基于survivin的"模拟病毒"瘤苗对结肠癌免疫治疗的作用

背景与目的：结肠癌的免疫治疗在肿瘤的综合治疗中发挥了重要作用。本研究以结肠癌的survivin为靶分子，构建基于survivin的“模拟病毒”瘤苗，并探讨该瘤苗对结肠癌的免疫治疗作用。方法：制备基于survivin的“模拟病毒”瘤苗，用扫描电镜和免疫印迹（Western blot）进行鉴定。酶联免疫斑点试验（Enzyme linked immunospot assay,ELISPOT）和标准^51Cr释放试验分别检测瘤苗所诱导的特异性CTL活性，并对Babl／c小鼠荷瘤模型进行免疫学效应评价。结果：扫描电镜和免疫印迹证实“模拟病毒”瘤苗制备成功，并能有效介导“模拟病毒”瘤苗所携带基因的表达。ELISPOT和标准^51Cr释放试验显示体内有效激发抗原特异性CTL效应，可诱导CTL产生IFN-γ等细胞因子，对结肠癌细胞系CT26有明显的杀伤毒性，杀伤率为56．4％；肿瘤治疗实验证实“模拟病毒”瘤苗能有效抑制肿瘤的生长速度，提高荷瘤动物的生存率，与对照组相比差异显著（P〈0．05）。结论：基于survivin的“模拟病毒”瘤苗能有效激发出特异性CTL应答，并在荷瘤动物模型中有效抑制结肠癌细胞CT26的生长，提高荷瘤动物的生存率，为新型结肠癌治疗性疫苗的设计提供了新思路。     

过继回输腺病毒介导的白细胞介素10基因转染CTL对机体抗肿瘤免疫功能的增强效应

本研究探讨了白细胞介紊10(IL-10)对小鼠体内抗肿瘤免疫功能的影响。鉴于C26结肠癌细胞转染了IL-10基因后在体内的致瘤性明显下降，本研究构建了一株对C26结肠癌细胞具有杀伤括性的CD8^ CTL并观察了IL-10基因转染的该细胞株对肿瘤的治疗作用。携带IL-10基因的重组腺病毒能有效介导小鼠琳巴细胞的基因转染并使之分泌较高水平的IL-10。IL-10基因转染的CTL过继回输荷瘤小鼠体内能明显增强荷瘤小鼠的体内抗肿瘤免疫功能，使实验性肺转移小鼠肺部转移结节数明显减少．这表明，IL-10对于过继回输的肿瘤特异性CTL的免疫功能具有明显的增强作用。     

氟胞嘧啶/胞嘧啶脱氨酶自杀基因疗法结合热休克蛋白-多肽复合物治疗小鼠胃癌

目的；研究氟胞嘧啶／胞嘧啶脱氨酶（5－FC／CD）基因疗法与热休克蛋白－多肽复合物（FSP70－PC）免疫疗法联合抗肿瘤效果。方法；将携带CD基因的重组腺病毒注射到小鼠MFC瘤体内，腹腔注射5－FC，同时皮下接种HSP70－PC。结果；经联合治疗后，70％荷瘤小鼠肿瘤体答缩小，消退，小鼠存活期延长，细胞毒T淋巴细胞（CTL）杀伤活性增高，CD4^ 及CD^8 T细胞浸润明显。结论：5－FC／CD基因疗法结合HSP－PC免疫疗法抗小鼠MFC瘤作用显著，具有临床应用前景。     

基于SFV RNA复制子核酸疫苗pIRSFV-HN的构建及其体内外抑瘤作用

目的：构建基于塞姆利基森林病毒（Semliki forest virus，SFV）RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN，并探讨其体内外的抑瘤作用。方法：基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因构建核酸疫苗pIRSFV-HN，pIRSFV-HN转染人结肠癌细胞HCT-116，以Western blotting检测转染后HCT-116细胞HN的表达水平，以AO／EB双荧光染色检测肿瘤细胞的凋亡，以MTT法检测疫苗对HCT-116细胞增殖的抑制。构建C57BL／6小鼠右后肢皮下荷H22腹水瘤细胞模型，瘤体内注射pIRSFV-HN（共3次），检测该小鼠血清IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ水平和特异性CTL活性。结果：成功构建基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN。结肠癌细胞HCT-116被疫苗转染后可有效表达HN蛋白，对照细胞则无表达；转染后HCT-116细胞出现凋亡的征象；该细胞的增殖受到明显抑制，最大抑制率达55．34％。移植瘤体内注射疫苗后，荷瘤小鼠血清IL-2、IFN-1水平显著升高（P〈0．05），其CTL活性也显著升高（P〈0．01）。结论：基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN在体外可有效地抑制肿瘤细胞；在体内可促使免疫趋向Th1优势，提高其抑瘤免疫水平。     

瘤体内/瘤周注射TNF重组腺病毒和/或IL-2重组腺病毒对肝癌小鼠的治疗作用研究

选择两种具有协同免疫调节作用的细胞因子进行联合基因治疗是提高肿瘤细胞因子基因治疗的有效途径之一.目前对IL-2/TNF-α联合基因方案,特别是瘤体内注射途径的抗肿瘤研究尚未见报道.IL-2与TNF-α具有协同作用.因此我们分别将携带TNF-α基因和IL-2基因的腺病毒(Ad-TNF,Ad-IL-2)联合或直接注射于BALB/c小鼠肝癌内,观察其抗瘤效果,并探讨其抗肿瘤免疫机制.结果表明:1.TNF治疗组脾细胞NK、LAK、CTL活性及Mφ杀伤活性明显高于对照组,诱生的细胞因子包括IL-2、GM-CSF、IFN-γ、TNF和IL-     

表达CD40L的小鼠结肠癌colon26瘤苗增强DC活性

目的：观察表达CD40L的小鼠结肠癌colon26瘤苗体内外对DC活性的影响。方法：以脂质体法将CD40L基因转染colon26细胞获得稳定表达CD40L的colon26/CD40L瘤苗。colon26/CD40L细胞与小鼠骨髓来源DC共培养,流式细胞术检测DC表型变化,RT-PCR法检测细胞因子基因P19、P35、P40、IL-18和IFN-γ的表达,ELISA法检测共培养上清中IL-12、IL-23和IFN-γ的水平。BALB/c小鼠皮下注射colon26细胞制备荷瘤小鼠模型,colon26/CD40L致敏DC治疗荷结肠癌小鼠,ELISA法检测荷瘤小鼠外周血中IL-12、IL-23、IFN-γ、IL-10和TGF-β的水平,H-E染色观察肝、脾和肿瘤组织的病理学变化。结果：成功获得高表达CD40L的丝裂霉素（MMC)处理的colon26/CD40L瘤苗。DC与colon26/CD40L瘤苗共培养后,DC表面共刺激分子CD80、CD86、MHCⅠ和MHCⅡ表达增高（P<0.01）;共培养体系中可检测到P19、P35、P40、IL-18和IFN-γ mRNA的表达,而在其他组未检测到上述基因的表达;共培养细胞上清中有较高水平的IL-12、IL-23和IFN-γ（P<0.01）。colon26/CD40L瘤苗致敏DC治疗组与colon26/CD40L瘤苗治疗组、DC治疗组比较,小鼠移植瘤的体积和质量明显减小和减少（P<0.05）;小鼠外周血IL-12、IL-23和IFN-γ明显升高（P<0.01）,IL-10和TGF-β明显降低（P<0.01）;小鼠移植瘤组织病理变化显著减轻。结论：表达CD40L的丝裂霉素（MMC)处理的结肠癌瘤苗可促进DC的成熟,刺激DC分泌细胞因子,增强DC体内外活性,从而增强治疗体系的抗肿瘤免疫效应。     

腺病毒介导IL-2基因转染的瘤苗体内抗肿瘤作用

目的 :探讨重组腺病毒介导的 IL- 2基因转染的瘤苗的体内抗肿瘤作用及其免疫学机制。方法 :应用腺病毒介导的鼠 IL- 2基因转染 CT2 6小鼠结肠癌细胞 ,灭活后用作瘤苗治疗荷瘤小鼠 ,观察皮下肿瘤生长及其存活期。采用乳酸脱氢酶释放法检测荷瘤小鼠脾细胞 CTL、L AK、NK细胞的杀伤活性。结果 :鼠 IL- 2基因转染瘤苗治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤生长并明显延长其存活期 (P<0 .0 1)。体内免疫功能检测表明 ,鼠 IL- 2基因转染疫苗治疗组小鼠脾细胞 CTL 活性、L AK活性和 NK活性显著高于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :腺病毒介导鼠 IL- 2基因转染的瘤苗体内具有较强的抗肿瘤效应 ,其机制可能是提高了荷瘤小鼠特异性和非特异性抗肿瘤免疫反应     

Ad介导人AFP和IFN-у协同诱发抗小鼠肝癌免疫效应

背景与目的:原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是常见的恶性肿瘤之一,目前对HCC的治疗尚无行之有效的手段。本研究探讨腺病毒(Adenovirus,Ad)载体介导异种甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)和酌干扰素(Interferon-gamma,IFN-γ酌)的协同抗肝癌效应。方法:用RT-PCR(reverse transcri-ptase-polymerase chain reaction)方法克隆小鼠IFN-γ酌基因并构建复制缺损型腺病毒编码人AFP和小鼠IFN-γ酌联合表达载体(Ad-hAFP/IFN-γ酌)。皮内免疫C57BL/6小鼠7d后,取脾细胞行51Cr释放实验检测特异性细胞毒T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocytes,CTLs)杀伤活性;或给免疫小鼠皮下接种Hepa1-6肝癌细胞,观察荷瘤小鼠成活情况。结果:51Cr释放实验显示,Ad-hAFP/IFN-γ酌免疫小鼠1周后其诱导产生的特异性CTL杀伤活性明显强于Ad-hAFP或Ad-IFN-γ酌单独免疫,在效∶靶比(E∶T)为10∶1时,Ad-hAFP/IFN-γ酌、Ad-hAFP和Ad-IFN-γ酌诱发的CTL杀伤率分别(43.8±5.5)%、(28.2±3.2)%和(12.8±1.9)%;30∶1时,为(79.6±6.4)%、(51.9±4.3)%和(15.6±2.3)%以及90∶1时(88.2±6.3)%、(62.5±4.8)%和(26.5±2.4)%。荷瘤试验表明,Ad-hAFP或Ad-IFN-γ酌单独免疫小鼠后1周接种5×106Hepa1-6肝瘤细胞,观察2个月,Ad-hAFP免疫组80%的小鼠荷瘤,Ad-IFN-γ酌免疫组小鼠则100%荷瘤;而Ad-hAFP/IFN-γ酌免疫小鼠在接种同样数量的Hepa1-6细胞,2个月无小鼠荷瘤,小鼠100%存活。结论:腺病毒载体介导异种AFP能有效地诱发针对小鼠AFP的特异性细胞免疫反应,IFN-γ酌能明显增强这种效应。     

复制缺陷型重组腺病毒介导mlFN-β基因治疗小鼠黑色素瘤的研究

目的：探讨人类复制缺陷型重组腺病毒载体介导mIFN-β基因治疗小鼠黑色素瘤的可行性和效果。方法：利用人类复制缺陷型重组腺病毒将目的基因mIFN-β经体外、体内两种途径导入小鼠黑色素瘤细胞（B16细胞）中，观察体外转mlFN-β基因的B16细胞的体内致瘤性和瘤苗作用，及通过腺病毒载体介导的mIFN-β对体内局部肿瘤治疗和抗肿瘤转移的作用。结果：1）携带目的基因的重组腺病毒感染B16细胞能获得较高的转移效率和目的基因的有效表达；2）将mIFN-β基因导入B16细胞对B16细胞的体外增殖能力无明显影响，但能显著提高细胞表面MHC-I类抗原的表达；3）将转mIFN-β基因的B16细胞接种小鼠，其体内致瘤性明显降低．且对对侧野生型B16细胞的致瘤性有抑制作用；4）瘤体内注射和经尾静脉注射途径给予AdCMV mIFN-β．对局部肿瘤和转移瘤有治疗作用。结论：利用人类复制缺陷型腺病毒载体介导mIFN-β基因治疗小鼠黑色素瘤是可行的，并具有较好疗效，提示用腺病毒载体携带有效的目的基因来开发瘤苗和治疗肿瘤具有良好的临床应用前景。     

新城疫病毒7793株对结肠癌小鼠肝转移的抑制效果及其可能的机制

目的：以脾脏保留法建立结肠癌小鼠肝转移模型,评价新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）7793株对小鼠结肠癌肝转移的抑制效果,并初步探讨NDV抑瘤的免疫激活机制。方法：经脾注入1×107/ml小鼠结肠癌细胞CT26的单细胞悬液0.1 ml,建立结肠癌CT26小鼠肝脏转移瘤模型;建模小鼠随机分3组（每组20只）: PBS阴性对照组、NDV7793给药组和5-FU给药组,于建模当天起连续5 d经腹腔分别注射PBS(0.1 ml/d)、NDV7793(512 HU/kg)和5-FU(20 mg/kg)。观察各组小鼠的生存状态,分析肝脏成瘤情况,计算抑瘤率和胸腺指数。ELISA法检测模型小鼠肝脏的IFN-γ水平。结果：成功构建小鼠结肠癌肝转移模型。NDV7793给药组小鼠未观察到明显的不良反应,生活状态好于PBS组和5-FU组。NDV7793组和5-FU组小鼠的肝转移瘤数量较PBS组均显著减少\[ (20.40±5.20) 、(205.50±19.21) vs (265.30±35.73)个,均 P <0.01\],NDV7793组的抑瘤率明显高于5-FU组（75.4% vs 48.0%, P <0.05）,NDV7793组小鼠的肝脏癌灶范围小,癌细胞以坏死或凋亡为主。NDV7793组和5-FU组小鼠的中位生存期明显长于PBS阴性对照组（30、22 vs 17 d, P <0.01）。NDV7793组小鼠肝脏IFN-γ的表达和胸腺指数均显著高于5-FU组和PBS组（均 P <0.05）。结论：NDV7793株对结肠癌小鼠的肝转移具有较强的抑制效果,并可能通过上调肝脏的IFN-γ以及提升胸腺指数来抑制结肠癌的肝转移。     

抗癌防转汤抑制肝癌淋巴道转移及其对MMP-9和CTL影响的研究

目的：探讨抗癌防转汤抑制小鼠肝癌淋巴道转移效果及其机制。方法：采用随机数字表法将小鼠分为正常对照组、荷瘤对照组、低剂量治疗组和高剂量治疗组，建立小鼠肝癌淋巴道转移模型，计算接种后面（21d小鼠抑瘤率）并运用MTT法检测CTL细胞活性及免疫组织化学方法和Western blot检测各组原发瘤及转移瘤基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase9，MMP-9）的表达水平，运用统计学分析数据意义。结果：治疗组较对照组，小鼠抑瘤率明显提高，MMP-9在原发瘤、转移瘤表达均减少（P＜0．05），细胞毒性T淋巴细胞（cyto-toxicity T lymphocyte，CTL）活性增强（P〈0．05），而且跟药物浓度呈正相关，P〈0．05。结论：抗癌防转汤有抑制肝癌淋巴道转移的作用，且其与MMP-9的表达水平降低，CTL细胞活性增强有关。     

转染CD40配体的卵巢癌细胞株OVHM抗卵巢癌肝转移机制的研究

目的 探讨转染CD40配体(CIMOL)的卵巢癌细胞株OVHM(CD40L-OVHM)体内抗卵巢癌肝转移的可能机制.方法 6～8周龄的C57BL/6N×C3H/He杂交一代(B6C3F1)雌性小鼠5只,经小鼠脾脏内接种OVHM,应用HE染色法验证小鼠肝脾转移模型是否建立成功.将OVHM细胞、空载体DNA-pMKITneo-OVHM细胞和CD40L-OVHM细胞接种于B6C3F1小鼠的脾脏,应用流式细胞术,分析荷瘤小鼠脾细胞CD11c分子的表达情况;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,检测荷瘤小鼠脾脏细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性;应用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测荷瘤小鼠外周血血清中干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-12、IL-4和IL-10的含量,并且观察小鼠脾脏和肝脏的成瘤情况及小鼠生存时间.结果 经病理学证实,卵巢癌肝脾转移动物模型建立成功.CD40L-OVHM组中小鼠脾细胞CD11c阳性细胞率明显高于OVHM组和转染空载体DNA-pMKITneo-OVHM组.CD40L-OVHM组小鼠脾脏内CTL的特异性杀伤活性明显增强,小鼠外周血血清中IFN-γ、TNF-α和IL-12的含量明显升高,而IL-4和IL-10的含量则明显降低,与OVHM组和转染空载体DNA-pMKITneo-OVHM组相比,差异均有统计学意义(P<0.05).CD40L-OVHM组小鼠的肝脏和脾脏重量均明显低于OVHM组和转染空载体DNA-pMKITneo-OVHM组,并且小鼠的生存期也明显延长(P<0.05).结论 转染CD40L cDNA的卵巢癌细胞可促进脾脏树突状细胞(DC)的成熟和分化,增强脾脏CTL的特异性杀伤活性,诱导Th1型细胞因子的分泌,抑制Th2型细胞因子的分泌,这可能是CD40L基因体内抗卵巢癌肝转移的机制之一.     

莪术醇瘤苗治疗胃癌的实验研究

目的：研究中药单体莪术醇生物修饰构建的肿瘤细胞瘤苗对荷瘤小鼠（SGC-7901胃癌）的免疫功能影响及治疗效率。方法：观察莪术醇-SGC-7901细胞瘤苗体外激活脾淋巴细胞的能力，体内成瘤性变化及作为瘤苗对荷瘤胃癌的小鼠治疗作用。结果：莪术醇-SGC-7901细胞瘤苗在体外能有效诱导免疫细胞活化增殖和特异性CTL活性的产生，体内的成瘤能力明显下降，用各组免疫接种后长期存活的脾细胞制备的LAK细胞，较同龄未免疫小鼠的脾细胞制备的LAK细胞具有更强的抗瘤效应（P〈0．05）；经莪术醇修饰构建的SGC-7901瘤苗与对照组相比能明显阻止胃癌细胞的肺转移，显著抑制皮下肿瘤结节形成，明显延长荷瘤鼠的生存时间（P〈0．05）；接种瘤苗后对荷瘤胃癌小鼠有较好的治疗效果。结论：莪术醇修饰构建的SGC-7901新型疫苗可以增强胃肿瘤细胞的免疫原性，对荷瘤胃癌小鼠（SGC-7901）有较好的治疗效果。     

联合自杀基因与IL-2基因转移疗法的抗肿瘤效果及其抗肿瘤免疫应答的诱导作用

单用自杀基因疗法或单用细胞因子基因疗法抗肿瘤效果不理想,本研究中我们观察了大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶(CD)基因与白细胞介素2(IL-2)基因联合转移对荷瘤小鼠的治疗效果及其对抗肿瘤免疫的诱导作用。复制荷瘤小鼠模型后在荷瘤部位注射表达CD基因的重组腺病毒(AdCD)及表达小鼠IL-2基因的重组腺病毒(AdIL2),并连续10天、每天1次腹腔注射5氟胞嘧啶(5FC)对荷瘤小鼠进行治疗。结果表明,AdCD/5FC/AdIL2联合基因治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤的生长,并明显延长其生存期(P<0.01)。联合基因治疗组小鼠肿瘤细胞发生明显的坏死,瘤内及瘤周有大量的炎性细胞浸润,瘤内CD4~ 和CD8~ T细胞明显增加,脾细胞NK和CIL杀伤活性明显高于单用AdCD/5FC、对照病毒AdLacZ/5FC或PBS组。实验结果表明,联合应用自杀基因与细胞因子基因治疗可更有效诱导机体的抗肿瘤免疫反应,从而更显著地抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长。     

腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶自杀基因联合IL-2基因疗法的肿瘤治疗作用及免疫机理分析

目的以腺病毒作为载体，将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与小鼠ＩＬ－２基因联合转移，研究其体内抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞后３天，肿瘤局部注射表达ＩＬ－２的重组腺病毒ＡｄＩＬ－２和表达ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ，然后连续１０天给予５－氟胞嘧啶（５－Ｆｃ）３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗。结果联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制，小鼠存活期明显长于ＡｄＩＬ－２、ＡｄＣＤ／５－Ｆｃ、ＡｄｌａｃＺ／５－Ｆｃ或ＰＢＳ组。经联合治疗后，小鼠脾细胞的ＮＫ活性和ＣＴＬ杀伤活性明显增强；肿瘤瘤体内ＣＤ４、ＣＤ８细胞浸润增加；肿瘤细胞表达Ｈ－２Ｋｂ和Ｂ７－１分子明显增加。结论联合应用自杀基因和ＩＬ－２基因治疗，一方面可以明显抑制荷瘤小鼠肿瘤生长，另一方面可以提高机体对肿瘤细胞免疫应答，增加机体的抗肿瘤作用，是肿瘤基因治疗中一条行之有效的途径。     

IFN-γ转基因治疗与重组IFN-γ注射对肝转移癌小鼠的治疗作用

转基因表达的IFN-γ可提高肿瘤细胞表面抗原的表达和激发宿主抗肿瘤免疫应答反应,这在肿瘤的基因免疫治疗中已得到人们的重视,但是对结肠癌肝转移模型的治疗作用鲜见报道.为了探讨转基因表达的IFN-γ和外源重组IFN-γ对结肠癌肝转移模型的作用,我们利用阳离子脂质体Lipofectamine将含huIFN-γ全长基因的真核表达质粒pcDNA3-huIFN-γ转染到小鼠结肠癌等细胞内,通过表达出的huIFN-γ发挥治疗作用并与外源重组的huIFN-γ作用进行比较.     

IFN-γ基因修饰的肿瘤细胞来源exosomes的抗肿瘤效应

[目的]探讨IFN-γ基因修饰的肿瘤细胞来源的exosomes体内抗肿瘤效应。[方法]通过密度梯度离心和蔗糖密度梯度法分离纯化E．G7-OVA肿瘤细胞分泌的exosomes。用表达小鼠IFN-γ基因的腺病毒载体AdIFN-γ和对照载体AdLacZ感染E．G7-OVA肿瘤细胞。将AdIFN-γ基因修饰的E．G7-OVA细胞来源的exosomes命名为Exo／IFN-γ,AdLacZ感染E．G7．OVA细胞及E．G7-OVA细胞来源的exosomes分别命名为Exo／LacZ和Exo。用这些exosomes免疫小鼠．观察其抗肿瘤效应．并探讨其作用机制。[结果]电镜下exosomes为双层膜结构,呈特征性的“盘状”结构,直径在40～100nm之间。通过Western印迹,在制备的Exo／IFN-γ中检测到IFN-γ,而在Exo／LacZ未检测到IFN-γ。与对照组PBS相比,用Exo、Exo／LacZ免疫小鼠分别能导致20％和30％小鼠90d无瘤（P=0．0008）,而用Exo／IFN-γ免疫小鼠则能导致60％小鼠90d无瘤（P=0．0001）;CTL表明,Exo／IFN-γ免疫诱导的CTL活性明显高于Exo和Exo／LacZ（P=0．0083）。[结论]INF-γ基因转染的E．G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes含有IFN-γ,且Exo／IFN-γ具有比常规exosomes更显著的抗肿瘤效应。     

小鼠γ-干扰素基因修饰瘤苗的抗肿瘤研究

本实验用RT-PCR方法得到小鼠γ-干扰素(mIFN-γ)全长cDNA,通过逆转录病毒载体将其导入小鼠肝癌细胞株,比较研究了该株细胞在mIFN-γ基因修饰前后致瘤性的变化,并制备了瘤苗,对其分泌干扰素的能力及对荷瘤小鼠的治疗作用作了进一步的研究,发现经过mIFN-γ基因修饰后,肿瘤细胞的致瘤性明显降低且瘤苗对荷瘤小鼠有明显的治疗作用,这为进一步开展细胞因子基因治疗工作打下一定基础。     

IL—2基因转染的肿瘤细胞增强机体免疫功能的实验研究

目的：探讨小鼠接种腺病毒介导的IL－2基因转移的CT26小鼠结肠腺癌细胞后机体免疫功能的变化（包括CTL、LAK细胞、NK细胞、巨噬细胞的杀伤活性变化）。方法：体外将腺病毒介导的小鼠IL－2基因转染CT26细胞（CT26-mIL-2)，然后将CT26－mIL2细胞接种于小鼠皮下。采用4h乳酸脱氢酸释放法检测荷瘤小鼠CTL、LAK、NK细胞的杀伤活性，MTT法检测巨噬细胞的杀伤活性。结果：接种CT26－mIL－2后第14d，小鼠脾细胞NK活性和诱导后的LAK活性和CTL活性均显著高于对照组（P＜0．01）；小鼠腹腔巨噬细胞数量显著增加，杀伤活性显著增强（P＜0．01）。结论：IL－2基因转染的肿瘤细胞能诱导机体的特异性和非特异性免疫功能参与机体的抗肿瘤作用。     

HA 纳米载体转 hGM - CSF 基因的 HepG2 疫苗联合多柔比星抗肝癌作用

目的：评价HA纳米载体转hGM—CSF基因的HepG2疫苗联合多柔比星治疗肝癌的效果。方法：建立Hu—PBL—SCIDHepG2荷瘤小鼠模型,待皮下种植瘤长至100—150mm3时,随机分为5组,每组5只：对照组（PBS）;化疗组（多柔比星DOX）;疫苗组（60Co照射的转染GM—CSF基因的HepG2细胞）;先疫苗后化疗组;先化疗后疫苗组。末次治疗后第5天处死各组小鼠,用MTT法测定脾脏CTL活性及肿瘤组织浸润淋巴细胞（TIL）杀伤活性;取肿瘤组织行HE染色及CD8＋T细胞免疫组化检查。结果：化疗组的CTL活性与对照组相比无显著变化（P〉0．05）。疫苗组和先疫苗后化疗组及先化疗后疫苗组的CTL活性显著强于上述两组（P〈0．05）,该3组两两之间也存在显著差异（P〈0．05）,而先化疗后疫苗组的CTL活性增强最为明显,明显高于其他两组（P〈0．05）。该组的TIL活性同样强于其他各组。同其它组相比,先化疗后疫苗组的瘤体内可见大量肿瘤细胞坏死,CD8＋T细胞浸润显著增加。结论：HA纳米载体转染hGM—CSF基因的HepG2疫苗的主动免疫联合多柔比星化疗具有协同抗肝癌作用,为肿瘤免疫联合化疗治疗肿瘤提供了实验依据。