的表达及其意义

目的 :探讨基质金属蛋白酶 9(MMP 9)在乳腺癌患者病程进展中的临床意义。方法 :对 4 8例原发性乳腺癌患者癌组织石蜡标本 ,采用标准链霉菌抗生物素蛋白 过氧化物酶亲合免疫组化法检测肿瘤组织中基质金属蛋白酶 9的表达 ,分析其与临床病理特征间的关系。结果 :4 8例乳腺癌中MMP 9阳性表达率为 4 2 % ;本组患者中无腋淋巴结转移组、高分化组、无远处转移组及 5年生存组MMP 9表达水平低于有腋淋巴结转移组、低分化组、远处转移组及死亡组 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :MMP 9和乳腺癌患者的转移和预后相关 ,此结果为临床建立新的乳腺癌预后预测因子提供了有价值的信息 ,并可用以指导临床治疗。     

肝癌组织IGF-Ⅱ启动子P4甲基化分析及意义

目的探讨人胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因启动子P4的甲基化状态与肝细胞癌的关系。方法提取手术切除的原发性肝癌及相应癌旁肝组织各12例、慢性乙型肝炎肝穿刺活检组织10例、正常肝组织7例以及三株肝癌细胞系(BEL7402,SMMC7721,HepG2)的基因组DNA,分析肝癌组织IGF-Ⅱ启动子P4序列,检测各组织、细胞的IGF-Ⅱ启动子P4的甲基化状态。结果肝癌组织IGF-Ⅱ启动子P4序列与MEDLINE提供的正常序列(NT-009308)一致;肝癌、癌旁、慢性乙型肝炎以及正常肝组织IGF-Ⅱ基因启动子P4甲基化率的差别有统计学意义(χ2=26.207,P=0.000)。结论本组原发性肝癌组织IGF-Ⅱ基因启动子P4无序列缺失、突变;IGF-Ⅱ基因胚胎型启动子P4的去甲基化与肝癌发生相关。     

浸润性乳腺癌中IGF-1的表达及其意义

目的探讨浸润性乳腺癌中IGF-1的表达及生物学意义。方法应用免疫组化EnVision法检测62例浸润性乳腺癌组织中IGF-1蛋白的表达水平。结果腋淋巴结转移者中IGF-1阳性率高于无腋淋巴结转移者（P〈0.05） 组织学分级Ⅲ级者,IGF-1阳性率明显高于组织学分级Ⅰ、Ⅱ级者（P〈0.01）。结论IGF-1蛋白是乳腺癌浸润和转移过程中的潜在生物学标志,其表达的检测对乳腺癌的浸润程度、转移特性有一定临床价值。     

生存素在乳腺癌组织的表达及其意义

目的 研究凋亡抑制蛋白生存素在乳腺癌组织中的表达及其临床病理学意义.方法 采用免疫组织化学(SP法)检测106例乳腺癌组织中的生存素表达,采用TUNEL方法检测乳腺癌细胞的凋亡指数,分析生存素表达与临床病理因素的关系.结合随访资料,应用Kaplan-Meier法分析生存素表达对乳腺癌生存率的影响.结果 生存素表达总阳性率64.2%(68/106例).乳腺癌生存素表达与腋窝淋巴结转移相关,与病人年龄、肿瘤大小、病理类型、激素受体状况、病理分期等因素统计学分析无相关性.生存素表达与细胞的凋亡指数及患者预后负相关.结论 生存素在乳腺癌组织中存在高表达,在正常乳腺组织中不表达;其表达程度与乳腺癌腋窝淋巴结转移、细胞的凋亡率有关.生存素可作为乳腺癌预后判断的辅助指标.