非小细胞肺癌组织中外泌体差异蛋白表达及临床意义

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清外泌体差异蛋白表达在临床诊断中的意义。 方法选择2017年1月至2018年1月新疆医科大学附属肿瘤医院肺内一科收治的NSCLC患者85例为NSCLC组,同期医院健康体检志愿者50例为对照组,利用蛋白组学技术筛选出两组患者血清外泌体中表达差异性最大的蛋白,采用Western blot与酶联免疫吸附法检测其在NSCLC患者中的表达水平,分析在诊断NSCLC中的应用价值。 结果NSCLC组患者血清外泌体总蛋白质平均浓度显著高于对照组(t＝18.723,P＝0.000);两组血清外泌体中TMEM88蛋白表达量差异显著,Gel-Pro软件定量分析血清外泌体TMEM88蛋白条带积分光密度值(IOD),提示NSCLC患者血清外泌体中TMEM88蛋白质表达水平显著高于对照组(t＝13.316,P＝0.000); NSCLC患者在肿瘤Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移及有血管癌栓中血清外泌体来源TMEM88蛋白表达升高(t＝7.376、3.958、4.304,P＝0.000);血清来源外泌体TMEM88蛋白表达超过589.41时,诊断NSCLC的AUC＝0.787,灵敏度及特异度分别为74.1%和87.1%,约登指数为0.612。 结论NSCLC患者血清外泌体来源TMEM88蛋白表达量异常升高,表达量与患者肿瘤分期、淋巴转移、脉管癌栓及肿瘤负荷量有关,在NSCLC诊断中有临床意义。     

血清外泌体miR-338在老年食管癌中表达及诊断价值

目的探讨血清外泌体miR-338在老年食管癌中的表达水平及诊断价值。方法选取老年食管癌患者32例作为观察组,另选取同期治疗的老年食管良性病变患者35例为对照组。提取并鉴定血清外泌体,进一步提取血清外泌体中miR-338并采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)进行测定,比较两组miR-338水平。分析血清外泌体miR-338表达水平与临床病理参数关系的关系。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-338对老年食管癌的诊断价值。结果所提取样品具备外泌体特征。观察组血清外泌体miR-338表达水平显著低于对照组(P<0.05)。血清外泌体miR-338低表达组中年龄≥68岁患者比例、有淋巴结转移及临床Ⅲ～Ⅳ分期患者比例明显高于高表达组(P<0.05)。血清外泌体miR-338对老年食管癌诊断的曲线下面积(AUC)为0.918,灵敏度和特异度分别为84.5%、86.3%。结论老年食管癌患者血清外泌体miR-338低表达,有望成为临床诊断老年食管癌新型生物标志物。     

结直肠癌患者血清外泌体lnc-KIAA1586-2的表达及其临床意义

目的 探讨血清外泌体来源lnc-KIAA1586-2在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)患者中的表达水平及其临床意义。方法收集2019年1月至2020年12月临床明确诊断的110例CRC患者及同期100名健康体检者血清标本,同时收集所有患者的临床资料。qRT-PCR法检测血清外泌体中lnc-KIAA1586-2的表达水平,电化学发光法检测血清CEA与CA19-9的表达水平。采用ROC曲线评价不同指标的诊断效能,并分析其与患者临床病理特征的关系。采用Cox比例风险模型进行多变量回归分析。结果 CRC患者血清外泌体中lnc-KIAA1586-2的相对表达水平(2.96±0.13)显著高于健康对照组(1.56±0.11)(t=9.53,P<0.001),患者术后血清外泌体lnc-KIAA1586-2相对表达水平显著下降。ROC曲线分析结果表明,血清外泌体lnc-KIAA1586-2诊断CRC的AUC为0.832,显著优于传统肿瘤标志物CEA、CA19-9的诊断效能。单因素分析发现血清外泌体lnc-KIAA1586-2相对表达量与肿瘤长径(χ²...     

血清外泌体来源的microRNA-221-3p在肝细胞癌中的表达及意义

目的探讨肝细胞癌(HCC)患者血清外泌体来源microRNA(miRNA)-221-3p的表达水平及分析其临床意义。方法选取2010年2月-2014年12月南京大学医学院附属南京鼓楼医院经手术治疗后诊断为HCC的66例患者作为HCC组,选取25例同期在本院接受健康检查的体检者作为对照组。通过外泌体提取试剂盒分离HCC组和对照组血清中的外泌体,采用蛋白免疫印迹检测外泌体标记蛋白分子,透射电镜鉴定血清外泌体形态;实时荧光定量PCR方法检测两组血清外泌体来源的miRNA-221-3p表达水平。计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验,计数资料两组间比较采用χ~2检验。采用Kaplan-Meier方法及logrank检验分析血清外泌体来源的miRNA-221-3p表达与预后关系,采用Cox比例风险回归模型分析预后影响因素。结果血清来源的外泌体是直径为40～100 nm囊泡体,表达HSP70、Alix及CD63。HCC组血清来源外泌体中miRNA-221-3p较对照组表达水平升高,差异具有统计学意义(U=354.00,P0.001)。HCC患者血清外泌体miRNA-221-3p高表达与肿瘤大小(χ~2=6.016,P=0.014)、包膜侵犯(χ~2=7.580,P=0.006)和TNM分期(χ~2=6.340,P=0.012)有关。此外,血清外泌体来源的miRNA-221-3p表达水平较高的HCC患者总体生存率较低,差异具有统计学意义(χ~2=17.105,P0.001)。多因素分析结果表明血清外泌体来源的miRNA-221-3p表达水平(风险比=2.434,95%可信区间:1.178～5.027,P=0.016)及肿瘤分期(风险比=2.653,95%可信区间:1.222～5.760,P=0.014)是影响HCC患者预后的独立危险因素。结论 HCC患者血清外泌体来源的miRNA-221-3p表达水平明显升高,对HCC诊断及预后判断具有参考价值。     

冠心病患者血清外泌体微小核糖核酸-141-3p对内皮细胞损伤的影响研究

目的:检测冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清外泌体中微小核糖核酸-141-3p(miR-141-3p)的表达变化,并分析miR-141-3p对人血管内皮细胞损伤的影响.方法:收集冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清(n=8)和健康人对照(n=8),用外泌体提取试剂盒提取血清外泌体RNA,使用qRT-PCR的方法检测血清外泌体...     

exoRBase数据库外泌体基因在冠心病中的差异表达及意义

目的通过对exoRBase外泌体数据库中筛选出的冠心病(CHD)患者外周血外泌体差异表达基因的分析和CeRNA网络的构建,挖掘导致冠心病发病和疾病进展中的关键基因和调控机制,通过对差异表达mRNA关键基因的GO和KEGG富集分析,研究冠心病差异表达mRNA参与的分子功能和生物学过程。方法应用R语言筛选出在exoRBase外泌体数据库冠心病患者外周血中差异表达的外泌体基因,通过在线数据库和Cytoscape软件构建CeRNA网络,对关键基因进行可视化分析,并对差异表达的mRNA关键基因进行GO和KEGG富集分析。结果筛选出冠心病患者外周血中差异表达的外泌体mRNA 312个,lncRNA 43个,circRNA 85个;通过构建CeRNA网络,发现mRNA、lncRNA和circRNA竞争性地结合miRNA,且与miRNA相结合的lncRNA表达均显著上调,而mRNA和circRNA的表达则大多数呈现显著下调的趋势;差异表达mRNA关键基因的GO和KEGG富集分析结果显示,这些关键基因主要与"磷酸酶激活活动"和"磷酸酶调节活动"功能相关。结论由exoRBase数据库筛选出的冠心病患者外周...     

胃癌患者癌组织和血清外泌体中LncRNA CCAT1、miR-140-3p表达及其临床意义

目的 观察胃癌患者癌组织和血清外泌体中LncRNA结肠癌相关转录因子1(CCAT1)、微小核糖核酸-140-3p(miR-140-3p)表达情况并分析其临床意义。方法 选取93例行胃癌根治术的胃癌患者为胃癌组，47例胃部良性病变患者为良性病变组，47例健康体检者为健康对照组。采集所有研究对象静脉血，提取血清外泌体，于胃癌患者行胃癌根治术过程中留取患者肿瘤组织样本及癌旁组织样本，采用RT-q PCR法检测血清外泌体及胃癌、癌旁组织中的LncRNA CCAT1、miR-140-3p。对胃癌患者随访5年，记录患者生存时间并计算5年生存率。采用Pearson相关分析法分析患者癌组织及血清外泌体中LncRNA CCAT1与miR-140-3p的相关性；比较不同病理特征胃癌患者癌组织及血清外泌体LncRNA CCAT1、miR-140-3p表达，以胃癌患者癌组织LncRNA CCAT1、miR-140-3p表达的平均值为界限，将患者分为高、低LncRNA CCAT1、miR-140-3p者，采用K-M生存曲线比较高、低LncRNA CCAT1、miR-140-3p患者5年总生存率；采用受试者工作特...     

血清外泌体miR-23b对STEMI患者行PCI后发生院内主要不良心血管事件的预测价值

目的研究血清外泌体miR-23b对ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者行急诊经皮冠脉介入术(PCI)后发生院内主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法选取2019年5月至2020年5月于海南医学院第一附属医院行直接PCI的STEMI患者103例,在入院时(PCI前)及术后1 d内(≤24 h)、2～3 d(48～72 h)、4～7 d时采集血液样本。根据是否发生院内MACE,分为MACE组和非MACE组。另外随机选择48例健康志愿者作为对照。采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血清外泌体miR-23b表达。结果与健康志愿者相比,STEMI患者PCI前血清外泌体miR-23b相对表达量升高(1.31±0.42 vs.1.00±0.11,P0.05)。对于STEMI患者,PCI后1 d内(≤24 h)外泌体miR-23b相对表达量达到峰值,随后逐渐降低。采用重复测量设计的方差分析,MACE组和非MACE组患者外泌体miR-23b相对表达量在不同时间点比较、组间比较以及变化趋势比较均存在统计学差异(F_(时间)=114.108,F_(组别)=51.905,F_(组别×时间)=21.152,P0.05)。ROC曲线分析发现,PCI后1 d内血清外泌体miR-23b预测STEMI患者行PCI术后短期发生MACE的AUC[0.923(95%CI:0.876～0.980)]最高(P0.001);而且经多因素Logistic回归分析,PCI术后1 d内血清外泌体miR-23b表达量升高是STEMI患者PCI后发生MACE的独立预测因素(P0.05)。结论血清外泌体miR-23b对STEMI患者行PCI后发生院内MACE具有良好的预测价值。     

miR-122与急性缺血性脑卒中的相关性

目的 探讨急性缺血性脑卒中患者血液外泌体中miR-122的表达。方法 60例急性缺血性脑卒中患者发病后1 d和7 d的血液标本作为实验组,40例健康人群的血液标本作为对照组。收集血液标本后,进行血清分离,提取血清中的外泌体,通过实时定量PCR技术检测血清外泌体中miR-122的表达水平。最后通过构建受试者工作特征(ROC)曲线判断miR-122作为急性缺血性脑卒中潜在生物标志物的可能性。结果 两组年龄、性别、糖尿病、高血压、高脂血症比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。急性缺血性脑卒中患者1 d血清外泌体中的miR-122的表达较对照组增高,差异有统计学意义(P<0.05);急性缺血性脑卒中患者7 d血清外泌体中的miR-122的表达较对照组增高,差异有统计学意义(P<0.05)。采用ROC曲线分析miR-122诊断急性缺血性脑卒中的价值,发病后1 d, miR-122 ROC曲线下面积0.76(95%CI:0.66～0.86),最佳临界点为0.58,敏感性为70.00%,特异性为87.50%;发病后7 d, miR-122 ROC曲线下面积0.83(95%CI:...     

巨噬细胞外泌体抑制HBV DNA复制

目的探讨巨噬细胞(macrophage,M?)外泌体抑制HBV DNA复制的机制及与慢性乙型肝炎(chronic viral hepatitis B,CHB)肝损伤的相关性。方法体外分离鉴定M?外泌体,并将其与Hep G2.2.15细胞共培养,利用实时定量PCR检测共培养后HBV DNA复制的变化,分别分析M?及其上清外泌体中微小RNA(micro RNA,mi RNA)-638的表达;同时入组CHB免疫活化(immune activation,IA)期、低(非)复制(inactive carrier,IC)期患者,并以同期健康者作为对照组,通过实时定量PCR检测血清外泌体中mi RNA-638的表达,并与肝损伤、HBV DNA载量进行相关性分析。结果 M?外泌体可以抑制HBV DNA复制;M?及其上清外泌体中mi RNA-638高表达;CHB患者IA期mi RNA-638的表达水平低于IC期;CHB患者血清外泌体中mi RNA-638的表达水平与ALT、AST和HBV DNA水平呈负相关。结论 M?外泌体可以抑制HBV DNA复制,外泌体中mi RNA-638的表达水平与肝脏炎性损伤和病毒复制密切相关,M?外泌体相关mi RNA可能是潜在的抑制HBV复制、减轻肝脏炎症的靶点。     

急性心肌梗死患者血浆外泌体mRNA表达谱分析

目的 比较分析急性心肌梗死(AMI)患者和非心源性胸痛(NCCP)患者血浆外泌体中mRNA的表达差异,并探讨差异表达mRNA对AMI发生发展可能的影响。方法 入选北京朝阳医院和内蒙古包头市中心医院NCCP患者和AMI患者各15例。提取入选者血浆外泌体及外泌体总RNA,高通量测序技术检测AMI患者和NCCP患者血浆中外泌体信使RNA(mRNA)的表达谱,筛选出AMI患者中差异表达的mRNA。对差异表达mRNA进行基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析。结果 提取的外泌体为粒径在30~200 nm之间的双层膜小囊泡,表达外泌体标志分子分化簇63(CD63)和热休克蛋白70(HSP70),而不表达甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH),符合外泌体的特征。对入选AMI患者和NCCP患者血浆外泌体中的mRNA表达量进行检测,AMI患者血浆中外泌体转录本数量为64 258条,NCCP患者血浆中外泌体转录本数量为64 374条。其中差异表达的mRNA共1 800条(上调951条,下调849条)。GO和KEGG分析表明上述差异表达的mRNA参与了AMI的生物学调节功能和通路。结论 AMI患者血浆外泌体中mRNA的表达水平与NCCP组比较存在明显的差异,这些差异表达的外泌体mRNA可能在AMI的发生发展过程中发挥重要的作用。     

血浆外泌体HSP90α对预测结直肠癌肝转移的价值探索

目的 探讨结直肠癌患者血浆外泌体HSP90α与结直肠癌肝转移的关系.方法 应用超速离心法提取27例I～III期原发性结直肠癌患者和27例结直肠癌肝转移患者的血浆外泌体,并应用ELISA法检测其HSP90α 表达,并与相同患者血浆游离HSP90α 比较.结果 应用超速离心法能有效提取血浆外泌体,经验证符合外泌体相关特征....     

冠心病患者血液外泌体mRNA、lncRNA及circRNA差异表达谱及竞争性内源RNA网络的构建

目的:通过生物信息学方法构建冠心病患者血液外泌体中的竞争性内源RNA(ceRNA)调控网络,探讨其发病机制。方法:在exoRbase数据库中下载冠心病患者和正常对照的血液外泌体测序数据,通过R语言分别对外泌体中mRNA、长链非编码RNA(lncRNA)、环状RNA(circRNA)的表达谱作差异表达分析,使用TargetScan和miRanda数据库共同预测和差异表达mRNA结合的微小RNA(miRNA),使用miRcode数据库预测与差异表达lncRNA结合的miRNA,使用starBase数据库预测与差异表达circRNA结合的miRNA。对3组miRNA两两取交集,保留与差异表达mRNA、lncRNA、circRNA两者及以上均结合的miRNA,构建ceRNA网络,使用Cytoscape软件可视化,并对差异表达基因进行GO富集和KEGG通路分析。结果:冠心病患者外周血外泌体中差异表达mRNA为569种,差异表达lncRNA为1408种,差异表达circRNA为282种。其中与差异表达mRNA相结合的miRNA有178种,与差异表达lncRNA结合的miRNA有207种,与差异表达circRNA结合的miRNA有328种,两两取交集,共保留120个共有的miRNA成功构建ceRNA网络,GO分析的结果主要富集在磷酸化、去磷酸化和脂质磷酸化等功能,KEGG分析的结果主要富集在甘油脂代谢和甘油磷脂代谢通路。结论:本研究成功构建冠心病患者血液外泌体中的ceRNA调控网络,为冠心病的诊断治疗提供新靶点。     

外泌体源性环状RNA Tousled样激酶1与老年急性脑梗死病情严重程度及预后的关系

目的 探讨血清外泌体源性环状RNA Tousled样激酶1(circTLK1)与老年急性脑梗死病情严重程度及预后的关系。方法 选取2021年10月至2022年11月恩施土家族苗族自治州中心医院脑病科收治的老年急性脑梗死患者128例(急性脑梗死组),采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分评估病情严重程度。急性脑梗死组90 d时又根据改良的Rankin量表(mRS)评分分为预后不良组46例和预后良好组82例。另选取健康体检者80例(对照组)。RT-PCR检测血清外泌体源性circTLK1表达。出院后对老年急性脑梗死患者进行随访,90 d时用mRS评分对预后进行评价。结果 急性脑梗死组血清外泌体源性circTLK1表达明显高于对照组(1.86±0.46 vs 0.87±0.12,P<0.05)。轻度、中度和重度急性脑梗死患者血清外泌体源性circTLK1表达逐渐升高(1.34±0.28 vs 1.78±0.19 vs 2.35±0.33,P<0.05)。预后不良组入院时NIHSS评分和circTLK1表达明显高于预后良好组[(13.21±3.24)分vs(9.55±2....     

血清饥饿对结肠癌HCT116细胞外泌体分泌的影响

目的:本研究尝试使用添加无外泌体血清(E x o s o m e-d e p l e t e d F B S)的培养基培养细胞并提取外泌体,比较无外泌体血清和传统的无血清两种不同的培养条件对结肠癌H C T116细胞外泌体分泌的影响,旨在优化外泌体提取条件,使之有利于后续功能研究.方法:采用提取前24 h无血清和添加无外泌体血清培养基培养结肠癌细胞,普通光学显微镜下观察两种培养条件下细胞的生长和形态,用超速离心法分步提取分泌到细胞培养上清中的外泌体,透射电子显微镜下观察外泌体的形态,蛋白免疫印迹法分析外泌体标志蛋白,以及纳米颗粒追踪计数分析外泌体大小和含量.结果:与无血清培养条件相比,添加无外泌体血清培养的HCT116细胞生长状态良好,细胞无明显死亡现象.两种培养条件分泌的外泌体形态相近,均呈圆形或椭圆形,由脂质双分子层包裹的小囊泡,直径为40-100 nm.无外泌体血清培养条件分泌的外泌体大约是无血清培养的6倍,二种培养条件下提取的外泌体直径均为90 nm左右,与电镜结果一致.两种培养条件提取的外泌体中均检测到HSP70和CD63外泌体标志蛋白.结论:添加无外泌体血清培养HCT116细胞分泌的外泌体与无血清培养相比无明显差异,但添加无外泌体血清培养的细胞状态比无血清培养的细胞状态好,外泌体的分泌可能更接近生理条件下的生长环境,分泌的外泌体数量更多,因此无外泌体血清培养条件较无血清培养更适合结肠癌来源外泌体的提取和研究.     

慢性丙型肝炎患者血清和外泌体LncRNA HEIH水平及其临床意义探讨*

目的 探讨慢性丙型肝炎(CHC)患者血清和外泌体肝细胞癌中高表达的中长链非编码RNA(long non-coding RNA HEIH,LncRNA-HEIH)水平变化及其临床意义。方法 2017年9月～2020年7月我院诊治的77例CHC患者和同期40例肝细胞癌(HCC)患者,采用定量RT-PCR法检测血清和外泌体LncRNA HEIH水平。CHC患者接受标准抗病毒治疗和肝活检。采用多元Logistic回归分析,应用ROC曲线分析血清和外泌体LncRNA HEIH水平预测肝组织病变的价值。结果 CHC患者血清和外泌体LncRNA HEIH水平分别为(2.3±0.2)和(3.6±0.6),均显著低于HCC患者【分别为(13.4±2.5)和(8.6±1.5),P<0.05】;53例肝组织炎症G0～G1患者血清和外泌体LncRNA HEIH水平分别为(2.5±0.3)和(3.9±0.6),显著高于24例肝组织炎症>G2者【分别为(1.9±0.4)和(2.9±0.5),P<0.05】,62例肝纤维化S0～S1患者血清和外泌体LncRNA HEIH水平分别为(2.6±0.4)和(4.1±0.7),均显著高于15例肝纤维化>S2者【分别为(1.6±0.4)和(2.5±0.5),P<0.05】;59例对抗病毒治疗应答组血清和外泌体LncRNA HEIH水平分别为(2.8±0.4)和(4.1±0.6),均显著高于18例不应答组【分别为(2.1±0.5)和(3.4±0.6),P<0.05】;CHC患者血清和外泌体LncRNA HEIH水平预测肝组织显著炎症或纤维化的AUC分别为0.764～0.778和0.723～0.736之间,具有一定的临床意义。结论 CHC患者血清和外泌体LncRNA HEIH水平异常,监测它们的变化可能对预测肝组织炎症分级和肝纤维化分期有帮助。     

老年2型糖尿病患者血清外泌体中神经元特异性烯醇化酶和磷酸化tau的表达及其与继发轻度认知功能障碍的相关性

目的 检测老年2型糖尿病(T2DM)患者血清外泌体神经元特异性烯醇化酶(NSE)和磷酸化tau(P-tau)的表达,并探讨其与患者发生轻度认知功能障碍(MCI)的相关性。方法 选取2019年1月至2020年12月于联勤保障部队第921医院就诊的114例老年T2DM患者为研究对象(研究组),另选取同期健康体检者100名为对照组。采用ExoQuick-TC提取研究对象血清源性外泌体。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测研究对象血清源性外泌体中NSE和P-tau的表达。使用简易认知状态评价量表(MMSE)和蒙特利尔认知评估量表(MoCA)对研究对象进行认知评估。采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析。根据数据类型,分别采用t检验或χ²检验进行组间比较。应用Spearman秩相关分析血清外泌体中NSE及P-tau表达水平与认知受损严重程度的相关性。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清源性外泌体中NSE和P-tau表达水平对MCI的预测价值。结果 研究组老年T2DM患者出现认知受损的比例高于对照组;MMSE和MoCA分值明显低于对照组;发生MCI的比例高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。根据MoCA分值将研究组患者分为MCI组(n=71)和非MCI组(n=43),MCI组血清外泌体中NSE和P-tau表达分别为(13.27±1.61)μg/L和(17.14±2.45)pg/ml,明显高于非MCI组的(10.86±1.43)μg/L和(14.49±2.25)pg/ml(t=5.728,6.154;P<0.05)。相关性分析显示,老年T2DM患者血清外泌体中NSE和P-tau表达水平与MMSE(r=-0.547,-0.562;P<0.05)和MoCA分值(r=-0.583,-0.597;P<0.05)存在负相关。ROC曲线分析结果显示,血清外泌体中NSE表达预测老年T2DM患者发生MCI的曲线下面积(AUC)为0.729,血清外泌体中P-tau表达预测老年T2DM患者发生MCI的AUC为0.741,而两者联合预测老年T2DM患者发生MCI的AUC为0.827,高于NSE和P-tau单个指标的预测价值(t=3.836,3.478;P<0.05)。结论 血清外泌体中高表达的NSE和P-tau与老年T2DM患者MCI的发生密切相关,二者联合的预测价值更高。     

冠心病患者外周血外泌体中microRNA基因芯片的差异性表达

目的:通过基因芯片筛选并分析健康成年人与急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者、稳定型心绞痛(SA)患者外周血外泌体中microRNA的表达差异,寻找临床诊断和治疗冠心病的新靶点。方法:入选STEMI患者、SA患者和健康成年人各3例,采集受试者静脉血,通过超高速离心法提取血清中的外泌体,运用基因芯片技术对外泌体中的microRNA进行测序。两两对比,从中筛选出差异性表达的microRNA,对差异性表达的microRNA的靶基因进行GO功能富集分析和KEGG Pathway富集分析。结果:STEMI组、SA组和健康组外周血中外泌体所含有的microRNA表达有明显差异。SA组与健康组对比,miR-5195-3p、miR-328、miR-130a-3p上调表达差异较明显[FC(abs)2];SA组与STEMI组对比,miR-483-3p下调表达差异较明显[FC(abs)2];STEMI组与健康组对比,miR-4787-3p、miR-423-5p、miR-151b上调表达差异较明显[FC(abs)2],miR-140-3p、miR-29a-3p、miR-765、miR-939-5p下调表达较明显[FC(abs)2]。结论:STEMI患者、SA患者和健康成年人外周血中外泌体所含有的microRNA表达有显著差异,其中部分特异性的microRNA与心血管疾病的发生发展有着密切的关系,可以作为冠心病诊断和治疗的新靶标。     

肝癌细胞外泌体的分离与鉴定

目的:针对目前尚缺理想的肿瘤细胞提取方案,探寻分离纯化肝癌细胞培养液中外泌体的新方法.方法:连续适应无血清培养肝癌SMMC-7721细胞,收集细胞上清液,采用改良超速离心法分离、纯化培养上清液中肝癌细胞外泌体;透射电镜观察其形态,Nanosight技术分析粒径;Western blot分析其特异蛋白Alix、CD63、CD9的表达并利用SDS-PAGE电泳分析肝癌细胞和外泌体的蛋白谱.结果:透射电镜观察到的肝癌细胞外泌体,外形呈圆形或椭圆形;Nanosight技术分析颗粒直径峰值为122 nm,直径30-150 nm之间颗粒占72.16%;Western blot证实在细胞培养上清液和外泌体提取液中均能检测到Alix、CD63、CD9的蛋白表达;SDS-PAGE电泳清晰显示外泌体中高丰度大分子结构蛋白明显少于肝癌细胞.结论:利用连续适应无血清细胞培养结合改良超速离心法能提取高纯度的外泌体,为肝癌细胞外泌体标志物研究奠定基础.     

血清外泌体miR-32和miR-20a在非小细胞肺癌中表达及其临床价值

目的检测非小细胞肺癌患者血清外泌体中miR-32以及miR-20a的表达水平,并探讨二者在临床诊断中的潜在价值。方法采集非小细胞肺癌患者和健康受试者外周静脉血各30例,分离出血清中外泌体,并提取其中的miRNA。通过实时荧光定量聚合酶链反应对miR-32和miR-20a进行检测,比较二者在两组中的表达水平,并分析与临床病理特征之间关系,通过受试者工作曲线(ROC)评价血清外泌体miR-32和miR-20a联合诊断非小细胞肺癌的价值。结果血清外泌体miR-32在非小细胞肺癌患者中较正常对照组下降,而miR-20a的表达较健康对照组升高,差异均有统计学意义(P0.05)。非小细胞肺癌患者血清外泌体miR-32在年龄、性别以及病理类型中,差异无统计学意义(P0.05),而在肿瘤分期及分化程度方面,差异有统计学意义(P0.05)。血清外泌体miR-20a在年龄、性别、肿瘤分期、分化程度和病理类型上均无显著差异(P0.05)。miR-32、miR-20a和两者联合检测非小细胞肺癌的AUC分别为0.715,0.713和0.825。结论 miR-32和miR-20a可能系潜在的生物标记物,二者联合可能有助于非小细胞肺癌早期诊断。