猪肝细胞用于生物人工肝的安全性问题

人工肝为肝衰患者过渡到肝移植的桥梁,而生物人工肝更符合生理需要.目前进入临床实验的生物人工肝多以猪肝细胞为材料,本文对猪肝细胞源性生物人工肝脏辅助系统的概念,猪肝细胞应用的潜在危险,猪内源性逆转录病毒的相关问题,以及防止猪病原体传播的方式等进行了综述.     

人工肝生物材料——猪肝细胞的研究进展

目前,生物人工肝细胞材料研究的主要来源有人肝细胞、肝肿瘤细胞株及异种动物肝细胞.由于人肝细胞来源不足以及肝肿瘤细胞株潜在的致瘤性,使异种动物肝细胞逐渐成为国内外生物人工肝研究的主要对象,其中猪肝细胞已成为生物人工肝应用最多的肝细胞.近年来,在大量实验研究基础上,猪肝细胞用于生物人工肝的研究已经取得较大进展.……     

猪肝细胞用于生物人工肝的研究进展

异种动物肝细胞一直是国外生物人工肝研究的主要细胞 ,其中猪肝细胞已成为生物人工肝应用最多的肝细胞。由于猪肝细胞的代谢功能 (细胞色素P4 5 0含量及其代谢能力 )与人工肝细胞最为接近 ,其混合氧化酶的高水平表达正是代偿肝衰竭解毒功能的重要基础〔1〕,故猪肝细胞被公认是目前生物人工肝较好的细胞材料。近年来 ,在大量实验研究的基础上 ,猪肝细胞型生物人工肝已进入Ⅱ /Ⅲ期临床研究阶段〔2〕。一、猪肝细胞用于生物人工肝的优缺点在人肝细胞来源极为困难的情况下 ,猪肝细胞在生物人工肝的实验研究和临床实验中起着重要作用〔3〕,占据…     

生物人工肝细胞材料的功能学研究进展

生物人工肝是治疗肝衰竭病人体外有效的肝支持治疗手段.肝细胞材料作为生物人工肝的主要生物成分,其功能表现决定了肝支持的治疗效果,能够具备成熟肝细胞的所有功能是生物人工肝细胞材料的最终目标.该文就目前生物人工肝细胞材料的功能学相关研究进展进行综述.     

生物人工肝人肝细胞系进展

大多数生物人工肝(bioartificial liver，BAL)装置以原代猪肝细胞作为生物成分，然而，由于异种移植相关危险性，猪肝细胞终究不是最佳选择。人肝细胞系无论哪方面都具有比动物肝细胞要好的特性，所以是应用于BAL的候选细胞。肿瘤来源细胞系C3A和HepG2具有多种肝细胞功能，     

骨髓间充质干细胞维持猪肝细胞形态与功能的实验研究

目的 建立猪肝细胞与骨髓间充质干细胞(MSCs)体外共培养体系,为生物人工肝的构建提供理想细胞来源.方法 自中华实验猪(n=3)髂前七棘抽取骨髓,采用密度梯度离心法分离单个核细胞,贴壁传代培养至第3代;原位两步胶原酶法分离猪肝细胞后与MSCs随机混合培养,观察共培养肝细胞形态和功能的变化水平.结果 第3代MSCs纯度>90%,肝细胞活率>95%,纯度>99%.共培养组肝细胞迅速黏附于MSCs表面,在三维空间呈球形聚集生长.异质细胞间出现细胞连接,超微结构与正常肝细胞接近.共培养组肝细胞白蛋白分泌水平和尿素合成能力自第1天培养起均显著高于对照组(P<0.05),并在第2天达到高峰.结论 猪肝细胞与MSCs共培养可维持肝细胞形态与功能,使构建功能性生物人工肝成为可能.     

人工肝生物反应器的研究现状

体外人工肝支持系统 (简称人工肝 )是国外近年来发展起来为肝衰竭患者提供体外肝功能支持的装置 ,这一技术的出现与发展为肝衰竭的治疗开辟了新途径。在各类人工肝装置中 ,以体外培养肝细胞作为生物成分的新型生物人工肝被认为是最有前途的 ,己在动物实验及临床应用中取得了较好的疗效[1] 。其基本原理是将体外培养增殖的肝细胞 (人肝细胞、哺乳动物肝细胞或肝细胞株 )置于体外循环装置 (生物反应器 )中 ,患者血液 (血浆 )流过生物反应器时 ,通过容器内的纤维素半透膜或直接与肝细胞进行物质交换 ,从而达到人工肝支持的目的。生物反应器是生…     

人工肝生物成分的研究进展

体外生物人工肝支持系统是用以为肝衰竭患者提供体外肝功能支持的装置。肝细胞是其主要生物成分 ,该系统的支持作用主要来源于肝细胞的生物代谢功能。近几年来 ,国外在肝细胞作为人工肝生物成分的有关研究方面取得较大进展 ,现就这一领域的主要进展作一综述。一、肝细胞来源1.同种肝细胞 :理论上讲 ,人肝细胞最为理想[1] ,但成人肝仅用于肝移植 ,因而成人肝细胞来源困难。有人提出将不适于肝移植的成人肝及肝移植时剩余的肝叶碎片收集起来 ,建立成人肝细胞“库”以资利用[2 ] ,但其来源仍然有限。胎肝细胞特别是较大月龄胎肝分离出的肝细胞 …     

肝衰竭动物模型的制备及其现状

生物人工肝是一种新型体外人工肝支持系统,它以培养肝细胞为材料,旨在充分代替肝脏的生物功能,为急性肝功能衰竭(ALF)患者提供可靠的过渡支持治疗[1].各种类型的生物人工肝研究都离不开体外肝支持的动物实验,合适的动物模型是其性能评价和进一步临床应用的重要条件.     

生物人工肝现状(文献综述)

人工肝已发展到组合性生物人工肝的形式.其中包括肝细胞移植的体内型和由人工合成材料及生物材料(肝细胞)结合而成的体外型.后者具备更充分、完备的肝功能,其效果优于传统的人工肝,已可为肝功能衰竭病人提供肝功能辅助.     

体外生物人工肝系统对暴发性肝衰竭兔的支持作用

目的探讨培养肝细胞用于生物人工肝及其作为肝移植辅助支持手段的可能性。方法以培养人肝细胞和中空纤维反应器为主要材料构成体外生物人工肝系统,对Ｄ-氨基半乳糖诱导的暴发性肝衰竭（ＦＨＦ）免进行人工肝支持实验。结果尽管两组实验动物的存活时间没有明显差异,但支持治疗组兔的血清转氨酶、总胆红素和肌酐水平均低于对照组,肝组织病理检查见肝细胞坏死程度明显轻于对照组,实验所用肝细胞保持较好的活力和贴壁能力。结论所用体外生物人工肝支持系统已发挥出培养肝细胞的生物作用,能够部分代偿ＦＨＦ兔的肝脏功能。【关键词】##4人工肝;;支持;;暴发性肝衰竭;;兔     

肝细胞永生化:实验研究与应用

肝细胞是生物人工肝支持系统的核心原材料,原代肝细胞由于体外生存期短、培养困难而限制了它的应用.目前常用的猪肝细胞有感染内源性逆转录病毒之忧.近年来随着分子生物学的发展肝细胞永生化已成为可能.肝细胞的永生化对于药物毒理、生物人工肝支持系统以及肝脏组织工程的研究都具有非常深远的意义.本文就肝细胞永生化的研究现状及应用前景作一综述.     

一种新的生物人工肝在治疗急性肝功能不全病人中的应用

随着肝移植日益成功,迫切需要研制一种人工肝支持系统来作用肝衰病人肝移植的过渡。先前所用的各种体外肝支持系统的方法包括:猪肝灌注、各种血液灌注、肝胞液灌注及交叉循环。这些方法多十分繁琐,且目前无一在临床上广泛应用。许多体外肝支持系统集中于血浆解毒作用。过去一直采用的隔离肝细胞治疗实验性肝衰,虽有某些神经症状方面的改善,而肝细胞的活力和功能未能令人倍服地显示出来。这里作者首次应用猪肝细胞制备新的生物人工肝(BAL)系统治疗重症急性肝衰。     

原代猪肝细胞培养体系及培养模式的初步探讨

目的探索一高密度、高效率的原代猪肝细胞培养方法,为生物人工肝的生物材料提供一种有效的培养模式.方法采用改良Seglen二步胶原酶灌注法分离肝细胞,分别将5×106的肝细胞加入胎牛血清、猪门静脉血清的培养体系中进行方瓶静止培养及聚球培养.结果肝细胞在接种后呈明显的Cytodex-3聚集趋势.门静脉血清培养体系中肝细胞的Albumin、Urea合成能力明显高于胎牛血清组.在培养后的前3周门静脉血清培养体系中聚球细胞模式优于微载体静止培养模式.结论与胎牛血清培养体系相比,猪门静脉血清培养体系更适合原代猪肝细胞高密度培养.聚球培养是一种较为理想的原代猪肝细胞培养模式.     

猪肝细胞与骨髓间充质干细胞最适共培养体系的建立

目的：建立猪肝细胞与骨髓间充质干细胞（MSCS）最适宜共培养体系,为生物人工肝的构建提供理想的细胞来源。方法：抽取中华实验猪（n=3）髂前上棘骨髓,采用密度梯度离心法分离单个核细胞,贴壁传代培养至第3代;采用原位两步胶原酶法分离猪肝细胞后与MSCS按1∶1,2∶1,5∶1和10∶1的比例混合培养,观察各组共培养肝细胞形态和功能的变化水平。结果：所获肝细胞纯度>99%,存活率>95%。共培养组肝细胞迅速黏附于MSCS表面,在三维空间呈球形聚集生长;肝细胞与MSCS间出现细胞连接,超微结构与正常肝细胞接近。肝细胞/MSCS 以2∶1共培养组的肝细胞清蛋白分泌水平、尿素合成能力和细胞色素P450为各组中之最佳,自第1天培养起均显著高于对照组（P<0.05）,并在第2天达到高峰,而且下降趋势较缓慢。结论：猪肝细胞/MSCS 按2∶1组成的最适共培养体系可最大程度地维持肝细胞功能,为构建功能性生物人工肝提供高效细胞材料。     

生物人工肝构建及临床应用14例次报告

目的　研究用聚砜膜纤维管构建的新型生物人工肝是否能有效支持肝脏功能。方法应用两步胶原酶法分离猪肝细胞 ,构建聚砜膜中空纤维管生物反应器 ,细胞数量 1× 10 10 个 ,与非生物人工肝同期或非同期使用 ,对 12例患者治疗 14例次 ,每次支持时间为 6h ,治疗前后观察患者一般状况并检测血氨、凝血酶原时间和部分肝功能指标。结果　应用生物人工肝治疗后血氨、凝血酶原时间和总胆红素均明显改善 ,治疗 2d后血氨仍为 (10 6± 131) μmol/L ,与治疗前相比较 [(172± 187)μmol/L]差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;治疗后 1个月 ,同期生物人工肝治疗组死亡 1例 ,非同期生物人工肝治疗组死亡 2例 ,患者总存活率 75 % (9/12 )。结论　我们构建的新型生物人工肝可支持急性肝功能衰竭患者的肝功能 ,同期生物人工肝治疗可能优于非同期生物人工肝。     

为生物人工肝选择合适的细胞

生物人工肝(bioartificial liver,BAL)是以培养肝细胞为生物材料,具有体外代偿肝脏功能的人工器官装置.本文就BAL细胞来源的研究进展进行综述.     

游离猪肝细胞的大量制备

因供肝缺乏,需人工肝的支持,以桥接肝移植。人工肝脏的研究已从非生物型发展到生物型。目前研制的生物型人工肝生物成分多用来源丰富、价格低廉的猪肝细胞。为适应生物型人工肝的临床应用,本研究参照和改良Ｎａｒｕｓｅ方法［２］,大量制备了高活率的游离猪肝细胞,报道如下。材料与方法１．材料①杂种猪,雌雄不限,体重１２～１５ｋｇ。②Ⅳ型胶原酶（Ｓｉｇｍａ产品）、ＭＥＭ、ＷＥＭ（Ｇｉｂｉｃｏ产品）。③氯胺酮、安定、肝素、生理盐水均为药用规格。④实验用水为三蒸水。２．试剂的制备（１）灌注液（ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｂｕ…     

生物人工肝的研究进展

肝移植是治疗急慢性肝功能衰竭最有效的方法,但是,由于供肝缺乏,必需寻求终未性肝病替代疗法.其中主要方法之一是体外生物人工肝支持系统,简称生物人工肝(bioartificial liver, BAL),发展至今已有40多年.临床试验证明BAL能促进肝功能衰竭病人的恢复,或过渡到肝移植.生物反应器是BAL的核心部件,生物反应器设计的主要目的在于保持肝细胞活力和功能,且不妨碍肝细胞营养及代谢产物的交换,同时还能起到治疗作用.细胞材料是BAL治疗基础,维持细胞活率和功能对BAL功效有决定性作用.本文就生物人工肝装置在实验和临床试验中的研究进展作一综述.……     

高原体外生物人工肝治疗急性肝衰竭

我们在高原环境条件下以体外培养猪肝细胞构建生物人工肝(BAL),探讨其对动物急性肝衰竭(AHF)的支持治疗效果. 一、材料与方法 随机选取已适应本地高原环境的健康长白仔猪(体质量28.5-33.0 kg,雌雄不拘)4头用于分离肝细胞制备中空纤维型生物反应器[1],6头用于以3％硫代乙酰胺(TAA)制备AHF模型[2].