Livin靶向RNA干扰对人胃癌细胞SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Livin靶向RNA干扰对SGC7901细胞株生物学特性的影响,探索胃癌基因治疗的新途径。方法设计和构建Livin特异性的siRNA真核表达载体,转染SGC7901细胞,应用RT-PCR分析LivinmRNA的表达情况,采用MTT法检测细胞的生长状况,通过流式细胞仪进行细胞凋亡的检测。结果构建真核表达载体p-siRNA1并转染SGC7901细胞后,RT-PCR结果显示2条Livin siRNA真核表达质粒均能有效抑制Livin mRNA的转录表达,干扰组细胞与未转染组细胞比较,生长受到明显抑制,凋亡率明显增加。结论成功构建了Livin干扰真核表达载体,siRNA重组体能有效抑制人胃癌细胞Livin mRNA表达,并抑制胃癌细胞生长,促进其凋亡。     

共轭亚油酸对人胃腺癌细胞侵袭及转移相关基因表达的影响

目的 研究c9,t11－共轭亚油酸（CLA）对人胃腺癌细胞（SGC－7901）侵袭能力的影响,探讨其抑制肿瘤转移的可能机制。方法 用重组基底膜侵袭实验评价癌细胞侵袭能力;用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测SGC－7901细胞中组织基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）－1、TIMP－2和nm23-H1mRNA的表达。结果 在200、100和50μmol/L浓度时,c9,t11-CLA对SGC－7901细胞侵袭重组基底膜的抑制率分别为53.7%、40.9%和29.3%。c9,t11-CLA可诱导SGC－7901细胞中TIMP－1、TIMP－2和nm23-H1mRNA的表达。结论 c9,t11-CLA抑制SGC-7901细胞侵袭重组基底膜。c9,t11-CLA的抗侵袭活性与诱导肿瘤细胞中TIMP－1、TIMP－2和nm23-H1mRNA的表达等有关。     

miR-100抑制胃癌细胞裸鼠移植瘤的生长及机制的研究

目的：探究miR-100抑制胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤的生长及机制。方法将实验裸鼠随机分成miR-100组和阴性对照组,将用GFP-miR-100或GFP-miR-negative control 转染的胃癌SGC7901细胞通过裸鼠腋窝注射分别转染到两组裸鼠中去,建立人胃癌SGC7901胃癌miR-100模型和阴性对照组模型,通过GFP图像观察体内miR-100的表达情况,HE染色观察肺转移及基质浸润情况,免疫组织化学和western blot检测miR-100靶基因蛋白表达情况。结果 miR-100在miR-100组裸鼠中稳定地高表达;在阴性对照组的8只裸鼠中,有6只裸鼠的肿瘤细胞浸润肿瘤周围的基质,miR-100组的9只裸鼠中,只有2只出现了基质浸润,其余7只裸鼠中,肿瘤结节被周围的纤维组织完好地包绕。 western blot和免疫组织化学显示在裸鼠异种移植肿瘤中,miR-100显著抑制了ZBTB7A 蛋白的表达。结论 miR-100通过抑制ZBTB7A靶点基因抑制胃癌细胞裸鼠移植瘤的转移和生长。     

异鼠李素抑制人胃癌细胞表皮生长因子受体途径

目的 通过体外试验研究异鼠李素抑制人胃癌SGC-7901细胞生长的表皮生长因子受体(EGFR)信号途径.方法 分别用0.8×10-4,1.2×10-4,2.4×10-4mol/L的异鼠李素、10%的RPMI 1640、0.048mol/L氟尿嘧啶处理SGC-7901细胞24h后收集细胞,计活细胞数,计算生长抑制率;用Lipofect转染法将EGFR或生长因子受体结合蛋白2(grb2 antisense)分别转入胃癌SGC-7901细胞中,用RT-PCR法分别检测EGFR和grb2 mRNA的表达水平;采用磷酸钙-DNA沉淀转染法测定AP-1活性.结果 0.8×10-4 1.2×10-4,2.4 x 10-4 mol/L异鼠李素和0.048mol/L氟尿嘧啶处理24h后对细胞生长的抑制率分别为55.06%,62.03%,66.46%.70.25%.3个剂量异鼠李素处理细胞后EGFR、grb2 mRNA表达水平、AP-1活性均明显下降,且随着剂量的增加而下降.EGFR、grb2 antiense分别转入SGC-7901细胞后,用2.4×10-4mol/L异鼠李索处理24h,阻断EGFR后转染细胞grb2的表达和AP-1活性比未转染的分别提高了62.79%和60%(P<0.05);阻断grb2后转染细胞AP-1活性比未转染的提高36%(P<0.05),而EGFR mRNA表达水平无显著变化(P>0.05).结论 异鼠李素是通过抑制EGFR信号转导途径的激活抑制人胃癌SGC-7901细胞生长.     

β-紫罗兰酮抑制SGC-7901细胞潜在的转移作用

目的观察β紫罗兰酮对人胃腺癌细胞(SGC7901)潜在转移的影响。方法采用细胞生长曲线,酶谱法和RTPCR技术,我们检查了不同浓度(25、50、100和200μmolL)β紫罗兰酮对SGC7901细胞生长,IV明胶酶的活性(MMP2和MMP9),nm23H1基因和金属蛋白酶抑制剂(TIMP1和TIMP2)在SGC7901细胞表达情况。β紫罗兰酮处理时间为24小时和48小时。结果β紫罗兰酮可抑制SGC7901细胞增殖。用不同浓度的β紫罗兰酮处理SGC7901细胞8天的抑制率分别为25.93%、28.21%、74.36%和90.11%。β紫罗兰酮作用于SGC7901细胞的IC50值为89μmolL。β紫罗兰酮不影响SGC7901细胞的基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的活性。然而,β紫罗兰酮可明显地促进nm23H1基因、TIMP1和TIMP2的表达,呈现剂量-反应关系。结论β紫罗兰酮可抑制SGC7901细胞的生长和增殖。可能通过上调nm23H1,TIMP1和TIMP2来影响SGC7901细胞潜在的转移。然而,β紫罗兰酮对SGC7901细胞的IV型明胶酶活性没有影响,因而,β紫罗兰酮抑制SGC7901细胞的转移需要进一步研究。     

靶向GCSsi RNA表达载体与胃癌细胞耐药性

目的构建葡萄糖神经酰胺合成酶（GCS）小干扰RNA（SiRNA）表达载体,观察其对胃癌耐药细胞（SGC7901/VCR）GCS基因表达和耐药性的影响。方法根据siRNA的设计原则,针对人GCS的mRNA序列设计并合成编码siRNA的寡核苷酸序列,并将其克隆入SiRNA的表达载体,构建重组质粒,将重组质粒转染胃癌长春新碱（VCR）耐药细胞SGC7901/VCR,通过蛋白印迹实验（WB）等方法检测转染细胞GCS的表达水平,采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测细胞耐药情况。结果构建的GCS siRNA表达载体经限制性酶切分析,证实释放出的片段大小与预期结果一致;转染SGC7901/VCR细胞后,可使细胞中GCS的表达受抑制,并使细胞对VCR的敏感性增加。结论GCS siRNA表达载体的成功构建及其对GCS表达的抑制和细胞耐药的逆转,使其可能成为肿瘤基因治疗的一种新手段。     

莱菔硫烷抑制人胃癌SGC7901细胞增殖及其诱导凋亡分子流行病学研究

目的研究莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）在体外对人胃癌细胞SGC7901的增殖抑制作用,探讨SFN诱导细胞凋亡的分子机理。方法以SFN和人胃癌细胞SGC7901为研究对象。采用四甲基偶氮唑盐比色法观察不同浓度SFN对细胞增殖的抑制影响,AO/EB双重染色法与透射电镜进行形态学变化观察,琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡状态下的DNA变化,RT-PCR检测细胞p21基因mRNA表达。结果 50～150μmol/L浓度范围的SFN对SGC7901细胞的增殖有明显的抑制作用。AO/EB染色结果显示SFN诱导SGC7901细胞凋亡发生形态学上改变。DNA琼脂糖凝胶电泳显示细胞经SFN（100μmol/L、150μmol/L）处理24 h后可见＂梯形＂DNA碎片条带。RT-PCR结果显示50μmol/L SFN能够诱导p21基因mRNA的表达增强。透射电镜观察到SFN作用SGC7901细胞48 h后出现核固缩等早期凋亡镜下改变。结论 SFN能抑制SGC7901细胞的增殖并诱导SGC7901细胞凋亡,可在翻译和转录水平上调p21的表达,其分子机理可能与调控p21基因存在关系。     

染料木黄酮对胃癌细胞侵袭转移的抑制作用

目的:研究染料木黄酮(genistein)对胃癌细胞侵袭转移的影响,并初步探讨其作用机制。方法:运用MTT法观察染料木黄酮对人胃癌细胞系SGC-7901细胞粘附能力的影响;用BoydenChamber膜侵袭系统,观察对SGC-7901游走和侵袭的影响;免疫细胞化学法观察对SGC-7901细胞TGF-β1表达的影响。结果:染料木黄酮作用后,SGC-7901细胞粘贴率降低(P<0.05),游走穿膜细胞数(83±4)和侵袭穿膜细胞数(35±3)均明显低于对照组(114±7,60±4,P<0.05),并且能降低TGF-β1的表达。结论:染料木黄酮能有效抑制胃癌侵袭转移。其作用机制可能与通过降低TGF-β1的表达,抑制胃癌细胞异质粘附、运动能力有关。     

PI3K/Akt信号通路对胃癌细胞SGC7901细胞化疗效果的影响

目的运用磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3-K)LY294002[2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮]作用于胃癌细胞系SGC7901,探讨抑制PI3K/Akt信号转导通路对胃癌细胞化疗敏感性的影响。方法采用MTT比色法,流式细胞术检测5-FU、DDP及ADM单独或联合PI3K抑制剂LY294002对人胃癌细胞SGC7901的抑制率、凋亡率。并分析单独及联合应用LY294002对SGC7901细胞周期的影响。Western-blot检测单独及联合化疗药后P-Akt蛋白在SGC7901细胞中的表达水平。结果单独使用化疗药5-FU、DDP及ADM均可抑制SGC7901细胞增殖、诱导其凋亡。当化疗药与抑制剂联合应用,对细胞的抑制作用明显增强,促凋亡作用增强,与对照组比较(P0.05)。细胞周期同步分析显示,单独用药均可将SGC7901细胞阻滞于G0/G1期。联合使用抑制剂使处于G0/G1期细胞增加。Western blot显示化疗药上调P-Akt蛋白的表达,联合使用抑制剂后SGC7901细胞P-Akt蛋白的表达与未使用抑制剂比较减弱,差异有统计学意义(P0.05)。结论阻断PI3K/Akt信号通路可提高化疗药5-FU、DDP及ADM对胃癌细胞株SGC7901的抑制率,凋亡率并使阻滞于G0/G1期细胞增多;LY294002通过阻断PI3K/Akt信号通路,抑制P-Akt蛋白表达,增强化疗药的敏感性;LY294002阻断PI3K/Akt信号通路对5-FU、DDP、ADM治疗胃癌有一定的协同或增强作用。     

联合转染p53与血管生成抑素基因对人胃癌细胞系SG7901生长的影响

目的探讨联合转染p53和血管生成抑素(AS)基因对人胃癌细胞系SG7901生长的影响。方法用脂质体转染法分别将p53、AS基因、p53和AS基因转染人胃癌细胞系SG7901。以RT-PCR法检测转染后细胞目的基因的表达,通过细胞集落形成实验、MTT生长曲线、细胞周期检测观察其生物学特性变化。结果p53或AS基因均能抑制转染细胞的生长,而联合转染两种基因的细胞生长抑制更明显。结论p53和AS基因具有协同抑制恶性肿瘤细胞生长作用,提示联合多种基因可能有利于恶性肿瘤的基因治疗。     

miR-24对胃癌细胞株BGC-803及SGC-7901凋亡和增殖的影响

目的 探讨在两株胃癌细胞株BGC-823及SGC-7901中抑制内源性miR-24的表达后对细胞凋亡和增殖的作用.方法 使用INTERFERin转染试剂将锁核苷酸标记的反义核酸miR-24-ASO转染进入胃癌细胞株,使用倒置荧光显微镜观察细胞生长变化,流式细胞计检测细胞凋亡的比例,然后使用CCK-8试剂盒对细胞增殖情况进行检测.结果 转染miR-24-ASO的BGC-803细胞和SGC-7901细胞相对于转染内参的凋亡水平分别增加了约25倍和21倍左右.转染了miR-24-ASO抑制内源性miR-24的表达之后细胞的增殖能力相对于转染阴性对照的细胞株的增殖能力均明显降低.结论 抑制内源性miR-24的表达可以诱导胃癌细胞的凋亡并导致胃癌细胞增殖能力的降低.miR-24调控了胃癌细胞的增殖和凋亡过程.揭示了miRNA在胃癌发生过程中的调控机制,并为胃癌的治疗提供了良好的应用前景.     

MMP-9调控绒毛外滋养细胞sFasL表达的研究

目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在绒毛外滋养细胞对可溶性Fas配体(sFasL)表达的调控。方法:化学合成针对MMP-9的siRNA,通过脂质体转染绒毛外滋养细胞株(TEV-1),运用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RealTimeRT-PCR)和ELISA法检测MMP-9siRNA转染前后细胞中MMP-9、FasLmRNA及其蛋白分泌表达的变化。结果:转染后24h,MMP-9siRNA组的MMP-9mRNA表达较对照组明显降低(P<0.05),而FasLmRNA表达较对照组无明显变化(P>0.05)。转染后48h,MMP-9siRNA组的MMP-9蛋白及FasL蛋白的分泌表达较对照组均显著降低(P<0.05)。结论:MMP-9siRNA能特异高效沉默TEV-1的MMP-9mRNA表达,MMP-9蛋白分泌减少的同时也降低了sFasL蛋白的分泌。绒毛外滋养细胞表达的MMP-9可调节sFasL的表达,从而影响内皮细胞凋亡,可能参与早期胎盘血管的重建过程。     

5-氮杂胞苷对DKK3去甲基化及对SGC7901胃癌细胞增殖的影响

目的 研究5-氮杂胞苷对SGC7901胃癌细胞DKK3基因启动子去甲基化对细胞增殖及凋亡的影响。 方法 采用5-氮杂胞苷处理SGC7901胃癌细胞,以未行5-氮杂胞苷处理的SGC7901胃癌细胞为对照,比较DKK3基因启动子甲基化改变及细胞增殖曲线、细胞增殖及凋亡的差异。 结果 SGC7901胃癌细胞DKK3基因启动子在5-氮杂胞苷作用前呈甲基化状态,作用后呈未甲基化状态,表明5-氮杂胞苷对SGC7901胃癌细胞DKK3基因启动子具有去甲基化作用。5-氮杂胞苷作用后的SGC7901胃癌细胞G₀/G₁期比例、PI和凋亡率均显著高于作用前SGC7901胃癌细胞(均P<0.05),S期和G₂/M期显著低于作用前SGC7901胃癌细胞(均P<0.05)。 结论 DKK3基因可能具有抑癌基因作用,5-氮杂胞苷对SGC7901胃癌细胞DKK3基因启动子的去甲基化可促进细胞凋亡并抑制其增殖。     

Cochinchina Momordica Seed Extract Induces Apoptosis and Cell Cycle Arrest in Human Gastric Cancer Cells Via PARP and p53 Signal Pathways

Cochinchina momordica seed is the dried ripe seed of Momordica cochinchinensis (Lour.) Spreng, which is a kind of fruit and consumed for dietary as well as medicinal uses. In this study, using the human SGC7901 and MKN-28 gastric cancer cell lines, we explored the anticancer activity of the extract from cochinchina momordica seed (ECMS). ECMS inhibited significantly the survival rates of SGC7901 and MKN-28 cells in concentration- and time-dependent manners by MTT assay. The typical apoptotic morphological changes were observed by Hoechst 33258 dye assay after SGC7901 and MKN-28 cells were treated with ECMS for 48 h. Flow cytometry analysis revealed that ECMS-treatment blocked the cells at the S phase of cell cycle. Furthermore, the protein expression levels of poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) and Bcl-2 were downregulated notably by ECMS-treatment, whereas those of Fas/Fas-associated death domain, p53, and Bax were upregulated in SGC7901 cells. ECMS dramatically enhanced the enzymatic activities of caspase-3 and caspase-9 whilst slightly increased caspase-8 activity. Taken together, this study demonstrated that ECMS exerted cytotoxic activities via PARP and p53 signal pathways in the human gastric cancer cells.     

复方中药对人胃癌细胞SGC7901生长抑制作用的研究

耳的研究复方中药对人胃癌细胞SGC7901生长的抑制作用。方法取对数生长期的人胃癌细胞SGC7901接种96孔板，待细胞生长良好后加入含不同浓度复方中药培养液，取2个时间点（作用24h、48h）采用MTT比色法^[1]观察复方中药对人胃癌细胞SGC7901生长的抑制作用。结果10^4ug／L和10^5ug／L浓度组在24h、48h、均表现出抑制SGC7901细胞生长作用，且作用强于5-Fu。10^3ug／L组在2个时间点也表现出抑制SGC7901细胞生长作用，但作用弱于5-Fu。结论复方中药对人胃癌SGC7901细胞生长有显著的抑制作用，且呈剂量和时间依赖方式。     

金雀异黄素诱导人胃癌细胞凋亡的机制研究

采用 4’ ,6 二乙酰基 2 苯基吲哚染色、琼脂糖凝胶电泳实验观察了金雀异黄素 (Gen)对体外培养的人胃癌SGC 790 1细胞的凋亡诱导作用 ,并采用WesternBlot法检测Gen对人胃癌细胞p5 3、Caspase 3蛋白的表达情况。结果显示 ,Gen诱导了胃癌细胞凋亡 ,并抑制突变型p5 3蛋白表达 ,增加Caspase 3蛋白表达。结果提示 ,Gen抑制突变型p5 3蛋白表达 ,增加Caspase 3蛋白表达 ,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的机制之一     

幽门螺杆菌感染对胃癌细胞株增殖及凋亡影响的研究

目的探讨幽门螺杆菌感染对胃癌细胞株SGC7901增殖和凋亡的影响和机制。方法体外培养的SGC7901细胞与1×10^8、5×10^7、1×10^7、5×10^6cfu／ml浓度梯度的HPNCTC11637标准菌株共孵育,分别在24、48、72h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞和TUNEL分析细胞凋亡,RT-PCR检测survivin在mRNA的表达情况,Western blot检测细胞survivin在蛋白水平的表达。结果1×10^8、5×10^7、1×10^7、5×10^6cfu／ml浓度梯度的HP菌对SGC7901细胞作用72h的细胞增殖抑制率分别为54．5％、58．9％、67．6％、72．9％。流式细胞仪和TUNEL法检测不同浓度梯度的HP菌处理72h后细胞凋亡率分别为42．51％、45．67％、48．57％、54．61％与49．51％、51．26％、59．41％、62．46。幽门螺杆菌可以明显降低survivin的mRNA和蛋白水平的表达。这些作用均随幽门螺杆菌浓度和作用时间的延长而增强。结论幽门螺杆菌感染可能通过降低survivin的表达,在体外抑制SGC7901细胞增殖,并促进其凋亡。并且,这种作用呈时间剂量效应。