β1整合素过表达促进体外兔角膜上皮细胞黏附和迁移

目的:探讨β1整合素过表达对角膜上皮细胞黏附和迁移的影响机制。方法:将β1整合素-GFP融合蛋白真核细胞重组表达质粒转染兔角膜上皮细胞,观察转染细胞的融合基因表达以及细胞的黏附和迁移能力。检测β1整合素转染对角膜上皮细胞粘着斑激酶(FAK)磷酸化的影响。结果:成功将β1整合素-GFP融合蛋白转染至兔角膜上皮细胞并使其过表达;β1整合素过表达能够明显增加角膜上皮细胞的黏附和迁移能力(P<0.05)并促进FAK磷酸化(P<0.05)。结论:β1整合素过表达能够明显促进角膜上皮细胞的黏附和迁移。     

β1整合素过表达抑制角膜上皮细胞凋亡的实验研究(英文)

目的:探讨β1整合素功能性过表达对角膜上皮细胞凋亡的影响及机制,为角膜细胞移植提供理论依据。方法:构建β1整合素-绿色荧光蛋白(GFP)融合基因并转染兔角膜上皮细胞。观察融合基因在角膜上皮细胞的表达及对各细胞外基质蛋白的黏附能力。检测β1整合素功能性转染对角膜上皮细胞凋亡及丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAP激酶)磷酸化的影响。结果:β1整合素-GFP融合基因成功转染至兔角膜上皮细胞并过表达;β1整合素过表达能够明显增加角膜上皮细胞对各细胞外基质蛋白的黏附力并抑制角膜上皮细胞凋亡及促使MAP激酶磷酸化。结论:β1整合素过表达能有效抑制角膜上皮细胞凋亡,MAP激酶磷酸化可能在这一过程中起重要作用。     

β1整合素过表达抑制角膜上皮细胞凋亡的研究

目的探讨β1整合素功能性过表达对角膜上皮细胞凋亡的影响及机制,为角膜细胞移植提供理论依据。方法构建β1整合素-绿色荧光蛋白(GFP)融合基因并转染兔角膜上皮细胞。观察融合基因在角膜上皮细胞的表达及对各细胞外基质蛋白的黏附能力。检测β1整合素功能性转染对角膜上皮细胞凋亡及丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化的影响。结果β1整合素-GFP融合基因成功转染至兔角膜上皮细胞并过表达;β1整合素过表达能够明显增加角膜上皮细胞对各细胞外基质蛋白的黏附力并抑制角膜上皮细胞凋亡及促使MAPK磷酸化。结论β1整合素过表达能有效抑制角膜上皮细胞凋亡,MAPK磷酸化可能在这一过程中起重要作用。     

整合素在角膜上皮创伤愈合中的研究进展

整合素作为一类重要的细胞黏附分子,通过影响细胞的形态,介导细胞的黏附、迁移和增生,在角膜上皮创伤愈合中发挥了重要的作用。讨论α2β1、α3β1、α5β1、αvβ3、α6β4、α9β1和αvβ6这7种整合素在角膜上皮创伤愈合中的研究进展及其临床意义。α6β4整合素为半桥粒的主要组成部分,介导角膜上皮细胞在细胞外基质上的静态黏附,损伤后该黏附就转变为α2β1、α3β1整合素介导的动态黏附,细胞在黏附-去黏附的过程中实现迁移,从而修复创面。α6β4、α3β1整合素相互协调作用,实现上皮细胞的板层状运动。研究还发现α6β4、α3β1整合素的活化还能促进细胞的增生。损伤后上皮细胞表面α5β1、αvβ3整合素的表达上调,二者与黏着斑的形成密切相关。α9β1和αvβ6为近年来新发现的与角膜上皮创伤愈合有关的整合素,其具体作用尚有待进一步的研究。     

整合素在真菌与角膜上皮细胞黏附过程中的表达

目的 探讨不同真菌菌种与人角膜上皮细胞黏附过程中整合素的表达及其作用机制.方法 实验研究.体外培养人角膜上皮细胞系,建立茄病镰刀菌(CGMCC 3.1829)和烟曲霉菌(CGMCC 3.0772)与角膜上皮细胞黏附的体外模型.茄病镰刀菌或烟曲霉菌与人角膜上皮细胞共孵育后,用无菌的磷酸盐缓冲溶液冲洗掉未黏附的真菌.提取细胞的总RNA,反转录为cDNA后采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时间点上不同真菌与角膜上皮细胞黏附的14种整合素分子mRNA水平的表达.各时间点之间基因表达差异的比较采用单因素方差分析.结果 在烟曲霉菌与人角膜上皮细胞黏附的过程中,随黏附时间延长,整合素家族白细胞黏附受体组成员编码基因整合素αL(ITGAL)、整合素α型(ITGAM)、整合素αX(ITGAX)及整合素β2(ITGB2)的表达显著上调.其中ITGAL的表达最高上调2倍(F=29.39,P<0.01),ITGAM的表达最高上调4倍(F=20.26,P<0.01),ITGAX的表达最高上调2.5倍(F=2.51,P<0.05),ITGB2的表达最高上调3.4倍(F=3.923,P<0.05).而在茄病镰刀菌与人角膜上皮细胞黏附的过程中,此14种整合素的表达未见显著差异.结论 整合素家族白细胞黏附受体组(β2组)成员αLβ2、αMβ2及αXβ2均参与烟曲霉菌与角膜上皮细胞的黏附;未见茄病镰刀菌与角膜上皮细胞的黏附过程中整合素表达的差异.整合素介导的黏附因菌种而异.     

bFGF对人晶状体上皮细胞中FAK表达的影响

目的:观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)引起体外培养的人晶状体上皮细胞迁移和黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)mRNA水平的动态变化.方法:体外培养的第3代人晶状体上皮细胞,建立细胞划痕损伤模型,经0,5,10,15μg/L bFGF作用8～16h后,电脑图像法测定细胞迁移距离,RT-PCR法检测0,1,4,8,16h FAK mRNA水平,免疫荧光法检测整合素β1和增殖细胞核抗原表达阳性率的变化.结果:与对照组比,5μg/L 组细胞迁移距离和FAK mRNA表达显著增加(P＜0.05):10μg/L 组细胞整合素β1表达阳性率显著增加(P＜0.05);15μg/L 细胞迁移距离和FAKmRNA显著降低(P＜0.05).结论:bFGF引起人晶状体上皮细胞迁移距离和FAK mRNA表达的变化.     

整合素-α5及其配体在大鼠角膜创伤愈合中的表达

整合素属细胞黏附分子，是由α和β亚单位通过非共价键形式结合成为跨膜糖蛋白，主要介导细胞与细胞和细胞与细胞外基质间的黏附，并在角膜创伤愈合中起重要作用。α5主要与β1结合。文献报道，配体纤维连接蛋白(fibronectin，FN)是以二聚体形式存在的大分子糖蛋白，经典受体为整合素-α5，大鼠角膜移植术后角膜创缘上皮细胞、迁移上皮细胞膜基底面及基质切口边缘α5及FN蛋白表达量明显增加；当创伤愈合后，其α5及FN蛋白表达消失。为此我们对大鼠角膜创伤愈合中整合素-α5及FN蛋白表达量进行检测，探讨其在角膜创伤愈合中的作用，现将结果报告如下。     

结缔组织生长因子对角膜成纤维细胞α5β1整合素表达的影响

目的 :观察结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor,CTGF)对体外培养的角膜成纤维细胞α5β1整合素表达的影响。方法 :体外培养兔角膜成纤维细胞 ,经 0 .5、5、5 0和 5 0 0ng/mlCTGF处理 2 4h后 ,用免疫组化染色检测角膜成纤维细胞α5β1整合素的表达情况。结果 :与对照组相比 ,0 .5、5、5 0和 5 0 0ng/ml的CTGF能呈剂量依赖性地促进角膜成纤维细胞α5β1整合素的表达 (P <0 .0 1)。结论 :一定浓度的CTGF能促进角膜成纤维细胞α5β1整合素的表达 ,它可能参与角膜基质损伤修复过程中角膜成纤维细胞与细胞外基质以及角膜成纤维细胞之间的黏附和角膜成纤维细胞的移行过程。     

TGF-β1短期眼部应用对兔眼角膜碱烧伤后整合素β1表达的作用

目的:研究TGF-β1短期眼部应用对兔角膜碱烧伤后整合素β1表达和角膜上皮愈合的影响.探求其对角膜碱烧伤的治疗作用.方法:制备大耳自家兔角膜碱烧伤模型,一组给予TGF-β1(浓度为200 ng/ml)局部滴眼,每日3次,连续7日;另一组给予PBS溶液代替,处理相同.于角膜碱烧伤后每日观察角膜上皮愈合面积,并于烧伤后6 h、1 d、3 d、7 d和14 d 5个时间点应用免疫组化方法检测TGF-β1实验组与PBS组角膜整合素β1表达情况.结果:烧伤后4 d、10 d、11 d、12 d和14 d实验组和对照组上皮愈合率比较.差异有统计学意义(P<0.05),两组随着上皮修复过程的进行,整合素β1的表达均逐渐增加,烧伤后7 d、14 d两个时间点实验组和对照组整合素β1平均灰度值比较,差异有显著性(P<0.05).结论:TGF-β1在活体实验中能促进整合素β1的表达,而后者的增加可以促进角膜上皮细胞向损伤区域的移行和粘附,从而减少碱烧伤愈合过程中上皮再次脱落现象,有利于创伤愈合.     

miRNA-147靶向调控VEGF对人视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡及迁移的影响

目的：探讨miRNA-147靶向调控VEGF对人视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡及迁移的影响,并初步研究其分子机制。

方法：选择人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19细胞),将细胞分为7组：空白对照组(不处理)、无义miRNA组(转染mimic NC)、miRNA-147模拟物组(转染miRNA-147 模拟物)、抑制剂阴性对照组(转染shRNA NC)、VEGF抑制剂组(转染VEGF抑制剂)、miRNA-147模拟物+空载病毒载体组(转染miRNA-147模拟物和空载体)和miRNA-147模拟物+VEGF过表达组(转染miRNA-147模拟物和VEGF过表达)。使用RT-qPCR检测各组细胞miRNA-147及VEGF mRNA表达水平; 双荧光素酶实验验证miRNA-147与VEGF靶向关系; Western blot检测VEGF蛋白表达水平; MTT法检测细胞增殖; 流式细胞术检测细胞凋亡水平及细胞周期的改变; 细胞划痕实验检测细胞迁移。

结果：与空白对照组和无义miRNA组相比,miRNA-147模拟物组miRNA-147表达水平显著升高,VEGF mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05); 与抑制剂阴性对照组相比,VEGF抑制剂组VEGF mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05); 与miRNA-147模拟物+空载病毒载体组相比,miRNA-147模拟物+VEGF过表达组VEGF mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告显示VEGF是miRNA-147的靶基因。转染miRNA-147 模拟物和VEGF抑制剂均可降低ARPE-19细胞增殖和迁移水平,促进细胞凋亡(P<0.05)。转染VEGF过表达可逆转miRNA-147 mimic对ARPE-19细胞增殖、迁移和凋亡的影响(P<0.05)。

结论：miRNA-147可通过靶向VEGF抑制ARPE-19细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡。     

黏着斑激酶在肿瘤坏死因子α上调人角膜上皮细胞明胶酶活性中的作用

目的 探讨黏着斑激酶(FAK)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)上调体外培养人角膜上皮细胞明胶酶活性中的作用.方法 实验研究.体外培养无眼部疾患人角膜上皮细胞,将传至3～4代的细胞暴露于含1 μg/L TNF-α(B组)、10 μg/L TNF-α(C组)、100 μg/L TNF-α(D组)的培养基中,对照组(A组)用含等量磷酸盐缓冲液(PBS)的培养基处理,明胶酶谱分析各组条件培养基中基质金属蛋白酶2和9( MMP-2、MMP-9)的活性,免疫印迹法分析FAK总蛋白表达及磷酸化FAK的表达;运用RNA干扰技术特异性抑制人角膜上皮细胞FAK的表达并重复以上过程.统计学方法使用单因素方差分析,各组间比较采用Tukey HSD检验.结果 明胶酶谱分析:与A相比,B、C、D组MMP-2、MMP-9活性均明显上调,差异有统计学意义(A、B、C、D组MMP-2活性表达分别为:124.06 ±4.06、146.72±5.51、241.18±5.65、389.95±4.44,F=2960.91,P=0.000;MMP-9活性表达分别为:122.78±5.86、165.70±7.90、479.49±6.22、495.88±5.03,F=4937.46,P=0.000),各组间比较差异均有统计学意义(MMP-2各组间比较均为P=0.000;MMP-9各组间比较P=0.000);免疫印迹分析:C、D组中磷酸化FAK较A组增加,差异有统计学意义(C、D组磷酸化FAK分别为:0.52±0.03、0.61 ±0.06;F=431.03,P=0.000),100 μ.g/L TNF-α组较10 μg/L TNF-α组中磷酸化FAK表达增加(P=0.005);运用RNA干扰技术特异性抑制人角膜上皮细胞FAK表达后,FAK总蛋白较特异性抑制之前明显下调,B、C、D组MMP-2的活性差异无统计学意义(转染后A、B、C、D组MMP-2分别为:55.13±0.66、55.67±0.43、55.49±0.20、55.91±0.37;F=2.73,P=0.079).10、100μg/L TNF-α干预组中MMP-9少量增加(转染后A、B、C、D组MMP-9分别为:80.48±0.39,81.26±0.62,84.43±0.47,85.56±0.61;F=105.80,P=0.000)但增加幅度较转染前明显减小,D组较C组MMP-9活性增强,差异有统计学意义(P=0.019).仅在100 μg/L TNF-α干预组中检测到FAK磷酸化(0.47±0.05),但表达量较抑制前明显减少(t=5.03,P=0.001).结论 FAK信号在TNF-α上调入角膜上皮细胞明胶酶活性过程中发挥一定作用,针对这一过程干预可能对防治角膜病变有意义.     

HSP47 siRNA对体外培养HTCF细胞生物学行为及TGF-β1表达水平的影响

目的:探究热休克蛋白47(HSP47)siRNA对体外培养人眼Tenon囊成纤维(HTCF)细胞生物学行为及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达水平影响。方法:体外培养HTCF细胞,并分为:空白对照组、空载体组和转染组;转染组根据HSP47基因序列设计并合成干扰siRNA序列,构建载体并导入HTCF细胞中;空载体组导入空白载体。采用RT-PCR和蛋白质印迹实验检测细胞中HSP47 mRNA和蛋白的表达情况,采用克隆形成实验、流式细胞术、Transwell法及划痕实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移,蛋白质印迹实验检测增殖、凋亡、侵袭、迁移蛋白和TGF-β1的表达情况。结果:相比空载体组,转染组HSP47 mRNA和蛋白的表达、克隆形成率、细胞愈合率、侵袭细胞数目、Ki67、N-cadherin、TGF-β1蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白相对表达水平显著升高(P<0.05),但细胞凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白相对表达水平均无差异(P>0.05)。结论:HSP47 siRNA可以通过抑制TGF-β1蛋白的表达降低HTCF细胞的增殖、侵袭及迁移能力,但对HTCF细胞的凋亡无明显影响。     

体外培养人晶状体上皮细胞整合素的表达

目的:研究体外培养人晶状体上皮细胞整合素的表达。方法:对人晶状体上皮细胞株SRA01/04进行培养并传代,经间接免疫荧光标记法处理细胞后上流式细胞仪检测各整合素的阳性表达率。结果:整合素α2,α3,α5,β1,β2在SRA01/04的阳性表达率分别为85.3%,97.6%,74.0%,97.7%,3.65%。整合素α3与β1之间无统计学差异(P>0.05),其余两两间比较均有显著统计学差异(P<0.01)。结论:人晶状体上皮细胞株SRA01/04整合素呈阳性表达。     

整合素连接激酶对人视网膜色素上皮细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨RNA干扰抑制整合素连接激酶（integrin-linked kinase, ILK）对人视网膜色素上皮（human retinal pigment epithelium,hRPE）细胞增殖和迁移的影响。方法:体外培养hRPE细胞,设计并合成特异性人ILK的RNA干扰片段,阳离子脂质体转染入人视网膜色素上皮细胞,利用RT-PCR及Western blot半定量检测siRNA对ILK基因及蛋白表达的抑制作用,MTT方法检测转染前后siRNA对细胞增殖的抑制作用。损伤愈合实验和Transwell实验观察人视网膜色素上皮细胞迁移能力的改变。结果:培养的hRPE细胞存在ILK的基因转录表达,siRNA显著抑制hRPE细胞ILK的mRNA和蛋白表达（P<0.01）。MTT、损伤愈合实验和Transwell实验提示转染ILK-siRNA后人视网膜色素上皮细胞的增殖、迁移能力有明显下降,与正常对照组相比有统计学差异（P<0.05）。结论:特异性ILK-siRNA能有效抑制ILK在hRPE的mRNA和蛋白的表达并显著降低hRPE的增殖和迁移能力。     

MicroRNA-34a通过上调Cdc42和Rac1促进人晶状体上皮细胞衰老和凋亡

目的:观察MicroRNA-34a对人晶状体上皮细胞系SRA01/04衰老和凋亡的影响及作用机制。方法:qRT-PCR检测年龄相关性白内障(ARC)晶状体和透明晶状体上皮细胞中MicroRNA-34a表达水平,采用脂质体转染试剂盒将MicroRNA-34a mimics(过表达组)、MicroRNA-34a inhibitors(抑制组)和空脂质体(对照组)转染至SRA01/04细胞,qRT-PCR检测MicroRNA-34a的表达量;采用β-半乳糖苷酸(SA-β-gal)染色检测转染后细胞的衰老情况。Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测MicroRNA-34a对人晶状体细胞系SRA01/04细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹检测Cdc42、Rac1蛋白的表达。结果:透明晶状体前囊膜组织中MicroRNA-34a的表达量显著低于ARC晶状体前囊膜组织(P<0.05);MicroRNA-34a过表达组、对照组、MicroRNA-34a抑制组SA-β-gal阳性率分别为(87.56±2.34)%、(12.22±2.74)%、(3.45±0.45)%。MicroRNA-34a过表达组明显高于对照组,而MicroRNA-34a抑制组SA-β-gal阳性率明显低于对照组(P<0.05);MicroRNA-34a抑制组、对照组和MicroRNA-34a过表达组的细胞凋亡率分别为(5.87±1.22)%、(12.26±2.14)%、(29.45±3.12)%,MicroRNA-34a抑制组细胞凋亡率明显低于对照组,而MicroRNA-34a过表达组细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05);MicroRNA-34a过表达组中Cdc42和Rac1的表达明显高于对照组(P<0.05),MicroRNA-34a抑制组中Cdc42和Rac1的表达明显低于对照组(P<0.05)。结论:MicroRNA-34a可能通过上调Cdc42和Rac1促进人晶状体上皮细胞衰老和凋亡。     

改构aFGF在角膜内皮细胞中的分泌表达及意义

目的观察改构型人酸性成纤维细胞生长因子(m-haFGF)真核表达载体(pSecTag/m-haFGF)在培养的兔角膜内皮细胞中的分泌表达,探讨其表达产物对由生理盐水损伤的角膜内皮细胞的保护作用。方法采用脂质体转染的方法,将psecTag/m-haFGF转染培养的兔角膜内皮细胞,用免疫印迹法检测m-haFGF的表达情况,同时用生理盐水造成细胞损伤,用MTT法检测细胞存活状况。结果角膜内皮细胞在转染m-haFGF基因后能够表达目标蛋白,未转染组为阴性;MTT显示,转染后损伤的细胞存活状况明显好于未转染组(P<0.05)。结论转染pSecTag/m-haFGF能够在培养的兔角膜内皮细胞中分泌表达,其基因表达产物对生理盐水造成的角膜内皮细胞损伤具有保护作用。     

ICAM-1在大鼠晶状体上皮细胞中表达的实验研究

目的:研究细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在糖尿病性白内障发病机制中的作用及转化生长因子β-1(TGF-β1)对晶状体上皮细胞ICAM-1表达的影响。方法:SD大鼠120只随机分为对照组和糖尿病性白内障组。在糖尿病性白内障组中,建立糖尿病模型,免疫组织化学SP法观察两组晶状体上皮细胞中ICAM-1表达变化;RT-PCR法检测TGF-β1和TGF-β1中和抗体对体外培养的人晶状体上皮细胞ICAM-1mRNA表达的影响。结果:在糖尿病性白内障组大鼠晶状体上皮细胞ICAM-1的表达明显增高,且随着病程发展呈进行性增强,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。TGF-β1培养组的人晶状体上皮细胞的ICAM-1的表达则显著增强,与正常血清培养组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。在TGF-β1抗体培养组中,ICAM-1的表达明显受到抑制,与TGF-β1培养组比较,差别具有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-β1可以促进晶状体上皮细胞ICAM-1的表达;ICAM-1通过促进晶状体上皮细胞的黏附、增殖而在糖尿病性白内障的发生中发挥重要作用。     

纤维连接蛋白对人晶状体上皮细胞系的增殖、黏附和移行的影响

目的:探讨纤维连接蛋白(fibronectin,FN)对人晶状体上皮细胞系HLE-B3的增殖、黏附和移行的影响及其受体整合素α5亚基的表达。方法:培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3,接种于不同浓度的FN(0,10,20,40mg/L)包被的培养板中,倒置显微镜下观察HLE-B3的生物学特性,采用WST-8法检测细胞的增殖、黏附情况,划痕法观察细胞的移行并记录细胞缺损区闭合时间,免疫细胞化学法观察整合素α5亚基的表达。结果:各浓度FN包被后,增殖实验中WST-8法检测的吸光值增高不明显(P>0.05)。随FN包被浓度的增高,黏附实验中的吸光值逐渐增高,划痕实验中缺损区闭合的时间逐渐缩短,各浓度组在统计学上具有显著性差异。整合素α5亚基随FN包被浓度的增高表达增强(P<0.05)。结论:FN具有显著促进HLE-B3黏附和移行的作用,同时能上调其受体整合素α5亚基的表达。     

LV-EGFP标记兔角膜基质细胞体外基质层移植的实验观察

目的:探讨兔角膜基质细胞(CSCs)体外移植兔角膜后的存活时间。方法:体外培养原代兔CSCs,并行细胞免疫组化鉴定,利用慢病毒载体(LV)携带标记基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染兔CSCs,倒置荧光显微镜下观察转染后细胞生长状态及荧光强度,体外动物实验,随机分为2组,实验组行LV-EGFP标记的兔CSCs细胞悬液角膜基质注射,对照组等量生理盐水角膜基质注射,转染后1wk,1mo取材冰冻切片观察移植的CSCs荧光,石蜡切片行苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态。结果:LV-EGFP转染兔CSCs在倒置荧光显微镜下24h后可见少量荧光,96h和110h荧光较强,转染后的CSCs与正常CSCs细胞形态无明显差异;转染后1wk,1mo实验组中角膜基质层中可见绿色荧光,对照组中无绿色荧光;石蜡切片1wk实验组见明显上皮细胞增生及角膜轻微水肿,少量炎症细胞浸润,转染后1mo实验组上皮细胞增生减弱,未见角膜层水肿;对照组1wk,1mo均未见明显异常。结论:LV-EGFP标记的兔CSCs行体外角膜基质移植,可在角膜中至少存活1mo,且与邻近组织相容性较好。     

人角膜上皮干细胞的识别

目的 探讨人角膜上皮干细胞的分子标记。方法 对人角膜和角膜缘部位行组织学检查以分析角膜缘解剖结构。对人角膜切片和整个角膜组织行免疫组织化学染色以检测中央角膜和角膜缘部位未分化标记,如核蛋白p63、乳腺癌抵抗蛋白（ABCG2,BCRP1）、烯醇化酶α、整合素拍、胡及β1、表皮生长因子受体（EGFR）、细胞角蛋白19（CK19）、14（CK14）及转铁蛋白受体（CDT1）的表达,经荧光显微镜和激光扫描共焦显微镜观察。对角膜中部和角膜缘上皮细胞的mRNA进行半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和原位杂交以检测其相关基因的表达。结果 角膜缘部位横向切片显示角膜缘上皮细胞为乳头放射状排列,对应于Vogt栅栏环境。未分化标记整合素β1、EGFR、烯醇化酶α及CK19在角膜缘基底细胞胞质染色较表层细胞更强;p63、ABCG2、整合素胡蛋白仅见于角膜缘基底部上皮细胞。激光扫描共焦显微镜观察和RT—PCR结果显示角膜缘表达p63、ABCG2、整合素胡蛋白及mRNA。原位杂交显示p63仅表达于角膜缘基底层细胞。结论 角膜缘上皮呈乳头放射状排列,角膜缘干细胞群具有复合标记：p63表达于细胞核、ABCG2表达于胞质、整合素胡表达于胞膜。采用这些标记复合体,可将角膜缘干细胞群与其他上皮细胞区分。