2011-2012年杭州市肠道沙门菌临床分离株的分子型别分析

目的研究2011-2012年杭州市肠道沙门菌临床分离株的型别,了解本地菌株分子流行病学特征。方法对66株肠道沙门菌临床分离株进行血清分型和多位点序列分型(MLST)。对其中主要血清型:鼠伤寒、甲型副伤寒、萨雷甲尼和肠炎沙门菌菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型。结果分布于21个血清型的66株沙门菌分成26个ST型别。发现一株纽波特沙门菌为新型ST1690。菌株血清型与MLST型别数据库中所对应的血清型符合率为100.00%。9株甲型副伤寒沙门菌的PFGE带型完全一致(P7型),与先前杭州流行菌株有差异(P1-P6型)。6株肠炎沙门菌分成4个PFGE型,型间最小相似性为92.70%。13株鼠伤寒沙门菌分为11个PFGE型,型间最小相似性为71.70%。7株萨雷甲尼沙门菌分成4个PFGE型别,型间最小相似性为91.00%。结论近年杭州腹泻病人中流行的肠道沙门菌菌株主要血清型为鼠伤寒、甲型副伤寒、萨雷甲尼和肠炎等。甲型副伤寒沙门菌菌株在杭州出现了新PFGE型别。MLST数据可以对沙门菌血清学鉴定提供一定的帮助。     

杭州市2002-2008年甲型副伤寒沙门菌分子分型研究

目的研究2002-2008年杭州市甲型副伤寒疫情分离株的亲缘性,并探讨脉冲场凝胶电泳（PFGE）、多位点序列分型（MLST）在甲型副伤寒沙门菌分子分型中的应用。方法对404株甲型副伤寒沙门菌运用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分子分型,并用K-B法测定菌株抗生素敏感性。挑选9株甲型副伤寒沙门菌进行多位点序列分型（MLST）以及稳定性试验。结果 404株甲型副伤寒沙门菌可分为6个PFGE型和4个耐药型,P1型和P2型属于同一个克隆系,该克隆系菌株占试验菌株数的99%,分离自临安市的310株菌均为P1型,分离自杭州市西湖区的主要菌型是P2型和P1型。9株甲型副伤寒沙门菌根据SucA位点的差异可分为2个MLST型。结论杭州市2002-2008年的甲型副伤寒疫情由同一克隆系的菌株主导。PFGE、MLST分型方法各有侧重,可互为补充。     

北京市40株肠炎沙门菌多重耐药和分子分型研究

目的分析2009-2010年北京市肠炎沙门菌多重耐药和脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electropho-resis,PFGE）分子分型。方法对2009-2010年北京市肠道门诊监测系统分离到的40株肠炎沙门菌进行生化鉴定、血清分型并运用纸片法进行药敏检测,并采用PFGE进行分子分型。结果发现40株肠炎沙门菌中,32株多重耐药菌株,其中4～5种抗生素耐药27株（84.38%）,10种抗生素耐药1株（3.13%）;可分为14个PFGE带型,其中4个PFGE型的菌株数超过1株。结论北京市肠炎沙门菌分离株多重耐药性比较严重,PFGE分子型别较多,且存在差异明显的多个克隆系,但同一PFGE型菌株的多重耐药谱较为接近。     

多位点序列分型技术在沙门菌鉴定中的应用研究

目的:探讨多位点序列分型技术(Multilocus sequence typing,MLST)在沙门菌鉴定中的应用。方法:对1株分离自腹泻病人的沙门菌疑似菌株用肠杆菌科鉴定试条API 20E进行生化鉴定并进行血清学鉴定,应用MLST分型方法对该菌株分子分型。结果:API 20E鉴定为沙门菌属,Vi因子血清不凝集,O因子血清A-F O多价不凝集。该菌的MLST型别为ST64型,提示为鸭沙门菌。结论:MLST分子分型技术有助于沙门菌的鉴别。     

多位点序列分型和脉冲场凝胶电泳在肠炎沙门菌分子分型的比较

目的 比较多位点序列分型技术和脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术在肠炎沙门菌菌株间分型的分辨率。方法 分别建立肠炎沙门菌的6个管家基因thrA、pure、sucA、aroC、hemD、dnaN和一个特异性的DNA标记Sdf Ⅰ的多位点序列分型技术，及以寡切点的XbaⅠ、SpeⅠ作为限制性内切酶的PFGE方法，并应用上述方法对食品中的分离株进行分型，比较两种方法的分辨率。结果 PFGE可以将50株肠炎沙门菌分为11个型。并且通过双酶系统的双重PFGE分型，还可以将PFGE型别再精细划分为亚型；MLST则揭示了在同一血清型内部，各菌株之间的管家基因碱基序列高度保守，而在沙门菌不同血清型的核苷酸序列之间，则分别存在不同数量的碱基差异。即MLST方法只能用于血清型之间，不能在血清型内部进行分型研究。结论 与MLST比较，PFGE方法在肠炎沙门菌的分型方面显示了比较高的分辨率。     

贵州省动物性食品中沙门菌耐药及分子特征相关性研究

目的 了解贵州省动物性食品中沙门菌的耐药和分子型别特征及二者相关性,为我省食源性沙门菌感染及防控提供科学依据。方法 对贵州省9个市(州)2017—2021年市售动物性食品中分离的146株沙门菌进行血清学分型,采用微量肉汤稀释法测定菌株对15种抗生素的耐药性,脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)和多位点序列分型(multi-locus sequence typing, MLST)对菌株进行分子分型。结果 146株沙门菌分出27种血清型,以鼠伤寒(31/146,21.2%)、德尔卑(26/146,17.8%)、肠炎沙门菌(16/146,11.0%)为优势血清型。146株菌耐药率为79.5%(116/146),多重耐药率达60.3%(88/146),共有72种耐药谱。对氨苄西林、四环素耐药率分别达61%、64.4%。129株菌经PFGE共分出52个聚类76种带型,相似度在53.5%～100%,146株菌经MLST共检出29种ST型,以ST40(26/146,17.8%)、ST34(17/146,11.6%)、ST11(16/146、1...     

一起肠炎沙门菌食物中毒实验室检测及溯源分析

目的对一起沙门菌引起的食物中毒进行病原菌检测及溯源分型分析。方法常规分离沙门菌,对分离到的肠炎沙门菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果 14名食物中毒学生标本检出肠炎沙门菌4株;57名食堂工作人员肛拭标本检出肠炎沙门菌6株、纽波特沙门菌1株;9份冷冻预包装食品中检出肠炎沙门菌1株。对11株肠炎沙门菌进行脉冲场凝胶电泳分型,学生、食堂工作人员检出的10株菌株PFGE条带完全一致,与1份冷冻预包装食品中检出的肠炎沙门菌的PFGE聚类分析的同源性为86%。结论这起食物中毒是由肠炎沙门菌引起,通过PFGE分型分析,本次食物中毒与预包装食品肠炎沙门菌污染无关联。PFGE可有效应用于食物中毒溯源分析及分子流行病学研究。     

上海市长宁区2017年肠炎沙门菌多重耐药和分子分型研究

【目的】了解上海市长宁区2017年肠炎沙门菌的分子分型结果及抗菌药物耐药情况。【方法】对2017年上海市长宁区的感染性食源性病原菌监测标本进行沙门菌的分离鉴定、血清分型,检出33株肠炎沙门菌,运用国家致病菌识别网技术手册(2017年)的分子分型方法进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型,使用微量肉汤稀释法进行抗菌药物耐药性的测定。【结果】33株肠炎沙门菌共分为11种带型,优势带型集中在Clade1中,共计30株。耐2种及2种以上抗菌药物的有22株,耐6种及6种以上抗菌药物的19株,并出现2株四代头孢全耐药。【结论】长宁区肠炎沙门菌多重耐药现象比较普遍,PFGE型别差异较小,相同PFGE型别的菌株多重耐药表型相近。     

深圳市某酒店两起沙门菌食物中毒的溯源分析

目的对同一酒店先后发生的两起食物中毒事件进行病原学检测及溯源分析,明确此次食物中毒事件的传染源和传播途径。方法根据GB 4789—2010对采集的102份样品进行分离培养、生化鉴定和血清学分型,运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对分离鉴定符合的沙门菌进行分子分型,用Bio Numerics软件对图谱进行聚类分析。结果从两起食物中毒事件患者的肛拭子中分离出8株肠炎沙门菌,从厨师肛拭子中分离出2株肠炎沙门菌。对此10株肠炎沙门菌进行API细菌鉴定,结果显示这10株肠炎沙门菌的生化特征均一致,进一步的PFGE实验结果显示分子分型条带完全一致。结论这两起接连发生的食物中毒事件是由同一肠炎沙门菌引起的,通过PFGE分型技术可以直观的判断所分离沙门菌的亲缘关系,为现场流行病学调查和溯源分析提供可靠依据。     

应用脉冲场凝胶电泳对伤寒沙门菌分型研究

目的:运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对湖北2008年分离的沙门菌菌株进行分析,探讨湖北沙门菌的分布、流行及变异情况。方法:对分离的沙门菌利用全自动生化分析系统、血清分型、及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子生物学技术进行研究。结果:18份测试株用XbaI酶切后产生3个带型。结论:通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)全基因DNA指纹图谱分析,可追溯其同源性。通过18株伤寒菌株的PFGE分型图谱分析,其中相似系数100%15份,占83.33.%,可确认为相同病原菌感染。由此说明PFGE是一种灵敏、可靠的研究沙门菌分子流行病学基因分型方法。     

上海市C群沙门菌暴发菌株鉴别诊断研究

目的:C群沙门菌血清型的鉴别诊断研究。方法:对2007年上海市黄浦区的C群食源性暴发沙门菌鉴定中存在与泰国产沙门菌分型血清H相因子有交叉凝集的菌株使用丹麦(SSI)血清参比;分析菌株的抗生素耐药性和脉冲凝胶电泳(PFGE)图谱,选择部分猪霍乱和汤卜逊沙门菌腹泻株进行多位点基因序列分析(MLST)分子分型;通过PluseNetChina非伤寒沙门菌数据库图谱比对上海的汤卜逊暴发菌株与重庆市C群沙门菌暴发菌株的分子型。结果:2007年黄浦区报告8株猪霍乱暴发菌株经丹麦血清分型鉴定为汤卜逊沙门菌;2007年的4株猪霍乱和5株汤卜逊沙门菌经丹麦SSI血清复核鉴定均为汤卜逊沙门菌ST26型;汤卜逊沙门菌暴发菌株对6种抗生素的耐药率均为100%,耐药谱与散发株显著不同;2007年重庆市的多起食源性暴发案例中的C群沙门菌经复核鉴定亦为汤卜逊沙门菌ST26型,并与上海的暴发菌株在遗传学上存在高度同源。结论:泰国血清的H相因子间存在交叉凝集现象。推测2007年上海市发生的食源性暴发病例可能由输入性汤卜逊沙门菌ST26型多重耐药克隆株引起。     

两起伤寒沙门菌感染暴发流行病原的相似度研究

目的 应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对两起由伤寒沙门菌引起的聚集性暴发流行中所分离到的伤寒沙门菌进行分离鉴定和基因分型,对其病原进行同源性分析和分子流行病学探讨,为科学防治提供实验室检测依据. 方法 用传统方法对11株伤寒沙门菌菌株进行生化、血清学复核鉴定.对确认的伤寒沙门菌菌株,采用脉冲场凝胶电泳技术分析电泳酶切指纹图谱. 结果 11株伤寒沙门菌经PFGE,根据其条带的差异可分为3个PFGE型别. 结论 两起伤寒沙门菌感染为不同亚型所致.     

中国2000-2008年间甲型副伤寒沙门菌脉冲场凝胶电泳和多位点序列分析

目的 分析我国2000-2008年间甲型副伤寒沙门菌流行株的分子分型及病原进化上的特征.方法 应用以Spe Ⅰ为限制性内切酶的脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)方法 和基于9个管家基因位点(aroC、thrA、hisD、purE、sucA、dnaN、hemD、adk和purA)的多位点序列分析(multilocus sequence typing,MLST)分型方法 ,对我国2000-2008年间分离自10个地区的118株甲型副伤寒沙门菌流行株进行分析.结果 应用PFGE方法 将118株甲型副伤寒沙门菌分为32个型,其中包含5株以上的优势PFGE带型有5种.而应用MLST方法 ,所有菌株只分出了2个序列分型(sequence type,ST),各菌株的管家基因序列高度保守,呈现高度克隆化.结论 中国2000-2008年间甲型副伤寒沙门菌菌株应用MLST这种分型方法 很难区分,MLST不适于甲型副伤寒沙门菌的暴发调查和流行病学监测.目前中国的甲型副伤寒是由高度克隆化的菌株引起全国范围的扩散 流行.随着年份的变迁,也积累了散在的变异.     

肠炎沙门菌可变数目串联重复序列位点用于多位点可变数目串联重复序列分型分析的评价

目的 评价不同肠炎沙门菌可变数目串联重复序列(VNTR)位点用于多位点可变数目串联重复序列(MLVA)分型的可行性.方法 选取已报道使用的肠炎沙门菌11个VNTR位点,对中国不同时间和地区分离的16株菌进行初步评价,选取具有单一扩增条带的位点进行104株肠炎沙门茵的MLVA分型分析.对这些菌株同时进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,比较MLVA分型方法与PFGE分型方法对菌株分型能力的强弱.结果 初筛得到7个VNTR位点用于扩大菌株的分析,这些位点将104株菌分为16个MLVA型别,D值为0.7222,这些菌株同时被分为22个PFGE型别,D值为0.7974.对两种方法各自所分的最大组包含的菌株进行比较,发现PFGE具有更强的分辨能力;从频数分布看,PFGE方法分型结果比较分散,MLVA分型较为集中.结论 用于国际肠炎沙门菌分型具有扩增多态性的VNTR位点在国内分离株中并不都具有多态性结果,在MLVA方法学建立中应选择更多的VNTR位点进行广泛的筛选才有利于国际实验室间的方法的统一.     

肠炎沙门菌可变数目串联重复序列位点用于多位点可变数目串联重复序列分型分析的评价

目的 评价不同肠炎沙门菌可变数目串联重复序列(VNTR)位点用于多位点可变数目串联重复序列(MLVA)分型的可行性.方法 选取已报道使用的肠炎沙门菌11个VNTR位点,对中国不同时间和地区分离的16株菌进行初步评价,选取具有单一扩增条带的位点进行104株肠炎沙门茵的MLVA分型分析.对这些菌株同时进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,比较MLVA分型方法与PFGE分型方法对菌株分型能力的强弱.结果 初筛得到7个VNTR位点用于扩大菌株的分析,这些位点将104株菌分为16个MLVA型别,D值为0.7222,这些菌株同时被分为22个PFGE型别,D值为0.7974.对两种方法各自所分的最大组包含的菌株进行比较,发现PFGE具有更强的分辨能力;从频数分布看,PFGE方法分型结果比较分散,MLVA分型较为集中.结论 用于国际肠炎沙门菌分型具有扩增多态性的VNTR位点在国内分离株中并不都具有多态性结果,在MLVA方法学建立中应选择更多的VNTR位点进行广泛的筛选才有利于国际实验室间的方法的统一.     

脉冲场凝胶电泳在沙门菌食物中毒溯源中的应用研究

目的用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法,追踪某次沙门菌食物中毒的来源,确定中毒食品,快速控制传染源。方法对食物中毒中分离的肠炎沙门菌用XbaI酶切总DNA,用脉冲场凝胶电泳（PFGE）法进行分子分型,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱进行电子化数据分析,绘出聚类分析图。结果脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型方法对患者样本分离的242株肠炎沙门菌进行分子分型,型别基本一致,表明是同一批食物中毒;从三文治等蛋糕制品中分离的9株菌株与患者分离株图谱完全一致,表明此次食物中毒的源头为某蛋糕厂生产的三文治等食品。结论脉冲场凝胶电泳技术适用于菌株的同源性的分析和传染源的追踪。     

2008—2013年北京市17株伤寒和副伤寒沙门菌耐药和分子分型研究

目的分析2008—2013年北京市17株伤寒、副伤寒沙门菌耐药及分子分型。方法对2008-2013年通过对北京市肠道门诊监测系统分离到的17株伤寒、副伤寒沙门菌进行生化鉴定、血清分型并运用纸片法进行药敏检测;利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果 17株伤寒、副伤寒沙门菌对三代头孢菌素类药物头孢他啶敏感率达100%,头孢噻肟和头孢曲松敏感率均为93.75%,对氟喹诺酮类药物环丙沙星敏感率为93.75%,萘啶酸耐药率达31.25%。其中16株伤寒、副伤寒沙门菌可分为15种PFGE带型,带型分布较分散。结论北京市伤寒、副伤寒沙门菌分离株对3代头孢类抗生素及环丙沙星敏感;PFGE分子型别较多,无聚集性。     

脉冲场凝胶电泳在沙门菌食物中毒调查检验中的应用

[目的]为肠炎沙门菌（Salmonella enteritidis）食物中毒的判定提供实验室检测依据。[方法]采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对1起食物中毒病人分离株和福建省以往分离的肠炎沙门菌株进行分子分型。[结果]不同病人的6株肠炎沙门菌PFGE结果均为同一型别,与往年分离的病人分离株的型别有异。[结论]PFGE分型技术可用于肠炎沙门菌的准确分型,有助于食物中毒的流行病学分析、溯源、判定和控制。     

辽宁省肠炎沙门菌耐药性及分子分型特征

目的分析近年辽宁省腹泻病例中检出的肠炎沙门菌血清型、耐药性及分子分型。方法对辽宁地区50株沙门菌临床分离株进行血清型分型;采用微量肉汤法,进行16种抗菌药物的药敏试验;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对选取的16株肠炎沙门菌株进行基因分型。结果肠炎沙门菌是沙门菌中的优势血清型。所有菌都对链霉素耐药。16株肠炎沙门菌分成7种型别,其中6个PFGE型别间仅有1条~3条带的差异,相似度在78.68%~100%,菌株间具有很近的亲缘关系。结论辽宁省感染性腹泻病例中沙门菌感染率较低。PFGE分子分型较多,无明显聚集性。     

舟山市2018—2020年肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌 PFGE分子分型特征分析

目的 了解舟山市肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型特征,为聚集性暴发事件溯源追踪提供依据。方法 用Pulse Net网络实验室标准方法对肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌进行PFGE分子分型,并进行聚类分析。结果 舟山市2018—2020年分离到106株肠炎沙门菌和60株鼠伤寒沙门菌,性别比1.1∶1和0.9∶1,集中于每年6～8月(78.3%和80.0%),主要以0～5岁年龄组居多(37.7%和66.7%)。106株肠炎沙门菌分12种带型,菌株间条带相似度84.0%～100.0%;优势带型为P1、P6和P7。60株鼠伤寒沙门菌分53种带型,菌株间条带相似度56.0%～100.0%;各带型包含1～4株菌,B1为优势带型。结论 舟山市肠炎沙门菌PFGE分子分型有明显优势带型,遗传同源性较高;鼠伤寒沙门菌PFGE分子型别众多,条带分散,呈遗传多样性。