siRNA干扰FOXM1基因对涎腺腺样囊性癌细胞增殖的影响

目的:探讨FOXM1对涎腺腺样囊性癌细胞增殖的影响。方法:以高转移腺样囊性癌细胞系(SACC-M)为对象,构建FOXM1 siRNA干扰片段,瞬转SACC-M细胞,蛋白质免疫印迹法检测干扰效率;流式细胞仪分析FOXM1干扰后SACC-M细胞周期的改变,甲基噻唑基四唑比色法检测干扰后SACC-M细胞的增殖,蛋白质免疫印迹法检测干扰后细胞周期蛋白CyclinB、CDC2的变化,划痕实验检测干扰前后细胞的迁移能力。结果:干扰后SACC-M细胞FOXM1表达明显下调,细胞增殖受到抑制,细胞周期S期比例明显下降,CyclinB表达明显下降,但细胞的迁移能力没有明显的变化。结论:FOXM1可调节涎腺腺样囊性癌细胞的增殖,但对其迁移能力没有明显作用。     

短发夹状RNA沉默H-ras基因对人涎腺腺样囊性癌细胞增殖的影响

目的 探讨H-ras基因对涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)生物学特性的影响以及作为SACC基因治疗靶点的可行性.方法 构建H-ras靶向H-ras-shRNA质粒及阴性对照HK-shRNA质粒,经脂质体介导转染SACC-M细胞,G418筛选建立稳定转染细胞株,将细胞分为H-ras-shRNA转染组、HK-shRNA转染组及未转染细胞组.绘制细胞生长曲线检测细胞体外增殖能力;反转录聚合酶链法分析各组细胞中H-ras基因mRNA表达变化;荧光蛋白定量分析H-ras蛋白表达水平;流式细胞术测定细胞周期及细胞凋亡情况;裸鼠成瘤实验检测细胞在体内的成瘤能力,分析H-ras沉默对细胞增殖及凋亡的影响.结果 成功构建重组质粒并导入SACC-M细胞,建立稳定表达质粒的细胞株.H-ras-shRNA质粒能有效降低SACC-M细胞中H-ras表达,H-ras基因抑制率为61.80%,H-ras蛋白表达抑制率为62.76%.细胞增殖活性明显受抑,G0G1期比例增加;流式细胞术结果显示实验组细胞凋亡率为30.82%,显著高于阴性对照组及空白对照组的4.29%和4.16%.H-ras沉默细胞的裸鼠体内成瘤能力降低.结论 H-ras靶向shRNA干扰质粒能持续有效的抑制SACC-M细胞中H-ras基因及蛋白水平的表达,降低细胞体内外的增殖活性,并能有效诱导细胞凋亡.     

沉默RohA基因对涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-2增殖和侵袭的影响

目的:探讨沉默RohA基因对涎腺腺样囊性癌(SACC)细胞株ACC-2增殖和侵袭的影响。方法:培养ACC-2细胞,分为siRNA-RhoA组、siRNA-对照序列组和空白对照组,实时荧光定量PCR技术检测细胞中Rho基因表达,Western blot法检测细胞中RohA蛋白表达,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力。结果:与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,siRNA-RhoA组细胞中RohA mRNA和蛋白相对表达量均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,siRNA-RhoA组细胞在24、48、72、96h时吸光度A值均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,si RNA-RhoA组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,si RNARhoA组迁移细胞数和侵袭细胞数均减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:特异性沉默RohA基因表达可明显减弱ACC-2增殖能力,促进细胞凋亡,抑制细胞转移和侵袭能力。     

涎腺腺样囊性癌侵袭转移相关微小RNA的筛选

目的 探讨不同转移能力涎腺腺样囊性癌(ACC)表达微小RNA(miRNA)的差异,以期筛选与ACC侵袭转移相关的miRNA及其所调控的靶基因.方法 以ACC高转移细胞株(ACC-M)为实验组,低转移细胞株(ACC-2)为对照组,采用高通量miRNA微阵列初步筛选两株细胞中差异表达的内源性miRNA,然后挑选几个显著差异表达的miRNA,采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)进一步加以验证,同时运用miRNA靶基因预测软件预测其可能调控的靶基因.结果 芯片初筛显示,与ACC-2相比,ACC-M中表达差异具有统计学意义的miRNA分子有23个,其中上调表达的有14个(miR-15a、miR-16、miR-509-3p等),下调表达的有9个(miR-24、miR-98、miR-320等).qRT-PCR验证与miRNAs芯片结果相符合.靶基因软件预测显示,miR-98的靶基因为Ras和高迁移率蛋白A2,miR-320的靶基因为整合素β3,miR-509-3p的靶基因为CD164,它们均与恶性肿瘤侵袭转移有关.结论 不同转移能力的ACC存在差异表达的miRNA、miR-98、miR-320和miR-509-3p可能与ACC侵袭转移相关,可能通过调控相关靶基因参与ACC的侵袭转移进程.     

RNA干扰Survivin对腺样囊性癌细胞株ACC-M生长的抑制作用

目的:探讨RNA干扰Survivin基因对腺样囊性癌细胞生长的抑制效应.方法:设计、合成siRNA(small interfering RNA),构建真核表达载体pGenesil-shRNA-Survivin,将重组质粒导入人腺样囊性癌ACC-M细胞株.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PcR)、Western-blot法分别检测转染后的ACC-M细胞中Survivin mRNA和蛋白表达的变化,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖,结果:测序证实真核表达载体构建成功,在pGenesil-shRNA-Survivin的ACCM细胞株中,Survivin mRNA及蛋白表达明显降低,ACC-M细胞生长受到抑制.结论:pGenesil-shRNA-Survivin重组质粒能有效抑制腺样囊性癌细胞生长.     

人工合成小干扰RNA抑制涎腺腺样囊性癌DNA甲基转移酶1的表达

目的通过筛选针对涎腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma，ACC）DNA甲基转移酶1（DNA methyhransferase 1，DNMT-1）基因有效的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）序列和分析RNA干扰（RNA interference，RNAi）作用的时效、量效关系，为建立ACC稳定抑制DNMT-1的表达载体，深入了解DNMT在ACC抑癌基因甲基化过程中的作用。方法设计并人工合成4对siRNA，脂质体介导分别转染ACC细胞系ACC-2、ACC-3和ACC-M细胞，分别于转染后24、48和72h，采用PCR、RT-PCR和Western blot方法检测各细胞系DNMT-1的mRNA和蛋白表达，筛选有效的siRNA干扰序列，同时设置siRNA不同浓度转染组，分析RNAi作用的量效关系。以Cy3标记甘油醛-3-磷酸脱氢酶siRNA作为阳性对照组。结果2对siRNA对3株ACC细胞系细胞DNMT-1的mRNA表达产生了抑制作用，它们分别使ACC-2、ACC-3、ACC-M DNMT-1表达抑制67％、86％、92％和76％、76％、86％，抑制作用出现的时间为转染后24～48h，维持24～48h，与siRNA浓度成正比，Western blot检测符合mRNA的检测结果。结论得到了2对针对ACCDNMT-1基因有效的siRNA干扰序列。它们能显著抑制涎腺ACC细胞系DNMT-1的mRNA和蛋白表达，该抑制作用具有时间依赖性和浓度相关性。     

生存素基因在三氧化二砷诱导腺样囊性癌-2细胞凋亡中的作用

目的体外观察三氧化二砷（As2O3）诱导人类腺样囊性癌（ACC）-2细胞凋亡的作用,同时检测此过程中ACC-2内生存素（Survivin）表达水平的变化。方法甲基噻唑基四唑（MTT）法检测As2O3不同处理条件下对ACC-2细胞生长的抑制效应,流式细胞术观察As2O3诱导的各组ACC-2细胞的凋亡率。使用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Survivin mRNA的表达,蛋白印迹（Western blot）检测蛋白水平的表达差异。结果As2O3作用下ACC-2细胞生长明显受抑制,其抑制率呈浓度和时间依赖关系,细胞凋亡率也呈相同的趋势。RT-PCR和Western blot检测显示,As2O3作用下ACC-2细胞内Survivin mRNA和蛋白表达明显受抑制,抑制程度也具有时间和剂量依赖性。结论As2O3可通过促进细胞凋亡使体外培养的ACC-2细胞生长受抑制,受抑制的ACC-2细胞内Survivin mRNA和蛋白表达下降。推测Survivin基因在As2O3诱导的ACC-2细胞凋亡中起重要作用。     

全国涎腺腺样囊性癌专题研讨会会议纪要

由中华口腔医学会口腔颌面外科专业委员会涎腺疾病学组主办、中国抗癌协会头颈肿瘤协作组协办、北京大学口腔医学院承办的全国涎腺腺样囊性癌专题研讨会于 2 0 0 2年 6月 1 7～1 8日在北京召开 ,来自全国各地的专家、代表 2 0余人参加了会议。本次会议针对具有特殊生物学行为的涎腺腺样囊性癌进行了深入探讨 ,相关专家相聚在一起 ,交流各自的研究经验 ,共同商讨进一步深入研究的计划和方案 ,并准备开展协作研究。在本次会议上 ,北京大学方伟岗教授介绍了肿瘤细胞侵袭转移的最新研究动向 ;上海第二医科大学林国础教授介绍了涎腺腺样囊性癌的…     

放射联合淋巴细胞对腺样囊性癌的抗瘤效应

目的 探索放射联合聩瘤引流区淋巴结淋巴细胞（ｔｕｍｏｒ ｄｒａｉｎｉｎｇ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ,ＤＮＬ对肿瘤细胞的作用。方法 取首次治疗病理证实的口腔癌患者颈清扫淋巴结,经常规消化、分离,加白细胞介素２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２,ＩＬ－２）培养,获取激活的淋巴细胞作为效应细胞,以效靶比（Ｅ：Ｔ）２５：１进行集落形成试验,观察对人涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞析（ａｄｅｎｏｉｄ     

腺样囊性癌患者生存预测模型的建立

目的通过分析唾液腺腺样囊性癌（SACC）患者的病历资料,建立生存预测模型,并探讨其临床应用价值.方法分析118例有完整随访资料的SACC患者的病历资料,选择10个可能对患者预后产生影响的临床病理因素,通过Cox模型进行多因素分析,建立预后指数方程.然后根据预后指数（PI）将患者分为高、中、低危险3个组,应用Kaplan-Meier法绘制3个组的生存曲线,得到各组总的累积生存率及中位生存时间.结果Cox模型多因素分析显示：SACC确诊时的年龄、临床症状、TNM临床分期、治疗方式、手术切缘与总累积生存率有关（P＜0.05）.预后指数方程为PI=0.031X2＋0.665X5＋0.420X6-0.576X7＋0.999X10.根据预后指数分为低危险组（PI＜3.57）、中危险组（PI=3.57～4.50）、高危险组（PI＞4.50）,预后指数越小,患者预后越好.3组的中位生存时间分别为18年、7年和4年,10年总累积生存率分别为83.56%、31.45%和11.20%.结论生存预测模型能够较全面反映SACC患者的预后,可预测不同患者的生存率,为临床治疗提供参考.     

神经生长因子对体外培养腺样囊性癌细胞的作用

目的研究神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对体外培养的腺样囊性癌(adenoidcysticcarcinoma,ACC)细胞的作用及其机制。方法使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度NGF(0.0,0.1,1.0,10.0,100.0,200.0ng/ml)对体外培养的腺样囊性癌细胞系Acc-2和Acc-M的作用;使用反转录(RT)-PCR检测两株细胞系中NGF的受体TrkA和p75的表达。结果Acc-2和Acc-M细胞中各浓度组的吸光度值和对照组差异均无显著性(P>0.05)。指数增长期的两株细胞内在mRNA水平均未发现TrkA和p75基因的表达。结论体外培养的腺样囊性癌细胞不表达NGF的受体TrkA和p75。NGF对体外培养的腺样囊性癌细胞的增殖无明显的促进或者抑制作用。     

涎腺腺样囊性癌中端粒酶RNA的表达

目的　研究人端粒酶RNA(hTR)在涎腺腺样囊性癌 (adenoidcysticcarcinoma;ACC)中的表达 ,探讨hTR与细胞增殖之间的关系及其临床意义。方法　采用原位杂交和免疫组化技术检测 19例涎腺ACC和 4例正常涎腺组织标本。结果　涎腺ACC组织中hTR表达显著增高 ( P <0 .0 0 1)且与病理分型有关 ( P <0 .0 5 ) ,hTR表达与PCNA表达间呈正相关 (P <0 .0 5 )。结论　hTR表达可能和涎腺组织增殖恶变有关     

腺样囊性癌30例报告

目的探讨提高腺样囊性癌诊治水平的方法。方法回顾性分析30例腺样囊性癌的临床资料。30例中除2例为T2病变外,其余28例中T310例、T418例均破出窦外侵犯邻近组织。结果30例全部随访5年以上,手术+放疗组中有3例分别于治疗后3～4年发生肺转移,2例半年后锁骨转移。结论对腺样囊性癌的治疗,首次手术应广泛彻底切除,术后放疗有助于阻止或延缓复发。     

肿瘤转移抑制基因nm23在涎腺腺样囊性癌表达的研究

目的：探讨肿瘤转移抑制基因nm23与涎腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)预后的关系。方法：采用免疫组织化学链亲和素法分析52例SACC的nm23表达,并分析nm23与SACC病理学分型、临床分期、局部复发、远处转移和患者生存率的关系。结果：nm23表达与SACC病理学分型、临床分期、局部复发和患者生存率无明显相关（P＞0．05）,而与远处转移呈高度负相关关系（P＜0．01）。结论：nm23能抑制SACC远处转移的发生,并可作为预后指标来预测SACC的远处转移,指导临床治疗。     

Long non-coding RNA MRPL23-AS1 suppresses anoikis in salivary adenoid cystic carcinoma in vitro

Distant lung metastasis is the main factor that affects the survival rate of patients with salivary adenoid cystic carcinoma (SACC). Anoikis resistance is a feature of tumor cells that easily metastasize. The long non-coding RNA (lncRNA) MRPL23 antisense RNA 1 (MPRL23-AS1) is related to lung metastasis in SACC, but its role in anoikis resistance is unknown. After altering MPRL23-AS1 expression in SACC cells, anoikis resistance was detected by calcein AM/PI staining and annexin V/PI flow cytometry. The apoptosis marker activated caspase-3 and the bcl-2/bax ratio were detected by Western blotting. The relationship between MPRL23-AS1 and the promoter of the potential downstream target gene p19INK4D was identified by chromatin immunoprecipitation (ChIP)-PCR assay. p19INK4D expression in patient tissues was determined using qRT-PCR and immunohistochemistry. The functional experiments showed that MPRL23-AS1 could promote anoikis resistance in vitro. MRPL23-AS1 recruited the EZH2 to the promoter region of p19INK4D, inhibited p19INK4D expression, and promoted tumor cell anoikis resistance. p19INK4D overexpression did not affect anoikis in attached cells; however, it attenuated the anoikis resistance effect of MPRL23-AS1 in suspension cells. p19INK4D expression was significantly lower in SACC tissues than in normal tissues. The novel MRPL23-AS1/p19INK4D axis may be a potential SACC biomarker or therapeutic target.     

三氧化二砷诱导涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对人涎腺腺样囊性(SACC)细胞的作用机制,寻找治疗SACC的新途径.方法 应用As2O3对SACC细胞株作用,以 MTT、软琼脂集落形成和形态学分析法观察细胞的变化.结果 三氧化二砷作用后,癌细胞异形性逐渐消失,细胞凋亡现象明显,可见凋亡小体.结论 As2O3对SACC细胞株具有显著的抑制增殖、诱导分化和促进凋亡作用.     

MicroRNA155 in the growth and invasion of salivary adenoid cystic carcinoma

J Oral Pathol Med (2013) 42 : 140–147 Background: The carcinogenesis mechanism of adenoid cystic carcinoma (ACC) of the salivary gland is poorly understood. MicroRNA155 (miRNA155) has been involved in the carcinogenesis of many malignant tumors. The present study aims to examine the role of miRNA155 in tumor growth and invasion of ACC. Methods: MiRNA155 expression was determined in ACC specimens along with normal salivary glands by quantitative PCR. Using ACC‐2 cells as a model for ACC, cell proliferation was examined by MTT assay after knocking down miRNA155 expression, and cell cycle analysis was performed. Invasive capacity of ACC‐2 cells was examined by a Transwell culture assay. The effect of miRNA155 on tumor growth was also examined in vivo using mouse models. The effect of miRNA155 on epidermal growth factor receptor (EGFR)/NF‐κB was studied by quantitative PCR and electrophoretic mobility shift assay. Results: MiRNA155 was over‐expressed in ACC. Proliferation of ACC‐2 cells was markedly inhibited by knocking down miRNA155, resulting from a blockade of cell cycle in the G1 phase. Inhibition of miRNA155 significantly suppressed the invasive capacity of ACC‐2 cells. In vivo growth of ACC‐2 cell‐derived tumors was significantly slower by inhibition of miRNA155. Inhibition of miRNA155 also resulted in decreased expression of EGFR and RelA (NF‐κB). Conclusion: The results suggest that miRNA155 facilitates cell cycle progression and promotes invasion in ACC and that the EGFR/NF‐κB pathway might participate in mediating the effects of miRNA155. This study has provided insights into the carcinogenic mechanisms of ACC and identified new targets for intervention of salivary ACC.     

舌腺样囊性癌1例

腺样囊性癌是一种多来源于大、小涎腺或上呼吸道黏液腺的低度恶性肿瘤,有较强的侵袭性,常沿神经生长并侵犯神经,发生于头颈部的较为少见,发生于舌部者更是少见。本文报道1例发生于舌根部的腺样囊性癌,并结合文献对其病理临床特征以及诊断、治疗进行探讨。     

c-kit在涎腺腺样囊性癌中的研究进展

涎腺腺样囊性癌（SACC）是涎腺最常见的恶性度相对较高的肿瘤之一,具有鲜明的组织学特点：肿瘤嗜神经和早期肺转移。下面就酪氨酸激酶家族Ⅲ类成员之一的c-kit基因与SACC的关系作一综述。