CD4、CCR5、CXCR4和DC-SIGN分子在HIV-1感染者及正常人晚孕胎盘及早孕绒毛的表达

目的明确CD4、CCR5、CXCR4和DC-SIGN分子在HIV-1不同感染状态晚孕胎盘和早孕绒毛的存在及表达情况,为探索HIV-1宫内传播的分子机制提供理论依据。方法收集11例HIV-1感染孕妇胎盘、13例正常孕妇胎盘和10例早孕流产绒毛,免疫组化检测并比较3组孕妇胎盘或绒毛组织中HIV-1相关受体CD4、CCR5、CXCR4和DC-SIGN分子的存在情况及其表达强度。结果 CD4在早孕绒毛和晚孕胎盘中的表达存在个体差异,早孕组、对照组和病例组CD4阳性率分别为70.00%、61.54%、72.73%,3组阳性率差异无统计学意义（P=0.902）。CCR5、CXCR4和DC-SIGN分子在胎盘均有表达,均定位于滋养细胞和绒毛间质细胞和/或Hofbauer细胞,且在早孕绒毛中的表达强度均低于晚孕胎盘组,差异均有统计学意义（t1=-4.09,P1<0.001;t2=-4.80,P2<0.001;t3=-4.57,P3=0.001）。结论胎盘组织中存在多种HIV-1受体相关分子,具备感染的分子基础。胎盘滋养细胞上是否存在CD4分子具有个体差异;CCR5、CXCR4和DC-SIG...     

CXCL12/CXCR4在正常妊娠胎盘组织中的表达及意义

目的探讨CXCL12/CXCR4在正常妊娠不同孕期胎盘组织中的表达情况及其在滋养层细胞侵蚀及孕卵着床等正常妊娠过程中的作用。方法采用免疫组织化学SP法检测50例正常孕妇(早孕15例、中孕15例、晚孕20例)胎盘组织中CXCL12/CXCR4表达程度。结果CXCL12/CXCR4在早、中孕组滋养细胞、基质细胞、蜕膜组织中呈强阳性表达,晚孕组呈弱阳性或阴性表达,与早、中孕期组相比表达明显减弱,差异有极显著性(P<0.01)。结论CXCL12/CXCR4可能在胎盘形成、子宫-胎儿血管系统的建立等过程中发挥重要作用。     

HIV感染者第二受体CCR5和CXCR4表达与机会性感染的相关性

目的分析HIV感染者第二受体表达与机会性感染的相关性,为临床监测提供依据。方法45例HIV-1阳性者作为研究组,其中发生机会性感染16例,无机会性感染29例。正常对照11例。比较机会性感染与无机会性感染HIV各期第二受体CCR5、CXCR4在CD4^＋T、CD8^＋T细胞上的表达,并分析其与CD4^＋／CD8^＋比值的相关性。结果与对照组比较,机会性感染组CD4^＋／CCR5、CD8^＋／CCR5、CD8^＋T细胞明显升高（P〈0．05或P〈0．01）,而CD4^＋／CXCR4、CD4^＋T细胞明显下降（P〈0．01）。机会性感染组CD8^＋／CCR5[（43．4±22．4）％]明显地高于无机会性感染组[（29．9±20．8）％,（P〈0．05）],CD8^＋T细胞[（1095．6±476．7）×100／L]明显高于无机会性感染组[（773．3±464．0）×10^6／L,（P〈0．05）]。CD4^＋／CXCR4表达与CD4^＋／CD8^＋比值呈正相关（r=0．306,P〈0．05）,CD8^＋／CCR5与CD8^＋呈正相关（r=0．432,P〈0．01）。结论HIV感染者第二受体CCR5表达增高,CD4^＋／CXCR4表达下降,机会性感染者第二受体CD8^＋／CCR5表达增高更为明显。检测第二受体CCR5、CXCR4有一定的临床价值,但第二受体检测仍需要结合CD4^＋T细胞动态检验,以提高监测价值。     

HIV感染者抗病毒治疗后HIV-1辅助受体的利用情况

目的 调查HIV-1感染人群抗病毒治疗后HIV-1辅助受体的利用情况.方法 从安徽、河南两地选择109例接受抗病毒治疗的HIV-1感染者和45例未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者作为研究对象,通过周围血单个核淋巴细胞(PBMCs)共培养方法,分离培养HIV-1临床毒株,利用酶联免疫吸附法检测培养上清HIV-1的P24含量,通过表达趋化因子CCR5和CXCR4的Ghost细胞系检测病毒辅助受体利用,对治疗人群中HIV-1辅助受体利用因素进行探讨,并与治疗因素进行分析讨论.结果 从治疗人群中分离了45株病毒,其中22株病毒(48.89%)利用CCR5辅助受体,是R5嗜性毒株;21株病毒(46.67%)利用CXC4/CCR5辅助受体,为双嗜性(X4/R5)毒株;有2株(4.44%)仅利用CXCR4辅助受体,为X4嗜毒株.从未治疗人群中分离了109株病毒,其中96株(88.07%)利用CCR5辅助受体(R5嗜性毒株);13株(11.93%)为X4/R5双嗜性毒株.HIV-1 CXC4/CCR5辅助受体利用率在两组中的差异有统计学意义(x2=27.30,P＜0.05).治疗方案一(齐多夫定、去羟肌苷、奈韦拉平三联用药)治疗后HIV-1 CXC4/CCR5的利用率为59.09%(13/22),治疗方案二(司他夫定、去羟肌苷、奈韦拉平三联用药)治疗后HIV-1 CXC4/CCR5的利用率为43.48%(10/23),二者对HIV-1辅助受体利用的影响差异没有统计学意义(x2=1.10,P=0.30).结论 在HIV-1感染者中,接受抗病毒治疗人群中HIV-1 CXCR4/CCR5利用率高于未治疗人群.     

Toll样受体4在感染性早产患者外周血单个核细胞的表达及意义

目的:观察感染性早产患者外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)的表达变化,探讨其与感染性早产发生的关系以及在早期预测中的价值。方法:收集31例早产(28～36+6周)患者部分胎盘胎膜组织行病理检查,根据病检有无绒毛膜羊膜炎分为早产感染组(17例)和早产非感染组(14例),门诊进行孕检的同孕周正常孕妇作为正常对照组(10例)。①采用酶联免疫吸附法测定血清中的IL-6水平;②应用流式细胞术观察早产患者和正常对照组孕妇外周血CD14+单个核细胞上TLR4分子的表达率和平均荧光强度(MFI);③检测血常规。结果:①TLR4在早产感染组患者外周血CD14+单个核细胞的阳性率为(39.22±13.17)%,平均荧光强度为(48.45±11.66),显著高于早产非感染组和正常对照组(P0.05);而TLR4分子在早产非感染组和正常对照组外周血CD14+单个核细胞的阳性率和MFI相比,差异无统计学意义(P0.05);②早产感染组孕妇血清中IL-6水平为(2.56±0.36)pg/ml,明显高于早产非感染组孕妇和正常对照组孕妇,差异有统计学意义(P0.05),但早产非感染组和正常对照组血清中IL-6水平比较,差异无统计学意义(P0.05);③感染性早产患者外周血TLR4的MFI与血清中IL-6水平成正相关(r=0.727,P0.05),与血常规中的白细胞总数和中性粒细胞百分比无明显相关性。结论:①感染性早产患者外周血单个核细胞表面TLR4及血清IL-6表达明显增强,提示TLR4的信号通路可能与感染性早产的发生发展密切相关;②TLR4平均荧光强度与血清中IL-6水平成正相关,可作为早期预测早产宫内感染的指标。     

干扰素调节因子4在Toll样受体3介导的小鼠流产过程中的作用及机制

目的研究干扰素调节因子4(IRF-4)在Toll样受体3(TLR-3)介导的小鼠流产过程中的作用机制。方法选取SPF级近交系Balb/C雌鼠、C57BL/6雄鼠,将孕鼠随机分为TLR-3抗体阻断组、CXCL12抗体阻断组、血清对照组,于孕4.5、5.5、6.5 d连续腹腔注射TLR-3抗体/CXCL12抗体/血清,孕6.5、7.5 d连续腹腔注射多聚次黄苷酸胞苷酸Poly(I∶C)或PBS。孕9.5、13.5、17.5 d时处死小鼠,计算胚胎吸收率,收集外周血、脾脏、子宫胎盘组织。利用小鼠淋巴细胞分离液分离外周血、脾脏、子宫胎盘来源的小鼠淋巴细胞,实时PCR法检测外周血、子宫胎盘来源的小鼠淋巴细胞中IRF-4 mRNA转录水平,流式细胞法检测外周血、脾脏来源的小鼠淋巴细胞中Th17细胞比例及子宫胎盘淋巴细胞中CXCR4阳性细胞比例,免疫组化法检测子宫胎盘组织中IRF-4蛋白表达水平。结果在外周血淋巴细胞中,Poly(I∶C)诱导流产组的IRF-4 mRNA转录水平在孕9.5、13.5、17.5 d时显著高于对照组(P0.05),且孕13.5 d时两组转录水平差异达到最高;给予预先腹腔连续注射TLR-3抗体后,Poly(I∶C)诱导流产组的IRF-4 mRNA转录水平与对照组相比无明显差异(P=0.867、0.931、0.953)。在子宫胎盘来源的淋巴细胞中,IRF-4 mRNA转录水平的变化趋势与PBMCs类似,Poly(I∶C)诱导流产组的IRF-4 mRNA转录水平在孕9.5、13.5 d时显著高于对照组(P0.01),在孕17.5 d时无显著差异(P=0.504);给予预先腹腔连续注射TLR-3抗体后,Poly(I∶C)诱导流产组的IRF-4 mRNA转录水平与对照组相比无明显差异(P=0.081、0.219、0.178)。流式细胞法检测Th17细胞(CD4阳性、IL-17A阳性)比例。在PBMCs中,三个孕期时间点时,Poly(I∶C)诱导流产组的CD4阳性、IL-17A阳性比例显著高于对照组(P0.05);TLR-3抗体预先阻断后,CD4阳性IL-17A阳性比例在两组中无明显差异(P=0.612、0.320、0.167)。在脾脏淋巴细胞中,Poly(I∶C)诱导流产组的CD4阳性IL-17A阳性比例在孕9.5、13.5、17.5 d时显著高于对照组(P0.05),TLR-3抗体预先阻断后,差异无统计学意义(P=0.109、0.413、0.631)。流式细胞法检测UMGCs中的CXCR4阳性细胞比例。CXCR4阳性细胞比例在IRF-4阳性细胞中显著高于IRF-4阴性细胞(P0.01),Poly(I∶C)注射可显著提高IRF-4阳性及IRF-4阴性细胞中CXCR4的表达;预先给予CXCL12(CXCR4配体)抗体阻断,无论是在IRF-4阳性或IRF-4阴性细胞中,Poly(I∶C)诱导组与对照组中CXCR4的表达无明显差异(P=0.122)。免疫组化法检测子宫胎盘组织中IRF-4蛋白表达水平,Poly(I∶C)诱导流产组的IRF-4免疫组化光密度值在孕9.5、13.5 d时显著高于对照组(P0.05),孕17.5 d时无明显差异(P=0.403);给予预先腹腔连续注射TLR-3抗体后,两组之间的表达差异无统计学意义(P=0.664、0.205、0.486)。结论 IRF-4在此流产过程中与对照组相比表达有差异,包括mRNA转录水平、蛋白水平均有显著差异。TLR-3抗体预先阻断小鼠体内TLR-3后,IRF-4转录及蛋白表达水平差异消失。     

REDD1在胎盘组织中的表达及意义

目的探讨发育及DNA损伤反应调节基因1(regulated in development and DNA damage responses 1,REDD1)在人胎盘组织中的表达及其意义。方法选择早孕绒毛组织(6~10周)、中孕(24~28周)及足月晚孕(38~39周)胎盘组织各8例,采用免疫组织化学染色技术,Western blot杂交以及实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测REDD1 mRNA及蛋白在不同孕周胎盘组织中的表达。结果 REDD1蛋白表达于胎盘滋养细胞的细胞质中,随着孕周增加,REDD1在mRNA及蛋白在胎盘组织中的表达呈现下降趋势。结论 REDD1可能早期参与了滋养细胞侵袭的过程。     

MMP-13和上皮细胞钙粘附蛋白在胎盘部位滋养细胞肿瘤和绒癌中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-13 (MMP-13)和上皮细胞钙粘附蛋白在胎盘部位滋养细胞肿瘤和绒癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测20例早孕胎盘绒毛,15例葡萄胎,20例绒癌,10例胎盘部位滋养细胞肿瘤中MMP-13和上皮细胞钙粘附蛋白的阳性表达率及相关性。结果 MMP-13定位于细胞浆,而上皮细胞钙粘附蛋白定位于细胞膜。MMP-13在葡萄胎、正常早孕绒毛、胎盘部位滋养细胞肿瘤、绒癌中阳性表达率逐渐升高,差异有统计学意义(P0. 05),在胎盘部位滋养细胞肿瘤中的阳性表达率高于正常早孕绒毛和葡萄胎,差异均有统计学意义(均P0. 05),在胎盘部位滋养细胞肿瘤中的阳性表达率低于绒癌,差异有统计学意义(P0. 05)。上皮细胞钙粘附蛋白在正常早孕绒毛、葡萄胎、胎盘部位滋养细胞肿瘤、绒癌中表达逐渐下降,差异有统计学意义(P0. 05),在胎盘部位滋养细胞中的阳性表达率低于正常早孕绒毛和葡萄胎,差异均有统计学意义(均P0. 05),在胎盘部位滋养细胞肿瘤和绒癌中的阳性表达率比较差异无统计学意义(P0. 05)。MMP-13和上皮细胞钙粘附蛋白在4组中的表达呈明显负相关(r=-0. 718,P=0. 000)。结论 MMP-13高表达和上皮细胞钙粘附蛋白表达降低或表达缺失,表明其可能在胎盘部位滋养细胞肿瘤和绒癌发生、发展过程中起重要作用。     

调节趋化因子CXCL12、CCL2、RANTES及其受体表达对自然流产模型小鼠妊娠结局的影响

目的:观察选择性改变母胎界面趋化因子CXCL12、CCL2、RANTES及其受体CXCR4、CCR2、CCR5的表达对自然流产模型小鼠妊娠结局的影响,探讨免疫学改造在不明原因复发性流产(URSA)治疗中的可行性.方法:选择经典模型动物建立正常妊娠与URSA小鼠模型,正常妊娠小鼠为对照组(10例),URSA小鼠随机分为5组:未干预组(10例)、CXCL12干预组(10例)、CCR2拮抗剂干预组(10例)、CCR5拮抗剂干预组(10例)和CXCL12+CCR2拮抗剂+CCR5拮抗剂联合干预组(10例).Western Blot方法检测各组小鼠绒毛和蜕膜组织中趋化因子及其受体CXCL12/CXCR4、CCL2/CCR2、RANTES/CCR5蛋白的表达;同时观察各组小鼠胚胎丢失的情况,计算胚胎丢失率.结果:①URSA小鼠未干预组绒毛和蜕膜组织中CXCL12/CXCR4蛋白的表达显著低于正常妊娠对照组,而CCL2/CCR2和RAN]ES/CCR5蛋白的表达均显著高于正常妊娠对照组,差异有统计学意义(P均＜0.05).URSA小鼠CXCL12干预组绒毛和蜕膜组织中CXCL12/CXCR4蛋白的表达显著高于未干预组(P＜o.05);但仍低于正常妊娠对照组(P＜0.05).URSA小鼠CCR2拮抗剂干预组绒毛和蜕膜组织中CCL2/CCR2蛋白的表达显著低于未干预组(P＜0.05),但仍高于正常妊娠对照组(P＜0.05).URSA小鼠CCR5拮抗剂干预组绒毛和蜕膜组织中RANTES/CCR5蛋白的表达显著低于未干预组(P＜0.05),但仍高于正常妊娠对照组(P＜0.05).URSA小鼠CXCL12+CCR2拮抗剂+CCR5拮抗剂联合干预组绒毛和蜕膜组织中CXCL12/CXCR4蛋白的表达显著高于未干预组(P＜0.05);但仍低于正常妊娠对照组(P＜0.05);CCL2/CCR2和RANTES/CCR5蛋白的表达均显著低于未干预组(P＜0.05),但仍高于正常妊娠对照组(P＜0.05).②UR-SA小鼠未干预组的胚胎吸收率显著高于正常妊娠对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).URSA小鼠CXCL12干预组、CCR2拮抗剂干预组、CCR5拮抗剂干预组和CXCL12+ CCR2拮抗剂+CCR5拮抗剂联合干预组的胚胎吸收率均低于未干预组(P均＜0.05),其中联合干预组下降更为显著(P＜0.05),但仍高于正常妊娠对照组(P＜0.05).结论:可以通过选择性诱导母胎界面CXCL12/CXCR4蛋白高表达、CCL2/CCR2和RANTES/CCR5蛋白低表达改善URSA小鼠妊娠结局.     

一种新的HIV-1感染相关分子--DC-SIGN

DC-SIGN是树突细胞表面的特异性分子,参与树突细胞迁移及与T淋巴细胞的相互作用,并能特异性捕获1型人免疫缺陷病毒(HIV-1),增强HIV-1对表达CD4和辅受体的靶细胞的感染,在HIV-1感染中起着非常重要的作用.本文综述了DC-SIGN的生物学特征及其介导HIV-1经性传播和血液传播感染靶细胞的机制.     

SDF-1/CXCR4表达与妊娠期高血压疾病及新生儿出生体重的关系

目的:研究胎盘中趋化因子SDF-1/CXCR4表达与妊娠期高血压疾病及新生儿出生体重之间的关系。方法:以10例妊娠期高血压患者为高血压组,10例轻度子痫前期患者为轻度子痫前期组,12例重度子痫前期患者为重度子痫前期组,35例正常产妇为对照组,以采用免疫组织化学法检测胎盘中SDF-1/CXCR4的表达强度,记录新生儿出生体重。结果:随着妊娠期高血压疾病病情加重,胎盘中SDF-1/CXCR4表达强度呈渐进性下降趋势,均低于对照组。对照组胎盘中SDF-1/CXCR4的表达与新生儿出生体重无统计学相关性。妊娠期高血压疾病患者胎盘中SDF-1、CXCR4的表达与新生儿出生体重有显著相关性。结论:胎盘中SDF-1、CXCR4表达强度变化与妊娠期高血压疾病发病及新生儿出生体重有重要关系。     

巨细胞病毒感染对人早孕绒毛及蜕膜组织的内分泌影响

目的:探讨人巨细胞病毒(humancytomegalovirusHCMV) 感染对人早孕绒毛及蜕膜组织的内分泌影响。方法: 采用体外培养早孕绒毛及蜕膜组织技术, 给予HCMV感染建立体外HCMV感染早孕绒毛及蜕膜模型, 采用放射免疫法检测HCMV感染后早孕绒毛及蜕膜组织培养上清液中hCG和PRL的水平。结果: ①正常早孕绒毛培养液中hCG分泌峰值在培养后第7天。给予高浓度HCMV干预后, hCG水平显著下降(P<0 .01 ), 给予中浓度HCMV干预后, hCG水平明显下降(P<0. 05 ),给予低度HCMV干预后, hCG水平于培养的第1~3天有所下降, 与正常对照组无显著差别(P>0 .05)。②正常蜕膜培养液中PRL分泌峰值在培养后第5天达峰值, 给予高浓度HCMV干预后, PRL水平显著下降(P<0 .001), 给予中浓度HCMV干预后,PRL水平明显下降(P<0 .01), 给予低度HCMV干预后, PRL水平于培养的第1~5天明显下降(P<0. 05) 后渐恢复至正常水平。结论: HCMV感染可影响早孕绒毛及蜕膜组织的hCG和PRL的分泌, 导致不良妊娠结局。     

The genetic variation of CCR5, CXCR4 and SDF-1 in three Chinese ethnic populations

The chemokine receptors and ligand CCR5, CXCR4 and SDF-1 play important roles in the entry of HIV-1 into host cells. Genetic polymorphisms such as CCR5-Δ32 and SDF-1 3'A have been reported to be associated with HIV-1 susceptibility and the progression of AIDS. Considering the remarkable difference in CCR5-Δ32 allele frequency among worldwide populations, we aimed to survey the genetic variations in CCR5, CXCR4 and SDF-1 in different Chinese populations. The open reading frames and regulatory regions of CCR5, CXCR4 and SDF-1 were sequenced in 141 Chinese individuals from three ethnic groups: Han, Mongol and Uyghur. Ninety-six variants were identified, 41 of which were newly identified (NI) in Chinese populations. A novel non-synonymous variant c.459 C>T (Trp153Cys) within CCR5 was identified in one Han individual. Of NI variants, 11 were common polymorphisms with a minor allele frequency (MAF) >5%. The polymorphism CCR5-Δ32 was found in three Uyghur individuals but was absent in Han and Mongol groups. The linkage disequilibrium (LD) analysis of CCR5 and SDF-1 and frequency of CCR5 haplotypes showed considerable divergence among three ethnic groups. Our results show the great genetic heterogeneity within CCR5, CXCR4 and SDF-1 in Chinese ethnic populations.     

趋化因子复合受体在HIV-1感染中的作用

趋化因子复合受体与HIV-1感染关系密切.此文简要回顾了HIV-1复合受体以及它们在病毒膜融合和HIV-1发病机制中的作用,以期为将来研究趋化因子复合受体抗HIV-1感染提供理论依据.     

Purified complexes of HIV-1 envelope glycoproteins with CD4 and CCR5(CXCR4): production, characterization and immunogenicity

The ability to readily elicit broadly neutralizing antibodies to HIV-1 remains elusive. We and others have hypothesized that interaction of the viral envelope glycoprotein (Env, gp120-gp41) with its receptor molecules could enhance the exposure of conserved epitopes that may facilitate the elicitation of broadly neutralizing antibodies. The Env-CD4-coreceptor complexes mediate HIV-1 entry into cells and serve as a major target for inhibitors of this process. To begin to evaluate their potential also as vaccine immunogens we produced relatively large amounts of complexes of purified recombinant soluble truncated Env, gp140(89.6) or gp120(89.6), with CD4 and CCR5 or CXCR4. We found that gp140(gp120)-CD4-CCR5 complexes are stable and immunogenic in mice transgenic for human CD4 and CCR5. They elicited anti-gp120 and anti-gp140 antibodies that inhibited an heterologous primary HIV-1 isolate (JR-FL) with two- to threefold higher neutralizing activity than those elicited by gp120 and gp140. The antibodies elicited by the complexes competed better with the antibodies X5 and CG10 but not with b12 for binding to gp120 and gp120-CD4 complexes compared to those elicited with gp140(120) alone. These findings suggest that stable purified Env-CD4-CCR5(CXCR4) complexes can be produced in relatively large amount sufficient for their further characterization that may help in the development of novel vaccines candidates.     

正常妊娠不同孕期胎盘组织中基质金属蛋白酶-9及其组织抑制物-1的表达

目的 :探讨基质金属蛋白酶 (MMP) - 9及其组织蛋白酶抑制物 (TL MP) - 1在正常妊娠不同孕期胎盘组织中的表达情况及其在滋养层细胞侵蚀及孕卵着床等正常妊娠过程中的作用。方法 :采用免疫组织化学 SP法检测 4 5例正常孕妇 (早孕 10例、中孕 15例、晚孕 2 0例 )胎盘组织中 MMP- 9/ TIMP- 1表达程度。结果 :MMP- 9在早、中孕组的滋养细胞、基质细胞、蜕膜组织中呈强阳性表达 ,晚孕组呈阳性表达 ,与早、中孕期组相比表达明显减弱 ,有极显著性差异 (P<0 .0 1) ;TIMP- 1在早、中孕组呈阳性表达 ,晚孕组呈强阳性表达 ,与早、中孕组相比表达明显增强 ,有极显著性差异 (P<0 .0 1)。结论 :MMP-9/ TIMP- 1可能在胎盘的形成、子宫 -胎儿血管系统的建立等过程中发挥重要作用。     

Differences in molecular evolution between switch (R5 to R5X4/X4-tropic) and non-switch (R5-tropic only) HIV-1 populations during infection

The recent introduction of entry inhibitors in the clinic as components of antiretroviral treatment has heightened the interest in coreceptor use of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1). Viruses using CCR5 as coreceptor (R5 viruses) are generally present over the entire course of infection whereas viruses using the CXCR4 coreceptor (R5X4/X4 viruses) emerge in about 50% of infected individuals during later stages of infection. The CCR5-to-CXCR4 switch represents a concern because CCR5 inhibitors, while suppressing R5 viruses, may allow the emergence of CXCR4-tropic viruses. In this study, HIV-1 populations that maintained CCR5 usage during infection were compared with populations that switched coreceptor usage to include CXCR4 later during infection, with the aim to find molecular properties of the virus populations associated with the CCR5-to-CXCR4 switch. We amplified and molecularly cloned the V1–V3 region of the HIV-1 envelope from 51 sequential HIV-1 isolates derived from 4 to 10 serial samples for each of the patients. Four of the patients had virus populations that switched coreceptor usage to include CXCR4 (switch populations: SP) during infection and four patients had viral populations that maintained exclusive CCR5 usage (non-switch populations: nSP). Coreceptor usage was determined experimentally on individual clones from dualtropic R5X4 isolates. In nSP we found that the number of potential N-linked glycosylation sites (PNGS) increased over time, whereas no pattern of change was observed in SP. We also found differences in V2 length and V3 charge between R5 viruses of nSP and R5 viruses of SP before the switch. The V2 region was significantly longer in R5 viruses of SP compared to viruses of nSP throughout the course of infection, and the V3 charge increased with time in R5 populations from SP, while it remained unchanged or decreased in nSP. These molecular properties could prove important for understanding the evolution of coreceptor usage in HIV-1 populations, and maybe even for predicting an upcoming coreceptor switch at early stages after primary infection.