EGCG诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡相关基因的差异表达

  目的   研究表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的生物学效应,并探讨其分子机制。   方法   运用DNA含量分析、Annexin Ⅴ/PI双标记法、DNA琼脂糖凝胶电泳以及透射电子显微镜形态学方法来观察细胞凋亡。通过SuperArray人细胞凋亡基因芯片检测100μmol/L EGCG作用于MGC-803细胞12 h后凋亡相关基因的表达谱,采用RT-PCR和Western blot技术验证上调基因Fas-L和下调基因Bag-1。   结果   25、50、100、200 μmol/L EGCG作用于MGC-803细胞24 h后,DNA含量分析出现了明显的亚二倍体峰;100 μmol/L EGCG作用4、8、12、24 h后,Annexin Ⅴ/PI双标记法表明早期凋亡细胞显著增加。100 μmol/L EGCG作用24 h后,在琼脂糖凝胶上电泳可见DNA凋亡特征性的阶梯状条带。电子显微镜观察到细胞体积缩小,核浓缩和凋亡小体形成等典型的形态学改变。通过基因芯片检测发现,100 μmol/L EGCG作用12 h后有8个凋亡相关基因表达差异显著,选择其中Fas-L和Bag-1运用RT-PCR和Western blot技术进行验证,其结果与基因芯片一致。   结论   EGCG能够诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡,这可能是多个基因和多条信号转导通路共同作用的结果。      

EGCG诱导胃癌和肝癌细胞凋亡及bcl—2表达下调的研究

探讨表没食子儿茶素没食子酸酯「（－）－ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ－３－ｇａｌｌａｔｅ,ＥＧＣＧ」诱导胃癌ＭＣＧ－８０３细胞和肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞凋亡的作用及其凋亡在基因ｂｃｌ－２产物表达的改变。方法：用ＭＴＴ法,琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测ＥＧＣＧ处理,ＭＧＣ－８０３细胞和ＢＥＩ－７４０２细胞后,他们在形态学和生化方面的改变以及ｂｃｌ－２蛋白表达水平的变化。结果：ＥＧＣＧ以剂量依赖的方     

活性氧在EGCG诱导人胃癌MGC803细胞凋亡中的作用

背景与目的:表没食子儿茶素没食子酸(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)抗肿瘤作用的机制目前尚不十分清楚,本研究旨在探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)在EGCG诱导人胃癌MGC803细胞凋亡中的作用.方法:采用噻唑蓝比色法(MTT)检测MGC803细胞的存活率;采用荧光显微镜观察MGC803细胞的凋亡率;流式细胞术检测MGC803细胞凋亡率及细胞内活性氧水平.结果:EGCG可诱导MGC803细胞凋亡,细胞内活性氧水平升高.抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cystein,NAC)干预后,EGCG抑制MGC803细胞生长的作用明显减弱,细胞凋亡率下降,NAC抑制了细胞内活性氧水平的升高.结论:EGCG可诱导MGC803细胞凋亡,该作用可被NAC显著抑制,提示EGCG诱导MGC803细胞凋亡与细胞内活性氧产生增加有关.     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡及机制

[目的]探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的生物学效应及抗肿瘤机制.[方法]通过MTT还原法检测EGCG对该细胞系生长的影响;用普通光镜、流式细胞仪和DNA断裂片段分析研究EGCG诱导的细胞凋亡.S-P免疫组化法检测细胞内Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达.[结果]EGCG能抑制MGC-803细胞的生长,抑制作用呈时间和剂量依赖性关系;EGCG处理MGC-803细胞后,普通光镜下细胞呈凋亡特征性改变;流式细胞仪示同一时间不同浓度EGCG(60、80、100、120μmol/L,48h)处理MGC-803细胞和同一浓度不同时间(80μmol/L,48、72h)处理MGC-803细胞,亚G1期细胞都逐渐增多;MGC-803细胞经EGCG(80、100、120μmol/L,48 h)后,其DNA电泳图中出现梯形条带;S-P免疫组化结果表明80μmol/L EGCG处理细胞48h后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax和Caspase-3蛋白表达升高.[结论]EGCG有诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的作用,其机制可能与Bax/Bcl-2比值增高导致Caspase-3的活化从而启动细胞凋亡有关.     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人胃癌BGC823细胞凋亡

[目的]观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的生物学效应及分子机制。[方法]通过MTT法检测EGCG对BGC823细胞生长的影响;用形态学观察、流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳研究EGCG诱导BGC823细胞凋亡。West-ern blot法检测EGCG处理后BGC823细胞NF-κB（p65）、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达。[结果]EGCG显著性抑制BGC823细胞的生长,呈浓度依赖性。EGCG处理后,光镜下细胞呈典型的凋亡形态学改变;流式细胞术分析表明不同浓度EGCG处理48h后,亚G1期细胞逐渐增加;EGCG（80μg/ml）作用48、72h后,DNA凝胶电泳出现典型梯形条带;Western blot表明EGCG处理48h后,NF-κB（p65）和Bcl-2蛋白表达下调,Bax和Caspase-3蛋白表达升高。[结论]EGCG具有诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制NF-κB活化,导致Bax/Bcl-2比值上调,促进Caspase-3活化有关。     

EGCG通过上调MnSOD 表达诱导鼻咽癌细胞株CNE-2 凋亡*

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（（-）-epigallocatechin-3-gallate,EGCG）对鼻咽癌细胞株CNE-2 的凋亡诱导作用、以及这个过程中MnSOD的表达变化特点。方法:应用噻唑蓝（MTT）法计算不同浓度EGCG 作用于CNE-2 鼻咽癌细胞后不同时间点的生长抑制率,并通过细胞荧光显微镜观察其凋亡情况,同时应用RT-PCR 法检测这个过程中MnSOD mRNA的表达变化。结果:EGCG 可以诱导CNE-2 细胞凋亡、抑制其生长,而且存在时间和剂量依赖关系,同时伴有MnSOD mRNA的表达上调。结论:EGCG 能通过上调MnSOD mRNA表达诱导鼻咽癌细胞株CNE-2 凋亡。      

p38MAPK在EGCG诱导人胃癌MGC803细胞凋亡中的作用

目的：探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen—activaced protein kinase，v38MAPK）在表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG）诱导人胃癌MGC803细胞凋亡中的作用。方法：采用MTT法检测MGC803细胞的存活率，荧光显微镜观察和碘化丙啶染色FCM检测MGC803细胞凋亡率，Western印迹法检测MGC803细胞中p38MAPK蛋白及磷酸化p38MAPK蛋白的表达。结果：EGCG可诱导MGC803细胞凋亡，且p38MAPK被激活。用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预后，EGCG抑制MGC803细胞生长的作用明显减弱，细胞凋亡率下降，p38MAPK活性显著下降。结论：EGCG可诱导MGC803细胞凋亡，该作用可被SB203580显著抑制，提示EGCG可能通过激活D38MAPK使部分MGCR03细胞凋亡。     

Nrf2 在EGCG诱导食管癌细胞凋亡中的作用

目的:探索核因子E 2 相关因子2（nuclearfactorerythroid- 2-relatedfactor 2,Nrf2）是否影响表没食子儿茶素没食子酸酯（-）-epigallocatechin- 3-gallate,EGCG）对食管癌细胞ECA-109 的凋亡。方法:应用MTT 方法在ECA-109 的Nrf2 干扰细胞（si-RNA ）与阴性对照细胞（si-NC）和空白对照细胞（control ）中计算EGCG 的半数致死量（IC 50）。 使用流式细胞仪分析EGCG 对3 组细胞凋亡的影响。使用Westernblot分析EGCG 对3 组细胞Nrf2 与cleaved-Caspase-3 蛋白表达的影响。结果:在食管癌ECA-109 细胞中,EGCG 能够诱导Nrf2 的表达,而Nrf2 的缺失明显降低了EGCG 的IC 50、增加了凋亡率、上调了其对cleavedCaspase-3 蛋白的影响。结论:EGCG 对Nrf2 的诱导减弱了其对食管癌细胞凋亡的影响。      

EGCG对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及E2F-1表达的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法采用CCK-8法检测EGCG对鼻咽癌细胞株CNE-2Z增殖的影响;AnnexinV /PI双标记流式细胞术检测EGCG的凋亡诱导作用;实时荧光定量PCR和Western blot检测核转录因子E2F-1及其上游调控蛋白CyclinD1和 p21的表达水平。结果EGCG处理后,CNE-2Z细胞的增殖明显受到抑制,其细胞凋亡率亦显著增高,呈量效关系;随着EGCG浓度增高,E2F-1 mRNA和蛋白表达水平明显下降,其上游调控蛋白CyclinD1的表达亦明显下调,而p21的表达则明显上调。结论EGCG可明显抑制鼻咽癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,可能与其直接或间接下调核转录因子E2F-1有关,CyclinD1和p21参与其调控。     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的机制

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人胃癌BGC-823细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:不同浓度EGCG单独或联合c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)抑制剂SP600125作用BGC-823细胞后,应用MTT法检测BGC-823细胞的增殖抑制率,显微镜下观察细胞的形态学改变,FCM检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测细胞中p-JNK和p-c-jun蛋白的表达情况,免疫细胞化学法检测细胞中caspase-3的表达。结果:EGCG可抑制BGC-823细胞的增殖(P<0.05),呈时间和剂量依赖效应;EGCG可诱导BGC-823细胞凋亡,细胞凋亡率呈剂量依赖效应(P<0.05);EGCG可上调BGC-823细胞中p-JNK、p-c-jun和caspase-3的表达(P<0.05)。EGCG引起的BGC-823细胞增殖抑制和caspase-3表达水平的上调可被SP600125部分抑制。结论:EGCG可诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡,其作用机制可能与激活JNK信号转导途径并上调caspase-3的表达有关。     

外源性胃泌素对胃癌细胞凋亡和凋亡调控基因bcl-2的影响

背景与目的:大量研究表明,外源性胃泌素对胃癌、结肠癌等胃肠道肿瘤细胞有促生长作用,但胃泌素是否参与了细胞的凋亡调控尚未见报道。本文旨在探讨胃泌素在胃癌细胞凋亡调控中的作用。方法:应用流式细胞仪观察胃泌素及其受体拮抗剂丙谷胺对MKN45胃癌细胞凋亡的影响;ABC免疫组化法测定细胞bcl-2基因的表达。结果:细胞培养48h后,胃泌素组细胞凋亡百分率为(1.39±0.54)%,明显低于对照组的(8.58±0.67)%(P<0.01);胃泌素组bcl-2基因阳性率为(22.3±5.3)%,明显高于对照组的(12.2±1.8)%(P<0.01),且随着时间延长表达率进一步增加。联合应用丙谷胺后上述作用消失。结论:胃泌素可能通过诱导细胞bcl-2基因的表达而抑制细胞的凋亡,丙谷胺可阻断胃泌素的凋亡调控作用。     

转染bcl-2反义寡核苷酸增强5-FU诱导胃癌细胞株SGC-7901凋亡

目的　探讨转染bcl 2反义寡核苷酸 (ASODN)能否增强 5 氟脲嘧腚 (5 -FU)诱导胃癌细胞株SGC790 1的细胞凋亡。方法　通过脂质体转染bcl 2ASODN和对照序列 ,凋亡率由流式细胞仪检测。酶联免疫法 (ELISA)用于检测细胞内源性bcl 2蛋白的表达 ,以证实反义序列的特异性。结果　和对照ODN相比 ,转染bcl 2ASODN显著增强 5 FU诱导的细胞凋亡率 (P<0 .0 1)。ELISA法显示SGC790 1的内源性bcl 2蛋白表达下降 (P <0 .0 1)。结论　bcl 2ASODN能增强 5 FU诱导胃癌细胞的凋亡率 ,这将为胃癌治疗提供有用的实验室依据。     

胃癌组织中细胞凋亡和bcl-2基因蛋白表达的研究

目的:为了探讨细胞凋亡和bcl-2基因蛋白与胃癌之间的关系。方法:采用原位末端标记技术和免疫组化法对40例胃癌、25例胃粘膜组织中细胞凋亡和bcl-2基因蛋白进行检测。结果:胃癌组织中80.0％(32/40)凋亡细胞为( ),7.5％(3/40)为( );胃粘膜组织中80.0％(20/25)为( ),20.0％(5/25)为( )。85.0％(34/40)的胃癌bcl-2基因蛋白表达阳性,64.0％(16/25)的胃小凹底部上皮bcl-2基因蛋白表达阳性,而表面上皮则不表达。结论:细胞凋亡受抑制和bcl-2基因蛋白过表达与胃癌的发生有密切关系。     

原发性肝细胞癌细胞凋亡相关蛋白bcl—2和bak的表达及意义

目的探讨细胞凋亡相关蛋白bcl-2和bak与肝癌的关系及其意义.方法采用免疫组化S-P方法,检测22例肝癌、22例肝癌伴肝硬变、20例肝硬变和10例正常肝组织中bcl-2及其相关蛋白bak的表达.结果 bcl-2蛋白在肝癌中表达阳性率为50.0%(22/44),而正常肝组织为60.0%(6/10),差异有显著性(P<0.05).在肝癌组织中bak蛋白表达阳性率为88.6%(39/44),而肝硬变组织为95.0%(19/20),差异无显著性(P>0.05).结论 bcl-2在肝癌和肝硬变组织呈中等表达,而bak在肝癌和肝硬变均呈高表达.     

胃癌组织p57KIP2和Bax蛋白的表达及与凋亡的关系

目的 探讨p57 KIP2和Bax蛋白在胃癌组织中的表达情况及其与凋亡的关系,并分析两种蛋白之间的相关性.方法 采用免疫组化SP法检测p57KIP2和Bax蛋白在57例胃癌组织和48例非癌胃黏膜组织中的表达情况,用TUNEL法检测相应的组织细胞凋亡情况.结果 胃癌组织中p57KIP2蛋白的阳性表达率为43.9％,显著低...     

p53/bcl-2与放疗诱导的宫颈癌细胞凋亡关系的研究

目的探讨宫颈癌放疗过程中,放疗诱导的细胞凋亡与p53、bcl-2的相关性.方法选择未经治疗的宫颈癌病人20例为实验对象,搜集分割放疗前后宫颈癌组织标本,用TDT-mediated dUTP-biotin nick end labeling(TUNEL)方法检测凋亡细胞;采用单克隆抗体免疫组化ABC法检测细胞凋亡相关基因p53、bcl-2的蛋白表达水平.结果(1)在宫颈癌放疗前后,细胞凋亡阳性率和平均凋亡指数分别为25%和0.11%、75%和2.8%,放疗前后有显著差异(P＜0.001);(2)放疗后p53蛋白表达显著减少,bcl-2蛋白无显著变化;(3)放疗前后,p53基因的表达与细胞凋亡呈有意义的相关性变化.结论放射治疗诱导了宫颈癌细胞凋亡的发生,并与凋亡调节基因p53及其表达呈间接有关.     

DAPK诱导PGCl3细胞凋亡时Bcl-2磷酸化的研究

目的:探讨DAPK诱导PGCl3细胞凋亡的可能机制。方法:真核表达载体pcDNA3.1-DAPK导入PGCl3细胞中。RT-PCR检测bcl-2和baxm-RNA丰度变化,Bcl-2含量变化和Bcl-2磷酸化水平变化。结果:DAPK诱导PGCl3细胞凋亡时,bcl-2表达是下调的,bax基因表达量无明显变化,pcDNA3.1-DAPK转染组的Bcl-2磷酸化水平相对pcDNA3.1组要高,同时Bcl-2蛋白含量是减少的。结论:过表达的DAPK诱导PGCl3细胞凋亡与bcl-2转录下调和Bcl-2磷酸化有关     

胃癌组织bcl-2蛋白表达和DCC基因的杂合性缺失

为了研究ｂｃｌ２蛋白表达和ＤＣＣ基因的杂合性缺失（ＬＯＨ）在胃癌发生中的作用，采用免疫组织化学技术和ＰＣＲ方法检测了胃癌组织ｂｃｌ２蛋白的表达和ＤＣＣ基因的杂合性丢失（ＬＯＨ）。结果发现，胃癌（信息个体）ＬＯＨ发生率为５４．５％（１８／３３），ｂｃｌ２蛋白的表达阳性率为６０．０％（３０／５０），Ⅲ、Ⅳ期胃癌ＬＯＨ发生率（８３．３％，１５／１８）显著高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌（２０．０％，３／１５），Ｐ＜０．０１。ｂｃｌ２蛋白的表达和ＤＣＣ基因的ＬＯＨ与胃癌大小、分化程度、淋巴结转移、浆膜浸润、临床分期及Ｌａｕｒｅｎ′ｓ分型无显著相关。结果提示ｂｃｌ２蛋白的高表达参与了胃癌的发生，ＤＣＣ基因的ＬＯＨ与胃癌的进展有关，但其致癌机制有所不同     

自发性细胞凋亡及bcl-2和bax基因与鼻咽癌放射敏感性关系的探讨

目的探讨自发性细胞凋亡及其相关基因bcl-2和bax与鼻咽癌放射敏感性的关系。方法采用TdT酶介导的生物素化dUTP缺口末端标记技术(terminal oxynucleotidyl transferase medi-ated dUTP biotin nick end labeling,TUNEL)和免疫组化法,分别检测51例放疗前的鼻咽癌活检组织中自发性凋亡指数(spontaneous apoptotic index,SAI)和bcl-2、bax基因的表达。结果鼻咽癌活检组织均检测到细胞凋亡,SAI平均为31.19±33.83;SAI与bcl-2和bax表达均无明显相关性,但与bcl-2/bax比率呈负相关(P<0.05);SAI与鼻咽癌放射敏感性明显相关,完全消退组比残留组SAI高(P<0.05);bcl-2的表达与鼻咽癌放射敏感性呈负相关(P<0.05),而bax的表达与鼻咽癌放射敏感性无关(P>0.05);bcl-2/bax的比率与鼻咽癌放射敏感性呈负相关(P<0.05)。结论SAI、bcl-2和bcl-2/bax的比率是反映鼻咽癌放射敏感性和预测鼻咽癌放疗效果的重要指标,而bax不能单独作为判断鼻咽癌放射敏感性的指标。