表皮干细胞的鉴定方法

获得纯化的人类和动物表皮干细胞不仅可为构建有生理功能的人工皮肤提供种子细胞，对了解皮肤组织器官发育、肿瘤疾病发生也具有重要意义，是转基因和组织工程技术中的重要靶细胞。利用慢周期性和自我更新能力是鉴别表皮干细胞最基本且较可靠的实验手段，但这两种方法的应用很不方便。目前位于表皮干细胞表面的糖蛋白已作为其特异性标志而受到关注。因表皮干细胞的特异性分子标志、识别标准、分布定位及体外培养条件下生物学特性的变化等诸多方面都还存在争议，限制了其基础研究与临床应用。     

表皮干细胞与毛囊干细胞生物学特性的比较

背景:获取更合适的组织工程皮肤种子细胞可使皮肤功能得到更好的修复。目的:分离、培养表皮干细胞和毛囊干细胞,并比较两种细胞的生物学特性。方法:体外分离培养2月龄新西兰兔表皮干细胞和毛囊干细胞,取生长良好的第2,3,6代细胞观察其生物学特性。结果与结论:毛囊干细胞较表皮干细胞贴壁快,具有更高的增殖活性。免疫组化及荧光定量PCR检测显示毛囊干细胞β1整合素、角蛋白19蛋白及mRNA表达均明显高于表皮干细胞。提示作为皮肤组织工程的种子细胞,毛囊干细胞较表皮干细胞更具优势。     

表皮干细胞标记物鉴定及应用现状

学术背景：大面积烧伤，创伤，癌症溃疡等造成的皮肤组织缺损问题越来越突出，尤其是大面积烧伤患者的自身皮源不足，因此需要一种有效的修复创面的方法。 目的：总结表皮干细胞特异性标记物的研究及应用现状。 检索策略：应用计算机检索PubMed 1980/2006年有关表皮干细胞特异性标记物的研究及应用的文章，检索词为“epidermal stem cells，Specific markers”，并限定文章语言种类为英文。共检索到50篇相关文献，排除重复文献，共纳入29篇。 文献评价：文献的来源主要是关表皮干细胞特异性标记物的研究及应用的文章。所选用的29篇文献中，均为临床或基础实验研究。 资料综合：表皮干细胞作为皮肤组织的特异性干细胞，不仅是维持皮肤新陈代谢的主要功能细胞，而且与创面修复紧密相关，是皮肤及其附属器发生、修复、改建的基础，因此可以作为组织工程皮肤的种子细胞。表皮干细胞的研究目前已经取得了长足进展，但是，仍有许多问题待解决：表皮干细胞缺乏特异性标记物，较难筛选；增殖周期长，体外培养中分化增殖的调控机制不十分清楚，目前研究的组织工程皮肤还没有皮肤附属结构，还不能称为是真正意义上的皮肤等问题。结论：表皮干细胞作为理想的种子细胞，为修复各种原因造成的皮肤缺损提供了机会窗口，开启了临床应用干细胞治疗的时代，这将为解决各种原因造成的皮肤缺损导致的皮源不足问题以及皮肤缺损的功能修复带来曙光。     

表皮干细胞生物学与临床应用研究进展

皮肤组织特异性干细胞，在维持表皮的自我更新，保持皮肤正常的表皮结构与功能方面起着重要作用。目前，在已发现的干细胞中，研究较多以及较深入的还是表皮干细胞。利用干细胞技术，生物工程原理及材料科学进行组织重建和修复的交叉学科——组织工程学，需要具有高度增殖及分化潜能的种子细胞——干细胞。表皮干细胞作为组织工程皮肤的种子细胞，已经在治疗烧伤方面发挥作用。     

成体表皮干细胞的分离培养与鉴定

目的 探讨成体表皮干细胞体外分离、培养和鉴定的技术方法。为组织工程皮肤的构建提供种子细胞。方法 通过中性蛋白酶消化成人包皮获得表皮细胞，再通过胰蛋白酶与乙二胺四乙酸（EDTA）消化并制成单个表皮细胞悬液，接种至人胎盘Ⅳ型胶原包被的培养瓶内．以Dulbecco改良Eagle培养基／F12（DMEM／F12，1：1）作为表皮干细胞培养基置培养箱内培养，37℃静置10～l5min，留用快速贴壁细胞继续培养，所得细胞分别以能否呈克隆状生长、流式细胞仪测细胞周期、透射电镜观察其超微结构及β1-整合素、角蛋白19（K19）免疫细胞化学染色进行鉴定。结果 人胎盘Ⅳ型胶原包被的培养瓶内快速贴壁细胞继续培养24h后细胞呈克隆状生长；电镜观察其超微结构示非成熟细胞特征；细胞周期分析示，第2代中静息期／DNA合成前期（G0／G1期）细胞占86．83％。β1-整合素、K19免疫细胞化学染色呈阳性。结论 成体表皮干细胞在体外得到成功分离与培养。     

正常皮肤和瘢痕组织表皮干细胞定位与增殖分化特征的比较性研究

目的 采研究少儿与成年人大面积重度烧伤后瘢痕组织表皮干细胞分布与表达β1整合素和角蛋白19，14，10（K19，K14，K10）的特征与规律，方法 分别取4－12岁少儿及4－12岁少儿及35－53岁成年人2组健康皮肤及大面积深度烧伤后瘢痕组织，采用免疫组织化学SP检测表皮干细胞，短暂扩充细胞特异表达的β1整合素和K19以及分化表皮细胞表达的K14和K10。结果 瘢痕组织表以基底层表达β1整合素与K19的阳性细胞数较健康皮肤明显减少，阳性强度降低。瘢痕组织表皮中表达K14的阳性细胞仅位于表皮底部二三层，明显少于健康皮肤，而K10表达阳性细胞则较健康皮肤分布广泛。结论 瘢痕组织表皮的增殖能力下降，细胞的分化行为紊乱，这可能是瘢痕组织表皮结构与功能改变，愈合能力下降的原因之一。     

表皮干细胞的生物学特性及应用

背景：尽早去除创面坏死组织、重建皮肤结构和功能,是大面积深度烧伤治疗的关键和最终目标。表皮干细胞作为皮肤组织特异性干细胞,拥有无可置疑的潜能。目的：总结表皮干细胞的生物学特性及应用现状。方法：应用计算机检索2000-01/2010-10PubMed数据库相关文章,检索词＂epidermal stem cells,basic study＂,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索2005-01/2010-10万方数据库相关文章,检索词为＂表皮干细胞＂,并限定文章语言种类为中文。共检索到文献271篇,最终纳入符合标准的文献38篇。结果与结论：表皮干细胞是具有多向分化潜能、自我更新能力和高度增殖能力的细胞,具有慢周期性和对基底膜的黏附能力,其增殖分化受到壁龛及Wnt信号通路、MAPK、c-Myc、Notch信号传导通路、细胞因子等的调控。目前尚无公认的特异性标志物,可用于创面修复、基因治疗、组织工程领域。随着表皮干细胞研究的深入,将为皮肤基础研究、创面功能修复和皮肤遗传病的治疗提供新途径。     

表皮干细胞的生物学特性及应用

背景:尽早去除创面坏死组织、重建皮肤结构和功能,是大面积深度烧伤治疗的关键和最终目标.表皮干细胞作为皮肤组织特异性干细胞,拥有无可置疑的潜能.目的:总结表皮干细胞的生物学特性及应用现状.方法:应用计算机检索2000-01/2010-10 PubMed数据库相关文章,检索词"epidermal stem cells,basic study",并限定文章语言种类为English.同时计算机检索2005-01/2010-10万方数据库相关文章,检索词为"表皮干细胞",并限定文章语言种类为中文.共检索到文献271篇,最终纳入符合标准的文献38篇.结果与结论:表皮干细胞是具有多向分化潜能、自我更新能力和高度增殖能力的细胞,具有慢周期性和对基底膜的黏附能力,其增殖分化受到壁龛及Wnt信号通路、MAPK、c-Myc、Notch信号传导通路、细胞因子等的调控.目前尚无公认的特异性标志物,可用于创面修复、基因治疗、组织工程领域.随着表皮干细胞研究的深入,将为皮肤基础研究、创面功能修复和皮肤遗传病的治疗提供新途径.     

正常皮肤和瘢痕组织表皮干细胞定位与增殖分化特征的比较性研究

目的采研究少儿与成年人大面积重度烧伤后瘢痕组织表皮干细胞分布与表达β1整合素和角蛋白19,14,10(K19,K14,K10)的特征与规律。方法分别取4～12岁少儿及35～53岁成年人2组健康皮肤及大面积深度烧伤后瘢痕组织。采用免疫组织化学SP法检测表皮干细胞、短暂扩充细胞特异表达的β1整合素和K19以及分化表皮细胞表达的K14和K10。结果瘢痕组织表皮基底层表达β1整合素与K19的阳性细胞数较健康皮肤明显减少,阳性强度降低。瘢痕组织表皮中表达K14的阳性细胞仅位于表皮底部二三层,明显少于健康皮肤,而K10表达阳性细胞则较健康皮肤分布广泛。结论瘢痕组织表皮的增殖能力下降,细胞的分化行为紊乱,这可能是瘢痕组织表皮结构与功能改变、愈合能力下降的原因之一。     

移植超薄表皮片中成熟细胞逆向分化为表皮干细胞的现象

目的：观察移植超薄表皮片中成熟表皮细胞的分化及分布状态，以及其向表皮干细胞逆分化现象在创面修复过程中的存在。 方法：采用荧光标记和免疫组织化学方法，检测解放军空军总医院2004-11／2005-05经环切术切取的成人的包皮12例，用中性蛋白酶消化获得表皮片，反复冲洗使基底层干细胞脱落。在一部分行苏木精-伊红、免疫组织化学染色的同时，另一部分皮片用DAPI标记后移植于由北京协和动物中心提供的12只裸鼠全层皮肤缺损的创面，于第4和7天取材制作冰冻切片，行免疫组化染色，荧光显微镜观察创面修复过程中表皮细胞角蛋白19、角蛋白14、角蛋白10的分布情况与表达特征。 结果：①苏木精-伊红染色可见未标记移植的表皮片示有正常的层次结构，但标记移植的皮片组织学观察显示细胞层次有松弛、紊乱的迹象。②免疫组化染色及荧光显微镜示未标记移植前的皮片颗粒层以下几乎未见角蛋白19阳性细胞而有少量角蛋白14阳性细胞和大量角蛋白10阳性细胞，而标记移植的皮片有孤立成团同时发蓝-红双荧光的角蛋白19阳性细胞，且角蛋白14阳性细胞明显增多。③这些现象在移植后的第4天最为显著。 结论：在超薄表皮片移植中显示有成熟表皮细胞向表皮干细胞方向的逆分化，起到了维持皮片活力和参与创面修复的作用。     

表皮干细胞生物学特性研究现状

表皮干细胞是来源于胚胎外胚层皮肤组织的专能干细胞,主要分布于表皮基底层和毛囊隆突部,形态学上具有未分化细胞的特征,在生物学方面是皮肤及其附属器发生、修复、改建的源泉.现阶段对表皮干细胞的鉴定需采用整合素、角蛋白、增殖细胞核抗原、基因物质及连接蛋白等多个标记物,其增殖分化受整合素、信号转导通路及细胞因子等因素影响.目前表皮干细胞研究在皮肤创而修复、组织工程皮肤的构建、基因治疗等方面均已取得显著进展,但仍存在如何确立一种绝对公认的特异标记物、从胚胎干细胞向表皮干细胞分化培养过程中怎样维持其干细胞特性以及快速大量扩增、应用于临床是否会恶性变而产生医疗安全等急需解决的问题.     

表皮细胞去分化的表皮干细胞

背景：表皮干细胞以显著的自我更新和多向分化潜能及皮肤组织工程学中诱人的应用前景,作为＂种子细胞＂成为皮肤创伤研究领域的热点之一。目的：综述表皮细胞去分化逆转为表皮干细胞的研究近况。方法：应用计算机检索1998-01/2011-01PubMed、Highwire和中国期刊全文数据库相关文章,检索词＂dedifferentiation,epidermalcells,epidermalstemcells,induction,去分化,表皮细胞,表皮干细胞,诱导＂。共检索到文献2754篇,最终纳入符合标准的文献46篇。结果与结论：去分化来源的表皮干细胞与机体自身来源的表皮干细胞之间在形态学和功能有许多相似点,并可表达表皮干细胞的特异性标记物。表皮细胞去分化途径制造表皮干细胞,可以作为机体自身来源表皮干细胞的替代细胞应用于皮肤损伤重建和再生的相关研究,为实现皮肤创伤由解剖修复到功能修复的＂完美修复＂提供新思路。     

表皮干细胞的研究进展

背景:随着分子生物学、细胞生物学及生物工程学的发展,表皮干细胞凭借其特有的生物学优势在基因治疗、细胞治疗中越来越受到重视.目的:综述表皮干细胞的相关研究进展.方法:第一作者应用计算机检索2000-01/2009-01 PubMed数据库(网址http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed)相关文章,检索词为"epidermal stem cell,marker,clinical application",并限定文章语占种类为English.同时计算机检索2000-01/2009 01 CNKI数据库(网址 http://www.cnki.net/index.htm)相关文章检索词为"表皮干细胞,标记物.临床应用",并限定文章语言种类为中文.共检索到文献815篇.最终纳入21篇.结果与结论:了解表皮下细胞的来源、分布特征、鉴定方法、增殖与分化调控的机制、临床应用现状等方面的研究进展是进一步应用表皮干细胞治疗疾病的重要前提和理论基础.表皮干细胞具有无限增殖和多向分化的潜能,对维持表皮的自我更新、保持皮肤的正常结构以及对皮肤的创伤修复具有重要意义.表皮干细胞已引起越来越多研究者的关注.     

表皮干细胞临床应用现状

目的:干细胞的研究已成为世界高新技术的亮点,势必导致一场医学和生物学革命。文章对干细胞研究现状及表皮干细胞临床应用进展作一综述。资料来源:应用计算机检索PUBMED1996-01/2007-01期间的相关文章,检索词为“stem cell”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库1996-01/2007-01期间的相关文章,检索词为“表皮干细胞,临床”,并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与表皮干细胞临床临床应用研究相关。排除标准:重复研究。资料提炼:共收集到86篇相关文献,35篇文献符合纳入标准,排除的51篇文献为内容陈旧或重复。资料综合:干细胞具有多向分化潜能和自我复制功能,可分化成不同的组织和器官,包括全能干细胞、胚胎干细胞、多能干细胞。皮肤干细胞在维持内环境稳定以及伤口修复中起关键作用,具有慢周期性和自我增殖能力的细胞,其正常增殖分化是维持皮肤正常组织结构和细胞内环境稳定的基本要求。表皮干细胞来源于胚胎的外胚层,毛囊上半部的隆起处数量众多,在缺乏毛发的手掌等处位于表皮的基地层。表皮干细胞具有双向分化的能力,一方面可向下迁移分化为表皮基底层,进而生成毛囊;另一方面可向上迁移并最终分化为各种表皮细胞。结论:表皮干细胞来源于外胚层,将其按组织工程原理构建皮肤,用于严重创伤、大面积烧伤以及整形术后的创面覆盖,已成为解决临床治疗中皮源缺乏问题的根本途径。     

脂肪来源干细胞诱导表皮细胞化的研究现状与进展

背景:脂肪干细胞通过向表皮细胞进行诱导可以对难愈创面的修复提供理想的解决方法.目的:通过分析总结近10 年以来脂肪干细胞的研究方法和思路,期待能为脂肪干细胞诱导表皮细胞化提供总结和探索.方法:由第一作者分别以"干细胞、脂肪干细胞"、"ADSCs 、adipose derived stem cells" 为检索词,应用计算机检索重庆维普(VIP)期刊全文数据库以及万方数据库2001-01/2010-10 有关文章,纳入有关脂肪干细胞组织工程的文献.排除与研究目的无关和内容重复者.保留26 篇文献做进一步分析.结果及结论:脂肪干细胞作为一种种子细胞,有望在一定的条件下定向诱导分化成为表皮细胞,并且提高诱导分化率和扩增能力,最终达到临床治疗使用的目的.其具有的来源丰富、易于获得、有多向分化潜能、相容性好、对患者损伤小等特点无疑是其他众多间充质干细胞所无法比拟的.但同时,脂肪干细胞在无免疫力的移植受体上表现的肿瘤样无限增生特性,在进入临床试验前仍需要寻找并建立合适的动物模型进行长期观测以确定其移植后的安全性;其次,脂肪干细胞向表皮细胞诱导尚无一安全稳定并行之有效的培养、诱导方式;以及在批量提取生产脂肪干细胞的过程中,如何保障细胞质量的均一稳定性仍然有待进一步研究.