醋酸甲羟孕酮增强顺铂对人卵巢癌耐药细胞抗癌作用的研究

目的:观察醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢癌CoC1/cDDP细胞移植瘤的生长抑制作用及对DDP的耐药逆转作用,并分析其作用机制。方法:建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,每组5只。(1)对照组:腹腔注射等体积生理盐水;(2)DDP治疗组:每只每次腹腔注射DDP 3mg/kg。(3)MPA治疗组:每只每次灌胃30mg/kg;(4)联合治疗组:每只每次灌胃MPA 30mg/kg,1h后每只每次腹腔注射DDP 3mg/kg,每隔2天给药1次,共4次,于治疗第1、5、10、15、20天分别测瘤体积,20天后处死裸鼠,完整剥出瘤组织,称瘤重,计算抑瘤率;通过流式细胞仪检测亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞鉴定细胞凋亡,分析移植瘤细胞周期;用半定量RT-PCR法检测移植细胞组织Survivin-ΔEx3、caspase-3、P21WAF1/CIP1及GST-π4基因mRNA表达。结果:(1)MPA组、MPA+DDP组治疗第10天起皮下移植瘤体积明显小于DDP组和对照组,且进行性缩小(P<0.01);抑瘤率分别为51.63%、62.21%,均明显大于DDP组的6.84%(P<0.01),并且两组间有显著差异(P<0.01);(2)流式细胞仪分析显示,移植瘤出现亚G1期峰及AnnexinV+/PI-细胞均证实MPA能诱导CoC1/cDDP细胞凋亡,并显著高于对照组及DDP组,并出现G1期阻滞;与DDP合用除出现G1期阻滞外又出现G2/M期阻滞,S期明显减少,亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞进一步上升;(3)半定量RT-PCR检测显示,MPA组Survivin-ΔEx3、GST-πmRNA下调,而P21WAF1/CIP1、caspase-3 mRNA上调,与DDP合用后,对Survivin-ΔEx3、P21WAF1/CIP1及GST-πmRNA的表达无协调作用,而对caspase-3 mRNA有协同上调作用。结论:MPA通过阻滞G0/G1期明显抑制了CoC1/cDDP移植瘤生长,并有很强的致凋亡作用,同时下调GST-πmRNA,从而逆转对顺铂耐药。     

TWEAK调控凋亡增加上皮性卵巢癌细胞对铂类药物敏感性的研究

目的：探讨肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂（TWEAK）在调控上皮性卵巢癌（EOC）细胞对顺铂（DDP）敏感性中发挥的作用。方法：不同浓度TWEAK刺激A2780/cDDP细胞后,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力及DDP半数抑制浓度（IC50）的变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡率的变化;采用透射电镜检测细胞核染色质形态和凋亡小体的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白caspase 3的活化情况。结果：TWEAK对A2780/cDDP细胞的增殖能力无影响,但能显著增加A2780/cDDP细胞对DDP的敏感性。流式结果显示,随着TWEAK剂量增加,A2780/cDDP细胞的凋亡显著增加。TWEAK刺激后A2780/cDDP细胞中caspase 3活化体表达增加,细胞核染色质发生形态变化,诱导了细胞的凋亡及凋亡小体形成。结论：TWEAK通过活化凋亡相关通路,促进EOC细胞凋亡,提高了DDP耐药EOC细胞对DDP的敏感性。这可能为临床开创逆转EOC铂类耐药的治疗新途径提供理论依据。     

Survivin反义寡核苷酸诱导人卵巢癌耐药细胞株COC_1/DDP凋亡的实验研究

目的 :探讨经脂质体介导的survivin反义寡核苷酸诱导人卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡的作用。方法 :将脂质体介导的survivin反义寡核苷酸 (survivin ASONs)作用于COC1/DDP细胞 ,采用一步法RT PCR检测survivin、bcl 2mRNA的表达 ,并进行细胞核DNA梯形电泳 ,检测caspase 3活性 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。结果 :经survivin ASONs作用后COC1/DDP细胞中survivin等抗凋亡基因的表达下降 ,细胞核DNA电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带 ,caspase 3活性增加且呈时间依赖性 ,细胞凋亡率达33.18% ,细胞周期G2 /M及S期明显下降而多阻滞于G0 /G1期 ,与对照组差异有显著性(P <0 .0 5 )。结论 :survivin ASONs反义寡核苷酸能诱导人卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP细胞凋亡 ,且效果显著     

Caspase-3活性改变与人卵巢癌细胞系COC1/DDP耐药的关系

目的 探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP中抗凋亡蛋白Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达及半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性与人卵巢癌顺铂耐药的关系。方法:采用RT-PCR和Western Blot分析人卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1和顺铂耐药株COC1/DDP中Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达和caspase-3的活性。并用流式细胞术测定顺铂作用后COC1和COC1/DDP细胞株的凋亡率。结果:在COC1/DDP细胞中,Bcl-XL和Bcl-2的表达明显高于COC1细胞;顺铂作用后,在COC1/DDP细胞株中细胞色素C的表达明显减少,caspase-3活性明显降低(P<0.05);其凋亡率也明显低于COC1细胞株(P<0.05)。结论:人卵巢癌细胞株COC1/DDP对顺铂产生耐药可能与细胞内Bcl-XL、Bcl-2过度表达抑制了线粒体细胞色素C的释放及caspase-3活性有关。     

拓扑替康诱导人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP凋亡的研究

目的探讨拓扑替康(TPT)诱导人卵巢癌顺铂耐药株COC1/DDP凋亡的内在分子机制。方法采用透射电镜和TUNEL法观察TPT诱导COC1/DDP细胞凋亡的情况;采用RTPCR和Westernblot检测TPT对COC1/DDP细胞内bcl2、bax和caspase3基因表达的影响以及caspase3活性的改变。结果COC1/DDP细胞在TPT作用后出现典型的凋亡形态特征,且凋亡率由8.54%上升为19.31%(P<0.05);TPT不影响COC1/DDP细胞内bcl2mRNA表达,却明显增加baxmRNA和caspase3mRNA表达,并提高caspase3活性。结论TPT诱导COC1/DDP细胞凋亡可能依赖于细胞内bax蛋白增高和caspase3的活化。     

米非司酮对卵巢上皮性癌耐药细胞DNA修复基因表达和顺铂敏感性的影响

目的 研究米非司酮对卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞DNA修复基因表达的调控,及对顺铂的增敏作用.方法 应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮作用后卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的顺铂半数抑制浓度(IC50);用RT-PCR技术、流式细胞仪检测米非司酮联合顺铂作用后COC1/DDP细胞ERCC1、BRCA1、hMLH1 mRNA的表达水平及细胞周期和凋亡率的变化;建立COC1/DDP细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分为顺铂组、米非司酮组、联合组和对照组,观察米非司酮在裸鼠体内对顺铂的增敏作用.结果 2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮分别使COC1/DDP细胞对顺铂的IC50下降为(3.18±0.46)、(1.95±0.14)和(0.64±0.18)μg/ml,2.5 μmol/L米非司酮联合顺铂作用后的IC50与单用顺铂者[(3.71±0.38)μg/ml]比较,差异无统计学意义(P=0.076),其他浓度之间两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).米非司酮下调ERCC1、BRCA1、hMLH1 mRNA表达水平,3种基因mRNA的相对表达量随米非司酮浓度的升高均呈下降趋势.2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮联合顺铂对COC1/DDP细胞作用后,G0/G1,期细胞比例升高(分别为51.68%、53.74%、55.08%).2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮与10 μg/ml顺铂联合作用使细胞凋亡率分别增加为5.11%、9.13%和12.24%.米非司酮联合顺铂治疗裸鼠皮下移植瘤的生长抑制率为70.1%,与顺铂组、米非司酮组(分别为22.5%、6.5%)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 米非司酮通过下调ERCC1、BRCA1、hMLH1基因的表达及阻滞G0/G1期细胞、增加细胞凋亡率来增强顺铂对卵巢癌细胞的抗肿瘤敏感性.     

微小RNA-16逆转上皮性卵巢癌顺铂耐药的研究

目的:研究微小RNA-16(miR-16)在人上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达及其与顺铂耐药的关系。方法:脂质体lipofectamine2000介导miR-16成熟体模拟物(mimics)及阴性对照片段(NC)分别转染人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP。实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-16的表达;蛋白印迹法检测细胞中Bcl-2蛋白、c-myc蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的顺铂半数抑制浓度(IC50);caspase-3活性检测试剂盒检测细胞内caspase-3酶的活性;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果:(1)SKOV3/DDP细胞顺铂耐药指数(RI)为5.33;(2)SKOV3/DDP细胞中miR-16表达水平明显低于SKOV3细胞,约为后者的1/10(P=0.000),转染miR-16 mimics后SKOV3/DDP细胞中miR-16水平升高约660倍(P=0.001);(3)SKOV3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量较SKOV3细胞明显升高,转染miR-16 mimics后SKOV3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量明显降低(P<0.01);(4)SKOV3/DDP细胞转染miR-16 mim-ics后,顺铂IC50(14.19±0.06)较转染NC组(22.52±0.60)明显降低(P=0.002),且顺铂作用后caspase-3的酶活力单位也明显升高(P=0.000);(5)顺铂(20μg/ml)作用24h、48h后,SKOV3组凋亡率明显高于SKOV3/DDP组,转染miR-16 mimics的SKOV3/DDP细胞凋亡率约为转染NC细胞的1.5倍(P<0.01)。结论:miR-16可能通过靶向下调上皮性卵巢癌细胞Bcl-2蛋白,并协同调节c-myc蛋白的表达,增强卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,发挥逆转耐药的作用。     

bcl-2反义寡核苷酸逆转人卵巢上皮性癌细胞耐药的体外研究

目的探讨体外bcl2反义寡核苷酸(AODN)对人卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞顺铂(DDP)耐药的逆转作用。方法以卵巢癌DDP耐药细胞株A2780/DDP为模型,实验组以脂质体为载体,分别将bcl2AODN、bcl2正义寡核苷酸(SODN)、bcl2随机寡核苷酸(RODN)分别转染到A2780/DDP细胞内;阴性对照组细胞以同体积的培养基转染;空白对照组细胞不转染。采用计数法检测细胞增殖变化;RTPCR技术检测bcl2mRNA表达水平;免疫荧光技术检测bcl2蛋白表达。将DDP作用于细胞,观察实验组、阴性对照组、空白对照组对DDP敏感性的差异。采用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测DDP对细胞的抑制率。结果实验组转染AODN的A2780/DDP细胞增殖被抑制,细胞倍增时间延迟了24h;A2780/DDP细胞的bcl2mRNA及蛋白的表达量下降,16μg/ml的AODN转染72h后,bcl2mRNA的表达量为0.76±0.01,bcl2蛋白表达量为171.30±3.09,分别与空白对照组bcl2mRNA(1.56±0.03)、bcl2蛋白(105.34±1.72)的表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.01);与相同浓度SODN、RODN转染的A2780/DDP细胞以及阴性对照组A2780/DDP细胞分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组转染AODN的卵巢癌细胞对DDP的敏感性提高,细胞抑制率为(97.49±1.00)%,与阴性对照组的(3.33±0.17)%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论AODN可通过下调bcl2mRNA及bcl2蛋白表达水平,抑制细胞的生长,增加细胞对DDP的敏感性,在一定程度上逆转了卵巢癌细胞的耐药性。     

miR-101通过调节p-ERK1/2蛋白表达对SKOV3/DDP细胞行为活性的影响

目的:探讨miR-101表达对上皮性卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP行为活性的影响及相关作用机制。方法:上调SKOV3/DDP细胞中miR-101表达水平。RT-PCR法检测SKOV3/DDP细胞中miR-101 mRNA表达水平,CCK-8检测SKOV3/DDP细胞的顺铂敏感性,划痕实验检测SKOV3/DDP细胞的迁移力,Transwell实验检测SKOV3/DDP细胞侵袭力,Annexin V-FITC/PI流式细胞实验检测SKOV3/DDP细胞凋亡率,Western blot法检测SKOV3/DDP细胞p-ERK1/2、波形蛋白(Vimentin)、钙粘蛋白E(E-cadherin)及Caspase-3蛋白表达水平。结果:与各对照组比较,miR-101组SKOV3/DDP细胞miR-101mRNA表达水平明显升高(P0.05),顺铂敏感性明显增加,IC50显著降低(P0.05);划痕距离明显增宽(P0.05),透膜细胞数显著减少(P0.05);细胞凋亡率显著增高(P0.05),p-ERK1/2及Vimentin蛋白表达水平降低(P0.05),E-cadherin及Caspase-3表达水平显著升高(P0.05)。结论:高表达的miR-101可抑制SKOV3/DDP细胞中p-ERK1/2蛋白表达,同时抑制细胞行为活性,促进顺铂诱导的细胞凋亡。     

丙戊酸钠协同顺铂对HO8910细胞杀伤作用机制研究

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)协同顺铂(DDP)对人卵巢癌HO8910细胞的杀伤作用及机制。方法:以1μg/m l DDP联合3mmol/L VPA处理细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;光镜下观察药物作用下各组细胞形态学的改变;流式细胞术检测细胞周期阻滞情况;RT-PCR法检测p53、p21 mRNA水平表达的改变;W estern blot法检测Ac-H3、p53、p21、Cyclin D1蛋白水平表达的改变。结果:(1)VPA能明显抑制HO8910细胞生长,且呈剂量和时间依赖性,VPA+DDP处理组抑制率高于DDP处理组,组间差异有统计学意义(P<0.05);(2)光镜下观察细胞形态,可见VPA处理组细胞体积缩小呈长梭型,胞膜皱缩,贴壁不良,VPA+DDP组改变更明显;(3)VPA阻滞卵巢癌HO8910细胞周期于G0/G1期,VPA+DDP组S期细胞明显减少;(4)VPA及VPA联合DDP均能够明显提高卵巢癌HO8910细胞组蛋白H3的乙酰化水平,上调p53、p21 mRNA及蛋白表达水平,降低CyclinD1蛋白的表达水平,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VPA能够协同DDP杀伤卵巢癌细胞HO8910;其作用机制可能与VPA提高组蛋白乙酰化水平,上调p53、p21基因表达和下调Cyclin D1表达,引发细胞周期阻滞有关。     

雷公藤内酯醇联合紫杉醇对COC1/DDP细胞凋亡的影响及其对PI3K/AKT/GSK3β信号通路的调控

目的：通过研究雷公藤内酯醇（TP）联合紫杉醇对耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞（COC1/DDP细胞）凋亡的影响,以探讨两药联合对COC1/DDP细胞作用的机制。方法：将对数生长期COC1/DDP细胞随机分为6组：空白对照组、紫杉醇组（3.13μg/ml）、LY294002组（10μmol/ml）、TP组（10ng/ml）、LY294002＋紫杉醇组（10μmol/ml LY294002＋3.13μg/ml紫杉醇）、TP＋紫杉醇组（10ng/ml TP＋3.13μg/ml紫杉醇）。采用MTT法检测各组的细胞增殖活性;普通光镜及AO/EB染色荧光显微镜观察细胞形态的变化;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测各组细胞中Akt、pAkt、GSK3β、p-GSK3β蛋白的表达变化。结果：（1）细胞增殖抑制率：TP＋紫杉醇组显著高于TP、紫杉醇组（P〈0.05）;LY294002＋紫杉醇组显著高于LY294002、紫杉醇组（P〈0.05）。联合用药组中,TP＋紫杉醇组显著高于LY294002＋紫杉醇组（P〈0.05）;单用药组中,TP组〉紫杉醇组〉LY294002组（P〈0.05）。各组抑制率均呈时间依赖性（P〈0.05）。（2）普通光镜及AO/EB染色荧光显微镜下观察,除空白组外,各用药组的细胞形态均有凋亡样改变。两联合用药组的细胞凋亡数显著高于各自单药组,TP＋紫杉醇组高于LY294002＋紫杉醇组;单用药组的细胞凋亡数：TP组〉紫杉醇组〉LY294002组。（3）流式细胞仪检测发现,两联合用药组的细胞凋亡率大于各自单药组（P〈0.05）。联合用药组中,TP＋紫杉醇组凋亡率显著高于LY294002＋紫杉醇组（P〈0.05）;单药组的细胞凋亡率为：TP〉紫杉醇〉LY294002（P〈0.05）。（4）p-Akt蛋白和p-GSK3β蛋白的表达从空白对照组→紫杉醇组→LY294002组→TP组→LY294002＋紫杉醇组→TP＋紫杉醇组,呈逐渐减少的趋势,而总Akt、GSK3β蛋白的表达不变。结论：TP可协同紫杉醇促进COC1/DDP细胞凋亡,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt/GSK3β信号通路,从而下调了耐药相关蛋白p-Akt、p-GSK3β的表达。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合顺铂对宫颈癌细胞化疗增敏作用的研究

目的:通过检测组蛋白去乙酰化酶抑制剂(SAHA)联合顺铂(DDP)对宫颈癌SiHa细胞生长抑制和促凋亡结果,探讨SAHA对宫颈癌细胞化疗增敏的疗效及机制。方法:将SAHA 0.25、0.5、1、2、4、6μmol/L和DDP 1、2、4、6、8、10μg/mL分别组成单药组和不同SAHA+DDP联合用药组,另设不加药对照组。MTT法检测两种药物单用及联合用药对SiHa细胞的增殖抑制作用;通过流式细胞术(FCM)观察药物对细胞周期的影响;用AnnexinV-FITC标记药物作用后的细胞,了解其早期凋亡情况;镜检观察药物作用后细胞形态的变化。结果:SAHA有抑制癌细胞生长的作用,两药联合具有协同作用或相加作用(P<0.05);SAHA使细胞停滞在G1/G0期,与DDP联合作用后凋亡率增加,使细胞周期进一步阻滞在G1/G0期(P<0.05)。镜下可见对照组癌细胞生长旺盛,异型性高,SA-HA组与DDP组则可见细胞缩小变形,胞膜皱缩,贴壁不良,肿瘤细胞大量坏死,联用组尤为明显。结论:SAHA联合DDP可以抑制细胞增殖,停滞细胞周期,促进细胞凋亡,二者联合有协同作用。     

苦参碱联合顺铂对子宫颈癌SiHa细胞中TSLC1基因表达的影响

目的探讨苦参碱联合顺铂对人宫颈癌SiHa细胞肺癌肿瘤抑制因子1（TSLC1）基因的表达及SiHa细胞对顺铂敏感性的影响,以期对治疗宫颈癌提供依据。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）测定不同浓度苦参碱组（50、100、150、200、250μg／ml）、顺铂组（5、10、15、20、25μg／ml）和联合组（15μg／ml顺铂联合5种浓度苦参碱）干预SiHa细胞后的抑制率;采用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）技术检测TSLC1 mRNA表达水平的变化。结果苦参碱及顺铂呈剂量依赖方式抑制SiHa细胞的生长,且随着各组浓度的增高,TSLC1 mRNA表达上调（P〈0．01）。不同浓度联合组对细胞的抑制率分别为39．35％、63．51％、68．74％、72．04％和74．31％,TSIC1 mRNA的表达量分别为8．59±0．01、15．33±0．01、26．38±0．07、61．34±0．01和92．33±0．01,与苦参碱组或顺铂组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论苦参碱联合顺铂抑制人宫颈癌SiHa细胞生长的机制可能与TSLC1 mRNA的表达上调有关,且苦参碱能够增加SiHa细胞对顺铂的敏感性。     

凋亡相关基因和半胱天冬氨酸蛋白酶-3在卵巢癌顺铂耐药细胞株中的表达

目的　探讨凋亡相关基因和半胱天冬氨酸蛋白酶 3 (caspase 3 )在卵巢癌顺铂 (DDP)耐药细胞株中的表达。方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术、蛋白印迹法和流式细胞仪分析卵巢癌DDP敏感细胞株A2 780、COC1和DDP耐药细胞株A2 780 /DDP、COC1/DDP中凋亡相关基因bcl 2、bcl XL、bax和bcl Xs的表达 ,及不同浓度DDP(0、5、10、2 0 μmol/L)作用后上述 4种细胞中caspase 3活性及其底物多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 (PARP)的变化。结果　bcl 2和bcl XLmRNA的表达 ,A2 780 /DDP细胞分别为 1 87± 0 2 5和 1 73± 0 15 ,明显高于A2 780细胞的 1 48± 0 14和 1 41± 0 19,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;bcl 2和bcl XL 蛋白的表达 ,A2 780 /DDP细胞分别为 1 99± 0 11和 1 69± 0 16,明显高于A2 780细胞的 1 5 1± 0 17和 1 2 8± 0 11,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;bcl 2和bcl XL在COC1/DDP细胞中的表达明显高于COC1细胞 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;bax的表达 ,A2 780 /DDP与A2 780、COC1/DDP与COC1细胞分别比较 ,差异均无显著性 (P >0 0 5 ) ;在上述 4种细胞中均未检测到bcl Xs的表达。不同浓度DDP作用后 ,A2 780 /DDP和COC1/DDP细胞中caspase 3活性明显低于A2 780和COC1细胞 (P <0 0 5 ) ;其凋亡率     

肌肽对缺氧缺血性脑损伤大鼠凋亡生化指标的影响简

目的 探讨肌肽对缺氧缺血性后大鼠脑组织凋亡生化指标的影响.方法 SD大鼠42只,出生后7 d结扎并切断左侧颈总动脉,吸入8%氧氮混合气2 h即制成缺氧缺血（HI）模型,随机将SD大鼠分为3组：（1）肌肽预处理组：在HI诱导前30 min腹腔注射肌肽1次250 mg/kg;（2）HI组：在相同条件下用等容积的生理盐水代替;（3）假手术组：不接受任何治疗和处理.大鼠在HI后24 h被处死,用TUNEL法检测缺氧缺血侧大脑皮质及海马CA1区神经细胞的凋亡,通过Real-time PCR及Wastern blotting方法检测肌肽对HI大鼠脑组织AIF、Caspase-3基因及蛋白表达的影响.结果 TUNEL染色结果显示：HI组大脑皮质的原位末端标记阳性细胞数明显高于肌肽预处理组,差异有统计学意义（P＜0.01）;HI组海马CA1区的TUNEL阳性细胞数亦明显多于肌肽预处理组,差异有统计学意义（P＜0.01）.Real-time PCR结果表明：HI组动物的AIF mRNA表达及Caspase-3 mRNA水平高于肌肽预处理组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.免疫印迹结果表明：HI组动物的AIF蛋白及Caspase-3水平高于预处理组,差异均有统计学意义（P＜0.01）;肌肽预处理组AIF和Caspse-3蛋白水平低于HI组,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 肌肽可有效减轻HI后大鼠脑组织细胞凋亡,从而发挥神经保护作用.     

Fn14活化凋亡增强人上皮性卵巢癌细胞顺铂敏感度的研究

目的：探讨成纤维细胞生长诱导因子14（Fn14）对人上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）细胞的顺铂（DDP）敏感度的影响及其可能机制。方法：蛋白质印迹（Western blotting）法检测EOC细胞株SKOV3、CAOV3、OVCAR3、ES2、3AO、A2780、A2780/DDP中Fn14蛋白的表达情况,选择低表达Fn14蛋白的细胞株转染Fn14过表达质粒后,观察转染后细胞株的Fn14蛋白、凋亡相关蛋白caspase-3、cleaved caspase-3和Bcl-2的表达情况。CCK-8法检测细胞增殖能力及DDP半数抑制浓度（IC50）。流式细胞学检测细胞凋亡。结果：人EOC细胞株SKOV3、CAOV3、OVCAR3、ES2、3AO、A2780、A2780/DDP中,A2780/DDP细胞株Fn14蛋白表达水平最低。Fn14过表达质粒转染A2780/DDP细胞后,细胞内Fn14表达水平上调（P＜0.05）;细胞的增殖能力无变化,但细胞DDP的IC50显著降低（P＜0.05）。流式细胞学检测结果进一步显示Fn14可以增加DDP诱导的A2780/DDP凋亡细胞数目。同时,Western blotting结果显示促凋亡蛋白caspase-3表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降（P＜0.05）。结论：Fn14可能活化凋亡通路进而提高A2780/DDP细胞对DDP的敏感度。