ω-3多不饱和脂肪酸对人胆囊癌细胞GBC-SD增殖的影响及机制的研究

目的研究二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)和花生四烯酸(arachidonic acid,AA)对人胆囊癌细胞GBC-SD增殖的影响,通过相关蛋白质指标,探讨可能的分子机制。方法 MTT法检测不同浓度(10~80 ug/mL)DHA和AA对胆囊癌细胞GBC-SD存活率的影响;免疫印迹检测β-catenin、c-myc、cyclinD1三种蛋白表达量的变化。结果当DHA浓度达到60 ug/mL时可明显抑制胆囊癌细胞GBC-SD存活并随着浓度升高抑制作用增强,呈剂量依赖(P<0.05),而相同浓度AA无明显作用。同时β-catenin、c-myc、cyclinD1三种蛋白表达量均下降。结论 DHA可抑制人胆囊癌细胞GBC-SD增殖,使β-catenin、c-myc、cyclin D1表达减少。     

二十二碳六烯酸对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究二十二碳六烯酸(DHA)对人胆管癌QBC 939细胞增殖、凋亡和周期的影响,并初步探讨可能的分子机制.方法 采用MTT法检测DHA和花生四烯酸(AA)对QBC 939细胞增殖的影响;流式细胞术检测DHA对QBC 939细胞凋亡和周期的影响;免疫印迹法检测DHA作用于QBC 939细胞后β -catenin、c-myc和cyclin D1三种蛋白表达量的变化.结果 作用浓度为80和100μg/mL的DHA可显著降低QBC 939细胞存活率,且呈一定的剂量、时间效应(P＜0.05),AA无明显作用.经80μg/mL DHA作用24 h后,QBC 939细胞早期凋亡率明显增加(P＜0.05),G0/G1期细胞显著增多(P＜0.05),G2/M、S期细胞减少(分别P＜0.01及P＜0.05).β-catenin、c-myc、cyclin D1表达量均下调.结论 DHA可抑制人胆管癌QBC939细胞增殖,促进其凋亡,部分作用机制可能是下调Wnt/β -catenin信号传导通路中β-catenin、c-myc和cyclin D1三种蛋白的表达.     

葛根素对成骨细胞体外增殖及Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

目的:葛根素对成骨细胞体外增殖及Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。方法:培养成骨细胞MC3T3-E1并分为对照组及10-6 mol/L PUE组、10~(-7) mol/L PUE组、10~(-8) mol/L PUE组,处理24小时后检测成骨细胞标志基因、凋亡基因、Wnt/β-catenin通路基因的mRNA表达量。结果:10-6 mol/L PUE组、10~(-7) mol/L PUE组、10~(-8) mol/L PUE组细胞ALP、Runx2、OC。Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt10b、β-catenin的mRNA表达量均显著高于对照组,caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12的mRNA表达量均显著低于对照组(P<0.05);且葛根素剂量越大,细胞中ALP、Runx2、OC、Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt10b、β-catenin的mRNA表达量越高,caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12的mRNA表达量越低(P<0.05)。结论:葛根素能够有效促进成骨细胞的增殖及Wnt/β-catenin通路的活化。     

miR-32-5p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究miR-32-5p对胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡的作用及机制,以及与含硬化蛋白结构域蛋白1(sclerostin domain-containing protein 1,SOSTDC1)的关系。方法 通过R语言分析筛出相比于正常胃组织,胃癌组织中有2倍以上表达差异的所有miRNA,同时预测差异2倍以上miRNA的靶基因,在其中确定研究目标miR-32-5p及SOSTDC1。采用qRT-PCR研究胃上皮细胞(GES-1)及胃癌细胞(MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-45)中miR-32-5p的表达水平。对MKN-45细胞进行转染,使其分为miR-NC mimics组(Lipofectamine 2000与miR-NC mimics共同转染)、miR-32-5p mimics组(Lipofectamine 2000与miR-32-5p mimics共同转染)、miR-NC inhibitor组(Lipofectamine 2000与miR-NC inhibitor共同转染)、miR-32-5p inhibitor组(Lipofectamine 2000与...     

BCL6B抑制结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移及其可能机制研究

目的：探讨B细胞淋巴瘤6B（B cell lymphoma 6 member B,BCL6B）对人结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移的影响及机制。方法：采用定量聚合酶链反应（quantitative polymerase chain reaction,qPCR）和Western blot检测和比较人正常肠上皮细胞FHC及人结直肠癌细胞HCT116中BCL6B的内源性表达;用脂质体法将pcDNA3.1-BCL6B转入HCT116细胞,同时设转入空载体的对照组;运用MTT法、流式细胞术、划痕愈合及Transwell试验检测BCL6B对癌细胞增殖、周期及迁移能力的影响;采用Western blot检测细胞中β-连环蛋白（β-catenin）、磷酸化的糖原合成酶激酶-3β（p-GSK3β）、细胞周期蛋白（CyclinD1）、基质金属蛋白酶-7（matrix metalloproteinase-7,MMP-7）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达。结果：qPCR和Western blot结果显示,与正常肠上皮细胞FHC相比,BCL6B在结直肠癌细胞HCT116中呈明显低表达（P=0.017）;转染pcDNA3.1-BCL6B后,细胞内BCL6B表达水平明显升高（P=0.000）。与阴性对照组相比,BCL6B组HCT116细胞4 d时的增殖活性降低41.79%（P=0.040）,且G1期细胞百分比增加62.09%（P=0.001）;同时,BCL6B组HCT116细胞48 h划痕愈合率及穿膜细胞数均明显减少（P=0.001）。Western blot结果表明,BCL6B组HCT116细胞内β-catenin、p-GSK3β、CyclinD1和MMP-7的表达水平较阴性对照组分别降低65.66%（P=0.028）、62.03%（P=0.001）、60.87%（P=0.021）和50.88%（P=0.030）,E-钙黏蛋白的表达升高63.64%（P=0.018）。结论：BCL6B可抑制结直肠癌细胞HCT116的增殖及迁移,其机制可能涉及Wnt/β-catenin通路的抑制。     

SOX7基因对肝癌细胞凋亡、氧化应激 及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨过表达SOX7对肝癌细胞凋亡、活性氧（ROS）水平及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法人肝癌Huh-7细胞分为空白组、空质粒pcDNA3.1组（Vector组）和pcDNA3.1-SOX7重组质粒组（pcDNA3.1-SOX7组）。转染48 h,Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡试剂盒、DCFH-DA法及Western blotting分别检测细胞凋亡率、ROS含量及SOX7、β-catenin、cyclin D1和cleaved-caspase 3蛋白表达。MTT法检测pcDNA3.1转染24 h、48 h和72 h的细胞活力。结果pcDNA3.1-SOX7重组质粒组SOX7蛋白表达明显高于空白组（P < 0.05）。与空白组比较,pcDNA3.1-SOX7组细胞活力及β-catenin和cyclin D1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡率、ROS含量及cleaved-caspase 3蛋白表达明显升高（P < 0.05）。结论过表达SOX7可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡机制与细胞内ROS水平提高及Wnt/β-catenin信号通路抑制有关。     

葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa增殖和诱导凋亡作用研究

目的:探讨葛根素对人子宫颈癌细胞株HeLa的作用及其机制。方法:取对数生长期的HeLa细胞分别用不同剂量的葛根素处理(0μmol,12.5μmol,25μmol,50μmol)。细胞培养48 h后,利用MTT法检测HeLa细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR法检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA水平。Western blotting法检测Wnt、β-catenin、Bax、Bcl-2、p53和p21表达水平。结果:葛根素成剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖,促进细胞凋亡,促进BaxmRNA表达,减少Wnt、β-catenin、Bcl-2 mRNA、p53和p21表达。结论:葛根素可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制与减少Wnt/β-catenin信号通路活化相关。     

Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的检测对甲状腺腺瘤患者及临床意义

本研究旨在探讨甲状腺腺瘤患者Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt-1,β-catenin的检测及临床意义。采用RT-PCR方法检测Wnt-1,β-catenin mRNA表达情况,采用Western blot和免疫组化方法检测Wnt-1,β-catenin蛋白表达情况。结果显示,与对照组相比,疾病组Wnt-1,β-catenin mRNA和蛋白的表达量均升高。肿瘤组织中,疾病组的Wnt-1蛋白表达阳性率和β-catenin蛋白表达阳性率均高于对照组。结果表明,Wnt-1表达与甲状腺腺瘤患者肿瘤直径密切相关。β-catenin表达也与甲状腺腺瘤患者肿瘤直径密切密切相关。甲状腺腺瘤患者Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt-1,β-catenin蛋白表达上调,且其表达与肿瘤生物学状态密切相关。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨枸杞多糖对压疮大鼠创面愈合的影响

目的 探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对压疮(pressure ulcer,PU)大鼠创面愈合及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 采用随机数字表法将18只SD大鼠分为3组,即空白组、模型组和LBP组。采用缺血再灌注损伤方法制备PU大鼠模型并给予LBP干预2周。观察各组大鼠治疗后第1天、3天、7天和14天创面的治愈率。创面组织取材进行HE染色病理检测。采用ELISA进行血清 肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平检测。Wnt1、β-catenin和GSK-3β的 mRNA和蛋白表达水平采用RT-qPCR方法和蛋白印迹方法进行检测。结果 在第3天、7天和14天时,LBP组大鼠创面愈合率明显高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果表明LBP可以减轻组织炎性浸润增加毛细血管数量。LBP治疗后与模型组比较可以有效降低血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。LBP治疗后与模型组比较,可以明显提高血清SOD和VEGF表达水平,降低MDA表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,LBP治疗后PU大鼠创面组织中Wnt1和β-catenin的mRNA及蛋白表达明显升高,而GSK-3β的mRNA及蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LBP在PU大鼠创面愈合过程中发挥了抗氧化和抗炎的特性,同时通过对Wnt/β-catenin信号通路的调控达到促进皮肤创面愈合的作用。     

血清剥夺抑制心肌细胞增殖、促进凋亡及对P53和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 研究血清剥夺对心肌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 将人心肌细胞AC16分为血清剥夺组（细胞在无胎牛血清的DMEM培养液中培养48 h）、对照组（细胞在含10%胎牛血清的DMEM培养液中培养48 h）。采用CCK-8法检测心肌细胞活力,EdU实验法检测细胞DNA合成水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平及线粒体膜电位变化,蛋白质印迹分析检测心肌细胞中caspase-9、Bcl-2、P53、增殖细胞核抗原（PCNA）、cyclin D1、β-连环蛋白（β-catenin）、Wnt5a、Axis抑制蛋白1（Axin1）、蓬乱蛋白2（Dvl2）、蓬乱蛋白3（Dvl3）、低密度脂蛋白受体相关蛋白6（LRP6）的表达水平。结果 CCK-8实验结果显示对照组的光密度值为1.93±0.01,血清剥夺组的光密度值为1.08±0.08,后者为前者的55.8%,两组比较差异有统计学意义（P<0.01）;细胞DNA合成受到抑制,血清剥夺组细胞DNA合成水平下降为对照组的65.6%,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。血清剥夺诱导了心肌细胞的凋亡,对照组凋亡率为（6.34±0.47）%,血清剥夺组凋亡率为（56.83±1.90）%,后者为前者的8.9倍,两组比较差异有统计学意义（P<0.01）;血清剥夺组心肌细胞线粒体膜电位下降,但与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。蛋白质印迹分析结果显示,血清剥夺促进了心肌细胞中caspase-9蛋白的表达,同时抑制了心肌细胞中Bcl-2、P53、PCNA、cyclin D1蛋白的表达;血清剥夺抑制了心肌细胞中β-catenin、Wnt5a、Axin1、Dvl2、Dvl3、LRP6蛋白的表达。结论 血清剥夺可抑制心肌细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

慢病毒介导的microRNA-19b表达对鼻咽癌细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号的影响

目的 研究慢病毒介导的microRNA-19b（miR-19b）表达对鼻咽癌细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号的影响。方法 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测鼻咽癌组织及人永生化鼻咽上皮细胞系NP69和鼻咽癌细胞系HONE1、5-8F和CNE1中miR-19b表达。构建miR-19b抑制表达（miR-19b inhibitor）、miR-19b过表达和无意义序列（Scrambled）的慢病毒载体（miR-19b mimics）,并设定空白组,转染鼻咽癌细胞系HONE1,qRT-PCR检测慢病毒转染细胞后细胞中miR-19b的表达;MTT法检测慢病毒转染细胞24、48和72?h后的细胞活力;流式细胞仪检测慢病毒转染细胞48?h的细胞凋亡率;Western blotting检测 ki-67、p53、β-连环蛋白（β-catenin）,Cyclin D1和C-myc的蛋白表达。结果 miR-19b在鼻咽癌组织及细胞中表达升高（P?<0.05）。Scrambled组与空白组比较,差异无统计学意义（P?>0.05）,与空白组比较,miR-19b inhibitor组miR-19b的表达降低,miR-19b mimics组miR-19b的表达升高（P?<0.05）;与空白组比较,miR-19b inhibitor组在48和72 h的细胞活力降低,而miR-19b mimics组在48和72?h的细胞活力升高（P?<0.05）;与空白组比较,miR-19b inhibitor组细胞凋亡率及p53的表达升高,ki-67、β-catenin、Cyclin D1和C-myc的表达降低,miR-19b mimics组细胞凋亡率及p53的表达降低,ki-67、β-catenin、Cyclin D1和C-myc的表达升高（P?< 0.05）。结论 抑制miR-19b表达可降低鼻咽癌细胞活力,诱导细胞凋亡及下调Wnt/β-catenin信号通路,而过表达miR-19b则反之。     

小RNA干扰MMP-2基因表达对结直肠癌细胞生物学特性的影响

目的探讨小RNA干扰基质金属蛋白酶2（MMP-2）基因表达对结直肠癌细胞生物学特性的影响。方法收集结直肠癌病人的结直肠癌组织及正常的癌旁组织,Western blotting检测MMP-2表达水平。取结直肠癌细胞SW620作为对照组,将MMP-2 siRNA、siRNA control转染至结直肠癌细胞中,Western blotting检测转染48 h后MMP-2 siRNA组、siRNA control组和对照组细胞中MMP-2水平,MTT法检测各组细胞存活情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡变化,Western blotting检测各组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、β-连环蛋白（β-catenin）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、下游靶基因C-myc、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）水平。结直肠癌细胞与Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535作用后,测定抑制剂组和未处理组（不加抑制剂）细胞增殖、凋亡变化,同时检测细胞中Bcl-2、β-catenin、Bax、C-myc、cyclin D1蛋白变化。结果结直肠癌组织中MMP-2蛋白表达水平明显高于癌旁组织（P < 0.01）。MMP-2 siRNA组MMP-2水平均低于对照组和siRNA control组（P < 0.05）,细胞存活率低于对照组（P < 0.05）,细胞凋亡率均高于对照组和siRNA control组（P < 0.05）。Bcl-2、β-catenin、C-myc、cyclin D1水平均低于对照组和siRNA control组（P < 0.05）,Bax水平均高于对照组和siRNA control组（P < 0.05）。Wnt/β-catenin信号通路抑制剂作用后,抑制剂组细胞存活率低于未处理组（P < 0.05）,细胞凋亡率高于未处理组（P < 0.05）,Bcl-2、β-catenin、C-myc、cyclin D1水平均明显低于未处理组（P < 0.01）,Bax水平明显高于未处理组（P < 0.01）,与转染MMP-2 siRNA的结直肠癌细胞一致。结论MMP-2在结直肠癌组织中表达上调,抑制MMP-2的结直肠癌细胞增殖受到抑制,凋亡增多,其作用机制与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路对卵巢癌细胞CAOV3增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖。方法 通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验选择适当的淫羊藿苷浓度并探讨其对卵巢癌细胞CAOV3生长、增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用荧光实时定量PCR(RT-PCR)法检测β-catenin及Wnt信号通路靶基因c-myc和cyclinD1 mRNA的表达水平,利用Western blot法检测β-catenin、c-myc和cyclinD1的蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,淫羊藿苷能显著抑制CAOV3的生长增殖;倒置显微镜下发现淫羊藿苷能使CAOV3细胞形态发生明显变化;RT-PCR检测结果表明淫羊藿苷可降低β-catenin的mRNA的表达以及抑制Wnt信号通路靶基因c-myc和cyclinD1 mRNA的表达;Western blot法检测结果表明淫羊藿苷可下调β-catenin、c-myc和cyclinD1的蛋白表达。结论 淫羊藿苷可以抑制人卵巢癌细胞CAOV3增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现的。     

脉冲电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨脉冲电磁场（pulsed electromagnetic fields, PEMFs）对大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）增殖、成骨分化以及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 将培养的第3代大鼠BMSCs分为3组。3个组均以LG-DMEM完全培养基培养1 d,待细胞贴壁后更换新鲜培养基,对照组不做干预处理; PEMFs组进行8 Hz、3.8 mT的PEMFs干预,每天40 min,持续21 d;成骨诱导基(OM)组加入成骨诱导剂,不予磁场干预。采用MTT法测定增殖活性;碱性磷酸酶（ALP）、茜素红S染色进行成骨分化鉴定;利用实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术检测Wnt/β-catenin信号通路及成骨分化相关基因的表达。结果 相较对照组,成骨诱导剂在干预第7、14、21 d可提高BMSCs的增殖活性（P<0.05）;PEMFs促增殖作用不明显。在BMSCs分化方面,PEMFs组及OM组ALP、茜素红S染色阳性强度均高于对照组（P<0.05）。定量RT-PCR结果显示,PEMFs组及OM组Wnt1、Wnt3a、LRP5、β-catenin、BMP-2、Runx2、ALP、OC mRNA的表达相较于对照组在相应时间点均有所上调（P<0.05）。PEMFs组各检测结果较OM组低,但趋势基本一致。结论 PEMFs在8 Hz、3.8 mT条件下可促进BMSCs的成骨分化,这可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。