重组Calpain蛋白的免疫原性及其诊断上的应用研究

目的研究在大肠杆菌中表达的日本血吸虫Calpain蛋白的免疫原性及其在日本血吸虫诊断上的应用. 方法用重组Calpain蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法测定特异性IgG抗体的动态变化及其IgG亚型(IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3)产生特征;同时用重组Calpain蛋白作为诊断抗原,粪检血吸虫病阳性患者血清作为一抗,肝吸虫阳性患者血清作为考核交叉反应血清. 结果重组Calpain抗原免疫小鼠后,产生了一个极高的抗Calpain特异性抗体,免疫4周后IgG类抗体达到高峰,与对照组鼠相比较,免疫鼠血清中IgG1, IgG2a, IgG2b特异性抗体也有显著性的上升; Calpain重组抗原血清诊断日本血吸虫和粪检的符合率为100%, 粪检阳性EPG低的个体抗Calpain抗体滴度高, EPG高的患者抗Calpain抗体滴度反而低, 与肝吸虫的交叉反应率为37%. 结论日本血吸虫Calpain是一个具有免疫原性的蛋白,能够激发宿主产生高水平的免疫球蛋白,能够敏感地测定日本血吸虫的感染, 说明Calpain可以发展成为日本血吸虫病的诊断抗原和日本血吸虫疫苗候选分子.     

日本血吸虫童虫早期诊断抗原模拟表位的初步筛选研究

目的：利用噬菌体随机12肽库技术筛选日本血吸虫感染早期诊断抗原。方法：用日本血吸虫感染后21d兔血清从噬菌体12肽库中经3轮筛选,有效地富集与早期感染兔血清有亲和力的噬菌体克隆。随机挑取11个单克隆分别纯化、扩增,随后采用ELISA、DOT-ELISA等检测方法,挑选出与早期感染兔血清有高亲和力的噬菌体克隆。结果：挑选出3个与感染后21d兔血清具有高亲和力的噬菌体单克隆。结论：用感染后21d兔血清从噬菌体随机12肽库中能筛选到日本血吸虫童虫早期诊断抗原模拟表位。     

基于可溶性虫卵抗原的血吸虫抗体检测免疫传感器

目的:将免疫法特异性和电化学法灵敏性相结合,建立一种高灵敏基于可溶性虫卵抗原的电化学免疫传感器,用于血吸虫抗体的检测。方法:巯基乙胺通过吸附作用在金电极表面形成的自组装单分子层(SAM),依次滴加2.5%戊二醛和血吸虫抗原(可溶性虫卵抗原,soluble egg antigen,SEA),用以捕获抗SEA抗体(兔多抗或人多抗),然后再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗形成免疫复合物。用循环伏安法检测还原峰的电流值。结果:在底物为添加了2μl 30%的双氧水及1.0 mmol/L对苯二酚的0.1 mol/L pH7.2的PBS缓冲液中,还原峰的电流值与抗SEA兔血清稀释度在10-3与10-6范围内成正比,相关系数为0.956。与抗SEA人血清稀释比在10-1与10-4范围内成正比,相关系数为0.988。在1∶40稀释度条件下,血吸虫病人与正常人血清的抗SEA还原峰的电流值相差7.4μA。结论:该方法可以用于血吸虫抗体的初步检测。     

日本血吸虫31/32kDa抗体的检测及其在诊断中的作用

利用纯化日本血吸虫３１／３２ｋＤａ抗原（Ｓｊ３１／３２）与可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）ＥＬＩＳＡ方法检测急、慢性日本血吸虫病血清,以探讨其作为抗原诊断血吸虫病的特异性、敏感性及疗效考核价值。结果急、慢性血吸虫病人血清抗Ｓｊ３１／３２抗体检出率为１００％和９５％,与正常人、肝吸虫和肺吸虫病人血清未出现交叉反应;抗ＳＥＡ抗体检出率为９７．４％和９０％,与正常人和肝、肺吸虫有不同的交叉反应。血吸虫病人治疗后     

抗日本血吸虫虫卵25KDa分泌性抗原单克隆抗体的制备

利用诊断日本血吸虫病的主要靶抗原──１０．５～３２ＫＤａ纯化抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ骨髓瘤细胞融合，制备出抗日本血吸虫虫卵抗原单克隆杂交瘤细胞株２Ｅ（１２），所分泌单克隆抗体针对的靶抗原为虫卵２５ＫＤａ分泌性抗原．用之进行ＣＯＰＴ，环沉率达７％，对急性和慢性血吸虫病人诊断率分别为１００％和８０．４％，与多种寄生虫抗原及寄生虫病人血清无交叉反应，因此具有良好的诊断应用潜力。     

重组抗原金标免疫渗滤法检测弓形虫感染的研究

目的:建立一种快速、简便的弓形虫病诊断方法。方法:将弓形虫P30重组抗原包被于硝酸纤维膜上,以金标免疫渗滤法(DIGFA)检测兔血清中相应抗体,呈现红色斑点者为阳性。结果:检测弓形虫感染兔血清41份,阳性率为97.56%(40/41),检测正常兔血清20份,感染囊虫兔血清26份,感染血吸虫兔血清40份,感染丝虫兔血清21份,感染肺吸虫兔血清33份,仅2份血吸虫感染兔血清出现交叉反应。结论:弓形虫P30重组抗原金标免疫渗滤法检测弓形虫感染兔有较高的敏感性和特异性。     

日本血吸虫病的免疫诊断现状与研究进展

简要概述了用于检测抗日本血吸虫抗体的理化纯化抗原、免疫纯化抗原、基因重组抗原和抗独特型抗体-内影像抗原等诊断用抗原和用针对日本血吸虫某一抗原组分的单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原的敏感性、特异性和实用性,及改变标记物、载体系统和标本类型等新的血清学诊断方法的研究进展.     

日本血吸虫尾蚴体外培养细胞的形态学与抗原性初步研究

目的探索日本血吸虫尾蚴细胞培养技术，分析培养细胞的形态特征与抗原性。方法采用改良RPMI-1640培养基对日本血吸虫尾蚴细胞作体外培养，观察培养细胞的生长特性和一般形态，取培养3周的细胞作HE染色和超微结构观察，并用SDS—PAGE、Western blot技术、免疫荧光和凝集试验检测其抗原性。结果在培养早期，细胞呈半悬浮状并向培养瓶中心聚集生长，观察到细胞分裂增殖现象，随着’培养时间延长，细胞生长繁殖速度渐渐减慢，培养至8周，多数细胞死亡。培养3周的细胞，大小不均，呈多形性，大部分细胞呈高核质比率，仅少数细胞胞浆较丰富。电镜观察培养细胞表面呈现特殊结构。SDS—PAGE和Immuno blot分析表明：尾蚴细胞与尾蚴虫体的蛋白带谱大体相似，感染兔血清对尾蚴虫体和尾蚴培养细胞抗原分子识别的条带略有不同。用尾蚴培养细胞与感染兔血清作凝集试验和免疫荧光检测，二者均可出现特异性结合。结论日本血吸虫尾蚴细胞在体外出现有限增殖，该细胞在血吸虫病的免疫诊断中具有潜在的应用价值。     

简易快速检测人轮状病毒

作者用抗轮状病毒血清致敏含A蛋白的葡萄球菌,与52份腹泻标本的10%粪便悬液作协同凝集,能在1—3分钟内出现清晰的凝集,为了对比同步作ELISA进行考核。一、方法(一)粪便悬液制作:用pH7.4PBS—吐温20将粪便稀释成10%的悬液,用力振摇30分钟后离心3000rpm30分。取上清-20℃贮存备用。(二)SPA诊断液制作:按常规法制作。     

金标法快速检测血清中血吸虫特异性IgM的研究

目的 探索金标免疫渗滤法(DIGFA)快速检测患者血清中抗日本血吸虫IgM抗体的诊断和疗效考核价值.方法 以虫卵可溶性抗原为抗原,羊抗人IgM(μ链)-胶体金结合物为检测标记物,创建DIGFA快速检测人血清中日本血吸虫特异性IgM的方法(IgM-DIGFA);用IgM-DIGFA和IgG-DIGFA平行检测不同病期患者血清,评价其诊断和疗效考核价值.结果 IgM-DIGFA检测急性和慢性血吸虫病患者的敏感性分别为100%(25/25)和95.8%(69/72),IgG-DIGFA的敏感性分别为100%(25/25)和97.2%(70/72),两法相比差异无统计学意义(P>0.05);检测健康人血清,特异性分别为99%(99/100)和97%(97/100).与IgG-DIGFA相比,IgM-DIGFA检测其他蠕虫病患者血清的交叉反应较低,仅与肺吸虫有3.3%交叉反应;IgM-DIG-FA检测治疗后6个月、12个月患者血清,阴转率分别为65.2%(15/23)和88.0%(22/25);IgG阴转率仅为21.7%(5/23)和64.0%(16/25).结论 DIGFA快速检测IgM的敏感性和IgG相近,且特异性更强,并具有潜在的疗效考核价值.     

3种抗原Dot—ELISA诊断日本血吸虫病的比较

目的 探讨Dot-ELISA快速诊断血吸虫病的实用价值。方法 利用Dot-ELISA分别检测108例日本血吸虫病人、25例肝吸虫病人、20例肺吸虫病和50例正常人血清日本血吸虫31／32kDa抗原（Sj31/32）、可溶性虫卵抗原（SEA）和血吸虫成虫粗抗原（AWA）特异性IgG抗体，以寻找用于Dot-ELISA快速有效诊断日本血吸虫病的抗原。结果 108例日本血吸虫病人血清Sj31/32-IgG、SEA-IgG和AWA－IgG的检出率分别为92．6％、94．4％和95．4％，平均抗体滴度分别为1：333、1：982和1：850，50例正常人和25例肝虫病人Sj31/32-IgG均为阴性，20例肺吸虫病人中Sj31/-IgG仅1例阳性，而正常人、肝吸虫和肺吸虫病人SEA－IgG、AWA－IgG均有不同程度的交叉反应。Sj32/IgG与SEA、AWA敏感性相似，但特异性明显高于SEA和AWA。结论 提示Si31/32-IgG Dot-ELISA诊断日本血吸虫病价值优于SEA和AWA。     

四川省不同疫区病毒性肝炎患者粪便中甲肝抗原检测报告

自1983年以来,先后从重庆、合川、自贡、璧山、万县、三台、南充等地区的甲肝暴发流行点中收集甲肝病人和密切接触者的粪便185份。用0.05M,PH7.6 Tris-盐酸缓冲液将其分别制成10％粪便悬液,用酶免检测法初筛,结果6份为甲肝抗原阳性。其中5份经聚乙二醇沉淀,氯仿抽提纯化后,再用酶免检测法进行抗原定量测定,其中一份滴度高达1:160。用美国Abbott药盒标化的甲肝IgM阳性和阴性血清各4份,分别对上     

应用RPHI检测EHF抗体

EHF病人血清中特异性抗体的检测,目前常用间接免疫荧光技术(IFAT)。因需用荧光显微镜,细胞抗原片,抗原片又需冷藏保存,故难于在基层医疗卫生单位开展使用。我们应用反向间接血凝抑制试验(RPHI)检测了EHF病人血清抗体,结果满意。1 材料与方法1.1 EHF抗原(89—1)由浙江省卫生防疫站提供,使用前检测效价,以50%血球凝集( )时,作为一个抗原单位,试验时使用4个抗原单位。1.2 抗EHFV—IgG致敏血球(冻干89—1)由浙江省卫生防疫站提供,使用时稀释成0.3%血球悬液。1.3 稀释液均采用一种稀释液(pH 7.2 0.01MPBS,含1%正常兔血清),稀释所有试剂和被检血清。     

酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗—HAV IgM的研究

1978年Duermeyer等首先用ELISA检测抗-HAV IgM,以后,陆续又有报道。目前,国外已有商品Abbott药盒可供抗-HAV IgM检测,但价格较为昂贵。国内自1982年后亦有类似报道。但是,由于甲型肝炎病毒(HAV)粪便抗原的纯度、抗人IgM(μ链)免疫血清和抗-HAV阴性的正常人血清来源不足等问题,常产生非特异性反应。本文报道应用纯化的HAV粪便抗原和国产马抗人IgM诊断血清检测抗-HAV IgM的结果。     

ELISA方法检测血吸虫抗体的研究

目的 :血吸虫病患者血清中 Ig G和 Ig M抗体检测方法的改进。方法 :用纯化的血吸虫虫卵抗原作包被抗原 ,用辣根过氧化物酶标记的抗人 Ig G和抗人 Ig M(μ链 )单克隆抗体作标记抗体 ,采用间接 EL ISA检测血清中 Ig G和 Ig M抗体。结果 :此法检测血吸虫病疫区患者 Ig G的阳性检出率为 84.1% (5 3/ 6 3) ,与 IHA结果 (5 2 / 6 3)基本一致。其灵敏度高达 1∶ 2 5 6 0 0。对 2例急感病人 Ig M检测均为阳性 ,而 90例正常人血清有87份为阴性 ,其灵敏度为 1∶ 16 0 0。两种检测方法的精密性好 ,CV值均在 5 %以下。结论 :此方法特异性强 ,灵敏度高 ,快速、简便 ,适合于广大农村疫区进行血吸虫病流行病普查和临床诊断     

保健饮料中锗化合物的分析

为阐明保健饮料中锗化合物的形态,确保食品的安全,本文采用2种色谱对锗化合物进行分析。二氧化锗和有机锗(2—羧乙基三氧化二锗(Ge—132))用Dowex 1—X2醋酸离子型树脂分离。Ge—132再经Sephadex G—10凝胶过滤色谱柱与有机酸分离,然后用Shim—pack 101柱HPLC进一步纯化。二氧化锗直接用苯基荧光酮分光光度法测定,Ge—132经消解后测定。试剂及仪器无机锗标准储备液:取0.144g二氧化锗,用含0.5ml 0.1mol/L NaOH溶液加温溶解,盐酸中和,水稀至100ml(含Ge 1g/L)。使用时用蒸馏水稀释200倍作为     

酶联免疫吸附试验检测空肠弯曲菌抗体及其临床应用

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)研究了空肠/结肠弯曲菌(cJc)的抗体反应。两株cJc的混合脂多糖(LPS)作为ELISA的抗原,与用作试验的24只兔抗cJc血清显示高滴度抗体。然而,仅7％弯曲菌肠炎病人的双份血清对这种混合LPS抗原显示抗体反应。此外,所得结果提示有人免疫球旦白的非特异性结合。经福尔马林处理的24株cJc被用作ELISA抗原时,其相应兔抗血清都同其中的一株菌(M_(14))起反应。人免疫球旦白基本上没有非特异性的结合。健康输血员血清可检出抗体,儿童血清的抗体滴度较低,提示早期有免疫。67例粪便培养cJc阳性的肠炎病人,其单份或双份血清标本能测出IgG抗体滴度明显升高的占82％。IgG滴度在感染的早期就有升高,说明是对较早期免疫的加强作用。此等病人的这些血清有77％亦能测出IgM抗体。依据肠炎病人血清的IgG和IgM分析,弯曲菌ELISA血清学阳性占94％,而健康对照组阳性仅占5％。     

犬粪便棘球绦虫抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法建立与应用

目的 研究双抗体夹心酶联免疫吸附检测犬粪便棘球绦虫虫体抗原的方法并评价其在实际工作中的应用价值.方法 实验犬12只,分实验组和对照组,实验组用活化绵羊源原头蚴(G1型)作人工感染;感染后08周内收集粪便,56 d宰杀实验犬,收集成虫;制备成虫抗原和虫体代谢/分泌抗原,蛋白酶K处理抗原并分别免疫成年绵羊和新西兰白兔;绵羊抗血清用80%饱和硫酸铵沉淀、透析,兔抗血清过IgG亲和层析柱,分别获得纯化抗体;观察犬粪便在PBS液中-80 ℃冷冻3 d或在含1% Formalin 的PBS液中70 ℃80 ℃加热8 h的处理方法对检出结果的影响.运用该方法对四川省甘孜县达通玛区4个乡的580只家犬吡喹酮每6月一次驱虫前后的粪抗原进行监测.结果 试验系统的敏感性为92.3%,特异性为80%;粪抗原从感染后的第23周可检出;两种样品处理方法都可以灭活虫卵但不影响检出效果;检测方法可同时用于对细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫感染的诊断;达通玛区家犬粪抗原阳性率从2000年的50%下降到2005年的17%.结论 检测方法具有较高的特异性和敏感性;推荐粪便用加热的方法处理可以灭活虫卵以防止生物污染;该方法可以在基层推广应用.     

应用抗原-捕捉/聚合酶链反应法进行HAV的分子流行病学研究

作者报道应用抗原-捕捉/聚合酶链反应法(AC/PCR)测定临床粪便样本中的甲型肝炎病毒(HAY),并进行了HAV的分子流行病学研究。这一方法是在一种专用的反应管中相继进行免疫亲和捕捉病毒,合成病毒cDNA,及用PCR法扩增cDNA。粪便样本分别获自用细胞培养的HAV接种感染的猴,实验感染HAV的志愿者,以及甲型肝炎患者。取5％～10％的粪便样本澄清悬液进行检测。     

四种血吸虫排泄—分泌抗原的比较

曼氏和日本血吸虫寄生在胃肠道的小静脉内,而埃及血吸虫则寄生在泌尿生殖器的小静脉内,这些吸虫释放出的排泄—分泌抗原直接进入血流被宿主处理,其中一些抗原在肝脏降解成小分子量的非抗原物质而被排泄,另一些抗原则以抗原形式排泄在尿和乳汁中。查出血吸虫特异性抗原的抗体即表示过去或现在有感染,在某些病例中免疫应答的水平与临床表现有相互关系,在宿主中发现血吸虫特异抗原表示有活动性感染,在某些病例中测得的抗原的总量与感染强度有关。