急性心肌梗死晚期再灌注后心肌细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达的研究

目的： 探讨犬急性心肌梗死后晚期再灌注对梗死周边缺血区心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。方法: 健康成年杂交犬28只，全麻下常规开胸暴露冠状动脉后随机分为3组：假手术组（n=8）,急性心肌梗死组（n=10）、晚期再灌注组（n=10）。假手术组仅行左冠状动脉前降支下穿过丝线而不结扎冠状动脉，急性心肌梗死组行左冠状动脉前降支高位永久结扎，晚期再灌注组在高位结扎左冠状动脉前降支 6 h 后松解结扎线予以再灌注 6 h。共有23只犬模型制作成功。各组犬均于术后 12 h 处死，采集心肌标本。使用TUNEL法检测心肌细胞凋亡，免疫组化染色和Western blotting蛋白印迹分析Bcl-2、Bax在心肌细胞中表达情况。结果: 晚期再灌注组心肌细胞凋亡数较急性心肌梗死组明显减少（P<0.05），但两组心肌细胞凋亡数均高于假手术组（P<0.01）。与假手术组相比，急性心肌梗死组和晚期再灌注组Bcl-2蛋白的表达均升高（P<0.01），其中在晚期再灌注组的表达略多于急性心肌梗死组，但无显著差异（P＞0.05）。Bax蛋白在晚期再灌注组的表达高于假手术组（P<0.01），但低于急性心肌梗死组（P<0.05）。结论: 急性心肌梗死后晚期再灌注可以减少梗死周边缺血区心肌细胞凋亡，其机制可能与心肌细胞表达Bax蛋白减少有关。     

糖尿病在糖尿病大鼠心肌梗死后心力衰竭形成中的效应

目的： 评估糖尿病在链脲霉素（STZ）诱导的血糖不加控制的糖尿病大鼠急性心肌梗死（AMI）后心力衰竭(HF)形成中的效应。方法：所有SD大鼠随机分组,糖尿病组经腹腔内注射STZ（65mg/kg）诱导糖尿病,70 d后所有AMI组结扎冠状动脉左前降支建立AMI模型。确定AMI前后各时点观察大鼠的生存率,心肌超微结构的变化,进行血流动力学分析、心肌纤维化测定及左心肥厚的评估。结果：结扎左冠状动脉前降支后,糖尿病大鼠的左心功能恶化及左室重构的速度均较非糖尿病大鼠显著。在早期阶段,糖尿病与非糖尿病大鼠心肌纤维化相似,而1月后却出现显著差别。结论：糖尿病大鼠AMI后心力衰竭进展明显加速。     

急性心肌梗死大鼠趋化因子表达与心功能的关系

目的：探讨急性心肌梗死（AMI）大鼠心肌局部趋化因子的表达与淋巴细胞浸润及心功能的关系。 方法： 结扎冠状动脉左前降支建立AMI大鼠模型，实验动物分为3组：心衰组（MI-HF）、未心衰组(MI-NF)和假手术组(sham)，假手术组只过线不结扎。于术后3 d、1周、2周检测血流动力学，将左室舒张末期压力(LVEDP)≥15 mmHg者归为心衰组。用半定量RT-PCR方法测定心肌梗死区（包括梗死周边区）趋化因子的mRNA表达，包括γ干扰素诱导的单核因子（MIG）、巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）、正常T细胞表达和分泌、活化时表达下降的因子（RANTES）。HE染色切片进行梗死区淋巴细胞计数分析。 结果： AMI大鼠心肌局部趋化因子的mRNA表达于术后3 d开始升高，1周达峰值，且MI-HF组较MI-NF组表达更高(RANTES, 0.83±0.05 vs 0.51±0.19, P<0.05; MIP-1α, 1.94±0.30 vs 1.48±0.33, P<0.05; MIG, 1.40±0.27 vs 0.93±0.28, P<0.05)。RANTES和MIP-1α的表达与淋巴细胞浸润显著相关(RANTES，r=0.35，P<0.05；MIP-1α，r＝0.40，P<0.05)。 结论： AMI后心肌局部趋化因子RANTES、MIP-1α、MIG表达增高，且趋化因子水平与心功能有相关性，趋化因子可能参与了AMI后心衰的病理生理学发展过程。     

罗格列酮对兔急性心肌梗死后心室重构及心功能的影响

目的 探讨罗格列酮(Ros)对兔急性心肌梗死(AMI)后心室重构和心功能的影响.方法 将30只日本大耳白兔随机分为:假手术(Sham)组,AMI模型组,Ros组,每组10只.永久性结扎冠状动脉左前降支中上1/3处制作AMI模型,术后6h Ros组给予Ros 3mg/(kg·d)灌胃,AMI组及sham龃给予等量蒸馏水灌...     

急性心肌梗死晚期再灌注后心肌细胞凋亡与Bcl-2、Bax 蛋白表达的研究

目的:探讨犬急性心肌梗死后晚期再灌注对梗死周边缺血区心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。方法:健康成年杂交犬28只,全麻下常规开胸暴露冠状动脉后随机分为3组:假手术组(n=8),急性心肌梗死组(n=10)、晚期再灌注组(n=10)。假手术组仅行左冠状动脉前降支下穿过丝线而不结扎冠状动脉,急性心肌梗死组行左冠状动脉前降支高位永久结扎,晚期再灌注组在高位结扎左冠状动脉前降支6 h后松解结扎线予以再灌注6 h。共有23只犬模型制作成功。各组犬均于术后12 h处死,采集心肌标本。使用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化染色和Western blotting蛋白印迹分析Bcl-2、Bax在心肌细胞中表达情况。结果:晚期再灌注组心肌细胞凋亡数较急性心肌梗死组明显减少(P<0.05),但两组心肌细胞凋亡数均高于假手术组(P<0.01)。与假手术组相比,急性心肌梗死组和晚期再灌注组Bcl-2蛋白的表达均升高(P<0.01),其中在晚期再灌注组的表达略多于急性心肌梗死组,但无显著差异(P>0.05)。Bax蛋白在晚期再灌注组的表达高于假手术组(P<0.01),但低于急性心肌梗死组(P<0.05)。结论:急性心肌梗死后晚期再灌注可以减少梗死周边缺血区心肌细胞凋亡,其机制可能与心肌细胞表达Bax蛋白减少有关。     

犬急性心肌梗死晚期再灌注对心肌Fas/FasL系统的影响及其可能的氧化应激机制

目的：探讨急性心肌梗死晚期再灌注对心肌细胞凋亡基因Fas/FasL表达的影响及其可能的氧化应激机制。方法：18条健康成年杂种犬，按随机方法分为3组，每组6条。晚期再灌注组：结扎冠状动脉前降支6 h后再灌注6 h;持续缺血组:开胸后6 h,结扎冠状动脉前降支6 h,不行再灌注处理；对照组：冠状动脉前降支只穿线不结扎持续12 h。免疫组化法检测梗死边缘区心肌Fas和FasL蛋白表达，TUNEL法测心肌细胞凋亡指数(AI)，比色法测定心肌超氧化物歧化酶（SOD）活性、还原性谷胱甘肽酶（GR）活性、丙二醛（MDA）含量等。结果：心肌Fas和FasL蛋白表达以及细胞凋亡指数在持续缺血组和晚期再灌注组明显高于对照组（分别为P<0.05,P<0.01），而且晚期再灌注组明显高于持续缺血组（P<0.05）。持续缺血组和晚期再灌注组的心肌细胞SOD活性和GR活性明显低于对照组(分别为P<0.05, P<0.01),而 MDA含量均明显高于对照组（P<0.05），并且两组之间亦有显著差别（P<0.05）。结论：AMI晚期再灌注使梗死边缘区心肌细胞Fas/FasL蛋白表达以及细胞凋亡指数增加，提示晚期再灌注仍然存在再灌注损伤，其机制可能与氧化应激有关。     

丹参酮ⅡA对急性心肌梗死大鼠的心肌凋亡及Bax与Caspase-3表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡与Bax、Caspase-3蛋白表达的影响。方法选取36只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组(Sham)、急性心肌梗死组(AMI)和丹参酮ⅡA治疗组(TanⅡA),通过冠状动脉左前降支结扎大鼠建立AMI模型。制模2周后行超声心动图检查观察各组动物心脏功能情况,而后处死动物取出心脏,原位末端凋亡法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况,Western blot方法检测Bax及Caspase-3的蛋白表达。结果与假手术组比较,AMI组左室射血分数(LVEF)及左室长轴缩短分数(FS)升高,左室舒张末期内径(LVDd)及左室收缩末期内径(LVDs)降低,心肌细胞凋亡数明显升高,Bax与Caspase-3蛋白表达量显著上调(P0.01);与AMI组比较,丹参酮ⅡA能扭转上述变化(P0.01)。结论丹参酮ⅡA对急性心肌梗死大鼠的作用与抑制心肌细胞凋亡和凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达相关。     

应用微阵列芯片分析糖尿病大鼠下肢动脉硬化miRNAs差异表达谱

 目的:通过建立糖尿病大鼠模型,检测糖尿病大鼠动脉硬化下肢与糖尿病大鼠无动脉硬化下肢的动脉组织中微小RNAs(miRNAs)的差异表达情况,探究异常表达的miRNAs参与糖尿病大鼠下肢动脉硬化可能的分子机制。方法:选取建模成功的患有糖尿病下肢动脉硬化和患有糖尿病但无下肢动脉硬化的大鼠,取出下肢动脉组织,分别提取总的miRNAs,用miRNAs微阵列芯片进行杂交检测,经过芯片扫描和数据分析,再用RT-qPCR验证芯片的扫描分析结果,最终获得糖尿病大鼠下肢动脉硬化的miRNAs差异表达谱。结果:筛选出10个与糖尿病大鼠下肢动脉硬化有关的miRNAs,即 rno-miR-206-3p、rno-miR-133a-5p、rno-miR-133b-3p、rno-miR-133a-3p、rno-miR-325-5p、rno-miR-675-3p、rno-miR-411-5p、rno-miR-329-3p、rno-miR-335和rno-miR-126a-3p,这10个异常表达的mi-RNAs都上调。RT-qPCR证实,其中9个miRNAs与芯片检查结果一致,仅仅rno-miR-335的PCR检测结果与基因芯片检测结果相反,表达下调。结论:有一群miRNAs在糖尿病大鼠下肢动脉硬化中起着重要作用,其表达过程很可能影响着动脉硬化的进程。     

早发型重度子痫前期血浆外泌体miRNAs表达谱分析

目的 通过比较早发型重度子痫前期（EOPE）患者与正常妊娠妇女血浆外泌体源性miRNAs表达谱的差异,初步探讨EOPE的发病机制。方法 收集于我院产检并最终诊断为EOPE的孕妇血浆（EOPE组,n=4）及正常妊娠妇女血浆（对照组,n=4）;对外泌体进行鉴定,提取血浆外泌体中的miRNAs进行测序,对差异表达的miRNAs进行生物信息学分析。分别利用3个靶基因预测网站进行靶基因预测,利用Venn图绘制数据库所预测的靶基因交集。使用在线分析网站DAVID分析2组差异表达蛋白中的GO功能注释结果,然后进行KEGG通路富集分析。用RT-PCR检测胎盘及血浆外泌体miRNAs水平。结果 检测到的颗粒直径为30～180 nm,峰值为112.8 nm;外形为茶状或椭圆形;2组均显著表达TSG101和CD63。测序结果显示：与对照组相比,EOPE组中共筛查出27个有显著表达差异的miRNAs,其中15个表达上调,12个表达下调;表达差异最显著的上调miRNA为miR-152。在线数据库网站预测所有差异表达miRNAs靶基因共8 414个,经生物信息学分析显示其靶基因在补体、凝血级联、MMPs信号通路及...     

大鼠心肌梗死后AChE阳性神经纤维再支配的观察

目的：观察大鼠心肌梗死后，梗死灶边缘区乙酰胆碱酯酶（AChE）阳性神经纤维密度的变化，探讨AChE阳性神经纤维的再支配过程。方法：实验用大鼠，结扎左冠状动脉前降支制备急性心肌梗死（AMI）模型，应用Kamovsky--Roots法和电镜组化技术，显示左心室梗死周围区1、2、12周AChE阳性神经纤维的密度变化。结果：①AMI后1、2周左心室梗死边缘区的AChE阳性神经纤维密度降低（P〈0．05），②12周后梗死边缘区的AChE阳性神经纤维密度升高，接近对照组。③电镜下见AChE阳性反应物以散在颗粒形式出现于肌间神经纤维走行处。结论：大鼠急性心肌梗死后12周，梗死周围区的存活心肌出现了神经再支配。     

Global microRNA profiles and signaling pathways in the development of cardiac hypertrophy

Hypertrophy is a major predictor of progressive heart disease and has an adverse prognosis. MicroRNAs (miRNAs) that accumulate during the course of cardiac hypertrophy may participate in the process. However, the nature of any interaction between a hypertrophy-specific signaling pathway and aberrant expression of miRNAs remains unclear. In this study, Spague Dawley male rats were treated with transverse aortic constriction (TAC) surgery to mimic pathological hypertrophy. Hearts were isolated from TAC and sham operated rats (n=5 for each group at 5, 10, 15, and 20 days after surgery) for miRNA microarray assay. The miRNAs dysexpressed during hypertrophy were further analyzed using a combination of bioinformatics algorithms in order to predict possible targets. Increased expression of the target genes identified in diverse signaling pathways was also analyzed. Two sets of miRNAs were identified, showing different expression patterns during hypertrophy. Bioinformatics analysis suggested the miRNAs may regulate multiple hypertrophy-specific signaling pathways by targeting the member genes and the interaction of miRNA and mRNA might form a network that leads to cardiac hypertrophy. In addition, the multifold changes in several miRNAs suggested that upregulation of rno-miR-331*, rno-miR-3596b, rno-miR-3557-5p and downregulation of rno-miR-10a, miR-221, miR-190, miR-451 could be seen as biomarkers of prognosis in clinical therapy of heart failure. This study described, for the first time, a potential mechanism of cardiac hypertrophy involving multiple signaling pathways that control up- and downregulation of miRNAs. It represents a first step in the systematic discovery of miRNA function in cardiovascular hypertrophy.     

MicroRNA-24对心肌梗死后心肌细胞凋亡的调控作用

 目的：研究microRNA-24（miR-24）在心肌梗死小鼠心肌组织中的表达变化,并研究miR-24对心肌细胞凋亡及心肌梗死后心功能的调控作用。方法：建立小鼠心梗模型及心肌细胞缺血缺氧模型,qRT-PCR检测心梗后心肌组织中miR-24表达情况;构建携带miR-24的慢病毒及脂质体,心梗组织局部注射慢病毒转染miR-24及心肌原代细胞转染miR-24;caspase-3/7检测心肌细胞凋亡情况;超声心动图及Masson染色检测心功能及心梗面积;TUNEL染色检测细胞凋亡;表达谱芯片检测及生物信息学分析预测靶位点。结果：miR-24在心梗部位及心梗周边区表达显著降低（P<0.01）,心梗模型转染miR-24能够改善心梗后2周心功能（P<0.05）,并减少心梗面积,抑制心梗局部细胞凋亡水平;原代心肌细胞转染miR-24能减少缺血缺氧引起的细胞凋亡（P<0.01）,芯片检测发现miR-24可能通过BCL2L11、ANK3及SGPL1等基因起作用。结论：miR-24在心梗后心肌组织中低表达。miR-24能抑制心肌细胞缺血缺氧条件下的凋亡水平,进而改善心梗后心功能。     

RA 患者外周血和关节炎大鼠破骨细胞miRNAs 异常表达谱比较及特征性miRNA 功能分析

目的:筛选类风湿关节炎(RA)患者外周血与关节炎大鼠破骨细胞的miRNAs 异常表达谱,分析RA 的特征性miRNAs 及其功能。方法:采用miRNAs 芯片,筛选RA 患者与正常人外周血、共培养诱生的关节炎大鼠破骨细胞与正常基质细胞的miRNAs 表达谱的差异;Real time PCR 对芯片结果进行验证;生物信息学方法对关键miRNA 进行功能分析。结果:与正常人相比,RA 患者外周血中具有差异表达的miRNAs 有189 个;与单核细胞比较,破骨细胞中具有差异表达的miRNAs 有211 个,其中miR-15b-5p 等10 个miRNAs 在RA 患者外周血及大鼠破骨细胞中均异常表达。Real time PCR 验证结果与芯片检测结果具有一致性。生物信息学分析结果显示特征性miRNA 的靶基因显著富集在VEGF,MAPK 信号通路等信号通路。结论:部分miRNAs 在RA 患者外周血及关节炎大鼠破骨细胞中的异常表达具有一致性,其可能作为RA 的特征性miRNAs,通过调控相关信号通路干预破骨细胞分化等病理过程。     

TMLR对缺血心肌乳酸代谢及线粒体的影响

目的:探讨激光心肌血运重建术(TMLR)对急性心肌缺血(AMI)的作用与机制。方法: 将18条犬随机等分为假手术组、AMI组和TMLR组,采用连续型Nd:YAG激光行TMLR术。测动脉和冠状窦血乳酸含量(A.Lat 和CS.Lat),心肌乳酸代谢速率(MLR)和心肌乳酸吸收分数(MLE);超微电镜结合生物体视学原理定量观察心肌细胞线粒体形态和数量。结果: 结扎左前降支冠状动脉(LAD)后60 min,AMI组和TMLR组CS.Lat分别为(7.63±4.27)mmol/L和(5.78±3.98)mmol/L,P<0.05;MLR分别为(0.03±0.01)mmol·100 g心肌^-1·min^-1和(0.06±0.02)mmol·100 g心肌^-1·min^-1,P<0.05;MLE分别为(12.04±3.04)% 和(21.84±8.49)%,P<0.05。LAD结扎后4 h,AMI组和TMLR组线粒体体密度分别为(27.51±7.93)% 和(31.26±3.85)%,P>0.05;面密度分别为(1.25±0.18)μm^-1和(1.64±0.28)μm^-1,P<0.01;数密度分别为(0.10±0.03)μm^-3和(0.18±0.05)μm^-3,P<0.01;平均体积分别为(5.27±2.85)μm³和(2.80±0.54)μm³,P<0.05;平均外径分别为(2.06±0.36)μm和(1.78±0.12)μm,P<0.05。结论: TMLR可纠正急性心肌缺血犬的心肌乳酸代谢障碍和减轻心肌细胞损伤。     

Deep sequencing of small RNAs from human skin reveals major alterations in the psoriasis miRNAome

Psoriasis is a chronic and complex inflammatory skin disease with lesions displaying dramatically altered mRNA expression profiles. However, much less is known about the expression of small RNAs. Here, we describe a comprehensive analysis of the normal and psoriatic skin miRNAome with next-generation sequencing in a large patient cohort. We generated 6.7 × 10(8) small RNA reads representing 717 known and 284 putative novel microRNAs (miRNAs). We also observed widespread expression of isomiRs and miRNA*s derived from known and novel miRNA loci, and a low frequency of miRNA editing in normal and psoriatic skin. The expression and processing of selected novel miRNAs were confirmed with qRT-PCR in skin and other human tissues or cell lines. Eighty known and 18 novel miRNAs were 2-42-fold differentially expressed in psoriatic skin. Of particular significance was the 2.7-fold upregulation of a validated novel miRNA derived from the antisense strand of the miR-203 locus, which plays a role in epithelial differentiation. Other differentially expressed miRNAs included hematopoietic-specific miRNAs such as miR-142-3p and miR-223/223*, and angiogenic miRNAs such as miR-21, miR-378, miR-100 and miR-31, which was the most highly upregulated miRNA in psoriatic skin. The functions of these miRNAs are consistent with the inflammatory and hyperproliferative phenotype of psoriatic lesions. In situ hybridization of differentially expressed miRNAs revealed stratified epidermal expression of an uncharacterized keratinocyte-derived miRNA, miR-135b, as well as the epidermal infiltration of the hematopoietic-specific miRNA, miR-142-3p, in psoriatic lesions. This study lays a critical framework for functional characterization of miRNAs in healthy and diseased skin.     

Differential microRNA expression and identification of putative miRNA targets and pathways in head and neck cancers

MicroRNAs (miRNAs) are small noncoding RNAs that involved in various cancer-related cellular processes. Diverse studies on expression profiling of miRNAs have been performed and the data showed that some miRNAs are up-regulated or down-regulated in cancer. Until now, there are no data published on the miRNA expression in head and neck cancers from Malaysia. Hence, this study aimed to investigate potentially crucial miRNAs in head and neck cancer patients from Malaysian populations. A global miRNA profiling was performed on 12 samples of head and neck cancer tissue using microarray analysis followed by validation using real-time RT-PCR. Microarray analysis identified 10 miRNAs that could distinguish malignant head and neck cancer lesions from normal tissues; 7 miRNAs (hsa-miR-181a-2*, hsa-miR-29b-1*, hsa-miR-181a, hsa-miR-181b, hsa-miR-744, hsa-miR-1271 and hsa-miR-221*) were up-regulated while 3 miRNAs (hsa-miR-141, hsa-miR-95 and hsa-miR-101) were down-regulated. These miRNAs may contribute in a simple profiling strategy to identify individuals at higher risk of developing head and neck cancers, thus helping in the elucidation of the molecular mechanisms involved in head and neck cancer pathogenesis.     

曲美他嗪与帕瑞昔布联合给药对急性心肌梗死期大鼠心脏的保护作用

目的: 探讨曲美他嗪(TMZ)与帕瑞昔布(parecoxib)联合给药对急性心肌梗死模型大鼠心脏的保护作用及其机制。方法: 66只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、急性心肌梗死模型组(AMI)、曲美他嗪治疗组(AMI+TMZ)、帕瑞昔布钠治疗组(AMI+parecoxib)和曲美他嗪与帕瑞昔布钠联合治疗组(AMI+TMZ+parecoxib)。大鼠实施冠状动脉左前降支结扎后,第3 d开始给药,第8 d检测大鼠心功能(HR、LVSP、LVEDP、+dp/dt_max和-dp/dt_max),测定心脏梗死面积, bax和bcl-2 基因表达, COX-2、Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3的蛋白表达,caspase-3活化以及心肌梗死周边区细胞凋亡率。结果: 与假手术组相比,AMI模型组大鼠心肌梗死周边区COX-2蛋白表达明显增高(P<0.01);帕瑞昔布钠治疗组与AMI模型组相比,COX-2表达下降(P<0.01);联合给药治疗组与模型组相比,能显著改善心肌梗死大鼠的心脏收缩功能(LVSP与+dp/dt_max)(P<0.05),并使心肌梗死面积缩小(P<0.05),心肌梗死周边区细胞的凋亡率下降,并且治疗效果优于单独给药。联合给药治疗组与模型组相比,Bax/Bcl-2 mRNA和蛋白表达比例显著降低(P<0.05),caspase-3活性和cleaved caspase-3蛋白表达下降(P<0.05)。结论: 帕瑞昔布钠与曲美他嗪联合给药治疗具有一定的协同保护缺血心肌的作用,其机制可能与共同抑制心肌细胞凋亡有关。