共刺激后淋巴细胞产生Th1/Th2细胞因子的变化及免疫抑制剂的影响

目的 探讨CD28、CD40通路共刺激后淋巴细胞产生Th1(IL-2、IFN-γ、IL-12)及Th2细胞因子(IL-4、IL-10)的变化及免疫抑制剂环孢素(CsA)、雷帕霉素(RPM)及霉酚酸(MPA)对共刺激通路激活后淋巴细胞产生Th1及Th2细胞因子的影响.方法采用单克隆抗体(mAb)与淋巴细胞表面CD3、CD28及CD40L分子结合产生相应刺激信号,单刺激及共刺激组分为:a组,CD3 mAb单刺激;b组,CD3 mAb加CD28 mAb共刺激;c组,CD3 mAb加CD28 mAb加CD40 L mAb共刺激;d组,CD3 mAb加CD28 mAb加CTLA4 mAb共刺激.各mAb的终浓度均为100 ng/ml.干预组分别将终浓度为300 ng/ml的CsA、RPM、MPA加入上述4组.ELISA法测定上述细胞培养上清中的细胞因子值.结果 a、b、c 3组IFN-γ分别为(248.91±11.20)、(555.08±24.42)、(548.19±33.06)ng/ml,IL-2分别为(29.48±8.61)、(1100.82±99.29)、(842.23±29.31)ng/ml,IL-4分别为(32.29±6.76)、(116.02±15.03)、(147.28±18.07)ng/ml,IL-10分别为(147.01±10.47)、(291.79±12.47)、(302.52±35.18)ng/ml.b、c组与a组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);b、c组IL-2、IL-12、IL-4比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).d组IFN-γ、IL-2及IL-10分别为(497.42±29.03)、(739.77±18.58)及(120.33±13.21)ng/ml,与b组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).CsA、RPM及MPA对共刺激后Th1/Th2细胞因子的产生均有抑制作用,CsA对4种细胞因子产生的抑制作用强于RPM和MPA,其中对IL-2及IL-4的抑制作用更为明显.CsA与CTLA4 mAb有协同作用.共刺激后IL-12产生升高,MPA可抑制单刺激和共刺激后IL-12的产生,CsA和RPM对IL-12的产生无明显抑制作用.结论 CD28、CD40共刺激通路在淋巴细胞活化中起关键作用.CsA、RPM、MPA及CTLA4 mAb对共刺激后Th1/Th2细胞因子的产生均有抑制作用,CsA的抑制作用更为明显.CD40 L mAb使Th1细胞因子及IL-12水平下降,又促进Th2细胞因子(以IL-4为主)产生,该作用可能是抗CD40 L抗体诱导移植物存活期延长的机制之一.     

慢性乙型肝炎患者DC/CIK体外经HBsAg活化后自体回输的疗效和对机体免疫的影响

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血来源的树突状细胞(DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)自体回输治疗的疗效和对机体免疫的影响。方法 95例CHB患者随机分为3组,即A组(33例),行DC/CIK治疗;B组(22例),行核苷酸类抗病毒治疗;C组(20例),未进行抗病毒治疗。用CHB外周血培养和扩增DC和CIK,成熟前给予HBsAg刺激。自体静脉回输(DC/CIK细胞数量109/100 ml),1次/3 d,共3次。各组均于治疗前、治疗后第1、3、6、12个月分别检测肝功能、HBV DNA、IFN-γ、IL-4和IL-12水平。其中IFN-γ、IL-4和IL-12均采用双抗体夹心ELISA法进行检测。结果治疗前各组患者病毒载量无显著差异。治疗各阶段B组患者血清HBV DNA水平均低于A组和C组患者(P均<0.001);A组患者治疗后3、6个月时病毒载量显著下降(P均<0.05)。各组患者治疗前后ALT和TBil水平差异无统计学意义。治疗后1个月后,A组患者血清IL-12水平显著高于B组和C组(9.32±2.07 pg/ml vs6.96±2.17 pg/ml,9.32±2.07 pg/ml vs 7.32±2.36 pg/ml,P<0.05),其他时间阶段各组比较,IL-12水平差异无统计学意义。各组患者之间血清IFN-γ、IL-4水平差异均无统计学意义。结论 DC/CIK细胞治疗对HBV有一定的抑制作用;推测DC/CIK细胞治疗对辅助T细胞的失衡无显著影响。     

索拉非尼联合树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞对肝癌生长与侵袭转移的作用

目的探讨索拉非尼联合树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肝癌生长与侵袭转移的作用。方法采集健康自愿者外周血50mL,体外培养健康成人细胞因子诱导的DC和CIK。160只雄性ICR小鼠建立H22肝癌细胞小鼠原位肝癌模型,采用随机数字表法分为4组：（1）生理盐水组：仅经胃灌注与索拉非尼组同等的生理盐水;（2）索拉非尼组：经胃灌注索拉非尼100μg/g,1次/d;（3）DC—CIK细胞组：经腹腔注射DC—CIK共培养细胞,1×10^7／只,1次／3d;（4）索拉非尼联合DC—CIK细胞组：经胃灌注索拉非尼,同时腹腔注射DC—CIK共培养细胞,剂量同前。每组40只,治疗3周。各组取20只处死,获取外周血和肝脏肿瘤组织。采用ELISA法检测AFP水平,HE染色检测肿瘤坏死程度,免疫组织化学染色分别检测肿瘤组织Ki-67和CD34表达。各组余下20只小鼠,观察生存时间。多组比较采用单因素方差分析,组问比较采用LSD检验。结果DC和CIK诱导、培养成功。生理盐水组、索拉非尼组、DC—CIK组和索拉非尼联合DC—CIK组AFP分别为（0．675±0．177）ng／L、（0．379±0．052）ng／L、（0．415±0．028）ng／L和（0．288±0．012）ng／L,4组比较,差异有统计学意义（F=0．415,P〈0．05）。生理盐水组肝内和腹腔转移数目分别为（21．2±1．3）个和（29．7±7．6）个,索拉非尼组分别为（16．4±1．6）个和（17．4±1．8）个,DC—CIK组分别为（20．2±1．7）个和（26．4±1．7）个,索拉非尼联合DC—CIK组分别为（15．2±1．3）个和（15．2±1．3）个,4组比较,差异有统计学意义（F=2．137,3．271,（P〈0．05）。生理盐水组、索拉非尼组、DC—CIK组和索拉非尼联合DC—CIK组抑瘤率分别为0、21％±3％、9％4-3％和24％±5％,4组比较,差异有统计学意义（F=3．715,P〈0．05）。生理盐水组、索拉非尼组、DC—CIK组和索拉非尼联合DC—CIK组生存时间分别为（18．2±2．5）d、（21．6±2．1）d、（24．3±2．8）d和（25．4±1．4）d,4组比较,差异有统计学意义（F=6．247,P〈0．05）。结论索拉非尼联合DC与CIK免疫治疗能够显著延长肝癌荷瘤小鼠生存时间,抑制肝肿瘤生长和转移。     

ICOS基因转染对CIK细胞杀伤胆管癌细胞作用的研究

目的 探讨转染可诱导共刺激分子(inducible co-stimulator, ICOS)基因对细胞因子诱导杀伤(cytokine. induced killer, CIK)细胞杀伤胆管癌细胞的作用.方法 构建含ICOS基因的腺病毒载体并转染给CIK细胞(CIK-ICOS细胞组),单纯CIK及CIK-EGFP细胞为对照组,观察3组CIK细胞体外增殖与凋亡情况以及对胆管癌细胞的杀伤作用;ELISA法检测3组CIK细胞上清液中IFN-γ、IL-2及TNF-α的表达.建立胆管癌移植瘤的SCID小鼠模型,按随机数字表法将40只SCID小鼠分为生理盐水对照组、CIK、CIK-EGFP、CIK-ICOS细胞治疗组,观察转染ICOS基因的CIK细胞对小鼠胆管癌细胞的杀伤作用.结果 CIK-ICOS细胞组体外增殖明显强于CIK及CIK-EGFP细胞组;培养第20天CIK-ICOS与CIK细胞凋亡率分别为0.69%和2.90%,第23天分别为0.89%和4.92%;在不同效靶比CIK-ICOS细胞组杀伤效应均显著高于CIK与CIK-EGFP细胞组(F=13.37,6.46,25.51,P<0.05);CIK-ICOS细胞组上清液中IFN-γ的浓度为(49.50±4.73)μg/L,显著高于CIK细胞组(30.53±3.73)μg/L及CIK-EGFP细胞组(30.12±2.64)μg/L(F=38.89,P<0.05).CIK-ICOS细胞治疗组小鼠肿瘤生长速度明显低于CIK与CIK-EGFP细胞治疗组,肿瘤坏死面积明显大于CIK与CIK-EGFP细胞治疗组,瘤内CIK细胞数量最多.结论 CIK细胞在体内外均具有杀伤胆管癌细胞的作用.转染ICOS基因后,CIK细胞体外存活时间延长、增殖能力增强、IFN-γ的表达增多,其在体内外抗胆管癌作用明显增强.     

不同血液稀释方法对直肠癌患者围术期NK细胞和CIK细胞的影响

目的 比较急性非等容血液稀释(ANIH)和急性高容血液稀释(AHH)联合控制性降压(CH)对直肠癌患者围术期自然杀伤(NK)细胞和细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞的影响.方法 择期直肠癌根治术患者45例,随机均分为ANIH组、AHH+CH组和对照组.分别于麻醉前1 h(T1)、术毕即刻(T2)、术后第1天(T3)、第4天(T4)抽取静脉血检测NK和CIK细胞的数量.结果 与T1时比较,T2～T4时AHH+CH组NK细胞明显升高(P＜0.05),T4时ANIH组NK细胞明显升高(P＜0.05),而对照组则明显降低(P＜0.05).与T1时比较,T2时三组CIK细胞均明显降低(P＜0.05),T4时ANIH组和AHH+CH组均明显升高(P＜0.05),且明显高于对照组(P＜0.05).结论 AHH联合CH以及ANIH均能使直肠癌患者NK和CIK细胞增加,AHH联合CH效果更优.     

自体血回输对全髋关节置换术患者免疫功能的影响

目的 比较回收式自体血回输和异体血输血对全髋关节置换手术患者免疫功能的影响. 方法 选择50例全髋关节置换手术,随机数字表法分为自体血回输组(A组)和异体血输血组(B组),每组25例.术中根据血容量丢失情况分别用自体血回输及异体血输血,于麻醉前、输血后第2天和输血后第5天采用流式细胞仪测定血浆CD4+T淋巴细胞(CD4+)、CD8+T淋巴细胞(CDx+)、自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)的比例以及白细胞介素(interleukin,IL)-2(IL-2)和白细胞介素-6(IL-6)的值.结果 B组输血后CD4+、CD8+、NK细胞、IL-2的值在第2天[(35±6)、(22±6)、(7±3)％、(523±407) ng/L]和第5天[(35±6)、(26±8)、(6±4)％、(442±376) ng/L]均低于术前[(40±8)、(28±9)、(9±4)％、(839±472)ng/L] (P＜0.05);A组输血后CD4+、CD8+的值在第5天[(39±8)、(27±9) ng/L]、NK细胞、IL-2的值在第2天[(8±4)％、(807±534) ng/L]和第5天[(8±4)％、(821±437) ng/L]均较术前有所下降,但差异无统计学意义(P＞0.05);IL-6的值在第2天[(3198±698) ng/L]和第5天[(3076±703) ng/L]均较术前[(2593±784) ng/L]有所升高(P＜0.05). 结论 自体血回输对全髋关节置换手术患者细胞和体液免疫功能均无明显抑制作用,是安全、可靠的血液保护方式.     

CD4+CD25+调节性T细胞/辅助性T细胞17在脓毒症大鼠中的作用

目的 观察CD4+ CD25+调节T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)细胞在脓毒症大鼠炎性免疫反应中的作用.方法 110只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脓毒症(CLP)组,采用改良的盲肠结扎穿孔术(CLP)制作大鼠脓毒症模型.采用流式细胞术检测CD14+单核细胞表面人类白细胞抗原-DR基因(HLA-DR)表达率、Treg细胞及TH17细胞比例;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-17炎性因子蛋白表达.结果 与假手术组比较:(1)伴随着脓毒症病情的发展,大鼠出现明显的免疫抑制,CD14+单核细胞HLA-DR表达率＜30％,IL-10/TNF-α比值(27.41 ±7.04比6.63 ±2.60)明显增高(P＜0.01).(2)术后96 h脓毒症大鼠Treg细胞[(11.91±3.88)％比(6.57±2.60)％,P＜0.01]和Th17细胞[(5.14±0.29)％比(2.85±0.07)％,P＜0.01]表达明显增高.(3)术后96 h脓毒症组前炎性细胞因子IL-6[(42.31±15.89) ng/L比(6.32 ±3.18) ng/L,P＜0.01]、IL-10[(69.89 ±20.78) ng/L比(13.58±5.37) ng/L,P＜0.01]、TNF-α[(5.03±3.10) ng/L比(2.77±1.10) ng/L,P＜0.01]、TGF-β[(4.99±2.01) ng/L比(1.88±1.07) ng/L,P＜0.01]、IL-17[(92.77±11.64) ng/L比(7.58±2.30) ng/L,P＜0.01]表达明显增高.结论 伴随着脓毒症病情的发展,大鼠出现明显的免疫抑制;在大鼠脓毒症的发生发展中,Treg细胞介导的免疫抑制及Th17细胞介导免疫激活反应同时存在;脓毒症细胞因子微环境变化可能是导致Treg细胞/Th17细胞失衡的原因之一.     

1例自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗急性白血病的护理

1例急性白血病患者巩固化疗后完全缓解,对其行自体外周血干细胞移植术,术后给予细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗,严格回输操作规程,注意观察不良反应,给予心理支持,预防出血及感染。结果患者全血细胞重建持续稳定,免疫标志细胞CD3 由32.50%升到90.17%骨髓细胞完全正常。每2 周随访1 次,连续8 周患者未复发,已恢复正常生活。     

腹腔镜和开腹直肠癌根治术对机体免疫功能的影响

目的:探讨腹腔镜直肠癌根治术(Miles)围手术期免疫功能的变化.方法:80例行Miles的患者分为2组,腹腔镜纽(L组)和传统开腹组(O组),每组40例.分别于术前1 d,术后第1天、第2天、第3天抽取患者外周静脉血,检测辅助T淋巴细胞(TH)2个亚群Th1、Th2细胞含量、Th1/Th2及白细胞介素-2(IL2)、IL-6含量.术前1 d和术后第3天检测全血CD3+CD56+T细胞和CD3-CD56十自然杀伤(NK)细胞的百分比.1L-2、IL-6的检测用酶联免疫吸附法(ELISA),CD3+CD56+T细胞和CD3-CD56+NK细胞用流式细胞仪进行检测.结果:术后第1天,L组Th1细胞含量高于O组(P＜0.05)；术后第1天、第2天、第3天,L组Th2细胞含量低于0组,Th1/Th2高于O组(P＜0.05)；术后第2天,L组IL2含量高于O组,术后第1天L组IL 6含量低于O组(P＜0.05).2组手术对CD3+CD56+T细胞、CD3-CD56+NK细胞的影响差异有显著性意义(P＜0.05).结论:Miles对患者术后免疫功能的抑制有一定的保护作用,对肿瘤患者的预后有益.     

恶性重度梗阻性黄疸对机体免疫功能的影响及免疫增强剂的治疗作用

目的 探讨恶性重度梗阻性黄疸对机体免疫功能的影响及免疫增强剂的治疗作用。方法 选择我院2010年3月至2012年7月收治的无明显黄疸（TBil＜17.1μmol/L）的胆石症患者（A组,无黄疸对照组,n=20）,恶性非重度梗阻性黄疸患者（TBil17.1～342μmol/L）（B组,恶性非重度黄疸组,n=20）,恶性重度梗阻性黄疸（TBil＞342μmol/L）行经皮经肝穿刺胆管引流术（PTCD）患者（C组,恶性重度黄疸组,n=39）。其中C组又分成免疫增强剂治疗组（C1,n=18）和非治疗组（C2,n=21）。C1组PTCD术后当天开始给予注射用胸腺肽α-1,1.6 mg/d,皮下注射,连用7 d。比较各组血浆细胞因子（IL-2、IFN-α、TNF-α）、T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+）和NK细胞百分率的变化。结果 C组CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞百分率及IL-2明显低于A组（P＜0.05）,CD3+、CD8+百分率及IL-2明显低于B组（P＜0.05）;TNF-α、IFN-αC组明显高于A组和B组（P＜0.05）;B组CD3+、NK细胞百分率及IL-2明显低于A组（P＜0.05）;CD4+/CD8+比值各组间无明显差异。C1组CD3+、CD4+百分率,CD4+/CD8+比值及IL-2呈升高趋势,TNF-α、IFN-α呈降低趋势,胸腺肽α-1治疗后第5天CD3+、CD4+百分率明显高于C2组（P＜0.05）,第7天CD4+百分率、CD4+/CD8+比值、IL-2、IFN-α明显高于C2组（P＜0.05）,TNF-α明显低于C2组（P＜0.05）。结论 恶性梗阻性黄疸患者免疫功能降低,重度黄疸时免疫功能受损更加明显。免疫增强剂可明显改善恶性梗阻性黄疸患者的免疫功能。     

膝关节后交叉韧带断裂治疗临床分析

目的 对35例膝关节后交叉韧带断裂治疗进行临床分析,重点探讨了有关交叉韧带断裂的治疗问题。方法 经明确诊断后,分析采用胫骨附着处撕脱骨折复位固定手术治疗26例、早期髌韧带中1／3移植重建3例、单纯长腿石膏固定6例。结果 本组病例全部进行随访,随访时间13个月－5年,胫骨附着处撕脱骨折复位固定及髋韧带中1／3移植重建29例为优良、单纯长腿石膏固定6例为差。结论 后交叉韧带断裂后应该及时给予手术修复;膝后外侧手术入路,操作简单,暴露充分;少于3个月的陈旧性病例仍适应手术治疗。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。