夏枯草提取物诱导B、T淋巴瘤细胞凋亡的实验研究

目的:研究夏枯草提取物对人B淋巴瘤Raji细胞及T淋巴瘤Jurkat细胞增殖的影响及其差异,探讨夏枯草提取物体外抗淋巴瘤的作用机制。方法:不同浓度的夏枯草提取物分别作用于Raji细胞及Jurkat细胞;48 h后分别收集各组细胞,应用MTT法、琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞技术分别检测每组细胞的增殖抑制率、细胞凋亡率及细胞凋亡情况;Western blot检测BCL-2及BAX蛋白表达变化。结果:不同浓度的夏枯草提取物对Raji及Jurkat细胞均有明显的增殖抑制作用(P0.01),且对Raji细胞的抑制作用大于Jurkat,其对Raji细胞IC50(18.01±0.92)μg/mL显著低于Jurkat细胞(25.47±0.96)μg/mL(P0.05);凝胶电泳检测结果表明夏枯草提取物处理Raji及Jurkat细胞后均出现凋亡相关DNA Ladder;随夏枯草提取物浓度的增加,Raji及Jurkat细胞的早期凋亡率均显著增加,与空白对照组比较差异显著(P0.01),浓度为15、20、25μg/mL的夏枯草提取物作用于Raji及Jurkat细胞后的早期凋亡率分别为(9.4±0.25)%、(21.68±0.46)%、(35.03±0.35)%和(4.06±0.14)%、(13.59±0.23)%、(22.92±0.20)%,同浓度条件下,Raji细胞的早期凋亡率显著高于Jurkat细胞(P0.01);随夏枯草提取物浓度增加,实验组细胞中BCL-2蛋白的表达逐渐减弱,BAX蛋白的表达逐渐增强,与空白对照组比较均有显著性差异(P0.05),同浓度条件下,Raji细胞内BCL-2蛋白表达的下降程度、BAX蛋白表达的增加程度显著高于Jur-kat细胞(P0.05)。结论:夏枯草提取物具有抑制淋巴瘤细胞增殖的作用,其机制可能与调节BCL-2和Bax蛋白的表达以诱导细胞凋亡有关,且夏枯草提取物对Raji细胞的抑制作用大于Jurkat细胞。     

夏枯草注射液诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的探讨夏枯草注射液体外抗白血病作用,为临床应用夏枯草注射液治疗白血病提供实验依据。方法采用M TT法测定夏枯草注射液对K 562细胞的增殖抑制率,计算出IC50值;绘制夏枯草注射液(50、100 m g/mL)作用于K 562细胞的生长曲线。用倒置显微镜、姬姆萨染色法、M TT染色法光镜下观察细胞形态,台盼蓝拒染法、流式细胞仪P I染色观察夏枯草注射液对K 562细胞的促凋亡活性,用免疫细胞化学法检测夏枯草注射液对凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响,并用图文分析系统进行定量分析。结果夏枯草注射液对K 562细胞增殖具有明显的抑制作用,且在一定的剂量范围内抑制作用具有明显的剂量依赖性(r=0.985 0),IC50为0.113 m g/mL。夏枯草注射液(50 m g/mL)作用于K 562细胞后,倒置显微镜、姬姆萨染色、M TT染色光镜下观察,均可见典型的凋亡细胞的形态学特征。流式细胞仪检测结果显示,处理组细胞凋亡率[(37.15±1.46)%]明显高于对照组细胞凋亡率[(5.56±0.68)%](P<0.01)。夏枯草注射液(50 m g/mL)作用于K 562细胞48 h,bcl-2蛋白表达增强,而bax表达减弱,与对照组相比差异显著(P<0.01)。结论夏枯草注射液可明显抑制K 562细胞增殖,可望成为新的抗白血病药物,诱导K 562细胞凋亡可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

苦参碱对Raji细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨活化的p38MAPK在苦参碱(Matrine,Mat)诱导人Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞凋亡过程中对Fas/FasL的影响。方法:选用Raji细胞进行体外培养,用苦参碱(终浓度为0.4、0.8、1.6 mg/mL)和在此基础上加入SB203580(p38 MAPK抑制剂)作用48 h后,分别采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率和Western blot检测P-p38MAPK、Fas、FasL蛋白表达的变化。结果:终浓度为0.4、0.8、1.6 mg/mL苦参碱对Raji细胞总凋亡率显著高于SB203580组及对照组(P<0.05或P<0.01);Western blot显示P-p38MAPK、Fas、FasL蛋白表达水平随苦参碱浓度的提高而增加,并且在加入SB203580后降低。P-p38MAPK与Fas、FasL具有明显相关性。结论:苦参碱可能通过活化p38MAPK来上调Fas、FasL的表达,从而促进Raji细胞凋亡。     

番荔枝内酯对人淋巴瘤Raji细胞体外增殖和凋亡的影响

目的研究番荔枝内酯对体外人淋巴瘤Raji细胞体外增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法将体外培养的Raji细胞分为番荔枝内酯组、阿霉素对照组及未干预组,番荔枝内酯药物浓度按6.25、12.5、25、50μg/mL分级作用于细胞。采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化染色检测各组细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（caspase-9）的表达情况。结果番荔枝内酯组细胞增殖率均低于未干预组,25、50μg/mL药物浓度组细胞增殖率低于阿霉素组,增殖率与浓度及培育时间负相关;番荔枝内酯组细胞凋亡率高于未干预组,25、50μg/mL药物浓度组凋亡率高于阿霉素组,和浓度、时间正相关;与未干预组相比,番荔枝内酯组caspase-9表达量逐步增加,与阿霉素组比较,6.25μg/mL组caspase-9表达低于阿霉素组（P〈0.05）,50μg/mL浓度组表达高于阿霉素组（P〈0.05）。结论番荔枝内酯对体外人淋巴瘤Raji细胞的增殖有抑制作用,并可能通过线粒体途径促进其凋亡。     

平滑肌细胞凋亡相关蛋白表达与中药的作用研究进展

细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)是肌体生长发育、细胞分化和病理状态中细胞自主性死亡过程。19 72年病理学家Ｋｅｒｒ[1 ] 等通过对不同类型的细胞死亡进行比较 ,发现了另一种区别于坏死的死亡形式 ,即程序性死亡 (Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ ,ＰＣＤ)又称细胞凋亡。它是细胞在基因调控下发生的主动死亡过程。细胞死亡 (凋亡 )与增殖过程的动态平衡调节着肌体的生长发育及进化 ,维持着细胞群体数量的自身稳定和内环境的相对恒定。同时对维持血管结构的稳定也具有重要意义。1　平滑肌细胞凋亡与动脉粥样硬化血管平滑肌细胞 (Ｖ…     

华蟾素注射液对Burkitt’s淋巴瘤细胞Raji体外增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 探讨华蟾素注射液对Burkitt’s淋巴瘤细胞Raji体外增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法 将Raji细胞分为空白对照组、华蟾素注射液组,空白对照组加入10μL培养基,华蟾素注射液组分别加入培养基稀释液10μL(稀释配比分别为:注射液原浓度的1/10、1/20、1/40、1/50、1/100、1/200、1/400),应用细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、流式细胞术及活细胞成像等方法检测三个时间点(12小时、24小时、48小时),不同浓度华蟾素注射液对Raji细胞生长的影响。结果 CCK-8结果显示,与空白对照组相比,华蟾素注射液组可明显抑制Raji细胞的增殖且呈浓度依赖性;流式检测显示,与空白对照组相比,华蟾素注射液组将Raji细胞阻滞于G0/G1期和S期,阻止细胞进入G2/M期,并促进Raji细胞的凋亡。结论 华蟾素注射液可明显抑制人Burkitt’s淋巴瘤细胞Raji的增殖,阻滞细胞于G1期和S期,并促进Raji细胞的凋亡,发挥其抗肿瘤作用。     

夏枯草提取物体外诱导EL-4细胞凋亡的实验研究

目的:检测夏枯草提取物对EL-4细胞(小鼠T细胞性淋巴瘤白血病细胞株)体外抗肿瘤活性并探讨其诱导EL-4细胞凋亡的特点。方法:应用MTT法检测夏枯草提取物对EL-4细胞的体外抗肿瘤活性,并绘出其生长曲线;倒置显微镜和HE染色观察细胞用药前后形态学变化;琼脂糖凝胶电泳法及TUNEL法检测夏枯草提取物对EL-4细胞的诱导凋亡作用。结果:夏枯草提取物对EL-4细胞有显著的增殖抑制作用,IC50值为23.67μg/mL;琼脂糖凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形凋亡带而空白对照组没有出现;TUNEL结果显示夏枯草组EL-4细胞经染色后胞核中出现棕黄色颗粒或核周出现棕黄色半月形深染区,而空白对照组则仅有个别细胞出现胞核棕黄色深染。结论:夏枯草提取物对EL-4细胞有显著的体外抗肿瘤活性,诱导凋亡可能是其抗肿瘤的主要机制之一。     

推拿、针刺对急性脑梗死大鼠细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响

从细胞凋亡及其相关基因蛋白表达方面探讨推拿、针剌治疗急性脑缺血的作用机理。用线栓法制成SD大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型，在阻塞2小时再灌注24小时后，应用TUNEL法和免疫组织化学法检测针刺、推拿治疗后大鼠脑组织细胞凋亡及Bel-2、Bax蛋白表达。结果：推拿、针刺均可减少缺血所致TUNEL阳性表达，提高梗死周边区皮层Bcl-2／Bax的比值。提示推拿、针刺对急性脑缺血的治疗作用可能与其可抑制细胞凋亡有关，从而保护脑神经细胞。     

夏枯草总黄酮通过抑制氧化磷酸化和糖酵解诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡

目的:研究夏枯草总黄酮对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,并从氧化磷酸化、糖酵解方面探讨其机制。方法:RTCA分析系统观察夏枯草总黄酮对SMMC-7721细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Elisa法检测细胞上清液中ROS,细胞裂解液中Bax、Bcl-2、Caspase-3和Caspase-9的含量变化;Seahorse XF96细胞能量代谢仪观察夏枯草总黄酮对细胞能量代谢表型的影响。结果:夏枯草总黄酮0.2、0.4、0.8μg/ml对SMMC7721细胞增殖具显著抑制作用,夏枯草总黄酮0.4、0.8μg/ml促进细胞凋亡、胞内ROS水平升高、Bax、Caspase-3和Caspase-9含量升高,Bcl-2含量降低;对细胞基础耗氧量,最大耗氧量,ATP生产能力和呼吸储备能力显著降低;抑制基础糖酵解、糖酵解最大水平、糖酵解储备功能(P<0.05或P<0.01)。结论:夏枯草总黄酮可升高肝癌细胞ROS水平,激活Bcl-2/Bax蛋白,诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能与抑制肝癌细胞有氧糖酵解和氧化磷酸化水平相关。     

清热祛湿益气方对肝损伤细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的 观察清热祛湿益气方对刀豆蛋白A(ConA)诱导的急性肝损伤模型小鼠肝细胞凋亡相关蛋白表达的影响.方法 Balb/c雄性小鼠50只,随机分为空白组,模型组,清热祛湿益气方低、中、高剂量组,每组10只,连续灌胃7天.采用Con A诱导复制小鼠急性肝损伤病理模型,观察不同剂量清热祛湿益气方(7.5g/kg、10.0g/kg、12.5g/kg)对肝细胞Bax、Bcl一2以及Caspase-3 mRNA表达的影响.结果 与模型组比较,清热祛湿益气方不同剂量可下调模型小鼠肝组织Bax、Caspase-3 mRNA的表达,并可上调Bcl-2的表达(P＜0.05),随剂量增大,Bcl-2阳性率分别为17.56%、18.28%、26.36%.结论 清热祛湿益气方可抑制肝细胞凋亡,对Con A诱导的急性肝损伤具有治疗作用.     

夏枯草多糖抗单纯性疱疹病毒及相关免疫活性初步研究

目的探讨夏枯草多糖抗单纯性疱疹病毒(HSV)及相关的免疫作用。方法通过96孔板病毒中和实验,观察细胞致病作用(CPE),体外研究夏枯草多糖的抗病毒作用,同时通过淋巴细胞转化增殖及细胞因子(IFN-γ)诱生实验研究夏枯草多糖的免疫活性。结果夏枯草多糖各部位(20mg/ml)分别在24,48h内可减轻CPE,直接杀灭病毒作用较弱;免疫学试验表明体外均能明显促进淋巴细胞转化增殖,且有明显的剂量依赖性,并均能明显诱生IFN-γ。结论夏枯草多糖用于单纯性疱疹的治疗作用,可能不是由对病毒的直接作用引起的,而是促进淋巴细胞转化增殖和诱生干扰素等免疫调节作用的结果。     

夏枯草膏治疗原发性开角型青光眼的临床观察

目的观察夏枯草膏治疗原发性开角型青光眼的临床疗效。方法选择符合纳入标准的原发性开角型青光眼患者共30例(60只眼),比较患者服用夏枯草膏前后的视力、眼压、视野及临床症状。结果服用夏枯草膏前后患者的视力差异没有显著性(P>0.05);眼压及视野平均光敏感度(MS)和平均缺损(MD)的改变差异有显著性(P<0.05);多数患者的临床症状有明显改善。结论夏枯草膏对于治疗原发性开角型青光眼有一定的临床疗效,作用机理有待进一步研究。     

正交实验优选夏枯草提取工艺的研究

目的优选夏枯草的最佳提取条件。方法以齐墩果酸含量为指标,采用L3(34)正交实验,对影响超声提取的因素(乙醇浓度、乙醇用量、提取时间)进行优选。结果最佳提取条件为乙醇浓度90%,用量20倍,时间40 min。结论优选夏枯草提取工艺稳定、可行。     

双波长薄层扫描法测定夏枯草中熊果酸的含量

目的测定夏枯草中熊果酸的含量。方法薄层扫描法。结果熊果酸在0.314~1.570μg范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.9992),平均回收率为99.3%,精密度实验RSD=1.86%。结论该方法可用于夏枯草的质量控制。     

HPLC-ESI-MS／MS鉴定夏枯草的主要化学成分

目的通过高效液相色谱电喷雾串联质谱（HPLC-ESI-MS／MS）手段鉴定夏枯草的主要化学成分。方法夏枯草采用水加热提取,提取液采用HPLC-ESI-MS／MS鉴定其所含的主要化学成分。结果通过保留时间、一级质谱和二级质谱信息从夏枯草水提液中鉴定或推测了8个主要化学成分的结构,其中5个有机酸类化合物通过对照品得到了鉴定。结论通过HPLC-ES〉MS／MS分析研究,夏枯草水提液的主要活性成分为有机酸类化合物。     

夏枯草多糖及凝胶抗单纯疱疹病毒的药效学研究

目的：探究夏枯草多糖及凝胶在体外和体内条件下的抗单纯疱疹病毒作用,为抗疱疹病毒新药研究提供科学依据。方法：本研究采用空斑减数法检测夏枯草多糖的体外抗单纯疱疹病毒（Herpes Simplex Virus,HSV）活性;同时,建立HSV-1（皮肤）和HSV-2（外阴部）病毒感染豚鼠模型,以病灶病变情况、丘疱疹数、典型病变评分结果以及病灶组织中HSV-1和HSV-2病毒的DNA拷贝数等为指标,对夏枯草多糖凝胶的体内抗HSV活性进行评价。结果：夏枯草多糖在体外实验中能够抑制HSV-1和HSV-2的活性;夏枯草多糖凝胶能够削弱HSV-1和HSV-2病毒感染豚鼠的病灶病变,发挥抗单纯疱疹病毒活性。结论：夏枯草多糖及凝胶在体外和体内实验中均具有抗单纯疱疹病毒的活性,具有开发成为抗单纯疱疹病毒药物的潜在价值。     

不同产地夏枯草中抗非小细胞肺癌成分科罗索酸的差异比较

目的:比较不同产地夏枯草中抗非小细胞肺癌活性成分科罗索酸的含量差异。方法:通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)和吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB),评价科罗索酸对非小细胞肺癌细胞的增殖抑制以及凋亡作用;建立高效液相色谱法,比较14个产地夏枯草中科罗索酸的含量差异。结果:科罗索酸抑制SPC-A-1人非小细胞肺癌的生长增殖(IC50=1.05×10-6mol/L),并且诱导SPC-A-1细胞凋亡。14个产地夏枯草中科罗索酸的含量差异较大,山西产地的含量最高,河南-2产地的含量最低。结论:科罗索酸为夏枯草中的抗非小细胞肺癌的活性成分,不同产地夏枯草的科罗索酸含量差异较大。     

夏枯草肺癌化学预防物质基础研究思路与方法

夏枯草对肺癌具有确切疗效,但其肺癌化学预防物质基础尚未明确.结合现代先进的分离、分析以及药效筛选技术,以中药"三个层次多维结构"组分结构理论,科学地揭示夏枯草肺癌化学预防物质基础,通过总结夏枯草化学成分和与肿瘤相关的研究成果,分析肺癌化学预防研究思路方法,为中药的物质基础研究和中药新药研发提供一定的参考.