湖北省首次分离出肠出血性大肠埃希菌O157∶H7

目的为了解肠出血性大肠埃希菌O157∶H7(EHEC O157∶H7)在我省的动物宿主种类和菌型特征,制定相应流行病防治对策.方法采用传统方法,在6～10月份肠道传染病高发季节,对武汉市3大养殖场、屠宰场的肉猪、奶牛及武汉7大城区的农贸商场的水产品进行调查采样,共采集811份样品,进行EHEC O157∶H7检测.结果341份猪粪样品中检出1株EHEC O157∶H7,阳性率为0.29%;255份奶牛粪便样品中检出7株EHEC O157∶H7,阳性率为2.75%;其他类标本中未检出.分离的这8株阳性菌株与传统的EHEC O157∶H7存在许多不同之处,它们均发酵山梨醇,大部分菌株不分解棉子糖,也存在不分解卫茅醇的菌株,而β-葡萄糖醛酸酶试验均为阳性.在致病因子上,检测现有的几种毒力基因均为阴性.结论在我省首次检出8株EHEC O157∶H7,说明其普遍存在于动物体内,对环境、食品构成较大威胁.     

武汉市2002～2003年大肠埃希菌O157:H7监测情况

目的了解武汉市大肠埃希菌O157：H7在腹泻病人中的检出情况和宿主动物带菌及毒力基因情况。方法根据广覆盖的原则，选择8家大型综合医院作为O157：H7监测点，监测腹泻病人的带菌情况；其中2家医院的肾病内科监测可疑肾衰病人，选择3家养殖场，采集猪、奶牛、鸡的粪便标本，采集生猪肉、奶制品等，用mEC培养基进行病原菌分离培养，用“金卡”作初筛，用聚合酶链反应(PCR)进行毒力基因分析。结果8家监测点共监测腹泻病人858例，肾病内科肾衰病人6例，未检出大肠埃希菌O157：H7或O157：H^-；3个宿主动物监测点共采集奶牛、猪、鸡的粪便标本318份，检出大肠埃希菌O157：H^- 8株，带菌率为252％，其中猪的带菌率最高为5．88％，奶牛为1．96％，鸡未检出；食品类生猪肉中检出1株O157：H^-，检出率为1．00％；对9株菌株进行O抗原PCR和H抗原PCR鉴定，O抗原均为阳性，H抗原为阴性；单克隆血清抗体6株阳性；并进行毒力基因鉴定，均为阴性。结论武汉市到目前为止尚未发现O157：H7病人，猪和奶牛是主要宿主，其带菌率没有明显差异，生猪带菌率有明显的上升，且从生猪肉中检出1株O157：H^-，尚未检出带病毒基因的菌株；而武汉市居民以食用猪肉为主，值得密切关注。提示加强宿主动物和食品大肠埃希菌O157：H7监测，特别是生猪的监测，结合腹泻病人的监测，对控制大肠埃希菌O157：H7的流行有重要意义。     

2005～2006年秦皇岛市食源性疾病病原菌污染状况调查

目的：了解秦皇岛市食品中沙门菌、EHEC O157：H7、单增李斯特菌、副溶血性弧菌、空场弯曲菌、金黄色葡萄球菌的污染状况,确定可能污染上述菌的高危食品,为食源性疾病的预防提供科学依据。方法：依据国标方法,采用进口显色培养基和生化鉴定试纸,对样品分别进行沙门菌、EHEC O157：H7、单增李斯特菌、副溶血性弧菌、空场弯曲菌、金黄色葡萄球菌的分离、生化及血清学鉴定。结果：检测生肉、动物性水产品、散装熟肉制品、生食蔬菜、速冻米面食品、非发酵豆制品6类共240份样品,共检出病原菌37株,总检出率15.8%,副溶血性弧菌检出12株,检出率最高,为30%,沙门菌检出11株,EHEC O157：H7检出8株,单增李斯特菌检出6株,6类食品中动物性水产品病原菌阳性率最高,为30%,其次为生肉类,病原菌阳性率为28.8%。结论：秦皇岛市居民消费食品中存在食源性疾病病原菌污染,其中水产品和生肉是主要污染食品品种,副溶血性弧菌和沙门菌是污染食品的主要病原菌。     

龙岩市1999～2005年O157大肠杆菌监测研究

[目的]为了解龙岩市O157大肠杆菌人的感染、食品污染以及动物和媒介昆虫带菌情况.[方法]1999～2005年采集腹泻病人粪便、动物粪便以及各类食品、苍蝇、养殖场污水等标本,mEC增菌后用SMAC进行分离,纯化菌株经生化鉴定、血清分型、毒力及特征基因检测等.[结果]共检测2212份标本,检出O157大肠杆菌29株,阳性率为1.31%.其中猪粪为3.42%,牛粪为2.62%,牛肉为2.33%,鸡肉为2.06%,养殖场污水为2.27%.其余标本均未检出目的菌.O157:H718株,O157:NM 6株,O157:H?5株.对12株O157:H7,进行了rfbO157和fliCH7基因的测定,结果rfbO157均为阳性,而fliCH7均为阴性.对18株(O157:H7 14株、O157:NM 3株、O157:H?1株),进行了SIT2、SLT1、eaeA、hly4种毒力基因检测,结果仅2株O157:H7 eaeA hly阳性,1株O157:H7 hly阳性,其余菌株均为阴性.检出菌株对环丙沙星、氟嗪酸、丁胺卡那、庆大霉素敏感.检出ESBLs 2株.[结论]我市畜、禽中存在O157大肠杆菌,未检出含有SLT2、SLT1毒素的菌株,未发现O157大肠杆菌病例和食物中毒患者,应加强宿主动物O157大肠杆菌监测.     

石家庄市环境样品中致泻性大肠埃希氏菌的分离与鉴定

[目的]调查自然环境中致泻性大肠埃希氏菌的分布、致病性与药物敏感性，为预防策略选择有效治疗药物提供科学依据。[方法]1999年1月至2001年4月检测石家庄市不同环境样品，对分离的致泻性大肠埃希氏菌株进行动物实验和药物敏感性测定。[结果]检测各类样本886份，检出103株致泻性大肠埃希氏菌（检出率为11.63%），其中EPEC71株11个血清型，EIEC26株6个血清型，ETEC5株3个血清型，EHEC1株为O157：H7血清型；从鸡肠腔内容物、带鱼、草鱼体中分离出的O25：K19血清型ETEC LT阳性，从蟹、鱿鱼体中检出的O8：K40、O78：K80血清型ETEC既产生LT又产生ST。26株EIEC均有侵袭力，O157：H7致小白鼠发病死亡。全部菌株对新霉素、亚胺硫霉素、头孢哌酮敏感。[结论]石家庄市各种环境样品中均可检出泻性大肠埃希氏菌，应采取措施，防止污染环境与食品，预防食源性疾病。     

蚌埠市2000～2004年肠出血性大肠杆菌O157∶H7监测研究

目的：了解蚌埠市腹泻病人、动物宿主携带肠出血性大肠杆菌O157 ：H7（EHEC O157 ：H7）情况，为防治工作提供决策依据。方法：采集我市市区和怀远县部分乡镇的现症腹泻病人和动物宿主（牛、羊、猪等）的粪便标本，用免疫磁珠法和血清学等方法检测EHEC O157 ：H7。结果：5年间共采集各种标本2502份，经检测检出9株EHEC O157 ：H7，检出率为0.36％。结论：蚌埠市部分腹泻病人和动物存在着EHEC O157 ：H7感染。     

蚌埠地区2000～2010年肠出血性大肠杆菌O157:H7感染状况的研究

目的了解2000-2010年沿淮地区肠出血性大肠杆菌O157:H7感染情况,为防控措施制订提供科学依据。方法采集蚌埠市市区和怀远县部分乡镇的现症腹泻病人和动物宿主(牛、羊、猪、鸡等)的粪便标本,用免疫磁珠富集法进行检测,血清凝集和生化试验对菌株进行鉴定。结果 2000～2010年共采集各类标本5 374份,经检测EHEC O157:H7阳性标本10份,阳性率0.19%,其中鸭、兔中检出阳性标本较少见。结论本次研究表明了EHEC O157:H7感染的普遍性,但阳性率较低,在公共卫生资源有限情况下,EHEC O157:H7防控目前不需成为沿淮地区传染病防控方面的主要公共卫生问题。     

2006年杭州市江干区食源性致病菌污染状况分析

目的：了解江干区食品中食源性致病菌污染状况，为食源性疾病的预防提供科学依据。方法：参考国标方法，采用进口显色培养基，对4类食品进行沙门菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、EHEC O157：H7和空肠弯曲菌的分离、生化及血清型鉴定。结果：109份样品共检出各类致病菌32株，总检出率为29.4%。其中副溶血性弧菌检出7株，检出率为38.9%；金黄色葡萄球菌检出8株，检出率为15.1%；单增李斯特菌检出15株，检出率为13.8%；沙门菌检出2株，检出率为1.8%；未检出EHEC O157：H7和空肠弯曲菌。结论：江干区食品中存在食源性致病菌的污染，其中生肉类、生食果蔬类和水产品受到的污染严重，副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌是污染食品的主要致病菌。     

PCR方法检测EHEC O157：H7的rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及其变种基因

目的：应用当前国际上常用的rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及其变种5对引物，对45株疑似肠出血性大肠埃希菌O157：H7（EHEC O157：H7）检测鉴定，全面了解此类菌的致病力情况。方法：分纯并富集被鉴定菌株，首先以单克隆诊断血清学凝集，阳性者再经100℃水煮制成粗模板，应用PCR检测各菌株是否具有rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及stx2及其变种5种基因，扩增结果经EB染色后在凝胶成像仪下观察特异性条带并拍照。结果：45株被检测菌经PCR扩增检测，5种基因全部阳性的有10株，4种基因出现阳性的只有1株，3种基因阳性的有6株，2种基因阳性的有17株，1种基因阳性的有10株，1株菌的5种基因检测均为阴性。45株菌中和。，阳性的有44株fliCH7基因阳性的菌株有30株，hlyA阳性的菌株只有10株，eaeA阳性基因的菌株有21株，stx2及其变种阳性的也只有11株。结论：这次45株菌中有5株具有全部的5种基因，44株为EHEC O157，其中30株为EHEC O157：H7，这次选择的5种基因不仅能给被检测菌株定性，而且能较全面地反应其毒力强度，适合于有条件的基层实验室开展。     

郑州市肠出血性大肠杆菌O157:H7感染监测

[目的]2005年监测郑州市肠出血性大肠杆菌O157：H7感染状况及病原分布特点,为各级卫生行政部门制订新发传染病防治措施,提供基础疫情资料。[方法]监测标本用免疫磁珠集菌方法（IMS）做病原学分离培养、毒力基因检测用多重PCR方法、药敏试验用（K-B）常规方法。[结果]腹泻病人标本185份,大肠杆菌O157：H7检出阳性4份。外环境标本588份,检出大肠杆菌O157：H7阳性20份。用多重PCR方法做毒力基因检测,有6份家畜家禽阳性标本中检出O157：H7毒力基因（Stx2、eaeA、HIyA）为阳性。药敏试验24株肠出血性大肠杆菌O157：H7对8种抗菌药物敏感率为95%以上,对新生霉素100%耐药,其余7种对抗菌药物敏感程度各有差异。[结论]郑州市有散在的大肠杆菌O157：H7感染的病人及动物疫点。奶牛和波尔山羊是大肠杆菌O157：H7动物宿主。     

大肠埃希菌O157:H7分离鉴定过程中赫尔曼埃希菌的鉴别

目的：鉴别大肠埃希菌O157：H7和赫尔曼埃希菌。方法：观察菌株在山梨醇麦康凯，营养琼脂及Chromagar O157培养基上菌落形态。生化试验检测菌株的生化特性，血清凝集试验检测菌株的O157和H7抗原，聚合酶链反应法检测O157和H7特异性基因。结果：在营养琼脂培养基上，5株赫尔曼埃希菌均产黄色色素，2株O157：H7菌不产色素；在Chromagar O157培养基上，2株O157：H7菌株呈紫红色，2株赫尔曼埃希菌株呈蓝色，其余3株赫尔曼埃希菌株呈黄绿色。O157：H7菌株KCN试验均为阴性，而赫尔曼埃希菌阳性。O157和H7抗血清坡片凝集试验，7析均为强凝集。O157：H7菌株与O157单克隆抗血清玻片凝集试验均为强凝集，而赫尔曼埃希菌均不凝集。O157：H7菌株O157和H7特异性基因均为阳性，赫尔曼埃希菌均为阴性。结论：赫尔曼埃希菌与O157多克隆抗血清有交叉反应，但单克隆抗血清能区分O157：H7和赫尔曼埃希菌。KCN试验和特异性基因检测亦能鉴别这两种菌。在营养琼脂和Chromagar O157培养基上的菌落形成也有助于两菌的区分。     

衢州市2000-2009年肠出血性大肠埃希菌O157∶H7监测

目的了解浙江省衢州市肠出血性大肠埃希菌O157∶H7人的感染、食品污染以及动物和媒介昆虫带菌情况。方法在流行季节采集腹泻患者、动物粪便以及各类食品、苍蝇等样本,MEC肉汤增菌后,用特异性免疫磁珠集菌,以科玛嘉显色平板分离,纯化的菌株进行生化鉴定、血清分型及毒力基因检测。结果 2000-2009年,共检测样本12 292份,检出EHEC O157∶H7 19株,总检出率为0.15%。其中4种宿主动物粪便样本中检出18株,检出率分别为羊2.14%、牛1.29%、猪0.45%、鸭0.19%;食品中从生猪肉中检出1株,检出率0.17%;腹泻患者和苍蝇样本中均未检出。经毒力基因检测,其中16株stx2+hly+eaeA阳性,1株hly+eaeA阳性,其余2株不带毒力基因,带毒率89.47%。结论浙江省衢州市部分动物中产毒的EHEC O157∶H7带菌率较高,表明该地区存在暴发或流行的潜在危险,应加强综合监测。     

北京市食品中五种食源性致病菌污染状况调查研究

[目的]了解北京市食品中沙门菌、单增李斯特菌、EHEC O157：H7、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌的分布状况、动物储存宿主的种类、菌株生物学特点，初步确定可能污染上述致病菌的高危食品，为食物中毒监测提供科学依据。[方法]依据国标方法，采用进口显色培养基，对样本分别进行沙门菌、单增李斯特菌、EHEC O157：H7、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌分离、生化及血清学鉴定。[结果]检测生肉(牛、猪、鸡)、熟肉、生牛奶、冰激凌、酸奶各生食水产品六类样品共927件，共检出致病菌197株，总检出率21．3％；其中分离沙门菌33株，检出率3．2％；单增李斯特菌99株，检出率9．6％；金黄色葡萄球菌65株，检出率6．3％。EHEC O157：H7和副溶血性弧菌均未检出。6类食品中致病菌阳性率最高的为生肉(37．7％)，其次为生奶(24．7％)，酸奶中未检出致病菌。[结论]北京市居民主要消费食品存在食源性致病菌污染，其中生肉和生奶是主要污染食品品种，单增李斯特菌在肉与肉制品中污染率较高(17．1％)，生肉(鸡肉)中沙门菌带菌率较高(19．4％)，主要血清型为肠炎沙门菌，生牛奶中金黄色葡萄球菌带菌率高(24．7％)，生食水产品未检出副溶血性弧菌，但存在金黄色葡萄球菌的间接污染，酸奶中未检出致病菌。     

2005年河南省食源性致病菌和耐药性监测

目的：了解河南省食品中沙门菌、单增李斯特菌、EHEC O157：H7、空肠弯曲菌和副溶血性弧菌的污染状况，确定可能污染上述致病菌的高危食品，为食源性疾病监测提供科学依据。方法：依据国标方法，采用进口显色培养基，对样本分别进行沙门菌、单增李斯特菌、EHEC O157：H7、空肠弯曲菌和副溶血性弧菌的分离、生化及血清学鉴定。结果：检测生肉（鸡肉、羊肉、牛肉、猪肉）、散装熟肉制品、生食蔬菜、淡水产品四类样品共540件，共检出致病菌170株，总检出率19．3％。其中副溶血性弧菌检出80株，检出率最高为41．4％；其次为沙门菌检出57株，检出率9．7％；单增李斯特菌检出19株，检出率2．7％；大肠杆菌O157：H7检出13株，检出率1．9％；空肠弯曲菌检出1株，检出率0．6％。4类食品中致病菌阳性率最高的为淡水产品（42．9％），其次为生肉（18．6％）。生食蔬菜和散装熟肉制品未检出食源性致病菌。所检沙门菌对10种抗生素均耐药，耐药率在3．6％～60．7％，对9种抗生素同时耐药的有16株，占28．1％；所检副溶血性弧菌小鼠毒力阳性的有54株，占92．9％，对链霉素耐药率达88．8％，有3株菌表现为多重耐药。结论：河南省居民主要消费食品存在食源性致病菌污染，其中淡水产品和生肉是主要污染食品品种；所检出的沙门菌和副溶血性弧菌对多种抗生素耐药，部分表现出多重耐药，建议政府应加大对动物饲料添加剂的管理，以防止耐药菌株的传播和扩散；所检副溶血性弧菌大多具有较强的毒力。     

芜湖地区动物宿主携带O157：H7大肠杆菌的调查

目的 了解O157：H7大肠杆菌在芜湖地区动物宿主中的存在现状及其生物学特性。方法 2000年6－10月选择芜湖县境内畜禽粪便标本及养殖场饲料和水样标本894份,以免疫磁珠法和血清学方法检测O157：H7大肠杆菌。结果 894份标本中检出3株O157：H7大肠杆菌,检出率为0．34％。检出菌株产毒情况：羊标本检出菌株产志贺毒素和溶血素,奶牛标本检出菌株产溶血素,猪标本检出菌株不产毒。结论 芜湖地区存在O157：H7大肠杆菌,应引起足够的重视。     

2008-2012年南宁市肠出血性大肠杆菌O157:H7监测结果

目的 了解南宁市肠出血性大肠杆菌0157:H7在人群及外环境中的感染情况,为防制工作提供依据.方法 2008-2012年采集南宁市现症腹泻患者、动物宿主粪便标本、市场生熟食品和苍蝇标本,经mEC增菌后用SMAC分离,纯化菌株经生化鉴定、血清分型等方法进行检测.结果 在2 139份腹泻患者标本中未检出阳性标本;在3 088份外环境标本中检出阳性标本20份.南宁市肠出血性大肠杆菌O157:H7感染阳性率呈现逐年下降趋势;不同动物粪便肠出血性大肠杆菌O157:H7阳性率不同,以牛粪检出阳性率最高.结论 南宁市肠出血性大肠杆菌O157:H7仍有散在的动物感染,应加强对动物粪便的管理及肠出血性大肠杆菌O157:H7的监测工作.     

蚌埠市2000～2004年肠出血性大肠杆菌 O157:H7监测研究

目的了解蚌埠市腹泻病人、动物宿主携带肠出血性大肠杆菌O157H7(EHEC O157H7)情况,为防治工作提供决策依据.方法采集我市市区和怀远县部分乡镇的现症腹泻病人和动物宿主(牛、羊、猪等)的粪便标本,用免疫磁珠法和血清学等方法检测EHEC O157H7.结果5年间共采集各种标本2 502份,经检测检出9株EHEC O157H7,检出率为0.36%.结论蚌埠市部分腹泻病人和动物存在着EHEC O157H7感染.     

安徽省肠出血性大肠杆菌O157:H7宿主动物监测研究

目的了解安徽省肠出血性大肠杆菌O157:H7在宿主动物中的分布及其毒力基因携带状况,为控制O157:H7感染提供依据。方法用免疫磁珠分离法(IMS)对安徽省3个监测点的宿主动物粪便标本进行0157:H7的分离培养,并用多重引物PCR方法(MPCR)检测分离菌株的毒力基因。结果采集宿主动物粪便标本5 560份,检出O157:H737株,阳性率为0.7%,其中牛的阳性率最高,为1.1%。106株O157:H7菌株经过毒力基因测定,65.1%的菌株携带SLT、hly基因。O157:H7感染性腹泻的发病与家禽家畜的带菌正相关(R=0.87,P=0.01)。结论安徽省宿主动物中能检出肠出血性大肠杆菌O157:H7,且菌株携带毒力基因。提示要加强对宿主动物进行O157:H7的流行病学调查和监测工作。     

PCR方法检测EHEC O157∶ H7的rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及其变种基因

目的:应用当前国际上常用的rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及其变种5对引物,对45株疑似肠出血性大肠埃希菌O157∶ H7(EHEC O157∶ H7)检测鉴定,全面了解此类菌的致病力情况.方法:分纯并富集被鉴定菌株,首先以单克隆诊断血清学凝集,阳性者再经 100℃水煮制成粗模板,应用PCR检测各菌株是否具有rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA及stx2及其变种5种基因,扩增结果经EB染色后在凝胶成像仪下观察特异性条带并拍照.结果:45株被检测菌经PCR扩增检测,5种基因全部阳性的有10株,4种基因出现阳性的只有1株,3种基因阳性的有6株,2种基因阳性的有17株,1种基因阳性的有10株,1株菌的5种基因检测均为阴性.45株菌中rfbO157阳性的有44株,fliCH7基因阳性的菌株有30株,hlyA阳性的菌株只有10株,eaeA阳性基因的菌株有21株,stx2及其变种阳性的也只有11株.结论:这次45株菌中有5株具有全部的5种基因,44株为EHEC O157,其中30株为EHEC O157∶ H7,这次选择的5种基因不仅能给被检测菌株定性,而且能较全面地反应其毒力强度,适合于有条件的基层实验室开展.     

生牛乳中致病菌污染状况及金黄色葡萄球菌耐药性研究

目的：了解生牛乳中沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、EHEC O157：H7及金黄色葡萄球菌污染状况及金黄色葡萄球菌的耐药性。方法：对采集的生牛乳样品进行致病菌检验并对检出的金黄色葡萄球菌作药物敏感试验。结果：171份牛乳样品共检出金黄色葡萄球菌26株,沙门菌4株,未检出单核细胞增生李斯特菌和EHEC O157：H7,总检出率为17．54％。金黄色葡萄球菌对10种抗生素出现不同程度的耐药,以青霉素为最,达88．46％。结论：生牛乳中金黄色葡萄球菌污染较重,其次为沙门菌。金黄色葡萄球菌对多种抗生素耐药。