尼氟灭酸对氯化钴诱导海马神经元凋亡的抑制作用

目的:探讨尼氟灭酸(NFA)对氯化钴(CoCl₂)诱导的海马神经元凋亡的抑制作用,阐明其可能的机制。方法:原代培养乳鼠海马细胞,并在倒置显微镜下观察海马细胞的形态变化。将海马神经元随机分为对照组(含1%血清培养液)、CoCl₂损伤组(含200 μmol·L^-1NFA等体积培养液)和不同浓度NFA组(在CoCl₂损伤组基础上加入20、40、80 μmol·L^-1 NFA)。MTT法检测各组海马神经元的存活率,流式细胞术分析海马神经元调亡率, ELISA法检测神经元培养液上清中相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和缺氧相关蛋白低氧诱导因子(HIF-1α)的表达水平。结果:海马神经元在培养7 d后形态规则,突触相互交织形成网络。MTT检测,与对照组比较,CoCl₂损伤组神经元存活率明显降低(P<0.01);与CoCl₂损伤组比较,20、40和80 μmol·L^-1NFA组神经元存活率升高(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组比较,CoCl₂损伤组神经元早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率升高(P<0.05或P<0.01);与CoCl₂损伤组比较,20、40和80 μmol·L^-1NFA组神经元早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率下降 (P<0.05或P<0.01)。ELISA法检测,与对照组比较,CoCl₂损伤组神经元培养液上清中HIF-1α、caspase-3 和Bax表达水平升高(P<0.01);与CoCl₂损伤组比较,20和40 μmol·L^-1 NFA组神经元培养上清中HIF-1α、caspace-3 和Bax表达水平下降,Bcl-2表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。结论:NFA可以降低CoCl₂对海马神经元的缺氧损伤作用,其机制与抑制HIF-1α的表达、下调Bax/Bcl-2及抑制神经元凋亡有关联。     

CGRP对葡萄糖诱导血管内皮细胞凋亡保护作用的研究

目的观察降钙素基因相关肽(calcitonin-gene-related peptide;CGRP)对高浓度葡萄糖(高糖)诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的作用,初步探讨CGRP抑制高糖诱导细胞凋亡的机制。方法用MTT法检测细胞活力;Cell Death Detection ELISA评价细胞凋亡;半定量RT-PCR检测细胞内细胞外信号调节激酶2(ERK2)mRNA的表达水平。结果当CGRP浓度为10^-8mol／L时,高糖对细胞的损伤已明显得到保护。高糖组细胞活力为印％,而CGRP处理组细胞活力为80％。ELISA结果显示,CGRP处理组细胞凋亡率明显下降。CGRP明显上调ERK2 mRNA表达水平。结论CGRP通过激活ERK2的表达拮抗高糖诱导的内皮细胞凋亡。     

内毒素诱导的血管内皮细胞凋亡

目的 从内毒素(LPS)所致血管内皮细胞(VEC)凋亡的角度进行了实验研究，为进一步探讨血瘀证实质及药物保护VEC作用机理，建立可靠的细胞凋亡模型。方法 以不同剂量内毒素作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24h，通过荧光显微镜与流式细胞仪观察细胞凋亡程度，并测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果 不同浓度LPS作用HUVEC 24h后，与对照组相比，HUVEC有较典型的细胞凋亡，且LDH显著升高。结论1μg/mL LPS可用于建立HUVEC凋亡模型，对研究方药治疗血瘀证的作用机理奠定了基础。     

川芎嗪对花生四烯酸诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的　研究川芎嗪 (TMP)对花生四烯酸 (AA,16 0μm ol/ L )诱导的血管内皮细胞株 ECV 30 4损伤和凋亡的保护作用及其机制。方法　 MTT法检测细胞存活率 ,比色法测乳酸脱氢酶 (L DH)释放率和细胞丙二醛(MDA)含量 ,Hoechst 332 5 8荧光染色法观察细胞核形态变化并测定细胞凋亡率 ,琼脂糖凝胶电泳检测 DNA降解。结果　 TMP(0 .2 5～ 1.0 m mol/ L)能浓度依赖性地抑制 AA引起的细胞存活率下降 (P<0 .0 5 ) ,并降低细胞L DH释放率和 MDA含量 (P<0 .0 5 )。 AA处理 2 4 h后的细胞呈典型的凋亡核固缩表现 ,凝胶电泳显示 DNA凋亡梯带 ,TMP(0 .2 5～ 1.0 m mol/ L)能降低其凋亡率 (P<0 .0 5 )。结论　 TMP对 AA引起的 ECV30 4细胞损伤和凋亡具有保护作用 ,其机制可能与其抗脂质过氧化作用有关     

血管内皮生长因子对缺氧诱导内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧对培养人静脉内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预性影响。方法 （1）人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定。（2）建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型,TUNEL法观测不同缺氧时间（0、12、24、48h）对内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预作用。结果 随缺氧时间延长,NUVECs凋亡率显著升高,血管内皮生长因子抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡。结论 内皮细胞的过渡凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素,血管内皮生长因子通过抑制内皮细胞凋亡,而具有内皮细胞保护作用。     

尼氟灭酸对肝癌细胞增殖的影响

为了观察氯通道阻断剂尼氟灭酸 (NFA)对人肝癌细胞 (humanhepatomacellline,HHCC)增殖的影响 ,我们将NFA作用于HHCC ,应用细胞计数法及噻唑兰 (MTT)比色分析法观察细胞增殖情况 ;用流式细胞仪检测细胞周期时相 ;并用激光扫描共聚焦显微镜检测 [Ca2 + ]i的变化 .结果发现 ,NFA使HHCC细胞数及MTT光吸收值 (OD)较对照组都显著降低 ,去除NFA后 ,OD值逐渐恢复 .经 1 0 0 μmol·L -1 NFA处理 4 8h的HHCC细胞G1 期细胞比例比对照组明显增高 ,S期及G2 期细胞比例明显低于对照组 .细胞外应用NFA (1 0 0 μmol·L -1 )使 [Ca2 +…     

降钙素基因相关肽对血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的观察降钙素基因相关肽(calcitonin-gene-relatedpeptide;CGRP)对高浓度葡萄糖(高糖)诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用。方法用MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果当CGRP浓度为10-8mol/L时,高糖对细胞的损伤已明显得到保护。高糖组细胞活力为60%,而CGRP处理组细胞活力为80%。流式细胞术检测结果显示,CGRP处理组细胞凋亡率明显下降。结论CGRP可对高糖诱导的内皮细胞凋亡起到保护作用。     

同型半胱氨酸诱导离体培养的血管内皮细胞凋亡

目的 :了解同型半胱氨酸 (HCY)对血管内皮细胞 (VEC)凋亡的形响。方法 :用不同浓度的HCY处理离体培养的大鼠VEC24h ,用末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT)介导的荧光素d -uTP缺口末端标记方法 (TUNEL)原位检测细胞凋亡 ,以TUNEL指数 (TUNELI)表示凋亡。结果 :正常对照培养条件下 (2 %FBS)VEC经历低频凋亡 ,其TUNELI为5.8±2.5。培基中加入浓度为0.1mmol/L的HCY ,凋亡细胞数开始增加 (TUNELI为12.6±4.4) ,但差异无显著性 (与对照比P>0.05) ;培基中HCY浓度为0.5mmol/L时 ,凋亡细胞明显增加 (TUNELI为22.4±6.4 ,与对照比 ,P<0.05) ,当培基中HCY浓度增加到1.0mmol/L时 ,将近一半的VEC经历凋亡性细胞死亡 (TUNELI为44.5±11.2 ,与0.1mmol/LHCY组比 ,P<0.05)。结论 :HCY浓度依赖性诱导VEC凋亡 ,VEC凋亡异常可能是动脉粥样硬化 (AS)发生的重要原因之一。     

羟自由基诱导血管内皮细胞、心肌细胞凋亡与卡托普利的干预作用

越来越多的证据表明 ,细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)与心血管病的发生和发展关系密切。目前 ,国内外对心血管细胞凋亡 (血管内皮细胞、心肌细胞等 )的研究已逐步深入。我院心内科自 1996年起陆续建立羟自由基 (ＨＦＲ)诱导血管内皮细胞凋亡和心肌细胞凋亡的体外实验模型 ,并观察卡托普利的干预作用 ,以期探索血管紧张素转换酶抑制剂 (ＡＣＥＩ)卡托普利对心血管细胞凋亡有否保护作用。在国内尚未见类似报道。本文将我们进行的两项实验研究综合报告如下。1　实验方法1.1　血管内皮细胞凋亡与卡托普利干预的实验方法采用改良的Ｊａｆｆｅ′ｓ…     

血管内皮细胞凋亡研究进展

凋亡诱导剂通过Fas/FasL/caspase途径、Cyt C途径、TNF-α途径及PARP途径等诱导血管内皮细胞凋亡。抗凋亡诱导剂通过干扰细胞凋亡的信号通路来抑制凋亡。中药作为广泛使用的抗凋亡药物在临床上已取得显著成效,但其部分具体的分子机制还不清楚。文章对血管内皮细胞凋亡的4条信号通路及凋亡诱导剂和抗凋亡诱导剂的研究进展作一综述。     

原花青素B2保护血管内皮细胞延缓凋亡及机制研究

目的 以H2O2诱导人内皮细胞凋亡为模型,观察原花青素B2 (GSPB2)延缓人内皮细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 用0.5 mmol H2O2预处理细胞,分别加入不同浓度的GSPB2(5.0、10.0、20.0 μmol/L)保护细胞,TUNEL法检测细胞凋亡;Western blotting检测凋亡相关分子Caspase-3、Bax、Bcl-2以及影响凋亡的相关分子PI3K、p-Akt、Akt的蛋白表达;Transwell小室检测各组细胞迁移情况.结果 0.5 mmol H2O2致人内皮细胞凋亡明显增加(P＜0.01),GSPB2能明显减轻H2O2所致的人内皮细胞凋亡(P＜0.05),10 μmol/mL的GSPB2就能接近恢复到H2O2未处理的对照组水平.进一步研究发现:Caspase-3、bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下调;PI3K、p-Akt、Akt表达上调.结论 不同浓度的GSPB2对H2O2诱导的血管内皮细胞具有保护作用,而且表现为浓度依赖性和时间依赖性,其机制与相关分子PI3K、p-Akt、Akt有关.     

牛磺酸对同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨牛磺酸对同型半胱氨酸引起的血管内皮细胞凋亡的影响。方法体外培养的人脐静脉内皮细胞,分为空白对照组、同型半胱氨酸组（0.5 mmol／L、1.0 mmol／L、1.5 mmol／L ）及牛磺酸＋同型半胱氨酸组（牛磺酸20 mmol／L＋同型半胱氨酸1.0 mmol／L）,48 h后以TUNEL法及流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果同型半胱氨酸明显增加内皮细胞的凋亡率,而牛磺酸能拮抗同型半胱氨酸引起内皮细胞的凋亡作用。结论牛磺酸对同型半胱氨酸引起的血管内皮细胞凋亡有拮抗作用。     

血管内皮生长因子拮抗缺氧诱导的血管内皮细胞凋亡及其机制研究

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧对血管内皮细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2与Apo-1/FasmRNA表达的影响,探讨VEGF用于预防经皮冠状动脉介入治疗术(PCI)后再狭窄的机制。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞(hUVEC)分成对照组、缺氧处理组、缺氧 VEGF处理组,12h后采用原位末端标记法、流式细胞术观察各组细胞的凋亡发生情况,通过RT-PCR法观察各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2与Apo-1/FasmRNA表达的变化。结果与对照组和缺氧 VEGF处理组比较,缺氧处理组凋亡细胞及FasmRNA表达明显增加,Bcl-2mRNA表达明显下降,而VEGF能拮抗上述作用。结论VEGF能拮抗缺氧诱导的内皮细胞凋亡,其抗凋亡的机制可能与上调Bcl-2mRNA表达与下调Apo-1/FasmRNA表达有关。从而为VEGF预防再狭窄进一步提供了理论依据。     

虾青素对氧化应激诱导内皮祖细胞凋亡的保护作用

目的：探讨虾青素对体外氧化应激诱导的人外周血内皮祖细胞凋亡的影响及机制。方法体外培养人外周血单核细胞源的内皮祖细胞,分为对照组、模型组（叔丁基过氧化氢100μmol/L ）、虾青素＋叔丁基过氧化氢组[虾青素0．10、1．00、10．00 nmol/L预处理24 h后,分别使用叔丁基过氧化氢溶液（100μmol/L）连续培养6 h]。细胞存活率采用MTT法检测;细胞凋亡率采用DAPI染细胞检测;DCFH-DA法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species ,ROS）水平;JC-1法测定线粒体膜电位。结果与对照组比较,叔丁基过氧化氢（100μmol/L）能明显的造成内皮祖细胞的凋亡（P＜0．05）。虾青素可降低叔丁基过氧化氢引起的内皮祖细胞凋亡,表现为细胞凋亡率减少（P＜0．05）,线粒体膜电位增加。结论虾青素对叔丁基过氧化氢诱导的内皮祖细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与保护线粒体功能有关。     

迷迭香酸对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞迁移、凋亡的作用

目的探讨迷迭香酸对高糖诱导下人视网膜血管内皮细胞迁移、凋亡的作用。方法将人视网膜血管内皮细胞按培养方案分为对照组、迷迭香酸组、高糖组、联合组。Transwell法观察各组细胞迁移能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,ELISA检测各组白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。Western blotting法与qRT-PCR技术检测各组细胞中血管内皮生长因子(VEGF)与凋亡相关蛋白Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(BAX)的表达水平。结果迷迭香酸组与对照组各项指标差异均无显著性(P＞0.05)。与对照组比较,高糖组人视网膜血管内皮细胞迁移能力及细胞凋亡水平显著增加,炎症指标IL-6、IL-8与TNF-α的含量增加,VEGF、Caspase-3、BAX蛋白及mRNA水平增加,Bcl-2蛋白及mRNA水平降低(P＜0.05)。与高糖组比较,联合组迁移细胞数量、细胞凋亡水平、IL-6、IL-8与TNF-α的含量、VEGF、Caspase-3与BAX的蛋白及mRNA水平降低,Bcl-2蛋白及mRNA水平增加(P＜0.05)。结论迷迭香酸可抑制高糖环境下人视网膜血管内皮细胞的迁移及凋亡状态,其机制可能与调控VEGF有关。     

薯蓣皂苷对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的:研究薯蓣皂苷对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导血管内皮细胞(EC)凋亡的保护作用,并探讨其作用机制.方法:实验分5组,对照组、模型组(150μg/mL的Ox-LDL)、薯蓣皂苷低中高剂量组(4.8、12、30μg/mL),用MTT法检测EC存活率;流式细胞术分析测定细胞凋亡率;硝酸还原酶法测定EC的NO浓度;双抗体夹心法检测内皮素(ET)浓度;Western Blot测定内皮细胞eNOS的蛋白表达.结果:与对照组相比,Ox-LDL使EC的凋亡率、ET的浓度显著升高(49.6±10.44vs 30.0±3.27,P＜0.01;25.89±2.07vs16.93±1.64,P＜0.05);使EC的存活率、NO的浓度、eNOS蛋白表达显著降低(64.89±1.02vs 100±0,P＜0.01;27.03±3.12vs59.46±16.19,P＜0.01;P＜0.01).薯蓣皂苷低中高剂量组能明显抑制EC的凋亡率,降低ET的浓度;提高EC的存活率、NO的浓度以及eNOS蛋白表达水平,且在此药物浓度范围内成浓度依赖性.结论:著蓣皂苷可能通过减少ET的合成与分泌,提高eNOS的表达,使NO的合成与释放增加,从而对Ox-LDL诱导血管内皮细胞凋亡起到保护作用.     

肝细胞生长因子抗糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡及分子机制

目的：探讨肝细胞生长因子抑制糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡的作用及其相关分子机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞，分为实验对照组、糖基化终产物及糖基化终产物＋肝细胞生长因子组，采用MTT法测定各组血管内皮细胞生长抑制率；瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化、流式细胞术测定细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法分析各组凋亡基因Ban、Bcl-2蛋白的表达及酶联反应法测定caspase-3活性。结果：糖基化终产物诱导培养的内皮细胞出现明显的凋亡形态学改变，内皮细胞凋亡率与糖基化终产物的浓度和作用时间呈依赖关系，肝细胞生长因子干预后可显著降低不同时间的内皮细胞凋亡率；肝细胞生长因子作用内皮细胞抗凋亡基因Bcl-2表达明显升高，而促凋亡基因Bax表达无明显变化；caspase-3活性显著降低。结论：肝细胞生长因子抑制糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡，其作用机制可能是上调抗凋亡基因Bcl-2水平、抑制caspase-3的激活．