荧光定量聚合酶链反应检测儿童白血病骨髓GRIK2基因的表达

目的 分析骨髓中GRIK2基因产物在白血病患儿、白血病细胞株及非血液病患儿中的表达差异.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光定量PCR(FQ-PCR)方法分别检测100例白血病患儿、3个白血病细胞株(Jurkat、Baji和HL-60细胞株)及30例对照组骨髓中GRIK2的表达情况.结果 RT-PCR和FQ-PCR检测标本的阳性率分别为4.51%(6/133例)和7.52%(7/133例),2种检测方法均显示GRIK2基因在白血病和正常造血细胞间的表达无统计学差异(P＞0.05),但GRIK2 mRNA在无6q缺失的T-急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿中较B-AIJL患儿表达高,在有6q缺失的T-ALL和B-ALL患儿中GRIK2表达为阴性,T细胞株Jurkat有阳性表达,B细胞株Raji和HL-60细胞株为阴性表达;30例对照组中3例有较高水平表达.结论 GRIK2 mRNA在骨髓中水平低或不表达,GRIK2基因是否为ALL的肿瘤抑制基因(TSG)有待进一步探讨.     

儿童急性白血病Notch1和Jagged1的基因表达

目的：探讨儿童急性白血病（AL）骨髓或外周血单个核细胞中Notch1和Jagged1基因表达及其在AL发病中的可能作用。方法：收集2009年2月至2011年7月初诊的47例AL患儿和20例正常或非恶性血液病儿童（对照组）骨髓或外周血单个核细胞,采用二步法半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测骨髓或外周血中Notch1和Jagged1基因表达情况。47例AL患儿中,急性淋巴细胞白血病（ALL）32例,其中B-ALL 26例,T-ALL 6例;急性髓细胞白血病（AML）15例。结果：ALL组及AML组Notch1基因阳性率高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。T-ALL患儿Notch1 基因表达水平高于B-ALL患儿,差异有统计学意义（P<0.01）。ALL组及AML组Jagged1基因阳性率与对照组比较差异无统计学意义,但ALL组及AML组Jagged1表达水平均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Notch1在儿童不同类型ALL中的表达有明显差异,T-ALL 患儿中的Notch1表达明显高于B-ALL患儿;在儿童AL细胞中,普遍存在Notch1信号的活化;Notch1在AML儿童中异常表达,提示Notch1在AML儿童中也起着重要作用。Jagged1在ALL及AML儿童中异常表达,但需要收集更多资料论证。     

Wnt通路中散乱蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及意义

目的 探讨Wnt信号通路中散乱蛋白（DVL）对儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）发病及预后的意义。方法 选取33例新发ALL患儿为病例组,根据危险度将ALL患儿分为低危组（n=14）、中危组（n=5）和高危组（n=14）;29例免疫性血小板减少症（ITP）患儿为对照组。采集病例组患儿初发及诱导治疗第33天时,以及对照组骨髓血各2 mL,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测骨髓血细胞DVL1、DVL2、DVL3 mRNA表达。结果 病例组初发期DVL1、DVL2、DVL3 mRNA表达水平高于缓解期及对照组（P < 0.05）,与对照组比较,病例组缓解期DVL2 mRNA水平升高（P < 0.05）。DVL2 mRNA表达水平在病例组初发期及缓解期均高于DVL 1、DVL 3 mRNA （P < 0.05）。高、中危组DVL1、DVL2 mRNA表达水平高于低危组（P < 0.05）。DVL2 mRNA表达水平在低、中、高危组均高于DVL1、DVL3 mRNA （P < 0.05）。结论 Wnt通路中DVL,尤其是DVL2的表达变化可能对儿童ALL的发病及预后有一定意义。     

高超二倍体核型儿童急性淋巴细胞白血病的临床特征及预后——福建省多中心回顾性研究

目的 检测儿童急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）患儿骨髓单个核细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA及蛋白水平表达和基因甲基化状态,探讨E-cadherin在儿童ALL的意义及甲基化状态与预后的关系。 方法 采集42例初次确诊的ALL患儿确诊时（治疗前组）及诱导化疗第33天（治疗后组）的骨髓血5 mL,应用RT-qPCR、Westerm blot及甲基化特异性PCR法检测骨髓单个核细胞中E-cadherin mRNA及蛋白表达和E-cadherin基因甲基化水平,并比较治疗前后各指标的变化。 结果 治疗后组E-cadherin mRNA及蛋白的表达水平均高于治疗前组（P<0.05）;治疗后组E-cadherin基因甲基化阳性率较治疗前组下降（P<0.05）;至试验终点时,甲基化阴性者总生存率和无事件生存率均高于甲基化阳性者（P<0.05）。 结论 E-cadherin表达与儿童ALL发展相关,表达降低及甲基化水平增高可能提示预后不良。     

血管内皮生长因子对人急性白血病细胞凋亡影响及相关基因表达的临床与实验研究

目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)对人急性白血病细胞株HL-60凋亡及相关基因Bcl-2和Mcl-1表达的影响,并从临床水平验证VEGF对人急性白血病细胞凋亡的影响。方法：采用单细胞凝胶电泳、流式细胞术检测VEGF处理后的HL-60细胞凋亡率;采用RT-PCR方法和免疫细胞化学法分别检测VEGF处理的HL-60细胞的Bcl-2和Mcl-1的表达水平。采用免疫细胞化学方法分别检测8例初发和复发、14例完全缓解的急性白血病患儿及5例正常儿童骨髓细胞的VEGF和Mcl-1蛋白表达。结果：VEGF可以明显抑制人急性白血病细胞株HL-60的凋亡,并且可以对抗VP16诱导的细胞凋亡效应。VEGF孵育HL-60细胞株18h后,其细胞内的Bcl-2和Mcl-1的mRNA和蛋白表达水平明显增加。初发和复发组白血病患儿骨髓细胞的VEGF和Mcl-1蛋白表达水平高于完全缓解组。结论：VEGF可能通过同时提高Bcl-2和Mcl-1的mRNA和蛋白表达,抑制急性白血病细胞株HL-60的凋亡,可能是白血病的发病机制之一。VEGF,Bcl-2和Mcl-1表达的增加可能对人急性白血病细胞的发生发展及预后产生影响,有可能成为临床白血病预后的参考指标之一。     

S100A8在儿童急性淋巴细胞白血病预后评估中的意义

目的 探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿S100A8表达与预后的关系。方法 回顾性分析CCLG-2008-ALL方案治疗的377例ALL患儿的临床资料。采用ELISA及PCR分别检测患儿血清S100A8蛋白水平及其mRNA的表达,并进行Kaplan-Meier生存分析和Cox回归分析。结果 随访56个月,377例患儿总生存率为89.1%。激素诱导良好组患儿S100A8蛋白及mRNA表达水平显著低于激素诱导不良组（P < 0.01）。在标危及中危患儿中,S100A8蛋白及mRNA表达水平与患儿的无事件生存率相关（P < 0.05）。不同危险度分层患儿的S100A8蛋白及mRNA表达也有明显差异（P < 0.01）。发生事件组患儿S100A8蛋白及mRNA表达水平明显高于无事件组（P < 0.01）。Kaplan-Meier生存分析和Cox回归模型均提示S100A8过表达是儿童ALL预后的独立危险因素。结论 S100A8高表达可能与儿童ALL不良预后有关,有望作为儿童ALL个体化精准治疗的新参考因子。     

儿童急性白血病survivin、cyclin D1基因的表达

目的探讨基因survivin、cyclin D1的表达与儿童急性白血病（AL）的关系。方法采用RT-PCR方法对42例初发或复发AL患儿和13例完全缓解AL（AL-CR）患儿及15例非恶性疾病患儿骨髓单个核细胞进行基因survivin、cyclinD1表达的检测。结果①AL组survivin、cyclinD1mRNA的阳性率分别为78.6%和42.9%,高于AL-CR组和对照组（P〈0.01）;完全缓解组和对照组差异无统计学意义（P〈0.05）;急性淋巴细胞白血病（ALL）组和急性非淋巴细胞白血病（ANLL）组之间表达差异无统计学意义。AL复发组cyclin D1 mRNA阳性率明显高于初发组。②儿童AL初发者survivin与cyclin D1的阳性表达差异无统计学意义。③cyclin D1 mRNA阳性者缓解率低。结论儿童AL中存在survivin、cyclin D1异常表达,两者阳性表达差异无统计学意义;cyclin D1高表达者可降低AL的化疗敏感性,cyclin D1对AL有判断疗效和预后的价值。     

同源盒基因HOXA9在儿童急性白血病中的表达及其临床意义

目的：研究同源盒基因HOXA9在儿童急性白血病（AL）患儿骨髓单个核细胞中的表达,并探讨其临床意义。方法：采用RT-PCR方法检测46例不同时期AL患儿HOXA9 mRNA的表达水平,以15例特发性血小板减少性紫癜（ITP）患儿作为对照。结果：46例AL患儿（52份骨髓标本）HOXA9基因阳性表达率为63%,其中急性髓细胞白血病(AML)组阳性表达率（86%）明显高于急性淋巴细胞白血病（ALL）组（35%）及对照组（13%）（P<0.05）; AML组HOXA9 mRNA表达水平明显高于ALL组及对照组（P<0.05）。HOXA9在各型儿童AML中表达不同,mRNA相对表达水平依次为：M5型＞M4型＞M1和（或）M2型,而在M3型中未检测到表达。HOXA9在AML患儿高危组中的阳性表达水平较高。AML患儿初治组HOXA9基因阳性表达率及mRNA水平明显高于缓解组和对照组（P<0.05）,而缓解组与对照组比较差异无统计学意义;未缓解组HOXA9基因表达显著高于缓解组和对照组（P<0.05）。结论：HOXA9基因高表达与AL的发生相关;AML患儿HOXA9基因表达水平明显高于ALL患儿。HOXA9基因高表达者与白血病危险程度有关,且提示预后不良。因此,HOXA9基因有望成为儿童AL诊断、治疗及判断预后的一个靶点。     

儿童急性淋巴细胞白血病中sFRP1基因的表达与预后

目的 检测急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿骨髓单个核细胞中sFRP1 mRNA,探讨sFRP1基因在儿童ALL的发病和预后评估中的价值.方法 留取2016年1月-2020年12月诊治的132例初发ALL患儿骨髓、50例经诱导缓解治疗后达完全缓解ALL患儿骨髓和20例非恶性疾病患儿骨髓,RT-PCR法检测骨髓单个核细胞中...     

儿童急性淋巴细胞白血病nm23-H1基因表达及其与免疫分型的关系

目的：探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL) nm23-H1基因的表达水平及其与免疫分型的关系。方法：应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测儿童ALL初治、缓解、难治、复发患儿及正常对照儿童nm23-H1基因的表达水平,观察nm23-H1基因与免疫表型的关系。结果：①初治患儿nm23-H1表达水平明显高于正常对照组（P<0.01）和完全缓解组（P<0.01）;完全缓解组nm23-H1表达水平与对照组差异无显著性（P>0.05）,复发组nm23-H1表达水平高于正常对照组（P<0.01）和完全缓解组（P<0.01）,与初治差异无显著性(P>0.05);难治组均为高表达。 ②T-ALL的nm23-H1阳性率高于B-ALL(P<0.05),且T-ALL的nm23 H1表达水平高于B-ALL（P<0.05）。结论： nm23-H1的表达水平随儿童ALL的病情发展而变化,在初治、复发及难治ALL具有高表达,nm23-H1高表达者预后差,易复发;nm23-H1在T-ALL具有高表达,可能是T-ALL的缓解率低、预后差的原因之一。［中国当代儿科杂志,2009,11-11）：881-884］     

儿童急性淋巴细胞白血病及阿霉素所致Jurkat细胞凋亡时WAVE1表达研究

目的：初步探讨WASP家族Verprolin同源蛋白1（WAVE1）在急性淋巴细胞白血病（ALL）发病中可能的作用及意义。方法：运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量法和蛋白质印迹（Western blotting）分别检测40例ALL初治患儿、15例化疗完全缓解半年、4例复发、10例非白血病患儿BMMCs中WAVE1 mRNA和蛋白的表达水平。以不同浓度阿霉素处理Jurkat细胞：①采用MTT法测细胞增殖;②采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;③采用RT-PCR和Western blotting检测WAVE1表达。结果：ALL初治和复发患儿BMMCs均有WAVE1 mRNA和蛋白的表达,对照和缓解组BMMCs中mRNA和蛋白低表达或无表达,初治和复发组的WAVE1 mRNA和蛋白的表达表达水平显著高于化疗后缓解组和对照组（P<0.01）。阿霉素明显抑制Jurkat细胞增殖,抑制作用呈剂量时间依赖效应（P<0.05）;阿霉素作用24 h后,细胞凋亡随药物浓度增增高而增加,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);细胞WAVE1 mRNA和蛋白表达水平随阿霉素处理浓度的增高而降低,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论：WAVE1在ALL患儿BMMCs中高表达;WAVE1可能与儿童ALL病程相关,它可能成为动态检测儿童ALL病情的一个新指标。     

T系和B系急性淋巴细胞白血病ID4甲基化状态分析

目的探讨DNA结合抑制因子4（ID4）基因甲基化与T系、B系及T/B双表达儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链式反应（MS-PCR）对18例初发ALL患儿进行ID4基因启动子区甲基化状况分析。18例ALL患儿中T系（T-ALL）2例,B系（B-ALL）13例,T/B双表达（T/B-ALL）3例。以34 例同期住院的非肿瘤性疾病患儿为对照组。结果ID4基因启动子区在初发ALL患儿中的完全甲基化率（15/18,83%）显著高于部分甲基化率（3/18,17％）,P＜0.05。T-ALL、B-ALL和T/B-ALL患儿的完全甲基化率分别为50%,85%,100%,显著高于对照组（18%;P0.05）。结论 ID4基因的甲基化可能与儿童ALL发病有关,T-ALL、B-ALL及T/B-ALL之间的ID4甲基化状态一致。［中国当代儿科杂志,2010,12(12)：940-942］     

急性B淋巴细胞白血病患儿IKZF1编码蛋白IKAROS异常表达研究

目的 分析急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿的骨髓标本IKAROS(IK)亚型,探讨异常IK亚型的发生频率与预后的关系,并初步研究其相关机制。方法 选择初发B-ALL患儿137例,利用巢式PCR、Sanger测序等分子生物学方法对其进行IK亚型的表达分析,并采用生存曲线探讨异常IK亚型发生频率与预后的关系。结果 137例初发B-ALL患儿中,仅表达IK1和/或IK2(a)正常亚型的患儿105例,32例具有异常IK亚型表达,其中16例表达IK6,14例表达IK4,2例表达IK7,且表达正常IK亚型与表达异常IK亚型组间2.5年无事件生存率差异有统计学意义(P=0.01)。生存曲线分析结果显示,将IK6亚型剔除出异常IK亚型组后,IK4+IK7组与正常IK亚型组间生存率差异无统计学意义(P=0.527),而IK6组生存率仍明显低于正常IK亚型组(P=0.001)。本研究亦从21例复发患儿中,获取10对初-复发成对样本进行IK亚型分析,发现其中8对存在IK亚型表达从初发状态到复发状态不连续情况;且21例复发患儿的复发样本中IK6亚型检出率高达62%,明显高于137例初发患儿IK6亚型检出率(12%)。结论 IK6亚型的表达可作为B-ALL不良预后的标志,且其于复发样本中的高发生率表明,IK6亚型的表达与B-ALL复发密切相关。     

儿童Ph-like急性淋巴细胞白血病的研究进展

费城染色体样急性淋巴细胞白血病(Ph-like ALL)是一组基因表达谱与费城染色体阳性ALL(Ph~+ALL)相似的B-ALL(B-lineage ALL)亚群,涉及一系列细胞因子受体基因及激酶信号通路异常活化的相关基因改变,并常伴淋系发育相关转录因子异常。Ph-like ALL在高危组儿童B-ALL的比例高达15%,其临床特征与不良预后相一致。酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)联合化疗显著改善儿童Ph~+ALL预后提示基于Ph-like ALL分子遗传学异常的精准靶向治疗具有良好的研究前景。该文结合近年Ph-like ALL的相关研究进展,对儿童Ph-like ALL的基因改变及发病机制、临床特征、诊断及治疗进行综述。     

CYP3A5基因在急性白血病儿童中的表达及临床意义

目的：CYP3A5参与多种常用化疗药物的代谢反应。目前对于CYP3A5基因参与急性白血病的研究主要限于细胞系的体外研究。该文通过检测急性白血病患儿CYP3A5-6986位点的基因型分布特点和基因表达水平,探讨其基因表达水平对白血病患者治疗、预后评价的意义。方法：①应用聚合酶链-限制性片段长度多态性方法（PCR-RFLP）及PCR产物序列测定,检测66例初治急性白血病患儿和20例对照儿童的CYP3A5-6986位点基因型分布;②实时定量PCR法检测病例组及对照组儿童骨髓单核细胞内wt-CYP3A5和SV1-CYP3A5 mRNA的表达水平。结果：①对照组和急性白血病儿童CYP3A5-6986多态性位点存在野生型（CYP3A5*1/*1）、杂合突变型(CYP3A5*1/*3)、纯合突变型（CYP3A5*3/*3）3种基因型;②66例初治急性白血病患儿按基因型分组后对其mRNA表达水平进行检测,3组间的wt-CYP3A5 mRNA差异有显著性意义(P<0.05);③ALL组wt-CYP3A5 mRNA低表达者第1次化疗后的缓解率高于wt-CYP3A5 mRNA高表达者,两者比较差异有显著性意义（P<0.05）;④对两例急性淋巴细胞性白血病患儿的CYP3A5 mRNA表达水平动态监测显示,1例复发前wt-CYP3A5 mRNA表达水平较缓解时升高。另1例wt-CYP3A5 mRNA表达一直处于较低水平,患儿目前仍处于缓解状态。结论：wt-CYP3A5 mRNA表达与白血病患儿的化疗疗效及预后密切相关,动态监测wt-CYP3A5 mRNA表达水平变化有助于判断病情变化。［中国当代儿科杂志,2009,11（7）：549-554］     

Wnt通路中Wif-1和β-catenin在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达

目的研究Wnt通路中Wnt通路抑制因子1(Wif-1)和β连环蛋白(β-catenin)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的表达及可能的作用。方法收集初发并且诱导缓解治疗第33天完全缓解的35例ALL患儿的临床资料,以治疗前作为初发组,第33天达完全缓解时作为缓解组,对照组为15例非恶性血液病患儿。RT-PCR方法检测Wif-1和β-cateninm RNA的表达,ELISA法测Wif-1蛋白的表达。结果初发组Wif-1m RNA及蛋白的表达明显低于对照组和缓解组,β-cateninm RNA的表达高于对照组和缓解组(P0.05)。在初发组和缓解组,高危患儿的β-cateninm RNA表达均高于中危和低危患儿,Wif-1m RNA、蛋白表达低于中危和低危患儿(P0.05)。在初发组和缓解组,T-ALL患儿β-cateninm RNA的表达高于B-ALL患儿,Wif-1m RNA、蛋白表达低于B-ALL患儿(P0.05)。各组Wif-1和β-cateninm RNA表达呈负相关(P0.05)。结论 Wif-1表达下降、β-catenin表达增高是儿童急淋发病机制之一,Wif-1下降和/或β-catenin增高的程度可能与预后相关。